阴离子交换柱使用手册
阴离子交换柱使用说明
IC-PAK阴离子交换柱使用指南2.3平衡The Ion Exclusion 色谱柱运输过程采用10%甲醇溶液储存,在用测试溶液和向之前必需平衡活化色谱柱平衡色谱柱:1.将色谱柱安装到仪器上。
2.用要求的洗脱液以0.5Ml/min的流速平衡10分钟,将大部分甲醇冲出色谱柱。
3.以0.1mLl/min的梯度的缓慢增加流速到1.0mL/min4采用1.0mL/min流速平衡20分钟,或者当基线平稳后才开始分析。
如果基线不稳,检查LC系统的其他部分。
3.1准备洗脱液指导原则:1.推荐的洗脱液是稀释的酸的水溶液注意:当流动相采用高浓度的有机相(超过20%)降低柱子的使用效果。
避免胺类,金属类,碱类和腐蚀剂,例如HCL.2.用0.45um或者更小孔径的滤膜过滤洗脱液以除去微生物。
用超纯水(18 megohm resistivity),例如MILLI-Q的水。
3.使用真空脱气机/超声波去掉可溶于水的气体(影响泵)4.使用Waters 在线过滤系统保护系统。
3.2样品制备和过滤如果样品中含有那些可溶解的并且可能污染色谱柱的污染物或微粒,选用以下其中一种步骤:1.用Waters Sample Clarification包,或者Millex过滤样品,避免色谱柱堵塞反压增加。
2.用SEP-PAK小柱净化样品,避免污染物降低柱寿命。
更多的信息请看WC02.3.用IC-PAK保护柱,能吸收化学和物理污染物。
附录A是保护柱清单。
4.1色谱柱指南注意:新色谱柱使用前,请按4.2方法测试样品的分离。
指导原则:下面的操作指南能帮助您在Waters色谱柱上得到最好的的效果。
1.不要超过13MPa ( 13atm或2000psi )压力下使用2.过滤所有的洗脱液。
决不能使用混浊,有沉淀的流动相。
3.保护色谱柱,避免振动,机械性外力(导致洗脱液成分改变)4.当用水做流动相组分时,请用Milli-Q 水系统纯化的水。
我们可以选择去离子水或瓶装色谱级水,某些有机化合物改变柱子的敏感性。
阴离子交换色谱柱安全操作及保养规程
阴离子交换色谱柱安全操作及保养规程阴离子交换色谱柱(Anion Exchange Chromatography Column)是一种常用的色谱分离技术。
在实验中,操作人员需要密切关注柱子的使用情况,以确保实验结果的准确性和人身安全。
本文将介绍阴离子交换色谱柱的基本操作规程和保养维护方法。
一、操作规程1. 准备工作•在进行操作之前,需要将色谱柱和固定装置进行清洁消毒。
•提前准备好所需的阴离子交换色谱树脂并按照要求进行催化活化。
•校准pH和Elution Buffer的浓度。
2. 样品预处理•根据实验要求对样品进行预处理,以提高阴离子交换色谱柱分离效果。
•样品必须保持干燥和无菌状态,以防止杂质和细菌的干扰。
•样品pH值和盐浓度的调整应根据实验要求进行。
3. 样品注入•注入样品之前,必须先将磷酸缓冲液从柱子上进行洗脱。
•样品注入时,流量应控制在柱子最大负荷的1/3以内。
•样品的浓度应根据实验要求进行,一般情况下,其浓度控制在0.2-1.0mg/mL。
4. 洗脱和洗涤•洗脱液的浓度要根据实验需要进一步调节。
一般而言,扰动强度和洗脱浓度成正比。
•在洗涤前,应该先用纯水或缓冲液将杂质洗出。
•洗脱和洗涤过程中,需要测定各阶段的洗脱液pH值,以确定实验关键点。
5. 清洗和储存•在操作结束后,需要对柱子进行清洗,以保证下次使用时能正常使用。
•阴离子交换色谱柱的储存条件需要根据实验方法进行。
一般来说,常温下可储存6-12个月。
二、柱子保养1. 储存和清洗•在使用之后,需要对柱子进行彻底的清洗,并将其储存在干燥通风的环境中。
•没有独立的储存条件时,柱子应储存在关闭的塑料袋内,以保证干燥和无菌状态。
•使用前应先对柱子进行检查,确定是否有磨损或裂纹等损坏状况。
2. 身体安全•在插入阴离子交换色谱柱或更换样品时,要避免接触柱子的端口或开启柱子,以免溶液或样品误飞溅。
•在使用过程中,要避免柱子突然断裂,防止溶液渗漏造成身体伤害。
阴离子交换柱使用手册
