猪圆环病毒2型天津株的全基因组克隆与序列分析-论文

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猪2型圆环病毒石河子流行株全基因组的克隆和序列分析

ｏｒｉｒｏｉｕｐｅ２ｆＰｏｃｎｅＣｉｃｖｒｓＴｙ
ＺＨＡＮＧａｃａ，ＡＯｕＣＡＩＫｕｊｎ，ＺｉｈｏＱＩＪｎ，ｏｕＣＨＥＮｕｎｆＭＥＮＧｎｌｇ，ｉＣｈａｇｕ，ＱｉｇｉＬＩｅｎＪ
第２年１２月
石河子大学学报（自然科学版）ＪｕｎｌｆｈｈｚＵｉｒｉ（ｔｒｌｃｎｅｏｒａｏｉｅｉｎｖｓｙＮａａＳｉｃ）Ｓｅｔｕｅ
Ｖｏ．９Ｎｏ６１２．
Ｄｅ．２１ｃ０１
法分２段克隆圆环病毒的基因，测序后拼接得到该圆环病毒的基因组。序列分析结果表明，Ｃ－ＨＺ基因组全长ＰＶＳ
为１６ｐＧｅｂｎ７７ｂ（ｎａｋ登录号：Ｆ１７４，因型为ＰＶ２。用ＤＮＡＭＡＮ软件将此株病毒基因组与国内其它１Ｊ７８８）基Ｃ－ａ２
文章编号：０７７８（０１０—６６０１０－３３２１）６０９—４
猪２型圆环病毒石河子流行株全基因组的克隆和序列分析
张再超，军，扩军，创夫，庆玲，劫乔蔡陈孟李
（ｉ子大学动物科技学院预防兽医学重点实验室，河子８２０）／河石３０３摘要：据已发表的猪２圆环病毒（ｏｃｎｒｏｉｕｐ，Ｃ一）基因组序列设计２对引物，ＰＲ的方根型Ｐｒｉｅｉｃｖｒｓｔｅ２ＰＶ２全ｃｙ用Ｃ

猪圆环病毒Ⅱ型的分离与全基因组序列分析

ＰＣＶ２ｓｒｉｓａｏｇｗｉｈｈｌｇｎｔｎｌｓｓｏｈｓｔａｎｎｈｓｆ１ＣＶ２ｓｑｅｃｓｐｂｉｈｄｉｔａｎｌｎｔｔｅｐｙｏｅｅｉａａｙｉｆｔｅｅｓｒｉｓａｄｔｏｅｏ２Ｐｈｃｅｕｎｅｕｌｅｎｓ
ＦｕｈｕＦｕｉｎ３０１ｚｏ，ｊａ５０３，Ｃｈｎ）ｉａ
ＡｂｔａｔＰｓ — ａｉｇｍｕｔｙｔｍｉｗａｔｇｓｎｒｍｅ（ｓｒｃ：ｏｔｗｅｎｎｌｉｓｅｃｓｓｉｙｄｏｎＰＭＷＳ）ｉａｍｅｇｎｉｅｓｎｓｎ．Ｐｒｉｅｃｒｓｎｅｒｉｇｄｓａｅｉｗｉｅｏｃｎｉ—
ＧｎａｋｗｅｅｃｍｐｒｄｅｕｎｅａａｙｉｏｈｏｐｅｅｇｎｍｅｉｄｃｔｄｔａｈｕｉＣｔａｓｗｅｅｅＢｎｒｏａｅ．ＳｑｅｃｎｌｓｆｅｃｍｌｔｅｏｎｉｅｈｔｔｅＦｊｎＰＶ２ｓｒｉｒｓｔａａｎ
ｓｎｆＭＷＳｉＦｊｎＰｏｉｅＴｅｒｅｏｎｔｄＦｉｓｏｇＰｕｉｒｖｎ．ｈｙｗｅｅｎｍｉａｅＵＱＩＧ００ｎＵＴＡＮ００．ｔｅｓｑｅｃｇｏｎａｃｄＮ４１ｄＰＩａ４１ｈｅｕｎｉｆ２ｎ
Байду номын сангаас
ＺＨＯＵｎｊｎ，ＷＡＮＧｎ — ａ，ＣＨＥｎ — ａｇ，ＷＥｎＬｕ —ｉｇａＬｏｇｂｉＹｏｇｌｎｉＩＨｏｇ，ＣＨＥＮｈｏｙｎＳａ — ｉｇ，

