骨肉瘤动物模型的建立
原位红色荧光标记骨肉瘤肺转移裸鼠模型的建立_黄伟谦
原位红色荧光标记骨肉瘤肺转移裸鼠模型的建立1通讯作者，E-mail ：Shixin2k@vip．163．com 210002南京南方医科大学南京临床学院南京军区南京总医院骨科黄伟谦，陆萌，周幸，胡亚威，施鑫1【摘要】目的利用红色荧光蛋白（RFP ）基因建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型，为体内监测骨肉瘤的生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种肿瘤动物模型。
方法以包含逆转录病毒pLNCX-DsRed-2的PT67包装细胞转染人骨肉瘤细胞系143B ，在裸鼠胫骨近端原位接种使其成瘤，活体荧光成像系统观察骨肉瘤的生长及肺转移情况。
结果获得稳定表达红色荧光蛋白的人骨肉瘤细胞株，原位接种的肿瘤发生率达100%，肺转移率为80%。
通过活体荧光成像系统于移植1周观察到肿瘤形成，移植4周肿瘤呈梭形膨胀，移植6周肿瘤呈分叶状球形，发光强度亦逐渐增加。
结论通过建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型可以观察原位骨肉瘤的不同生长过程以及肺转移情况，是研究骨肉瘤生长及肺转移相关因素的一种重要工具。
【关键词】骨肉瘤；红色荧光蛋白；肺转移；原位动物模型中图分类号：R73-35文献标识码：A文章编号：1009－0460（2012）06－0501－04Establishment of orthotopic osteosarcoma and pulmonary metastasis nude mice model expressing red fluo-rescent proteinHUANG Wei-qian ，LU Meng ，ZHOU Xing ，HU Ya-wei ，SHI Xin．Department of Orthopaedics Surgery ，Clinical School of the Southern Medical University ，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command ，PLA ，Nanjing 210002，ChinaCorresponding author ：SHI Xin ，E-mail ：Shixin2k@vip．163．com【Abstract 】ObjectiveTo establish an orthotopic osteosarcoma and pulmonary metastasis nude mice model expressing red flu-orescent protein （RFP ），and could be used to monitor the growth of osteosarcoma and evaluate the efficacy of antitumor drug．Methods Human osteosarcoma cells of 143B were transfected with incasing cells PT67contained pLNCX-DsRed-2，RFP-tagged osteosarcoma cells were injected into the proximal tibia of athymic mice ，the growth and pulmonary metastasis of osteosarcoma were observed and an-alyzed with whole body optical imaging system．ResultsThe stable RFP tagged 143B cells were established and the cell line was usedto duplicate the implanted tumor model ，the incidence of orthotopic tumor was 100%，and 80%of them metastasized to lungs．