阴离子交换柱使用手册阴离子交换柱使用手册Chrompack HPLC IonoSpher A Columns注意Chrompack IonoSpher A色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介Chrompack IonoSpher A柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱'推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2・5到6・5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸鞍(lmM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0. 45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力注意:最高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi增加流速或者降低流速要釆取小的间隔变化以 防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子”要降低流量至0,等待洗 拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的 结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分 析柱上。
5. 样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处 理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很 大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还 是样品。
阴离子交换柱的使用
阴离子交换柱使用手册注意Chrompack IonoSpher A色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力注意:最高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
阴阳离子交换器使用说明书
阴阳离子交换器使用说明书本使用说明书适用于逆流再生的阴、阳离子交换器一、设备的安装:设备应安装垂直。
外壁垂直误差应小于其高度的0.25%。
二、树脂的装填:当阳、阴离子交换器均需要装填树脂时,先把阴树脂装填到阴离子交换器内,后把阳树脂装填到阳离子交换器内,以防止阳树脂夹带到阴离子交换器内而影响到阴离子交换器的出水水质。
树脂装填到上部视镜的中部即可。
三、阳、阴树脂的预处理阳树脂及阴树脂装填完毕后,用10%的氧气钠(NaC1)溶液加1%的氢氧化钠(Na(OH))溶液对树脂浸泡12-24小时。
溶液的总量约等于阴、阳树脂的体积。
然后用水冲洗到PH值在8-9之间即可。
用PH试纸检测。
四、阳、阴树脂的第一次再生(1)阳床第一次再生1. 阳树脂再生用3-5%的盐酸(HC1)溶液对阳树脂进行再生。
2. 阳树脂正洗用前级水(清水、RO装置的出水、或电渗析出水)正洗阳树脂至出水PH值为5-6之间,用PH试纸测试。
(2)阴床第一次再生1. 阴树脂再生用2-4%的氢氧钠(Na(OH))溶液对阴树脂进行再生。
2. 阴树脂正洗再生完毕后,用阳离子交换器出水正洗阴树脂,直至出水水质符合要求。
当正洗出水达到需求时,阴离子交换器打开出水阁,关下排阀。
投入正常运行。
注:阳离子交换器及阴离子交换器的第一次再生及投入运行,由我厂调试人员完成。
五、阳阴离子交换器再生的7个基本过程阳、阴离子交换器再生有7个基本过程,即:1,工作。
2,反洗分层。
3,阴树脂吸药水(氢氧化钠)。
4,阳树脂吸药水(盐酸)。
5,清洗阴树脂。
6,清洗阳树脂。
7,混合树脂。
现把操作程序叙述如下:1,工作。
水路流程图见图1,反渗透水经过树脂混合床由上进,自下出,生产去离子超纯水。
2,反洗分层。
反洗水路流程图见图2,由于树脂长期工作,失效。