猪圆环病毒2型天津株的全基因组克隆与序列分析

仔猪多系统衰竭综合征（Ｐｏｓｔ — ｗｅａｎｉｎｇｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ— ｉｃｗａｓｔｉｎｇｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＷＳ）的主要病原，除ＰＭ—
统衰竭综合征，无菌采集发病猪肺脏、脾脏、肾脏和淋巴结等组织，置一７０℃保存备用。１．１．２细胞、菌株和试剂等材料ＰＫ－１５细胞（无ＰＣＶ污染）和受体菌ＪＭ１０９均由天津市畜牧兽医研究所兽医研究室保存；基因组ＤＮＡ提取试剂盒、小量ＤＮＡ片段快速胶回收试剂盒、ｄＮＴＰｓ
分析纯。
１．１．３引物设计从ＮＣＢＩ中搜索２０多株ＰＣＶ一２全基因组序列，通过同源性分析，选取保守区域设计
３对引物（表１）。引物对ＰＣＶ－２－Ｆ／ＰＣ命名为ＰＣＶ一２ＴＪ一１，同时对其全基因组进行克隆和序列分析。结果表明，该分离株基因组全长
１７６７ｂｐ，与我国上海ＬＮ一１９株和韩国的Ａ４０９９株的核苷酸同源性最高，均达到９９．６。ＰＣＶ一２全基因组
津地区流行的ＰＣＶ一２毒株为ＰＣＶ一２ｂ，为ＰＣＶ一２的分子流行病学、遗传变异及防控奠定了基础。
关键词：猪圆环病毒２型；基因组；克隆；序列分析

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（PRRSV-2）是一种重要的猪类病毒，它会引起猪的严重疾病，并对全球猪业产生了极大的经济影响。

对猪圆环病毒2型的检测技术和研究进展一直备受关注。

本文将从PRRSV-2的检测技术和研究进展两个方面进行介绍。

一、猪圆环病毒2型检测技术1. 实时荧光RT-PCR技术实时荧光RT-PCR技术是目前用于PRRSV-2检测的主要方法之一。

该技术通过分离RNA，然后利用逆转录酶将RNA转化为cDNA，再利用聚合酶链式反应（PCR）进行扩增，最后通过荧光探针实时检测扩增产物的数量。

这种技术具有灵敏度高、特异性好、快速准确等优点，已经成为PRRSV-2检测的金标准。

2. 基因组测序技术随着生物技术的不断发展，基因组测序技术在PRRSV-2的检测中也得到了广泛应用。

通过对PRRSV-2的基因组进行测序，可以对该病毒的进化特征、毒株变异等进行深入研究，为疫苗研发、病毒溯源等提供重要参考。

3. 免疫学检测方法除了分子生物学方法外，免疫学检测方法也是PRRSV-2检测的重要手段之一。

ELISA、免疫荧光法等免疫学检测方法可以通过检测猪血清中的抗体水平，来进行PRRSV-2感染的诊断和流行病学调查。

4. 快速检测试剂盒随着POCT（ Point of Care Testing）技术的发展，一些快速检测试剂盒也逐渐应用于PRRSV-2的检测中。

这些试剂盒可以在实验室外、无需专业设备的情况下进行快速检测，为疫情监测、动物交易等提供了便利。

以上几种技术各有优缺点，但在实际应用中可以根据需要进行选择和结合，以提高PRRSV-2的检测效率和准确性。

1. 病毒进化特征研究随着基因组测序技术的广泛应用，人们对PRRSV-2的毒株进化特征有了更深入的了解。

研究表明，PRRSV-2存在着较高的遗传多样性和进化速度，不同地区、不同时间和不同种类的PRRSV-2之间存在着较大的遗传差异，这对疫苗的制备和疫情防控提出了更高的要求。

一株猪圆环病毒2型全基因组的克隆与序列分析

一株猪圆环病毒2型全基因组的克隆与序列分析王伟丞;梁海英;曾智勇;汤德元;刘钊【摘要】应用猪繁殖障碍性病毒性疫病6重PCR检测方法对贵州省开阳县某规猪场送检的1头疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征的病死仔猪进行病原检测,确诊感染有猪圆环病毒2型(PCV2)后,对该病毒全基因组进行扩增,将其克隆到pMD19-TSimple载体上,筛选获得了重组质粒pMD19-T-PCV2,并对其进行序列测定和分析.结果表明:克隆得到的PCV2毒株的基因组全长为1 767 bp,与国内外参考毒株核苷酸序列相似性为94.1％～98.4％,根据欧盟猪圆环病毒疾病委员会规定的PCV2基因型划分标准,将PCV2 GZ-KY1毒株划分为PCV2b亚型.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2014(050)008【总页数】3页(P20-22)【关键词】猪圆环病毒2型;基因组;克隆;序列分析【作者】王伟丞;梁海英;曾智勇;汤德元;刘钊【作者单位】贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学教学实验场,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S852.65+1猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。

PMWS于1997年首次在加拿大报道，随后在美国、法国、德国、日本等多个国家相继报道。

近年来该病在我国普遍流行，给我国养猪业造成了巨大的经济损失[1]。

2000年郎洪武等首次报道中国猪群存在PCV2感染，阳性率为42.9%[2]。

2007年周绪斌等报道在2000-2005年间20多个省市PCV2感染平均阳性率达55.04%[3]。

根据崔亚兰等对贵州省2007-2011年猪圆环病毒感染的流行病学调查结果表明，PCV2在贵州省的感染日益严重[4]；另根据本实验室对2011-2012年间贵州部分地区的PCV2血清学调查发现，PCV2野毒感染的阳性率高达61.3%[5]。