The tumor was forming after implanting for 1week ，growing with a spindle shape after implanting for 4weeks and with spherical shape for 6weeks ，luminous intensity enhancing gradually ，could be observed by whole body optical imaging system．ConclusionThe clinicallyrelevant model of human osteosarcoma provides varying degrees of tumor growth at the primary site and lung metastatic potential．Thus ，the orthotopic nude mice model should be a valuable tool to investigate factors that promote or inhibit osteosarcoma growth or metasta-sis．【Key Words 】Osteosarcoma ；Red fluorescent protein （RFP ）；Pulmonary metastasis ；Orthotopic animal model骨肉瘤是最常见的原发性骨骼肌肉系统恶性肿瘤，大约占儿童恶性肿瘤的2.4%，10 20岁为骨肉瘤的发病的高峰期，常见发病部位为股骨远端和胫骨近端［1-2］。
动物模型的建立与应用肿瘤动物模型
动物移植性肿瘤模型的特点
模型复制简便，肿瘤和荷瘤动物较一致； 接种成活率高； 生长特性与人体肿瘤有差别。
人体肿瘤的异种移植模型
建立异种可移植性肿瘤模型的最终目的是提供人类肿瘤 的体内研究手段，以便于直接研究人类肿瘤的生物学特性 及其发病机制。现在主要利用免疫缺陷动物，将人类的肿 瘤组织或细胞系移植于免疫缺陷动物体内，建立异种可移 植性瘤株。
乙基苯基亚 口服 硝胺
每天1 mg/kg 180-250 食管癌
>80%
N- 亚 硝 基 - 口服 甲基-乙酰 氧基-甲胺
3.5mg/kg，2次 80-120 /周，共10周
前 胃 乳 头 状 >90% 瘤和癌
N-甲基亚硝 静脉 基脲
生 后 第 50 和 57 -100 天，50mg/kg
乳腺癌
>90%
W256 Wistar大鼠或 同上 其它大白鼠
0.2-0.5ml（1:3）
sc或im
动物移植性肿瘤的移植方法
⑴取瘤 在不损伤肿瘤的前提下，处死供瘤动物，无菌条件下采取肿瘤。实 体瘤注意无菌剥离，取无坏死的、生长良好的瘤组织；腹水瘤最 好腹部消毒后，将吸取部位的腹部皮肤与肌膜剥离开，以保证无 菌吸取含瘤细胞的腹水。
肿瘤研究，一般分为基础研究和临床研究两大类。基础 研究，又分为分子水平、细胞水平和整体水平的研究。 利用实验动物进行整体水平的肿瘤研究，通常称为实验 肿瘤学研究。实验肿瘤学研究，不仅与分子水平、细胞 水平的研究密切联系，而且对人类肿瘤的预防和治疗有 更直接的指导意义和参考价值。
肿瘤动物模型
自发性肿瘤动物模型 诱发性肿瘤动物模型 移植性肿瘤动物模型 遗传修饰动物与实验肿瘤学研究
这类肿瘤发生的条件比较自然，有可能通过细致的观察和统计分 析而发现原先没有发现的环境致癌因素或其他致癌因素，可以着 重观察遗传因素在肿瘤发生上的作用。
肿瘤动物模型的构建
肿瘤动物模型的构建第一类是皮下移植瘤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发，T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤：首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒 3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次，然后用眼科剪剪开约0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
移植性人骨肉瘤OS_732裸鼠模型的建立_刘巍峰
染，两组实验过程均未出现裸鼠死亡。两组裸鼠 像及部分区域肿瘤细胞坏死灶；符合骨肉瘤的病
生长状况均良好，体重在接种初与实验终点均无 理组织学特征。两组肺组织压片均未发现转移灶。
明显差异。Ａ 组接种当天局部皮下有液泡形成， ２～ ３ 天 后 液 泡 吸收，１ 周左右局部小包块明 显 ，接
讨 论
种 ２ 周后可见明显局部肿瘤形成，无自然消退现
