抗核抗体阳性颗粒型如何鉴别
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。
以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。
原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。
通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。
2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。
原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。
结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。
3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。
4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。
以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。
抗核抗体的检测方法
抗核抗体的检测方法
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA），就像侦探在寻找线索一样，能精准地检测出抗核抗体是否存在呢。
比如说，在检查血液的时候，它能火眼金睛般地把抗核抗体给揪出来！
2. 免疫荧光法呀，如同一个神奇的魔法镜，可以让抗核抗体现形哟！就好比如你在黑暗中寻找东西，它一下子就把光打在了目标上，厉害吧！比如医生用这个方法能清楚地看到抗核抗体的情况呢。
3. 免疫印迹法可牛了，它仿佛是个智能识别器，对抗核抗体的辨别那叫一个准！你想想看，这不就像是在一堆东西里一下子挑出你想要的那个，是不是很神奇呀！像诊断一些疾病的时候就经常用到它呢。
4. 胶体金法呀，就像是个小巧玲珑的指南针，能快速指引出抗核抗体的方向哦！比如说在一些快速检测中，它就发挥大作用啦！
5. 化学发光法，那简直就是夜空中最亮的星呀，一下子就能把抗核抗体照亮呢！举个例子，在检测的关键时刻，它能给出最闪亮的答案！
6. 间接免疫荧光法，相当于一个精准的瞄准器，能准确无误地锁定抗核抗体呢！就像射击比赛中瞄准靶心一样厉害哟！比如在复杂的情况中它也能发挥威力。
7. 斑点酶免疫技术，如同一个细心的卫士，能牢牢地守住检测抗核抗体的关卡呀！想想看，是不是很有安全感呢！比如在特定的检测情境下它可重要啦。
8. 流式细胞术，哇塞，这可是个高科技的玩意儿呀，能高效地检测抗核抗体呢！这就好比有一双特别的眼睛，能瞬间捕捉到关键信息，厉害吧！像一些精确的分析中就少不了它。
9. 放射免疫法，那可是个厉害的角色呢，对检测抗核抗体有着独特的本领哦！就好像拥有超级力量一样，能准确找到目标呢！比如在一些专业的检测领域就有它的用武之地啦。
我觉得这些抗核抗体的检测方法都各有特点和优势，在医学诊断中都起着至关重要的作用呢！。
抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读-精选文档
自身免疫病的“病谱”
器官特异性
非器官特异性
桥本甲状腺炎 扩张性心肌炎
自身免疫性溶血性贫血 系统性红斑狼疮
原发性粘液水肿 恶性贫血
特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征
甲状腺机能亢进 自身免疫性胃炎
特发性粒细胞减少症
类风湿关节炎
Addisino病 1型糖尿病 重症肌无力
自身免疫性肝炎 原发性胆汁性肝硬化 原发性硬化性胆管炎
抗核膜抗体(抗板层素抗体)
荧光模式: 在核膜区呈现线状荧光, 中心区域荧光强度弱(Hep2), 而肝细胞片:中心区域发暗,无荧光, 此点可与核均 质荧光相区别. 靶抗原: 包括60kD, 68kD和74kD 3种蛋白组分,与中间丝相关, 以网状形式包被在核内膜的内部. 相关疾病: 慢性活动性自身免疫性肝炎的活动期.
每个实验室应根据各自情况，建立本室的cutoff值，以确保实验结果的精确性和可比性
部分自身抗体的国际参考品
参考品
特异性
WHO Wo80 dsDNA 100 IU/ampoule
WHO1064
均质型ANA 100 IU/ampoule
MRC 参考品A 均质型ANA 100 IU/ampoule
患病率↓： PPV↓ ，NPV↑ 理想的ANA试验： 高PPV：大部分阳性结果者是CTD患者 高NPV：大部分阴性结果者不患CTD
ANA检测的选择原则
临床医生选择ANA检测的目的： 1）在有典型症状患者中作出CTD的诊断 2）在症状不确定患者中排除CTD的诊断 3）明确CTD的类别 4）判断病情活动度
EUROIMMUN
粗颗粒型 抗RNP/Sm抗体
荧光模式:
§ Hep-2细胞:间期时,整个细胞核呈现粗颗粒,但有 时也出现中等到细的颗粒荧光,核仁为阴性;在分裂 期细胞中,浓缩的染色体部位为阴性,而外周区几乎 为均质型、光滑的荧光.