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（PRRSV-2）是一种严重危害猪健康的病毒，对猪场养殖业造成了严重的经济损失。

猪圆环病毒2型检测技术及研究的进展备受关注。

本文将对猪圆环病毒2型检测技术及研究进展进行介绍。

猪圆环病毒2型是一种RNA病毒，主要感染猪的肺泡巨噬细胞和树突细胞，引起猪的呼吸道疾病。

该病毒具有高变异性和抗原异质性，使得对其检测和控制具有一定的困难。

目前，针对猪圆环病毒2型的检测技术主要包括病毒抗原检测、病毒核酸检测和抗体检测。

病毒抗原检测是目前应用最为广泛的检测技术之一，其原理是利用酶联免疫吸附试验（ELISA）或荧光素酶免疫吸附测定（FIA）等方法检测猪血清、血浆或组织样品中的猪圆环病毒2型抗原。

病毒核酸检测则是通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测病毒在猪体内的核酸含量，可快速、准确地检测猪圆环病毒2型的感染情况。

抗体检测则是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法检测猪血清或血浆中的病毒抗体水平，用于评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。

近年来，针对猪圆环病毒2型的检测技术不断得到改进和提高，使得对该病毒的检测更加快速、准确和灵敏。

新型ELISA检测试剂盒的开发，可以大大缩短检测时间，提高检测的准确性；PCR技术的改进也使得对病毒核酸的检测更为灵敏和快速；抗体检测方面也出现了更加精准的检测方法，能够更好地评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。

除了检测技术的不断改进之外，针对猪圆环病毒2型的研究也在不断深入。

研究人员对猪圆环病毒2型的传播途径、致病机制、病毒变异性等方面进行了深入研究，为更好地控制和防治该病毒提供了重要的理论支持。

研究人员还不断寻找新的疫苗和药物来应对猪圆环病毒2型的感染，为猪场养殖业的健康发展提供有力的支持。

猪圆环病毒2型Cap全基因的克隆与原核表达

猪圆环病毒2型Cap全基因的克隆与原核表达李海花;覃尧;张全红;李秀丽【摘要】Cap蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的主要结构蛋白,能诱导免疫保护,是临床上利用血清学诊断PCV2的主要依据.本研究根据PCV2 TJ株全基因核苷酸序列(GenBank登录号:KC751546)设计特异性引物,利用PCR从PCV2 TJ株扩增获得Cap全基因,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET32a-Cap,经IPTG诱导获得约48 ku的重组融合蛋白,Western blotting分析结果表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体和PCV2阳性猪血清均呈阳性反应.本研究成功克隆Cap全基因,构建原核表达载体,并实现Cap融合蛋白的表达,这为PCV2 Cap蛋白的功能研究及诊断方法的建立和亚单位疫苗的研制奠定了基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)002【总页数】5页(P337-341)【关键词】猪圆环病毒2型;Cap基因;克隆;原核表达【作者】李海花;覃尧;张全红;李秀丽【作者单位】天津市畜牧兽医研究所,天津300384;中国农业大学动物医学院,北京100193;国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心,北京100190;天津市畜牧兽医研究所,天津300384【正文语种】中文【中图分类】Q786猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2，PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原体[1]。

PMWS以断奶仔猪的进行性消瘦、贫血、淋巴结肿大、肝炎、肾炎和肺炎为特征。

除PMWS外，PCV2还与许多相关疾病的发生有关，如猪皮炎与肾炎综合征、增生性坏死性肺炎、仔猪先天性颤抖、猪呼吸道综合征、繁殖障碍、肠炎等疾病也与PCV2有重要关联[1-4]。