【摘要】 目的 建立移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为骨肉瘤的提供研究实验模型。方法 采取皮下细胞悬 液注射法与组织块植入接种法，建立人骨肉瘤裸鼠模型。人成骨肉瘤 ＯＳ－７３２ 细胞株体外传代培养后，将 １ × １０７ 细胞悬液注入裸鼠腋后皮下（１０ 只裸鼠），或将已成瘤的瘤组织块接种于裸鼠腋后皮下（１０ 只裸鼠）， 观察肿瘤生长情况。接种后 ４ 周处死裸鼠，剥瘤称重，行病理鉴定。比较两种方法的成瘤率、终末瘤体积及 瘤重、肿瘤相对增长率；大体观及病理组织学。结果 两组裸鼠接种 ２ 周后均有局部肿瘤形成，细胞悬液 组成瘤率 ７０％，组织块组成瘤率 １００％，两组成瘤率差异无显著性（Ｐ ＞ ０．０５）；两组终末瘤体积及瘤重差异 具有显著性（均 Ｐ ＜ ０．０５）。细胞悬液组相对增长率高于组织块组，接种后第 １６ 天开始两组肿瘤增长率具有 显著性差异（Ｐ ＜ ０．０５）。病理组织学鉴定符合骨肉瘤镜下特点。结论 成功建立了移植性人骨肉瘤裸鼠模 型，为临床研究提供了可靠方法。
·２０４·
中国骨肿瘤骨病２００８年８月第７卷第４期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｂｏｎｅ Ｔｕｍｏｒ ＆ Ｂｏｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ａｕｇｕｓｔ ２００８， Ｖｏｌ ７， Ｎｏ．４
·论著·
移植性人骨肉瘤 ＯＳ－７３２ 裸鼠模型的建立
刘巍峰 郭卫 牛晓辉 袁润英 张清 徐海荣 陈大福
建立人类骨肉瘤之斑马鱼动物模式
致謝首先必須感謝蕭崇德與顏厥全老師給予學生參與專題的機會，由於我在課業上並不是非常傑出，對於一些生物研究上的知識也不是非常了解，但憑藉著老師多年且豐富的專業指導下，使學生對於專題的組織架構不只更充分的了解，也引起了學生對於研究的興趣。
老師經常給予精闢的建言也給學生很多幫助，讓我在實驗方面的想法能更多元、更完善。
此外，老師也不吝嗇分享珍貴的自身經驗，讓學生在實驗上能吸收老師的經驗，做起實驗更有效率。
另外也感謝學長陳吉芳與屈哲宇以及學姐邱群鳳在實驗室長期的指導與幫忙，即使在他們百忙之中也會不吝嗇於抽空指導學生的實驗，並且將他們的專業知識與長期體會的實驗重點鉅細靡遺分享給學生，也感謝其他一起在實驗室奮鬥的專題生同學。
若沒有學長姐們在背後默默的幫助及同學間的互相勉勵，相信我在研究這條路上會更加艱辛，非常感謝每一個在我生命中的貴人。
最後還要感謝蔡敬民老師慷慨借用組織切片機，以及詹文雄老師慷慨借用高解析力光學顯微鏡及照相機，才有辦法呈現出辛苦的實驗結晶。
中文摘要骨肉瘤(osteosarcoma) 為紡錘狀的細胞肉瘤，是一種形成於人類骨頭上的惡性腫瘤，發生骨肉瘤的原因通常是放射治療後或某些疾病會伴隨骨肉瘤的形成，例如Li-Fraumeni症候群(主要是由於抑癌基因p53基因發生突變) 。
在小鼠的研究中，已證明若將p53和pRb此兩種抑癌基因去活化會造成骨肉瘤的形成，但其詳細的發病機制尚未完全了解。
本實驗擬以斑馬魚為實驗動物，利用硬骨細胞專一啟動子，以基因轉殖的技術將人類常見的致癌基因專一表現在斑馬魚的硬骨細胞中，例如HPV-E6可使Ubiquitin與p53結合，使之受Proteasome辨識，造成p53大量降解。
c-Myc為促進細胞增生的因子之一，會促使Rb磷酸化，活化下游生長因子E2F1以活化細胞週期，造成細胞增生，藉此誘發骨肉瘤，以動態觀察腫瘤在不同時期的表現。
目前已建立了Tg (Ola.Sp7:nlsGFP) cy25轉基因斑馬魚，可在全身硬骨細胞中表現綠色螢光蛋白，日後將與帶有致癌基因之斑馬魚交配，可利用綠螢光觀察突變魚硬骨的詳細變化。
骨癌动物模型研究进展
一 化学物质诱导大鼠骨癌模型
病理变化：
大鼠胫骨切片显示, 骨髓腔内及骨小梁间见大量肿瘤细胞生长活
跃。
一 化学物质诱导大鼠骨癌模型
模型特点： 化学诱导模型目前应用极少, 这类制作方法所需时间太长
二 应用乳腺癌细胞同种异体移植建立大鼠骨癌模型
模型制作方法： 动物麻醉后, 腹部朝上, 左侧后肢剪毛, 皮肤 消毒, 在胫骨上段皮肤切开1cm 小口, 小心暴 露胫骨, 先用10ml 注射器针头穿刺打孔, 然后 换上10Ll 注射器进入骨髓腔, 缓慢注入3Ll 含3 @ 103 个MRMT- 1 大鼠乳腺癌细胞, 注射完毕 后用骨蜡封住针孔。无菌棉签蘸生理盐水清 洗创口, 皮肤缝合。
二 应用乳腺癌细胞同种异体移植建 立大鼠骨癌模型
模型特点：
(1) 病因病变更接近于人。 (2) 采用局部注入法, 方法简便, 注药剂量