需要进行再生,分层是再生的第一步。
是水从下进,进入交换器。
从交换器上排排出,反洗至出水澄清,一般需10-15分钟放水打开中排阀门、使阴阳树脂分层,利于再生。
阴离子交换柱使用手册
阴离子交换柱使用手册Chrompack HPLC IonoSpher A Columns注意Chrompack IonoSpher A色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
东曹 TSKgel DEAE-NPR阴离子交换色谱柱说明书
阴离子交换色谱柱TSKgel DEAE-NPR 使用说明书东曹株式会社填料键合二乙氨基乙基官能团的无孔亲水性离子交换树脂离子交换容量:>0.06 mequiv./mL粒径:2.5 μm色谱柱货号:0013075尺寸:4.6 mm(I.D.)×3.5 cm(L)出厂溶剂:超纯水pH值范围2~10盐浓度的范围小于1 M流速范围小于1.6 mL/min一般推荐的流速为1.0~1.5 mL/min。
清洗色谱柱请使用0.1~0.2 N NaOH清洗色谱柱。
通常,使用进样器多次注入0.5~1 mL的0.5~0.1 N NaOH 后即可还原色谱柱。
如果该步骤无效,请使用0.5~1 mL的20~40 %的乙酸多次清洗色谱柱。
推荐使用0.1~0.2 N NaOH定期(如,每天使用后)清洗色谱柱。
色谱柱性能测试(蛋白质混合物分离度)推荐使用以下条件测试色谱柱的性能。
样品:卵白蛋白(5 μg)和大豆胰蛋白酶抑制剂(5 μg)的混合物10 μL流动相:A:20 mM的Tris-HCl缓冲溶液(pH 8.0)B:20 mM的Tris-HCl缓冲溶液+ 0.5 M NaCl(pH 8.0)线性梯度:A液→B液;10 min流速: 1.0 mL/min出厂时,DEAE-NPR色谱柱拥有6.0以上的分离度。
非常重要!!!尽管还原由于杂质的吸附导致性能下降的DEAE-NPR色谱柱并不难,但是如果小颗粒杂质夹在填料颗粒之间,这种情况柱子很难还原。
由于填料颗粒之间的空隙非常小,如果样品或流动相中存在细小的颗粒就很容易卡在中间。
因此,强烈建议使用0.2~0.5 μm孔径的过滤器过滤样品后进行分析。
另外,在泵和进样器之间安装0.2~0.5 μm孔径的在线过滤器可以有效延长色谱柱的寿命。
东曹(上海)生物科技有限公司上海市徐汇区虹梅路1801号A区凯科国际大厦1001室电话:021-3461-0856传真:021-3461-0858E-mail:**************.cn网址:/home-cnTSKgel,TSKgel SuperMultipore, TSKgel STAT,BioAssist,Lipopropak,TOYOPEARL,ToyoScreen,TOYOPEARL GigaCap,TOYOPEARL MegaCap,TOYOPAK以及EcoSEC是东曹株式会社在日本,中国,美国,欧盟等的注册商标。
离子交换色谱柱使用说明
XB-SCX色谱柱使用说明发布日期:2011-08-23一. Ultimate® XB-SCX强阳离子交换柱说明:基质:超高纯全多孔球形硅胶;填料:硅胶基质上键合有苯基磺酸基(-C6H4-SO3-);pH范围:使用范围为2.0~6.5;最大使用压力:40Mpa(即6000psi);最高使用温度:80℃;色谱柱内保存溶液:100%甲醇;色谱柱两端筛板孔径均为2um,色谱柱可以反向冲洗。
二. Ultimate® XB-SCX色谱柱的使用特性:1. 常用于分离在水溶液中呈阳离子态的化合物;2. Ultimate® XB-SCX色谱柱能与水和有机溶剂兼容,可用甲醇、乙腈和水(包括缓冲盐溶液)作流动相进行分析;3. 阳离子化合物的保留能力与流动相的pH、离子强度、流动相中有机相的比例以及温度有关。
通常离子强度越大保留时间越短,流动相中有机相的比例越大保留时间越长;4. 柠檬酸盐和磷酸盐等缓冲盐通常用于调整流动相的pH和离子强度以改善分离度。
流动相的pH应该维持在pH 2.0~6.5;5. 阳离子柱的平衡时间相对C18而言较长。