抗核抗体介绍
抗核抗体介绍抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE，95% ~100%）、类风湿性（RA，10%~20%）、混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、干燥综合症（SjS,10%~40%）、全身性硬皮病（85%~90%）、狼疮性（95%~100%）、原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，但经皮质激素治疗后，阳性率可降低。
抗核抗体在类人中约有20％～50％IgG型ANA呈阳性，小儿类风湿ANA的阳性率约19％～35％，伴发虹膜睫状体炎者阳性率高（505~90%），故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。
已发现75％类风湿病人有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）可使白细胞核受到破坏。
抗核抗体是一组对细胞核内的DNA，RNA，蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体。
按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如(一)抗DNA抗体，（二）抗组蛋白抗体，（三）抗非组蛋白抗体，（四）抗核仁抗体等。
每一大类又因不同抗原特性而再分为许多种类。
因此ANA在广义上是一组各有不同临床意义的自身抗体，更确切的名称应为抗核抗体谱。
ANA 主要存在于IgG，也见于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。
常见的核免疫荧光杭核抗体试验有以下几种图形：（1）均质型：核质染色均匀一致，这种染色型常与抗组蛋白和抗DNA抗体有关；（2）斑点型：核质染色呈斑点状，抗可提取性核抗原（ENA）抗体常呈这种染色型；（3）周边型：荧光染色围绕在核膜周围，它与抗DNA抗体有关；（4）核仁型：仅有核仁染色，具有抗4-6sRNA抗体呈现这种染色型；（5）着丝点型：在体外培养的细胞株（喉癌细胞）在核分裂相期时，可见到荧光染色的着丝点排列成特殊图型，而在鼠肝做底物中看不到此类图型，而被遗漏。
抗核抗体的分类，由于核抗原不同，有多种不同的ANA 。
抗DNA抗体抗DNA抗体有抗双链DNA（ds DNA）和抗单链(ss DNA)抗体之分。
抗核抗体检测及共识解读-263-2019年华医网继续教育答案
2019年华医网继续教育答案-263-抗核抗体检测及共
识解读
备注:红色选项或后方标记“[正确答案]”为正确选项
(一)间接免疫荧光法检测抗核抗体的荧光模型解读
1、关于间接免疫荧光法的细胞浆荧光模型的描述说法正确的是（）
A、胞浆细颗粒型：整个细胞核浆呈粗斑点型荧光染色，核仁染色可有可无
B、胞浆网状型：粗颗粒纤维状染色，延伸着染于整个细胞核内
C、胞浆极型：沿细胞核外围间断的斑点或颗粒状缎带样染色，分布于细胞质的两极[正确答案]
D、胞浆棒环状型：间期细胞核被膜呈现点状染色，邻近细胞相触点的荧光会增强
E、以上均正确
2、关于间接免疫荧光法的细胞核荧光模型的描述说法正确的是（）
A、细胞核均质型：整个间期细胞核呈现大小不一、荧光强度不同、分布有异的斑点
B、核质密斑点型：细胞核浆均匀荧光染色，根据细胞基质的不同，核仁染色可有可无
C、着丝点型：粗斑点(40-80/细胞)散落于间期细胞内，并集中排列在分裂期细胞的浓缩染色体中[正确答案]
D、细胞核细颗粒斑点型：整个细胞核浆呈粗斑点型荧光染色，核仁染色可有可无
E、以上均正确
3、关于间接免疫荧光法的细胞浆荧光模型的描述说法不正确的是（）
A、AC-16丝状/微管型：其特征是细胞骨架纤维染色，有时像细小间断的粒状沉积物[正确答案]
B、AC-17节段型：染色沿张力丝的短节和周期致密体增强
C、AC-18胞浆散点型：GW小体在间期细胞的细胞质内有染色，而染色颇常见于S/G2晚期细胞
D、AC-19胞浆致密颗粒型：整个细胞质呈现接近均匀但浑沌不清的模式。
抗核抗体核型与抗核抗体谱检测结果对比分析
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ５ ， Ｎ ｏ ． １ ４
・ １ ８５ ９ ・
・
临床检 验研 究论 著 ・
抗 核抗 体 核 型 与抗 核抗 体 谱检 测 结 果对 比分 析