准确。 (3) 模型稳定, 制作时间短, 不易出现感染
及不良反应。
三 应用VX2肿瘤细胞异种移植诱发兔子骨癌模型
模型制作方法：手术剥离荷瘤兔肿瘤，用双 面刀片切取肿块边缘生长旺盛的粉红色鱼肉 样组织，制成1mm3大小的肿瘤组织块，置于 RPMI1640培养液中备用。切开实验动物胫骨 内侧上段的皮肤，在胫骨的干骺端用12号针 头钻洞直至干骺端松质骨内，洞深常为0.4～ 0.5mm，将肿瘤组织置入洞的底部，用骨蜡 封闭洞口，缝合皮肤切口。1周后在移植部位 能扪及直径0.5～10mm大小的肿块，即制成 动物模型。
模组大鼠左侧胫骨X 线片
第8 天模型组大鼠左侧胫骨切片
造模第14 天模型组大鼠左侧胫骨切片 造模第20 天模型组大鼠左侧胫骨切片
二 应用乳腺癌细胞同种异体移植建立
大鼠骨癌模型
病理改变：大鼠胫骨切片显示, 骨髓腔内及骨小 梁间见大量肿瘤细胞生长活跃, 骨皮质仍完整 ( 除穿刺小缺口外) , 伴有局部、少量的编织骨 形成造模第14 天, 骨髓腔内充满了肿瘤细胞, 大部分呈活跃状态, 骨小梁破坏, 骨皮质受侵、 变薄, 局部见大量的编织骨形成 。造模第20 天, 骨髓腔完全被肿瘤细胞所填充,中央大部分 肿瘤细胞已退变坏死, 而在骨髓腔的边缘部分, 肿瘤细胞多呈活跃状态。肿瘤向外生长, 骨皮 质完全破坏、范围广泛。同时周围见大量呈 针样排列的新生编织骨。
大鼠原位移植性骨肉瘤模型的建立及生物学特性观察
【 键 词 】 原 位 移 植 ； 肉瘤 ； 鼠 关 骨 大 【 图分 类 号 】Ｒ ３ ． 中 ７０５ ９ 【 文献 标 识 码 】Ａ 【 章 编 号 】１７ —８６ ２０ ）１ ６５０ 文 ６ １ ５ （０ ６ ｌ－ ４ ． ７ ０ ４
Ｍ ｏ ｅ ｕ ｄ ｔ ｎ ｏ ｔＯ ｓｅ ｓ ｒ ｏ ａ Ｕｓｎｇ Ｏ ｒ ｈ ｔ ｐ ｃ Ｉ ｐ ａ ｔ ｔｏ ｄ ｌＦｏ ｎ ａ ｉ ｎ Ｒａ ｔ ｏ ａ ｃ ｍ ｉ ｔ ｏ ｏ ｉ ｍ ｌ ｎ ａ ｉ ｎ ｏ
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一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法[发明专利]
![一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ef664da8a8956bec0875e38f.png)
专利名称：一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法专利类型：发明专利
发明人：肖建如,徐乐勤,吴志鹏,杨兴海,周振华,黄权,林在俊,万维,矫健,蔡小攀,陈素,许炜,祝倾,刘铁龙,严望军,杨
诚,钱明,李珍惜,周旺
申请号：CN201310006583.4
申请日：20130108
公开号：CN103911342A
公开日：
20140709
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种动物模型及其构建方法，骨巨细胞瘤（GCT）在我国的发病率较高，目前尚未成功构建人骨巨细胞瘤动物模型。
本发明提供了一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法，是将从人骨巨细胞瘤组织分离培养的原代细胞注射到裸小鼠的胫骨内，得到的人骨巨细胞瘤小鼠动物模型。
本发明所建立的人骨巨细胞瘤骨损伤小鼠动物模型中的溶骨性损害特征与临床上骨巨细胞瘤的病理特征相似，存活的细胞为来源于人的骨巨细胞瘤基质细胞。
应用本发明的动物模型可以用于系统研究骨巨细胞瘤的发病机制和进一步筛选治疗骨巨细胞瘤的药物。
申请人：中国人民解放军第二军医大学
地址：200433 上海市杨浦区翔殷路800号
国籍：CN
代理机构：上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：赵青
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实验动物肿瘤模型的建立及应用概述PPT课件
实验动物研究起步:
早期
使用狗、马、羊等常规动物
1912-1922年 Slye培育出近交系小鼠
1946年
Reynier培养出可供实验用的
无菌动物
1958年
英国制定出实验动物标准
实验动物的研究在我国的发展
50年代中期 中国1号、津白1、 津白2等近交系小鼠
50-90年代 建立大量可移植性瘤 株,有近百余种人类癌细胞系被 建立