猪圆环病毒2型的分离鉴定及全基因组克隆和序列分析

１１２细胞、粒、种．．质菌Ｐ１Ｋ一５细胞购自武汉病
毒所细胞保管中心（ＰＶ１及ＰＶ一测为阴经Ｃ一Ｃ２检
性）限制性内切酶ＢｍＨ工、ｎ，ａＨｉｄⅢ、ＭＤ１一ｐ８Ｔ
Ｓｍｐｅ体（生物工程大连有限公司）ＤＨ５ｉｌ载宝，ａ宿主菌，四川农业大学动物生物技术中心保存。
Ｐ一５细胞，Ｋ１盲传１５代后，Ａ方法检测出有明显的特异性荧光，该毒株命名为ＰＶ一一Ｃ株，对ＰＶ一ＩＦ将Ｃ２Ｓ并Ｃ２Ｓ－Ｃ病毒基因组全长进行扩增及克隆、测序与比对分析。测序结果显示该病毒基因组全长１７７ｂ，离６ｐ分
１１３引物设计采用Ｆｎｕ等ｎ。设计用．．ｅａｘＭ。所。于扩增ＰＶ－基因组为１７７ｂＣ２全６ｐ或１７８ｂ６ｐ的
ＷＳ之外，Ｃ－ＰＶ２还与猪的几种新出现传染病的发生
密切相关，包括猪呼吸道病综合征（ＲＣ）ＰＤ及猪增生
重视，为当前研究的热点。成
本试验从所采典型ＰＭＷＳ病料中分离鉴定出ＰＶ２并对Ｐ一Ｃ－，ＣＶ２全基因组的扩增、隆和序列克
分析，与ＧｅＢｎ并ｎａｋ中的ＰＶ２参考毒株进行同源Ｃ一
机理提供依据。
列，ＣＰＶ可分为ＰＶ１和ＰＶ２个血清型，Ｃ－Ｃ－Ｃ－两ＰＶ１

猪圆环病毒2型的全基因克隆和序列分析

１２１引物的设计与合成．．
扩增获得４株Ｐ＿ＣＶ２的全基因组序列，分别命名为ＳＤＮｙＰＶ２ＳＩＰＶ一、ＨＢｄＰＶ一、ＳＮ— Ｃ－Ｃ－、ｈ）Ｃ２Ｉｂ — Ｃ２ＧＬＰＶ一２经测序确定长度均为１７７ｂ。应用ＤＮＡＳａ序列分析表明，，６ｐｔｒ４个ＰＶ－Ｃ２分离株与国外部分分离株的
工生物工程技术服务有限公司产品；质粒提取试剂盒
为博大泰克公司产品；限制性内切酶Ｈｉｄ］ＢｍＨＩｎ］、ａ］为美国Ｐｏｇｒｍｅａ公司产品；菌株Ｄ５为国家口蹄疫Ｈａ参考实验室保存。其他试剂均为国产分析纯。
１２方法．
定基础。
命名的，病毒属于圆环病毒科圆环病毒属成员，该是迄今发现的最小的动物病毒。该病毒分为两种基因
型，ＰＶ一即Ｃ１及ＰＶ一。自圆环病毒被发现以来，Ｃ２
在世界多个国家都有分离毒株出现，证明ＰＶ－并Ｃ２是断奶仔猪多系统衰竭综合征（ＭＷＳ的病原之Ｐ）
１１２试剂、粒和菌种ＰＲ试剂，Ｎ片段回．．质ＣＤＡ
收试剂盒，ＴＸｇｌＰ１一ｅｔｒＩＧ，－ａ，ＭＤ８ＴＶｃ为宝生物工Ｐｏ
程（大连）有限公司产品；Ｎ提取试剂盒为上海生ＤＡ
（国农业科学院兰州兽医研究所．畜疫病病原生物学国家重点实验室，业部畜禽病毒学重点开放实验室。中家农国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州７０４）３０６

2株猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析

流行株的全基因，行了序列测定分析．并进结果表明，个分离株基因组全长分别为１６ｐ和１６ｐ２２７ｂ７８ｂ，个分离７
株之间的核苷酸相似性为９．％，Ｇｎａｋ已发表的ＰＶ７３与ｅＢｎ上Ｃ２分离株之间的相似性为９．％一９３３８９．％．２个分离株的ＯＦＲ２核苷酸序列相似性分别为９．％一９６和９．％￣８０，在一定的变异．１３９．％０６９．％存
ＨｉｎＥＹ — ，ＫＮｉ— ＵＬｕｊｎＰＮＱａ —ｕ，Ａｏｇｘ，ＨＡＧＧｉｏｇｍｉＯＧＬｕＷ，ＵＯＹ－，ＡｕｎｈｉＣＯＺｎ —ｉＺＮｕ— ｎｕｈ
（ｏｅｅｏＶｔｉａｅｉｎ，ｏｔＣｉａＡｒｕｔａＵｉｒｉＧａｇｈｕ５￣２Ｃｉ）ＣｌｇｆｅｒｒＭｄｃｅＳｕｈｎｇｉｌｒｎｖｓｔｕｎｚｏ１４，ｈｎｌｅｎｙｉｈｃｕｌｅｙ，ａ
ＡｓａｔＡｃｒｉｇｔｔｅｃｍｌｔｇｎｍｅｓｑｅｃｓｆｏｃｅｃｒｖｕｐＰＶ）ｐｂｉｅｂｔｃ：ｃｏｄｎｏｐｅｅｏｅｕｎｅｒｉｉｏｉｓｙｅ２（Ｃ２ｕｌｈｄｉｒｏｈｅｏｐｎｃｒｔｓｎ
关键词：２ｓ５．５．文献标识码：Ａ文章编号：０１４ｌ２０）３０８ —５１０ — １Ｘ（０８０ —０００
Ｍｏｅｕａｏｉｇ，ｅｕｎｉｇａｄＡｎｌｓｓｏｈｍｐｅｅｌｃｌｒＣｌｎｎＳｑｅｃｎｎａｙｉｆｔｅＣｏｌｔＧｅｏｅｏｏｃｎｒｏｉｕｐｓｌｔｓｎｍｆｔｗｏＰｒｉｅＣｉｃｖｒｓＴｙｅ２Ｉｏａｅ