三. Ultimate® XB-SCX色谱柱的维护1. 流动相抽滤过0.45um滤膜,样品针筒过滤;2. 使用之前,先用过渡流动相以1.0ml/min过渡30min,然后用流动相走基线,基线平稳后进样;使用之后,先用100mmol/L的NaClO4 溶液(调节pH<4)以1.0ml/min反向冲洗色谱柱40min;然后用水反向冲洗30min,再用甲醇反向冲洗40min,最后保存在纯甲醇中;过渡流动相是指:有机相和水相比例与流动相相同,只是过渡流动相不含缓冲盐;3. 建议:1)用保护柱和预柱以延长色谱柱的使用寿命;2)使用一段时间(约一周)后需用纯甲醇(或乙腈)以1.0ml/min反向冲洗色谱柱90min,冲洗过程中注意过渡,防止缓冲盐析出。
deae-阴离子交换柱说明书
上海宝曼生物科技有限公司中国化工仪器网化学试剂、生化试剂、抗体、仪器仪表、实验室耗材、技术服务公司介绍产品展示供求商机产品目录产品报价公司动态荣誉证书资料下载技术文章招聘信息询价留言联系我们中级榜上有名 2QQ交谈产品分类品牌分类化学试剂对照品暂无信息产品搜索:联系方式地址:上海市杨浦区五角场高新技术产业园区邮编:200433联系人:魏勇、任辉斌电话:86-021-********传真:86-021-********手机:139****6570、133****6828留言:发送留言个性化:网址:展台:/st176387/友情链接·中国化工仪器网您所在位置:首页 > 技术文章 > DEAE琼脂糖凝胶FF DEAE Sepharose FF 使用说明书技术文章DEAE琼脂糖凝胶FF DEAE Sepharose FF 使用说明书点击次数:927 发布时间:2010-11-24DEAE-琼脂糖凝胶FF产品说明书DEAE-琼脂糖凝胶FF是将二乙胺基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1. 外观本品呈白色,球状、无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2. 理化指标项目指标离子交换基团-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H离子交换类型弱阴离子,可交换离子Cl-基质6%交联琼脂糖蛋白质吸附容量110mgHSA/ml介质总离子交换容量0.11~0.16 mmol/ml 介质形状球形粒径45~165 μm流速*300~600 cm/h;最大流速750 cm/h工作温度4~40℃耐热pH7水中120℃ 30min耐压0.3 MPapH稳定性1~14 (短时间 ,在位清洗);2~12 (长时间)pH工作范围2~9化学稳定性在以下液体中稳定:所有常用的水相缓冲液;1mol/L 氢氧化钠;8mol/L 尿素;6mol/L 盐酸胍;70% 乙醇*检测条件:层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl3.包装产品以聚胺酯瓶密封包装,外贴标签,注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。
阴离子交换柱使用说明
阴离子交换柱使用说明IC-PAK阴离子交换柱使用指南2.3平衡The Ion Exclusion 色谱柱运输过程采用10%甲醇溶液储存,在用测试溶液和向之前必需平衡活化色谱柱平衡色谱柱:1.将色谱柱安装到仪器上。
2.用要求的洗脱液以0.5Ml/min的流速平衡10分钟,将大部分甲醇冲出色谱柱。
3.以0.1mLl/min的梯度的缓慢增加流速到1.0mL/min4采用1.0mL/min流速平衡20分钟,或者当基线平稳后才开始分析。
如果基线不稳,检查LC系统的其他部分。
3.1准备洗脱液指导原则:1.推荐的洗脱液是稀释的酸的水溶液注意:当流动相采用高浓度的有机相(超过20%)降低柱子的使用效果。
避免胺类,金属类,碱类和腐蚀剂,例如HCL.2.用0.45um或者更小孔径的滤膜过滤洗脱液以除去微生物。
用超纯水(18 megohm resistivity),例如MILLI-Q的水。
3.使用真空脱气机/超声波去掉可溶于水的气体(影响泵)4.使用Waters 在线过滤系统保护系统。
3.2样品制备和过滤如果样品中含有那些可溶解的并且可能污染色谱柱的污染物或微粒,选用以下其中一种步骤:1.用Waters Sample Clarification包,或者Millex过滤样品,避免色谱柱堵塞反压增加。
2.用SEP-PAK小柱净化样品,避免污染物降低柱寿命。
更多的信息请看WC02.3.用IC-PAK保护柱,能吸收化学和物理污染物。
附录A是保护柱4.1色谱柱指南注意:新色谱柱使用前,请按4.2方法测试样品的分离。
指导原则:下面的操作指南能帮助您在Waters色谱柱上得到最好的的效果。
1.不要超过13MPa ( 13atm或2000psi )压力下使用2.过滤所有的洗脱液。
决不能使用混浊,有沉淀的流动相。
3.保护色谱柱,避免振动,机械性外力(导致洗脱液成分改变)4.当用水做流动相组分时,请用Milli-Q 水系统纯化的水。
我们可以选择去离子水或瓶装色谱级水,某些有机化合物改变柱子的敏感性。
阴离子交换柱的使用
阴离子交换柱使用手册注意Chrompack IonoSpher A色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力注意:最高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
离子交换色谱柱使用说明
XB-SCX色谱柱使用说明发布日期:2011-08-23一. Ultimate® XB-SCX强阳离子交换柱说明:基质:超高纯全多孔球形硅胶;填料:硅胶基质上键合有苯基磺酸基(-C6H4-SO3-);pH范围:使用范围为2.0~6.5;最大使用压力:40Mpa(即6000psi);最高使用温度:80℃;色谱柱内保存溶液:100%甲醇;色谱柱两端筛板孔径均为2um,色谱柱可以反向冲洗。
二. Ultimate® XB-SCX色谱柱的使用特性:1. 常用于分离在水溶液中呈阳离子态的化合物;2. Ultimate® XB-SCX色谱柱能与水和有机溶剂兼容,可用甲醇、乙腈和水(包括缓冲盐溶液)作流动相进行分析;3. 阳离子化合物的保留能力与流动相的pH、离子强度、流动相中有机相的比例以及温度有关。
通常离子强度越大保留时间越短,流动相中有机相的比例越大保留时间越长;4. 柠檬酸盐和磷酸盐等缓冲盐通常用于调整流动相的pH和离子强度以改善分离度。
流动相的pH应该维持在pH 2.0~6.5;5. 阳离子柱的平衡时间相对C18而言较长。
三. Ultimate® XB-SCX色谱柱的维护1. 流动相抽滤过0.45um滤膜,样品针筒过滤;2. 使用之前,先用过渡流动相以1.0ml/min过渡30min,然后用流动相走基线,基线平稳后进样;使用之后,先用100mmol/L的NaClO4 溶液(调节pH<4)以1.0ml/min反向冲洗色谱柱40min;然后用水反向冲洗30min,再用甲醇反向冲洗40min,最后保存在纯甲醇中;过渡流动相是指:有机相和水相比例与流动相相同,只是过渡流动相不含缓冲盐;3. 建议:1)用保护柱和预柱以延长色谱柱的使用寿命;2)使用一段时间(约一周)后需用纯甲醇(或乙腈)以1.0ml/min反向冲洗色谱柱90min,冲洗过程中注意过渡,防止缓冲盐析出。
阴离子交换柱的使用
阴离⼦交换柱的使⽤阴离⼦交换柱使⽤⼿册注意Chrompack IonoSpher A⾊谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导⼊碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱⼦损坏。
在使⽤这个柱⼦之前,你要充分地熟悉这本⼿册讲述的内容。
1.简介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅胶基质的强阴离⼦交换材料,含有季胺功能团。
特别设计⽤于使⽤常规HPLC分析有机和⽆机阴离⼦。
2.⾊谱柱⽼化在开始分析⼯作以前,柱⼦必须经过正确的⽼化。
⼀个没有正确⽼化的柱⼦可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发⽣变化等等。