至今各省市科研单位已建立大量 裸鼠培育室,制定出医学实验动 物管理暂行条例
原因
1、研究人的一生至少需要半个世 纪,而一些动物(鼠、兔、鸡)等至 多十年就够了。
2、利用病人组织活检和尸检的分 析很难得到肿瘤发展全过程的资 料,而通过动物则易获得。
3、凡不能在人体内进行的实验程 序和干扰计划均可经动物肿瘤模 型实现。
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基础饲料 AFB1腹腔注射 0.015%的AAF饲料
移植性肿瘤的建立及应用
1、同种可移植性肿瘤 2、异种可移植性肿瘤
腹水瘤的建立
将移植性实体瘤细胞注入同种受体动 物腹腔内,移植于受体动物腹壁内或其
它部位,待肿瘤生长后引起腹水。 将带瘤腹水给同种同系动物移植传代,
即可形成腹水瘤。
诱发性肿瘤模型的建立及应用 可移植性肿瘤的建立及应用
诱发性肿瘤模型 的建立及应用
诱发肿瘤的基本方法、途径
涂抹法 经口给药法 气管内直接注入法 穿线法 注射法
黄曲霉毒素诱发肝癌模型
基础知识:黄曲霉毒素为强至癌物,动物经口 摄入便可诱发大量肝癌。 在本实验利用大鼠进行腹腔注射法。
主要程序:
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人骨肉瘤OS-732、Saos-2和U2OS裸鼠成瘤模型的建立和比较
人骨肉瘤ＯＳ－７３２、Ｓａｏｓ－２和Ｕ２ＯＳ裸鼠成瘤模型的建立和比较郭建勋１，王任先１刘巍峰２，黎广平１，万 奔１，张博文１，陈大福１ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｎｕｄｅｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｈｕｍａｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａＯＳ－７３２，Ｓａｏｓ－２ａｎｄＵ２ＯＳＧＵＯＪｉａｎｘｕｎ１，ＷＡＮＧＲｅｎｘｉａｎ１，ＬＩＵＷｅｉｆｅｎｇ２，ＬＩＧｕａｎｇｐｉｎｇ１，ＷＡＮＢｅｎ１，ＺＨＡＮＧＢｏｗｅｎ１，ＣＨＥＮＤａｆｕ１１ＢｅｉｊｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ；２ＤｅｐａｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃＯｎｃｏｌｏｇｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＪｉｓｈｕｉｔａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３５，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓＯＳ－７３２，Ｓａｏｓ－２ａｎｄＵ２ＯＳｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｗｉｔｈｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｃｌｕｄｉｎｇＭａｔｒｉｇｅｌ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｃｌｉｎｉｃａｌａｎｔｉ ｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＣＣＫ８ａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＯＳ－７３２，Ｓａｏｓ－２ａｎｄＵ２ＯＳ．Ｓｃｒａｔｃｈｈｅａｌｉｎｇａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ．３０ｎｕｄｅｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉ ｖｉｄｅｄｉｎｔｏｓｉｘｇｒｏｕｐｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏａｓｉｍｐｌｅｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ：ＯＳ－７３２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏＡ１ｇｒｏｕｐ（ｈｉｇｈｃｅｌｌｍａｓｓ），Ａ２ｇｒｏｕｐ（ｌｏｗｃｅｌｌｍａｓｓ），Ｓａｏｓ－２ｃｅｌｌｓｉｎｔｏＢ１ｇｒｏｕｐ（ｈｉｇｈｃｅｌｌｍａｓｓ），Ｂ２ｇｒｏｕｐ（ｌｏｗｃｅｌｌｍａｓｓ），ａｎｄＵ２ＯＳｃｅｌｌｓｉｎｔｏＣ１ｇｒｏｕｐ（ｈｉｇｈｃｅｌｌｍａｓｓ），Ｃ２ｇｒｏｕｐ（ｌｏｗｃｅｌｌｍａｓｓ）．ＴｈｅｃｅｌｌｓｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｍｉｘｅｄｗｉｔｈＭａｔｒｉｇｅｌａｎｄｉｎｊｅｃｔｅｄｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｎｔｈｅａｘｉｌｌａｏｆｔｈｅｌｅｆｔｆｏｒｅｌｉｍｂｏｆｎｕｄｅｍｉｃｅ，ａｎｄｔｈｅｔｉｍｅ，ｒａｔｅａｎｄｓｉｚｅｏｆｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｇｒｏｕｐＡ１ａｎｄｇｒｏｕｐＡ２ｗａｓａｂｏｕｔ７ｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ１００％．ＴｈｅｔｕｍｏｒｖｏｌｕｍｅａｎｄｗｅｉｇｈｔｉｎｇｒｏｕｐＡ１ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌａｒｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｇｒｏｕｐＡ２，ｗｉｔｈｔｕｍｏｒｖｏｌｕｍｅｏｆ［（２１６７．９６±８４４．８５）ｖｓ（９７５．０５±９８７．３３）］ｍｍ３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｔｕｍｏｒｍａｓｓｗａｓ［（１．３３±０．４０）ｖｓ（０．５５±０．５０）］ｇ，ａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｇｒｏｕｐＢ１ａｎｄＢ２ｗａｓａｂｏｕｔ１４ｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ１００％ａｎｄ２０％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｔｕｍｏｒｖｏｌｕｍｅｗａｓ［（１２２２．６７±１１７１．８０）ｖｓ５１０．８６］ｍｍ３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｔｕｍｏｒｍａｓｓｗａｓ［（０．７５±０．４０）ｖｓ０．４］ｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＳｉｎｃｅｏｎｌｙｏｎｅｍｏｕｓｅｉｎｇｒｏｕｐＢ２ｈａｄｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗａｓｍａｄｅｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐＢ１ａｎｄｇｒｏｕｐＢ２．ＴｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｗａｓｎｏｔｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｇｒｏｕｐＣ１ａｎｄｇｒｏｕｐＣ２．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＭａｔｒｉｇｅｌｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆＯＳ－７３２ａｎｄＳａｏｓ－２ｃｅｌｌｓｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｈａｓｃｅｒｔａｉｎｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆｎｕｄｅｍｉｃｅ，ｂｕｔｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｒａｔｅｏｆｎｕｄｅｍｉｃｅｉｓｍｏｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｅ ｇｒｅｅｏｆｃｅｌｌｍａｌｉｇｎａｎｃｙｔｈａｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｃｅｌｌｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，ｍｏｄｅｌ，ａｎｉｍａｌ，ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＭａｔｒｉｇｅｌＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０７）：１１０３－１１０７【摘要】 目的：比较人骨肉瘤细胞ＯＳ－７３２、Ｓａｏｓ－２和Ｕ２ＯＳ在基质胶（Ｍａｒｔｒｉｇｅｌ）辅助条件下的裸鼠皮下成瘤情况，为研究临床抗肿瘤药物的动物模型奠定基础。