猪圆环病毒2型分子生物学研究进展

组全长约１７６７～１７６８ｂｐ，衣壳蛋白呈二十面体
对称＿１１。
免疫组化试验，证实感染猪的组织中存在圆环病
毒。经ＰＣＲ扩增后分析序列，发现该病毒与早期
摘
要：猪圆环病毒２型（ＰＣＶ２）是引起猪圆环病毒相关疾病（ＰＣＶＡＤ）的主要病因。目前流行的ＰＣＶ２被分为ＰＣＶ２ａ和
ＰＣＶ２ｂ两个亚群。北美和其他国家ＰＣＶＡＤ的暴发通常与主要基因型从ＰＣＶ２ａ转变为ＰＣＶ２ｂ有关。本文对圆环病毒２型的分
１病毒结构及病原生物学特性
猪圆环病毒２型属于圆环病毒科圆环病毒
属，单股负链环状不分节无囊膜ＤＮＡ病毒。基因
毒后没有引发具有临床症状的疾病。直到２０世纪９０年代，加拿大出现一种名为ＰＭＷＳ的新型衰竭性疾病。利用ＰＣＶ特异性单克隆抗体进行电镜和
ＰＣＶ２ｂ，ｔｗｏｓｕｂｇｒｏｕｐｓｏｆＰＣＶ２，ｗｅｒｅｅｐｉｄｅｍｉｃｒｅｃｅｎｔｌｙ．ＩｎＮｏａｈＡｍｅｒｉｃａａｎｄｏｔｈｅｒｃｏｕｎｔｒｉｅｓ，ＰＣＶＡＤｏｕｔｂｒｅａｋｓｗｅｒｅｕｓｕａｌｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｍａｉｎｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｏｍＰＣＶ２ａｉｎｔｏＰＣＶ２ｂ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｕｃｒｔｕｒｅｏｆｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅｅｉｒｃｏｖｉｒｕｓｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２ａｎｄｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展1. 引言1.1 猪圆环病毒2型概述猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病的病毒，属于环状病毒科。

PCV2是一种小型非包膜的双链DNA病毒，病毒颗粒直径约17-25nm。

PCV2主要感染猪，特别是生长发育中的猪，并可引起多种免疫抑制相关疾病，严重影响了猪的生长发育和生产性能。

PCV2感染广泛分布于全球范围内，给猪养殖业造成了巨大的经济损失。

PCV2感染的临床症状主要包括疲劳、厌食、呼吸困难等，重症时还可导致猪的死亡。

随着猪养殖业的快速发展和养猪密度的增加，PCV2感染的发病率也在逐渐上升。

加强PCV2的检测和研究对于控制和预防猪瘦弱综合征和猪圆环病毒病具有重要意义。

通过对PCV2的检测技术和研究进展的深入探讨，可以为疫苗研制和防疫工作提供重要的参考和支持。

【字数：276】1.2 研究意义猪圆环病毒2型是一种广泛存在于猪群中的病原体，能够引起猪圆环病毒病，严重危害猪的生产业。

猪圆环病毒2型检测技术的研究意义在于及早发现并控制病毒传播，保障猪群的健康和生产安全。

通过对猪圆环病毒2型检测技术的研究和应用，可以提高疾病的早期诊断率和治疗效果，降低疫情的传播风险，减少养猪业的经济损失。

研究猪圆环病毒2型的检测技术还可以为相关病毒的检测提供借鉴和参考，推动病毒学领域的发展。

加强对猪圆环病毒2型检测技术的研究具有重要的意义，有助于提高我国养猪业的竞争力和可持续发展能力。

【研究意义】2. 正文2.1 猪圆环病毒2型检测方法猪圆环病毒2型（PCV2）是一种严重危害猪只健康的病毒，因其高度变异性和传染性而备受关注。

为了及时发现和控制PCV2感染，研究人员开发了多种检测方法。

1. 病毒核酸检测：PCR技术是目前应用最广泛的检测方法之一。

通过设计特异性引物，可以实现对PCV2基因组的扩增和检测，具有高灵敏度和特异性。

2. 免疫学检测：病毒抗原检测通过检测病毒在体内产生的蛋白质来确认感染情况。

猪圆环病毒2型LN株初步分离与全基因组测序

ｓａｍｐｌｅｓｏｆａｐｉｇｆａｍｒｉｎＬｕｏｙａｎｇＣｉｔｙｏｆＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＰＣＶ一２．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ．山ｅｇｅｎｏｍｅｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｗａｓａｍｐｌｉｉｆｅｄ．ｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａＰＣＶ一２ｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓａｍｐｌｅｓａｎｄｗａｓｎａｍｅｄａｓＬＮ．ＴｈｅｓｉｚｅｏｆｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆＬＮｓｔｒａｉｎｗａｓ１７６７ｂｐ．ｈｅＴｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｗｉｌｌｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｓｏｒｆｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆＰＣＶ－２ａｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｔｈｅｖａｃｃｉｎｅａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｓｏｒｆＰＣＶ一２．

病死猪圆环病毒2型检测及全基因序列分析

猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）是一种重要的猪病病原，于1997年在加拿大被首次发现，随后在大多数养猪国家被发现。

PCV2可引起猪的多种病症，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS ）、猪皮炎肾病综合征（PDNS ）、病死猪圆环病毒2型检测及全基因序列分析高志强1，汪　琳1，赵相鹏1，蒲　静1，尹　羿1，尹立勇2，张　伟1，任　彤1（1.北京海关技术中心，北京　100026；2.顺义区动物卫生监督所，北京　101300）摘　要：为准确检测猪圆环病毒2型（PCV2）并分析其基因序列情况，在序列比对分析的基础上，设计一对简并引物和一条探针，经体系优化建立了PCV2的荧光PCR 方法。

该方法可检出10拷贝的PCV2质粒DNA，不与猪瘟病毒等多种病毒发生交叉反应。

对送检的2批次45份病死猪脏器进行检测，检出25份阳性样品，与套式PCR 方法的复合率为95.6%；对3份强阳性样品使用一对全基因组扩增引物，扩增了PCV2型全基因片段；经克隆测序后分析，发现3个病毒基因分别属于2种基因亚型（PCV2b 和PCV2d）。

本研究对于PCV2的准确检测及其变异特征的了解具有参考意义。

关键词：病死猪；猪圆环病毒2型；序列分析中图分类号：S 851.3 文献标识码：A 文章编号：1005-944X （2019）10-0084-06DOI ：10.3969/j.issn.1005-944X.2019.10.018Detection of Porcine Circovirus Type 2 in Dead Pigs and Analysison Its Complete Genome SequenceGao Zhiqiang 1，Wang Lin 1，Zhao Xiangpeng 1，Pu Jing 1，Yin Yi 1，Yin Liyong 2，Zhang Wei 1，Ren Tong 1（1. Beijing Customs Technical Center ，Beijing 100026，China ；2. Shunyi Animal Health Supervision Institution ，Beijing 101300，China ）Abstract ：In order to accurately detect porcine circovirus type 2（PCV 2）and to analyze its genome sequence ，a pair of degenerate primers and a probe were designed based on sequence alignment analysis ，after systematic optimization ，a real-time PCR method was established ，which could detect 10 copies of plasmid DNA of PCV 2，with no any cross reaction with classical swine fever virus and other viruses. Then two batches of 45 organ samples collected from dead pigs were tested by established method ，and 25 samples were detected to be positive ，the coincidence rate with nested-PCR was 95.6%；for the three strong-positive samples ，their complete gene fragments of PCV 2 were ampliﬁed by a pair of primers ，then were sequenced and analyzed ，and it was found that the genes of the three viruses were classiﬁed into two different subtypes （PCV 2b and PCV 2d ）. Therefore ，it was of certain signiﬁcance to conﬁrm relevant test results and recognize any variation of PCV 2 by the above method.Key words ：dead pig ；porcine circovirus type 2；sequence analysis收稿日期：2019-08-05　修回日期：2019-08-12基金项目：北京市科技计划项目（Z171100001317011）；国家重点研发计划项目（2017YFF0210305）通信作者：汪琳2019年第36卷第10期图1　引物探针设计区域的序列比对结果猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）、繁殖障碍、肉芽肿性肠炎、坏死性淋巴结炎等。

猪圆环病毒2型的分离鉴定及其全基因组序列分析

河南农业科学，2018，47(6):117-121Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i：10.15933/ki. 1004-3268.2018.06.020猪圆环病毒2型的分离鉴定及其全基因组序列分析汪磊1!2,赵宝磊2,冯华2,刘运超2,魏蔷2,张改平(1.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002& 2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州450002)摘要：为分离鉴定流行于河南省的猪圆环病毒2型（P C V2)，对河南省不同地区猪场的11份疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（P M W S)猪的病料进行分离鉴定，得到P C V2毒株。

通过P C R检测，11份临床疑似病料中，7份确诊为P C V2阳性病料，阳性率为63.6%。

挑选出阳性值较高的毒株命名为zm d-20161022,通过增殖培养筛选出优良毒株，并对其进行单层过氧化物酶试验（I P M A)鉴定，分析免疫原性；应用P C R对该病毒全基因组进行特异性扩增，经测序后对该病毒的同源性和系统进化进行分析。