常见 的抗 体 为 抗 ｓ Ｓ Ａ／ Ｒ ｏ ５ ２ ｋ ｄ （ ３ １ ． ７ ８ ） 、 抗ｓ ｓ Ａ ￣ ／ Ｒ ｏ ６ ０ ｋ （ ｄ ３ ０ ． ８ ４ ） 和抗 Ｓ Ｓ Ｂ ／ Ｌ ａ （ １ ９ ． １ ６ ） 抗体 ； １ ７例 荧光 均 质 型 标 本 中 ， 常 见 的 抗 体 为抗 核 小体 （ ４ ７ ． Ｏ ６ ） 和抗组蛋 白（ ４ ｌ ＿ １ ８ ） 抗体 ； 抗Ｃ ｅ ｎ ｐ Ｂ对 着 丝 点核 型 的诊 断 具 有 较 高 的 特 异 性 ， 阳性 率 为 ９ ２ ． １ ６ （ ４ ７ ／
Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ａ ｎｔ ｉ ｎｕｃ ｌ ｅ ａ ｒ ａ ｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄｙ ｋａ ｒ ｙ ｏｔ ｙ ｐｅ ｓ ａ ｎｄ ａ ｎｔ ｉ ｎｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ａ ｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄｙ ｓ ｐｅ ｃ ｔ ｒ ｕ ｍ
Ｃ ｈ ｅ ｎ ｇｉ ｑ ｉ ｏ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｏ Ｄｉ ， Ｄｅ ｎ ｇ Ｘｉ ａ ｏ ｇ ａ ｎ ｇ， Ｒｅ ｎ Ｆａ ｎ ｇ， Ｒｅ ｎ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ Ｊ ｉ ｅ， Ｌｉ Ｚｈ ｉ
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ， Ｙ ａ ｎ ｇ ｐ ｕ Ｄｉ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｔ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ９ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
抗核抗体及常用检测方法
Ｉ Ｉ Ｆ检测 Ａ Ｎ Ａ， 主要有 以下 ６种常见荧 光染 色模 型： ①核均
置命名 ， 如抗线粒体抗体 、 抗 高尔基体抗体 和抗着丝点抗体等。
２ 检 测抗 核抗体 的临床意义 对Ａ Ｎ Ａ的认识 始于狼疮细胞 的发现 ， 而对 Ａ Ｎ Ａ研究 的兴 起和深入则是源于新病种 、 新技术 的不断发现和 临床 医学 的迅
些非结缔组织病如慢性活动性肝炎 、 重症 肌无 力和慢性淋 巴性 甲状腺炎等也可见 Ａ Ｎ Ａ阳性 ，正常老年人也可 出现低滴度 的
ＡＮＡ 。
组 专 门针 对 细胞 核 内脱 氧 核 糖 核 酸 （ Ｄ Ｎ Ａ） 、核 糖 核 酸
（ Ｒ Ｎ Ａ） 、蛋 白质 、脂类 、酶类及这些物质分子 复合 物的抗体。
酶联免疫 吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 、 蛋 白芯片法［ １ ０ 】 、 金标法及 流式细胞 术【 ｌ 】 】 等， 但临床应用最为广泛的还 是 Ｉ Ｉ Ｆ和 Ｉ Ｂ Ｔ 。 ３ ． １ 间接免疫荧光法 该方 法是公认进行 Ａ Ｎ Ａ筛查 的首 选方法 。早在 １ ９ ５ ７年 ， Ｈｏ ｌ ｂ ｏ ｒ ｏ ｗ和 Ｆ ｒ ｉ ｏ ｕ等首先 以啮齿动物组
胞核各种成分的 自身抗体 ，是 自身免疫风 ｆ 生 疾病 （ ａ ｕ ｔ ｏ ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｅ ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ， Ａ Ｒ Ｄ） 诊 断 中重要 的血 清学标 志物 『 １ ・ ２ １ ， 其是
一
Ｊ ｏ 一 １ 抗体多见于肌炎 ， 且与合并肺间质纤 维化相关 。此外 ， 某
ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｉ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｉ Ｉ Ｆ ） 、 免 疫 印迹 法 （ ｉ ｍｍ ｕ ｎ ｏ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｅ ｓ ｔ ， Ｉ Ｂ Ｔ ） 、
临床医学检验基础知识讲解：抗核抗体检测方法
ANA的检测方法由于ANA的复杂性及多样性，故测定方法繁多。
目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。
1.免疫荧光法检测血清总ANA最常用的方法是荧光免疫组化法。