要⽼化这类柱⼦,⾸先要使⽤甲醇淋洗,然后使⽤去离⼦⽔。
再⽤你选⽤的洗脱液进⾏平衡。
在发货以前,每根柱⼦都已经测试过并进⾏了⽼化。
因此没有必要在第⼀次使⽤时⽤⽔冲洗)。
3.洗脱液推荐在这类柱上使⽤的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使⽤⽔杨酸缓冲液,因为⽔杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,⽽且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使⽤以前要脱⽓,并⽤0.45微⽶滤膜过滤,防⽌发⽣检测和泵送问题。
⼀定要在开始使⽤系统以前检查有否微⽣物⽣长,否则你的柱⼦会堵塞,柱压会升⾼到⽆法接受的⽔平。
4.流量和压⼒注意:最⾼压⼒:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi增加流速或者降低流速要采取⼩的间隔变化以防⽌填充床的扰动。
如果你想更换柱⼦,,要降低流量⾄0,等待洗脱液完全流出柱⼦为⽌(2分钟)。
拆除柱⼦⽽没有等待压⼒的降低会损坏柱⼦。
⾼柱压的产⽣⼀般是由于不正确地使⽤柱⼦的结果。
使⽤保护柱(见第6节)会防⽌污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备保持柱⼦长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防⽌将疏⽔性/与流动相极性差别很⼤的化合物泵⼊⾊谱柱,不管是来⾃流动相还是样品。
HAMILTON公司阴阳离子交换柱说明书
HAMILTON公司阴/阳离子交换柱说明书请妥善保管柱子的说明书以及检测报告。
柱子的安装:柱子的适用范围以及运输时的保存液请参考柱子的检测报告将柱子两头的堵头拧下,确认流动相流动方向,将柱子接到仪器上。
建议在第一次使用之前,柱子的尾部不与检测器连接,先用流动相过柱子。
这样一方面可以清洗柱子内部的杂质,同时也避免了这些杂质被冲到检测器中,污染检测器。
清洗后将柱子与检测器连接,使用10-20倍柱体积的流动相平衡柱子,基线平稳后方可使用。
某些柱子可能需要更多的平衡液来平衡柱子。
使用时的注意事项流动相要使用色谱纯试剂以及去离子水,在使用之前要经过0.2微米的微孔滤膜过滤。
上柱的流动相存放时间过长将有可能滋长微生物。
样品要经过0.2微米的微孔滤膜过滤。
最好将分析柱与保护柱一同配合使用。
在更换不同的流动相时要确保柱腔内的液体与新流动相之间不会发生沉淀、结晶、絮状物等现象。
至少要用20倍柱体积的流动相来更换和平衡柱子。
柱压最好控制在6000Psi以内,防止柱头塌陷。
柱子的再生方法请参考检测报告柱子的保存:短时间的保存(1-3天)不必更换流动相。
长时间的保存请参考检测报告中的SHIPPING SOLVENT.本文献有《北京康林科技有限责任公司》提供;北京康林科技有限责任公司成立于1995年,是一家以经营进口色谱、质谱仪器及其耗材、实验室仪器、化学及生化试剂和标样为主的高科技企业。
在广大用户的支持下,公司经过十年的稳步发展,已经成为国内色谱、质谱、样品前处理和生化产品的主要供应商之一,在业内享有极佳的信誉。
康林公司是美国Sigma-Aldrich集团(Supelco、Sigma、Aldrich、Fluka、RDH)、瑞士Hamilton、日本Tosoh、美国Waters、瑞典Kromasil、英国ChromTech、美国Corning、美国Gast、美国Organomation等世界著名公司及众多专业公司授权的中国一级代理。
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阴离子交换柱使用手册
Chrompack HPLC IonoSpher A Columns
注意
Chrompack IonoSpher A 色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介