结果显示，该毒株序列全长1767b P，同源性分析发现与国内3株P C V2毒株(A Y686763、H M641752、H M038034)的同源性为95.2% ~98.3%，与基因登录号为H M038030.1 的同源性高达98.6%。

系统进化树分析发现，_1：-20161022毒株与基因登录号为10038030.1的亲缘关系很近，被鉴定为P C V2b-1c型，属于P C V2b的一种亚型。

关键词：猪圆环病毒2型；分离鉴定；I P M A;全基因组；序列分析中图分类号：S852.65 文献标志码：A文章编号$ 1004-3268(2018)06-0117-05Isolation and Identification of Porcine Circovirns Type 2 andIts Complete Genome Sequence AnalysisW A N G Lei1，2,Z H A O Baolei2,F E N G H u a2,LIU Yunchao2,W E I Qiang2,Z H A N G Gaiping1，2*(1.College of Animal Husbandry and V eterinary Medicine，H e n a n Agricultural University，Zhengzhou450002,C h ina;2.K e y Laboratory of Animal I m m u n o l o g y,H e n a n A c a d e m y of Agricultural Scienccs/Key Laboratory ofAnimal I m m u n o l o g y，Ministry of Agriculture，Zhengzhou450002,China)Abstract$In order to isolate and identify porcine circovirus type2，11 clinical samples from weanling pigssuspected of P C V2 infection，which i s endemic to pig farms in Henan province，were tested and identified.The7out of11 clinical samples were diagnosed as P C V2 positive by P C R，and the positi63.6% .The strain witli the highest positive value was selected and nam e d as z m d-further tested by I P M A to a nalyze the immunogenicity，and the complete genome was amplified by P C Rand sequenced for homology and phylogenetic analysis.The full lengtii of z m d-20161022 was 1767b p，95.2% —98.3% homology wit!i three P C V2 strains(A Y686763，H M641752，H M038034)from China，and98.6%homology with the P C V2 strain(the gene accession number H M038030. 1 Phylogenetic analysis showed that the z m d-20161022 strain belonged to P C V2b-1c，a subtype of P C V2b，which was closely related to the gene accession number H M038030.1.K e y words$Porcine circovirus type 2 ；Isolation and identification；I P M A；G e n o m e;Sequence analysis猪圆环病毒（P〇，i n e C1rco V1rus，P C V)，属于圆单股环状负链D N A病毒，是目前发现的最小的动物环病毒科（C m x o m d e)圆环病毒属，是一种无囊膜的病毒之一[1]。