多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。
如将患者血清先进行不同比例的稀释，可以做大致的定量试验，在1：80稀释仍然虽阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。
在油镜下观察结果，可以将ANA阳性的荧光现象分成4种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断有进一步的参考价值。
①周边型表示抗DNA抗体存在；②均质型表示有抗DNP抗体；③斑点（颗粒）型多为抗ENA抗体；④核仁型多为抗核小体抗体。
SLE患者常出现周边型、匀质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型；周边型对SLE有较高的特异性。
近年有人用锥虫或血鞭毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗dsDNA抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其他抗原干扰；在阳性结果时，可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。
因此该试验用于测定抗dsDNA抗体具有特异性强和敏感性高的优点。
另外，短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得推广。
2.放射免疫法常用检测抗DNA抗体，有Farr法及过滤法。
①Farr法的原理为用同位素标记DNA，被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合，经50%硫酸铵饱和液沉淀，然后比较沉淀物和上清液中的放射活性，从而得出DNA结合活性，一般结合率大于20%为阳性。
②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器（孔径为0.45μm）进行过滤，游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。
3.ELISA临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。
目前已有试剂盒供应。
4.免疫印迹（immunoblotting）先将混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后将这些带转印到硝酸纤维素膜上，最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析（方法见第十五章）。
抗核抗体荧光片判读
ANA
胞浆颗粒型：线粒体、 胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 、
细胞浆 胞浆纤维性：波形蛋白、 胞浆纤维性：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白 分裂期细胞阳性：纺锤体、中间体、 分裂期细胞阳性：纺锤体、中间体、中心粒等
核均质型（dsDNA、ssDNA、核小体、组蛋白） 核均质型（dsDNA、ssDNA、核小体、组蛋白）
常见的抗核抗体的荧光模型
细胞核：核均质性、核膜型、核颗粒性、 细胞核：核均质性、核膜型、核颗粒性、着丝点 核点型、核仁型、细胞周期蛋白Ⅰ 型、核点型、核仁型、细胞周期蛋白Ⅰ和Ⅱ型等
细胞浆：胞浆颗粒型、胞浆纤维性等 细胞浆：胞浆颗粒型、
分裂期细胞阳性：纺锤体、中心粒、 分裂期细胞阳性：纺锤体、中心粒、中间体等
可看到10-20个荧光点，肝组织 个荧光点， 可看到 个荧光点 切片荧光弱， 切片荧光弱，很容易被忽略
核点型
3-20个大小、强度不均匀的点状荧光 个大小、 个大小
染色体阴性， 染色体阴性，周围点状荧光
大小、 大小、数目不均一的点状荧光
胞浆颗粒型
线粒体
核糖体P蛋白 核糖体 蛋白
Jo-1
抗溶酶 高尔基体抗体 体抗体
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下： 根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