Chrompack IonoSpher A 柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化
在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液
推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力
注意:最高压力:不锈钢柱:4500psi;玻璃柱:3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6.保护柱
一定要使用保护柱,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
对于ChromSep 柱我们建议使用ChromSep Anion 交换保护柱。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
对于常用不锈钢柱,我们建议使用Chromguard Anion exchange High Efficiency(高效)柱(10X3.0mm) 或High Capacity(高容量)柱(50X3.0mm)。
7.进样量和浓度
8.温度
Chrompack IonoSpher A 柱可以在室温环境使用。
为了提高柱子的稳定性,建议不要在40°C以上使用。
9.贮存
在贮存柱子以前,建议先用去离子水,然后用甲醇冲洗。
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
10.检测灵敏度
对于使用邻苯二甲酸缓冲液作为洗脱液的阴离子的检测,以下几种方法可用:
·折光检测
·电导检测
·紫外检测
邻苯二甲酸缓冲液对所有三种检测方法都是特别好的,因为邻苯二甲酸缓冲液具有高的折光性,相对低的电导率和紫外吸收性质。
检测波长取决于要检测的离子。
11.系统峰
当你使用Chrompack IonoSpher A 柱的时候,系统峰可能会出现。
通常一个馏分既溶剂在前面,第二个馏分应当是硫酸盐。
方向(正峰或负峰)取决于样品的pH。
位置取决于流动相的Ph。
较低pH会使系统峰向前移动。
在我们的实验中pH值在3.8-4.3之间最佳。
12.柱效损失的可能原因
1.额外的峰展宽。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
2.洗脱的平衡时间不够。
3.不正确的洗脱液pH或洗脱液的离子强度。
4.洗脱液中存在不正确离子。
5.固定相污染。
a.高柱压伴随分辨率降低。
1.颗粒物积聚在烧结物或者填充物床上。
(a)样品来源---过滤或离心
(b)洗脱液来源---过滤洗脱液,封闭洗脱液容器。
(c)系统来源---冲洗整个系统管路和泵;安装在线系统过滤器。
2.蛋白质类物质的积聚
(a)微生物在样品中生长。
3.微生物在洗脱液中生长。
b.正常柱压伴随柱效降低
1.有机污染
(a)样品中有脂肪,油脂,脂质。
固定相的表面被覆盖。
(b)从样品中带来的不确切的有机物或未正确制备的洗脱液。
(c)在洗脱液制备完成以后带入洗脱液中的非特定有机物,例如
在运输时从大气中带来。
13.对于纠正污染问题的可能有效的操作
1.准备新鲜的洗脱液
在很多情况下,柱效的丧失可以归结为洗脱液的污染。
所以,要在使用柱子以前准备新鲜的洗脱液,冲洗所有液体管路。
洗脱液应当用0.2到0.4微米的滤膜过滤,在使用以前要脱气。
2.色谱柱再生
要进行色谱柱的再生工作
a.首先使色谱柱反向
b.以0.4ml/min的流速用1M硝酸铵洗脱30ml。
c.以0.4ml/min的流速用40:60 (v:v)的甲醇/水洗脱30ml。
d.以0.4ml/min的流速用异丙醇洗脱30ml。
e.以0.4ml/min的流速用水洗脱30ml。
f.以0.4ml/min的流速用洗脱液洗脱30ml。
g.将柱子转回正常方向。
用洗脱液平衡。
以上内容由美国瓦里安技术中国有限公司北京办事处李华译自Chrompack IonoSpher A 柱随柱附带操作手册。
2002年5月14日
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