离子交换柱使用说明

阳离子交换柱使用注意（下）

进样量和浓度

当样品的洗提强度比洗脱液低（在柱样品预浓缩）的时候，更高的样品量也可以注射。

贮存

在贮存柱子以前，建议先用去离子水，然后用甲醇冲洗。一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。

检测灵敏度

对于阳离子的检测，建议进行电导率的测定,使用前面提到的低电导洗脱液。

柱效损失的可能原因

1．额外的峰展宽。要保证管路的长度和内径都保持最小。

2．洗脱的平衡时间不够。

3．不正确的洗脱液pH或洗脱液的离子强度。

4．洗脱液中存在不正确的阴离子。制备新鲜的洗脱液。

5．固定相污染。

a. 高柱压伴随分辨率降低。

1．颗粒物积聚在烧结物或者填充物床上。

（a）样品来源---过滤或离心

（b）洗脱液来源---过滤洗脱液，封闭洗脱液容器。

（c）系统来源---冲洗整个系统管路和泵；安装在线系统过滤器。

2．蛋白质类物质的积聚

（a）微生物在样品中生长。

（b）微生物在洗脱液中生长。

b. 正常柱压伴随柱效降低

1．有机污染

（a）样品中有脂肪，油脂，脂质。固定相的表面被覆盖。

（b）从样品中带来的不确切的有机物或未正确制备的洗

脱液。

（c）在洗脱液制备完成以后带入洗脱液中的非特定有机

物，例如在运输时从大气中带来。

对于纠正污染问题的可能有效的操作

1．准备新鲜的洗脱液

在很多情况下，柱效的丧失可以归结为洗脱液的污染。所以，要在使用柱子以前准备新鲜的洗脱液，冲洗所有液体管路。洗脱液应当用0.2到0.4微米的滤膜过滤，在使用以前要脱气。

2．色谱柱再生

要进行色谱柱的再生工作

a．首先倒转色谱柱

b．以0.4ml/min的流速用1M硝酸铵洗脱30ml。

c．以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脱30ml。

d．以0.4ml/min的流速用异丙醇洗脱30ml。

e．以0.4ml/min的流速用水洗脱30ml。

f．以0.4ml/min的流速用洗脱液洗脱30ml。

g．将柱子转回正常方向。

用洗脱液平衡。