核均质性： 核均质性：DNA、组蛋白和核小体等 、 核膜型：板层素、 核膜型：板层素、gp210等 等 细胞核 核颗粒性 核糖核蛋白： 核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A 、 、 SS-B、Ku等 、 等 细胞周期蛋白： 细胞周期蛋白：Ⅰ型（PCNA)和Ⅱ型 和 核仁型： 多聚酶、 核仁型：Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl、原纤维蛋白 、 多聚酶 、 核浆点型：着丝点、核点等 核浆点型：着丝点、核点等
抗核抗体检测原理
抗核抗体检测原理抗核抗体是指针对细胞核内物质（包括核糖体、线粒体等）的自身免疫抗体。
抗核抗体检测在临床上广泛应用于风湿免疫系统疾病的诊断和鉴别诊断。
抗核抗体检测原理主要是通过ELISA或间接免疫荧光法等技术，检测患者血清中的自身免疫抗体与核抗原结合的情况，来判断是否存在自身免疫反应。
抗核抗体检测的方法有多种，本文将重点介绍ELISA和间接免疫荧光法。
一、ELISA法检测原理ELISA法是酶联免疫吸附试验，又称酶标法。
其检测原理基于抗原与特异性抗体的反应，在一个特定的底物上标记酶使其可定量测定。
ELISA法的具体操作步骤如下：1. 将核抗原制备成微孔板的包被抗原，加入标准物、阳性及阴性对照和待检血清。
2. 洗涤掉未结合物，加入人抗IgG酶标记物，形成抗体-抗原-酶复合物。
3. 清洗掉未结合的抗体，加入底物与显色剂，使酶与底物反应所生成的色素可量化。
4. 通过光密度计测定每个孔的发光程度，根据标准曲线计算出各样本抗体的浓度。
二、间接免疫荧光法检测原理间接免疫荧光法又称间接荧光抗体法，其检测原理是使用荧光标记的细胞核物质（如正常人淋巴细胞的核）作为抗原，检测待测血清中的自身抗体结合情况。
具体操作步骤如下：1. 将正常人淋巴细胞制成薄片，用甲醛固定，形成抗原。
2. 加入待检血清，其中若存在抗核抗体，会与抗原结合形成复合物。
3. 再加入荧光标记的抗人IgG抗体，以荧光染色，并进行显微镜观察。
4. 观察样本的荧光染色程度、荧光颗粒的类型和形态、分布情况等，以判断是否存在抗核抗体的阳性反应或抗核抗体水平的高低。
三、应用抗核抗体检测可以用于如系统性红斑狼疮、硬皮病、混合型结缔组织病等自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断。
对于一些具有高度特异性的抗核抗体或特定细胞核抗原，如抗ds-DNA（双链DNA）抗体，根据抗体阳性水平还可以预测某一个病人的病情的严重程度和治疗效果。
高滴度抗核抗体可预示病情活动度高，反之即预示病情不活跃，治疗效果好等。
抗核抗体
抗核抗体（ANA）实验室检测及结果解读2010-04-23 来源:本站综合浏览:1709次转发至：【字号：大中小】核心提示：抗核抗体（ANA）是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，是目前自身免疫性疾病最常用的筛查指标。
主要存在于血清中，也可在胸水，关节滑膜液和尿液中出现。
抗核抗体在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性，如SLE,RA,混合型结缔组织病一.1.抗核抗体阳性提示患者结缔组织病的可能,但仍要结合患者的临床表现及各结缔组织病的诊断标准.2.结缔组织病的易感人群一般为中青年女性,老年患者的自身抗体的滴度会升高,但一般为低水平.3.抗核抗体为一大类自身抗体的总称,ANA阳性进一步分型为针对多种核抗原成份特异性的自身抗体,根据间接免疫荧光的荧光模型(抗原底物为HEP-2和肝片)可区分不同的荧光核型,不同核型也有鉴别意义,如SLE多为均质型.MCTD多为颗粒型4.不同的结缔组织病可出现特征性抗体:如SLE相关的自身抗体有sm抗体,ds-DNA抗体,皮肌炎相关的JO-1抗体,MCTD相关的u1RNP抗体等等,5.先了解不同结缔组织病的自身抗体谱,进一步结合临床表现的诊断价值更大.二.我们先看看ANA检测的方法和原理，或许这样能使我们明白其中的奥妙。
临床上常用的ANA筛选实验是间接免疫荧光抗核抗体检测（IFANA）。
基本原理是患者血清存在的ANA（第一抗体）能与相应细胞核（浆）抗原成分结合，用荧光标记的抗人球蛋白抗体（第二抗体）复染，经过荧光显微镜检验地带网观察即能反映ANA存在，而且通过对患者血清做一定稀释后的检测还可以对抗体含量做半定量（滴度）测定。
本文来自检验地带网一般超过95％正常人群ANA水平的数值定义为ANA阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度>1：80为阳性。
ANA阳性可见于多种临床情况，除了自身免疫性风湿病，还可见于各种原因引起的肝硬化、自身免疫性肝病、肿瘤以及少数正常人尤其是老年人，但在正常人种通常IFANA滴度较低。
抗核抗体检测方法
抗核抗体检测方法