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是一种广泛分布于全球范围的病毒，属于猪圆环病毒科。

该病毒在猪群中引起了严重的疾病，主要表现为猪繁殖与生产性能下降、控制性的呼吸道疾病和消化道疾病，并使猪对其他传染性疾病易感，导致了重大经济损失。

目前，猪圆环病毒2型的检测技术主要包括传统的分子生物学方法和免疫学方法。

分子生物学方法中，常用的PCR技术可通过扩增病毒基因组中的特定片段来检测病毒。

常用的PCR方法包括常规PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）和逆转录PCR等。

这些方法具有灵敏度高、特异性强的优点，能够快速准确地检测病毒。

PCR技术还可以用于基因测序和基因型分析，有助于研究病毒的遗传变异和演化规律。

免疫学方法中，常用的技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术和免疫杂交等。

ELISA技术是一种常规的血清学检测方法，可以通过检测病毒抗原或抗体来确定样品中是否存在PCV2。

免疫荧光技术可以利用荧光染料标记的抗体与病毒抗原或抗体结合，通过荧光显微镜观察来检测病毒。

免疫杂交是利用放射性同位素或酶标记探针与病毒核酸结合，采用一定的检测方法来确定样品中是否存在病毒。

猪圆环病毒2型的检测技术在近年来得到了广泛的关注和研究。

研究人员通过不断改进和创新，提高了检测方法的灵敏度和特异性。

研究者们通过对PCR技术的不断改良，将其应用于PCV2的早期诊断和病毒载量的定量分析。

向PCV2的抗原和抗体的检测方法中引入了新的标记物和探针，进一步提高了检测的准确性和可靠性。

一些新兴的技术也正在被应用于PCV2的检测，如新一代测序技术和基于CRISPR-Cas9技术的病毒诊断方法，这些技术有望在未来得到更广泛的应用。

猪圆环病毒2型的检测技术是研究人员关注的焦点。

随着技术的不断发展和创新，我们可以期待更加准确、快速、灵敏的检测方法的应用，为PCV2的防控和研究提供有力的支持。

猪圆环病毒2型的分离鉴定及其全基因组序列分析

猪圆环病毒2型的分离鉴定及其全基因组序列分析汪磊;赵宝磊;冯华;刘运超;魏蔷;张改平【摘要】为分离鉴定流行于河南省的猪圆环病毒2型(PCV2),对河南省不同地区猪场的11份疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)猪的病料进行分离鉴定,得到PCV2毒株.通过PCR检测,11份临床疑似病料中,7份确诊为PCV2阳性病料,阳性率为63.6％.挑选出阳性值较高的毒株命名为zmd-20161022,通过增殖培养筛选出优良毒株,并对其进行单层过氧化物酶试验(IPMA)鉴定,分析免疫原性;应用PCR 对该病毒全基因组进行特异性扩增,经测序后对该病毒的同源性和系统进化进行分析.结果显示,该毒株序列全长1 767 bp,同源性分析发现与国内3株PCV2毒株(AY686763、HM641752、HM038034)的同源性为95.2％～98.3％,与基因登录号为HM038030.1的同源性高达98.6％.系统进化树分析发现,zmd-20161022毒株与基因登录号为HM038030.1的亲缘关系很近,被鉴定为PCV2b-1c型,属于PCV2b的一种亚型.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2018(047)006【总页数】5页(P117-121)【关键词】猪圆环病毒2型;分离鉴定;IPMA;全基因组;序列分析【作者】汪磊;赵宝磊;冯华;刘运超;魏蔷;张改平【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviride)圆环病毒属,是一种无囊膜的单股环状负链DNA病毒,是目前发现的最小的动物病毒之一[1]。

感染性猪圆环病毒2型基因组DNA的分子克隆

感染性猪圆环病毒2型基因组DNA的分子克隆芦银华;华修国;崔立;谈国蕾;许立华;黄伟坚;陈德胜;陈溥言【期刊名称】《中国病毒学》【年(卷),期】2003(018)004【摘要】本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组(1 768bp),克隆入pcDNA3载体的EcoRI酶切应点,获得含有PCV-2全基因组的重组质粒,命名为pcDNApcv2.将重组质粒大量扩增后,用EcoRI切出1 768bp的PCV-2全基因组,在体外用T4 DNA连接酶使其连接环化.用脂质体法将体外连接产物转染无PCV污染的PK-15细胞,经4次连续传代,用间接免疫荧光实验(IFA)及电镜观察证实已获得复制能力的PCV-2病毒.由此可见,本试验构建的环化的PCV-2全基因组DNA具有感染性.【总页数】5页(P371-375)【作者】芦银华;华修国;崔立;谈国蕾;许立华;黄伟坚;陈德胜;陈溥言【作者单位】南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095;上海交通大学农学院,上海,200030;上海交通大学农学院,上海,200030;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095;宁夏大学农学院动物科学系,宁夏银川,750105;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.类猪圆环病毒2型因子P1与P2株全长基因组DNA分子克隆的构建 [J], 温立斌;何孔旺;杨汉春2.嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性 [J], 宋益;朱丽娜;高崧;刘秀梵3.猪圆环病毒2型BF株感染性分子克隆系列突变株的构建 [J], 王芳;盖新娜;郭鑫;杨汉春4.猪圆环病毒2型基因组DNA的结构与功能研究进展 [J], 赵燕;喻正军5.猪圆环病毒2型HZ0201株分子克隆的感染性分析 [J], 陈婷飞;周继勇;陈庆新;商绍彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪圆环病毒2型的全基因克隆和序列分析

猪圆环病毒2型的全基因克隆和序列分析杨顺利;尹双辉;杨亚民;刘湘涛【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)010【摘要】参考GenBank中发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因序列,设计一对PCR引物,从病料中扩增获得4株PCV-2的全基因组序列,分别命名为SDNY-PCV-2、ShD-PCV-2、 HBbd-PCV-2、GSLN-PCV-2,经测序确定长度均为1 767 bp.应用DNA Star序列分析表明,4个PCV-2分离株与国外部分分离株的核苷酸序列同源性达95.5%～99.8%,与PCV-1毒株的序列同源性为76.2%～77.6%.与国内外部分分离毒株序列进化树分析表明,4个PCV-2分离毒株处于不同分支中,存在一定差异.【总页数】5页(P1-5)【作者】杨顺利;尹双辉;杨亚民;刘湘涛【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州,730046【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2【相关文献】1.猪圆环病毒1型和2型四川分离株全基因克隆分析 [J], 朱玲;郭万柱;徐志文;陈杨;周远成2.辽宁地区猪圆环病毒2型全基因克隆与序列分析 [J], 董烨;郭士琪;孙雪;沈国顺;刘丽霞3.5株猪圆环病毒2型全基因克隆和序列分析 [J], 唐志玲;肖建雄;陈瑞爱;罗满林4.猪圆环病毒2型贵州部分流行株的全基因克隆及序列分析 [J], 杨志刚;王喜;石远菊;汤德元;曾智勇;黄涛;王彬;尹德晶;郑如雯;杨翼5.河南省部分地区猪圆环病毒2型全基因组的克隆与序列分析 [J], 朱前磊;宋丹;杨海波;赵美雪;张利平;刘敏;陈红英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。