抗核抗体检测是一种通过检测人体血清中的抗核抗体（ANA）来评估自身免疫系统功能的方法。
以下是一些常见的抗核抗体检测方法：
1. 免疫荧光法：这是最常用的抗核抗体检测方法。
它使用细胞核素或其成分来作为探针，与患者血清中的抗核抗体结合，并通过荧光显微镜或免疫荧光仪观察标记物的荧光来判定阳性或阴性结果。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是一种常见的抗体检测方法，通过将抗核抗体与酶标记的抗体结合，再与细胞核素或其成分结合，最后加入酶底物以产生荧光或颜色反应，来判定阳性或阴性结果。
3. 免疫印迹分析（Immunoblot）：这种方法使用电泳将细胞核素或其成分分离开来，然后将其转移到膜上。
然后，将患者血清中的抗核抗体与膜上的目标蛋白结合，并使用酶标记的二抗或放射性同位素进行检测，来判定阳性或阴性结果。
4. 细胞结合抗体测定法：这种方法使用人类细胞进行抗核抗体检测。
血清中的抗核抗体与细胞表面上的细胞核素结合，然后通过荧光显微镜或流式细胞术来观察细胞结合情况，来判定阳性或阴性结果。
这些方法通常会综合使用，以获得更精确的抗核抗体检测结果。
抗核抗体阳性的诊断和鉴别诊断思路
抗核抗体阳性的诊断和鉴别诊断思路1.抗核抗体阳性提示患者结缔组织病的可能,但仍要结合患者的临床表现及各结缔组织病的诊断标准.2.结缔组织病的易感人群一般为中青年女性,老年患者的自身抗体的滴度会升高,但一般为低水平.3.抗核抗体为一大类自身抗体的总称,ANA阳性进一步分型为针对多种核抗原成份特异性的自身抗体,根据间接免疫荧光的荧光模型(抗原底物为HEP-2和肝片)可区分不同的荧光核型,不同核型也有鉴别意义,如SLE多为均质型.MCTD多为颗粒型4.不同的结缔组织病可出现特征性抗体:如SLE相关的自身抗体有sm 抗体,ds-DNA 抗体, 皮肌炎相关的JO-1抗体, MCTD相关的u1RNP抗体等等, 5.先了解不同结缔组织病的自身抗体谱,进一步结合临床表现的诊断价值更大.我们先看看ANA检测的方法和原理，或许这样能使我们明白其中的奥妙。
临床上常用的ANA筛选实验是间接免疫荧光抗核抗体检测（IFANA）。
基本原理是患者血清存在的ANA（第一抗体）能与相应细胞核（浆）抗原成分结合，用荧光标记的抗人球蛋白抗体（第二抗体）复染，经过荧光显微镜观察即能反映ANA存在，而且通过对患者血清做一定稀释后的检测还可以对抗体含量做半定量（滴度）测定。
一般超过95％正常人群ANA水平的数值定义为ANA阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度>1：80为阳性。
ANA阳性可见于多种临床情况，除了自身免疫性风湿病，还可见于各种原因引起的肝硬化、自身免疫性肝病、肿瘤以及少数正常人尤其是老年人，但在正常人种通常IFANA滴度较低。
ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析，ANA阳性并不能确立某种临床诊断，反之，ANA阴性也不能排除自身免疫性病。
通常，大多数ANA滴度的高低并非与疾病的活动性平行，所以抗核抗体滴度高未必提示疾病活动，也不一定是治疗的指征。
ANA筛选试验对于SLE是诊断无特异性，正常人中32％在1：40血清稀释可呈阳性，13％在1：80筛选时呈阳性。
抗核抗体(免疫荧光法)
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•
核点型
分少核点型（1-5）和多核点型（5-20），前者靶抗 原是p80盘曲蛋白，后者靶抗原是Sp100和PML。 少核点型多见于进行性系统性硬化症、干燥综合征， 也可见于SLE和PBC等。 多核点型常与AMA并存，多见于PBC，特别是对于 AMA阴性的PBC患者更有临床意义。
• 抗SSA（Ro）抗体和抗 SSB（La）抗体：此两种 抗体是ANA中的细颗粒型。
均质型
• 与抗组蛋白，AnuA anti-dsDNA相关 • 均质型可能是SLE或药物 性狼疮等； • 抗dsDNA抗体：该抗体可 能是ANA中的均质型或是 ANA阴性。最近研究发现， 也可能是颗粒型或核仁型。
• 抗Scl-70、抗RNA聚合酶、抗 PM-Scl • 该抗体是ANA中的核仁型，其 靶抗原是拓扑异构酶Ⅰ。该抗 体是硬皮病弥漫型较为特异的 抗体，并常预示着预后不良。 此外该抗体也可出现与多发性 肌炎、IgA肾病等患者。 • 抗原纤维蛋白抗体、抗PM-SCL 抗体和抗RNA多聚酶抗体：此 三者抗体均多为ANA中的核仁 型。抗原纤维蛋白抗体的靶抗 原是U3nRNP，抗PM-SCL抗体 的靶抗原是核仁中的颗粒成分， 抗RNA多聚酶抗体是RNA多聚 酶Ⅰ和Ⅲ。此三种抗体在硬皮 病中亦较为常见，亦可见于多 发性肌炎等疾病。
• •
核膜型
• • 抗ds-DNA,抗gp210、抗核孔复合 物 又称抗核周因子抗体，靶抗原是核 孔复合物（包括gp210和核孔蛋白 p62）和板层素B受体。该抗体在 PBC中亦具有较高的阳性率，此外 抗板层素B受体抗体也可见于自身 免疫性肝炎、抗磷脂综合征及SLE 等。抗gp210抗体和核孔蛋白p62 抗体对于判断PBC预后具有重要意 义，前者阳性常提示PBC有向肝衰 竭发展的危险性。
【检验医学】抗核抗体的检测
实验原理
⑥ 荧光显微镜观察
⑤ 洗去多余荧光二抗
④ 加入荧光二抗反应 ③ 洗去未反应蛋
① HEp-2细胞（底物片试剂盒） 检测过程 : 2 步反应 + 2步洗涤 + 1步观察
相关疾病：SLE
胞浆粗颗粒型
特点：胞浆颗粒粗且不均匀，核仁无染， 疑为线粒体抗体(M1~M10)
相关疾病：PBC（M2亚型）
核仁型
特点：核仁部位均匀染色 相关疾病：硬皮病、皮肌炎等
着丝点型
特点：分裂期大小相同的46个着丝点染色 相关疾病：局限性硬皮病
核点型
特点：细胞核部位分布大小较为 均匀的10个左右点状颗粒
如果在待测标本的底物片上观察到明亮、清晰的 亮绿色荧光，则说明该待测血清ANA阳性，并进 一步判断其荧光模型。
IIF法检测ANA荧光染色模型
细胞核 细胞浆
均质型 颗粒型 核仁型 着丝点型 周边型 核点型
核糖体型 线粒体型 高尔基体型 溶酶体型 胞浆颗粒型
细胞骨架
肌动蛋白型 波形蛋白型 细胞角蛋白型 原肌球蛋白型 纽带蛋白型
斑点型 周边型：
Ku 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型 板层素、gp210等
核仁型： Scl-70、RNA多聚酶和原纤维蛋白等 核浆点型： 着丝点、核点等
胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 细胞浆 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等
分裂期细胞阳性：
纺锤体、分离带、中心粒等
抗核抗体的检测策略
ANA细胞靶抗原成份模式图
抗核抗体的分类
抗核抗体的分类
以下是 8 条关于抗核抗体分类的内容：
1. 哎呀，抗核抗体有均质型的呀！就好像是一幅均匀涂抹的画卷一样。
比如说系统性红斑狼疮的患者中，就有可能出现这种均质型抗核抗体呢！
2. 嘿，还有斑点型的抗核抗体呢！这就像是夜空中那点点闪烁的繁星。
像干燥综合征等疾病，就可能有它的身影哦！
3. 哇塞，核仁型抗核抗体也不能小瞧啊！它就像一个神秘的核心区域。
有些硬皮病患者不就有这种类型嘛！
4. 妈呀，着丝点型抗核抗体很特别哦！就跟那些精准排列的扣子一样。
在局限性硬皮病中，它可是会出现的哟！
5. 呀，胞浆型抗核抗体也存在呀！这不就跟广阔的细胞质一样嘛。
像自身免疫性肝病患者有时就能检测到呢！
6. 嘿，膜型抗核抗体也挺有趣呢！可以想象成一层薄薄的膜呀。
一些自身免疫性疾病中也会有它的踪迹。
7. 哇哦，核糖核蛋白颗粒型抗核抗体可有意思了！就跟那些小小的颗粒聚集起来一样。
难道不是在特定疾病中会出现吗？
8. 哟呵，混合型抗核抗体也来啦！它就像是各种元素混合在一起的奇妙组合。
好多疾病中都可能有它搅和呢！
总之，抗核抗体的分类可真是多样又复杂，每一种都和不同的疾病有着千丝万缕的联系呀！。
抗核抗体主荧光核型核颗粒型
抗核抗体主荧光核型核颗粒型抗核抗体是指针对细胞核内的某些成分产生的抗体，通过免疫荧光染色技术可以观察到它们在细胞核中的分布情况。
抗核抗体主要用于自身免疫性疾病的诊断和鉴定，其中一种常见的核型是核颗粒型。
所谓核颗粒型，是指抗核抗体在细胞核内呈现出颗粒状的分布。
这些颗粒状结构是与核内一些特定成分相结合形成的，常见的有核仁、染色质或其他核内蛋白质。
核颗粒型的形成可能与某些自身免疫性疾病的发生和发展有关，因此对其进行观察和分析可以为相关疾病的诊断和治疗提供重要依据。
在进行抗核抗体主荧光染色时，首先需要获取患者的血清样本，然后将其与标记有荧光物质的抗人免疫球蛋白结合。
这样，当抗体与细胞核内的特定成分结合时，荧光信号将会在显微镜下观察到。
如果观察到的荧光信号呈现出颗粒状分布，就可以判断为核颗粒型。
核颗粒型的出现可能与某些自身免疫性疾病相关。
例如，系统性红斑狼疮（SLE）是一种免疫系统性疾病，患者体内常会产生大量的抗核抗体。
在SLE患者的核型中，核颗粒型是最常见的一种类型。
此外，核颗粒型也可以在其他一些自身免疫性疾病中观察到，例如混合性结缔组织病、多发性肌炎和系统性硬化症等。
通过观察核颗粒型的形成情况，可以为自身免疫性疾病的诊断和鉴定提供重要信息。
不同的核型在不同的疾病中有其特异性，因此可以根据核型的类型和分布情况来判断患者的疾病类型和严重程度。
此外，通过监测核颗粒型的变化，还可以评估治疗的效果和疾病的进展情况。
需要注意的是，核颗粒型并不是所有自身免疫性疾病的特异性标志物，也并非所有患者都会出现核颗粒型。
因此，在进行抗核抗体主荧光染色时，还需要结合患者的临床症状、其他实验室检查结果和医生的临床经验进行综合分析和判断。
抗核抗体主荧光核型核颗粒型是一种常见的核型，它与某些自身免疫性疾病的发生和发展密切相关。
通过观察核颗粒型的形成情况，可以为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
然而，核颗粒型并非所有疾病的特异性标志物，因此在进行抗核抗体主荧光染色时，还需要综合其他临床信息进行判断和分析。
课件：抗核抗体(ANA)荧光模型判读解析及举例说明
核点型
• HEp-2：间期细胞 核内出现大小、数 目、强度不均的点 状荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性， 周围可见点状荧光
• 肝片：肝细胞核内 出现大小、数目不 均一的点状荧光； 荧光强度与HEp-2 基本一致
• 靶抗原：Sp100
核膜型
• HEp-2：间期细胞 核呈现均匀荧光， 核周增强；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性
• HEp-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光
• 肝片： 肝细胞呈颗 粒样荧光，整个视 野呈细沙状荧光
• 靶抗原：线粒体
胞浆颗粒型：抗Jo-1抗体
• HEp-2：间期细胞浆 中出现颗粒到细块状 荧光，细胞核有时也 出现细颗粒荧光；分 裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围区 域呈致密的细颗粒荧 光
• 肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：IMPDH2 临床意义：出现在丙肝患者中，特别是经过病毒唑或干扰素治疗的， 此抗 体不是自免病特异性的抗体。
• 肝片：肝细胞核呈 现特征性环状荧光
• 靶抗原：板层素、 gp210
核仁型
• HEp-2：间期细胞 核仁阳性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性。
• 肝片：肝细胞核仁 阳性；荧光强度与 HEp-2基本一致
• 靶抗原：Scl-70、 PM-Scl、RNA多 聚酶、原纤维蛋白
核
PM-Scl
仁
型
的
多பைடு நூலகம்
种
模
型
• HEp-2：分裂中期 细胞中间水平方向 产生带状细颗粒荧 光，半数间期细胞 含有大量粗荧光点， 其余细胞为阴性。
• 肝片：荧光模式不 典型
疑难片讨论
均质+核点
胞浆颗粒型
核膜型+核均质型
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导语：恶性高的疾病是很让人无语的，因此做好准确的检查是非常重要的，根据调查发现，我国每年因各类疾病而死亡的将近十余万万人，可见疾病的出现
恶性高的疾病是很让人无语的，因此做好准确的检查是非常重要的，根据调查发现，我国每年因各类疾病而死亡的将近十余万万人，可见疾病的出现对其个人以及家庭都是一致命打击。
为了能让大家早发现早治疗，对于疾病的正确诊断很重要。
那么，抗核抗体阳性颗粒型如何鉴别？
做了一个月免疫科病房住院总，几乎每天都要收到院内会诊，以血液、肾脏、消化、心内、呼吸科的请会诊居多，其中百分之七八十都是因为查出ANA阳性而请会诊，因为临床经验不足，很多时候看过病人后觉得达不到哪种风湿病的诊断标准，也很少能提出有价值的治疗意见，因此想提请园内战友讨论，遇到抗核抗体阳性(中高滴度)的病人如何诊断和鉴别诊断？
1.抗核抗体阳性提示患者结缔组织病的可能，但仍要结合患者的临床表现及各结缔组织病的诊断标准.
2.结缔组织病的易感人群一般为中青年女性，老年患者的自身抗体的滴度会升高，但一般为低水平.
3.抗核抗体为一大类自身抗体的总称，ANA阳性进一步分型为针对多种核抗原成份特异性的自身抗体，根据间接免疫荧光的荧光模型(抗原底物为HEP-2和肝片)可区分不同的荧光核型，不同核型也有鉴别意义，如SLE多为均质型.MCTD多为颗粒型
4.不同的结缔组织病可出现特征性抗体：如SLE相关的自身抗体有sm 抗体，ds-DNA 抗体，皮肌炎相关的JO-1抗体，MCTD相关的
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