骨肉瘤动物模型的研究进展
骨肉瘤动物模型的研究进展【摘要】实验动物模型是研究人类骨肉瘤的重要手段之一。
动物模型有多种不同建立方法。
全文对动物模型的建立方法、模型特点及目前应用等进行综述。
【关键词】骨肉瘤骨肉瘤好发于青少年，是导致青少年死亡的第二大恶性肿瘤。
至今对骨肉瘤的病因及其转移发展机制仍了解甚少。
可以通过肿瘤动物模型来对其进行进一步研究，目前常用的动物模型有小鼠、大鼠、兔、犬等。
大鼠器官与人类相似，基因型与人类也相近。
犬类可自发骨肉瘤，与人类有一定的相似，常用作自发性肿瘤模型。
近来流行免疫抑制性或免疫缺陷性动物模型，如裸鼠等，可以接种不同来源的肿瘤细胞，从而在同一宿主研究比较。
动物模型有助于探索骨肉瘤的发病机制，研究其转移的内在机制和评价治疗疗效，对骨肉瘤的研究有重要价值。
本文主要从骨肉瘤动物模型的建立方法、模型特点及具体应用等方面进行综述。
1 动物模型建立方法1.1 诱发型肿瘤模型系将致癌物质与动物特定部位直接或间接接触，使该部位靶器官产生肿瘤。
其操作相对简单，靶器官和诱癌剂恒定，成瘤率较高，是一种较好的建立肿瘤模型的方法。
但诱发肿瘤形成需要较长时间，且诱发肿瘤的恶性程度不高，低分化肿瘤少见。
物理因素诱导：放射性核素是强致癌物质，将核素与动物接触，可以诱发骨肉瘤。
原子序数大于铀的核素，如238钚、351镅等是强致癌物。
放射性核素诱导骨肉瘤可将核素的盐溶液注射到动物体内，也可直接用核素对动物进行照射。
用核素盐溶液诱导肿瘤时，剂量应适宜，过低不易致瘤，过高时核素对肿瘤细胞有杀伤作用，会导致实验失败。
王玉民等[1]以Wistar大鼠为研究对象，利用发射性超铀核素238钚作为物理致癌因子在大鼠体内诱发肿瘤。
他们将硝酸238钚溶液释后，以不同剂量注射于大鼠臀肌内，发现随着盐溶液浓度的增加，骨肉瘤的发生率也随之上升，但当剂量增加到一定程度时，骨肉瘤的发生率反而下降。
Tinkey PT 等[2]以Sprague-Dawlev大鼠为研究对象，用60Ｃo以致瘤累积剂量照射其后腿4～8个月，观察到大剂量照射的大鼠发生了骨肉瘤及其他肿瘤，低剂量照射的大鼠则未发生肿瘤。
小鼠骨肉瘤模型构建的关键
小鼠骨肉瘤模型构建的关键符策岗;曾艳;赵红卫;刘扬;肖运祥;陈海丹【摘要】目的探讨骨肉瘤动物模型荷瘤成功率的关键因素.方法 24只4～8周龄C3h小鼠,其中C3 h/HeJ型6只、C3h/HeN型18只,随机分为2组.A组采用一般脱毛膏脱毛后外侧腋下注射浓度为5×10 7个数量级/mL的LM8细胞悬液0.2 mL;B组采用动物剃毛器剃毛后外侧腋下皮下注射浓度为5×10 7个数量级/mL的LM8细胞悬液0.2 mL后每日给于注射处局部按摩,并分别记录肿瘤生长情况.结果A组成瘤率33％(4/12);B组成瘤率100％.结论不同的注射技巧对LM8的荷瘤过程及后期护理对成瘤率具有重要的意义.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2016(026)001【总页数】3页(P73-75)【关键词】C3h;骨肉瘤;模型【作者】符策岗;曾艳;赵红卫;刘扬;肖运祥;陈海丹【作者单位】三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学医学院,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000【正文语种】中文【中图分类】R-332骨肉瘤(osteosarcoma，OS)好发于儿童和青少年，而在25～59岁之间发病率相对较低，这可能说明骨肉瘤发病与骨的生长活动有关[1]。
骨肉瘤的好发部位是肱骨远端、股骨远端和胫骨近端，临床治疗主要以手术联合化疗为主，虽然在很大程度上提高了患者的生存率，但由于化疗耐药性和肿瘤转移使得部分患者的死亡率居高不下。
骨肉瘤动物模型构建的实验学特点
4 文献证据综合提炼
4.1 自发肿瘤模型 骨肉瘤的自发肿瘤模型通常采用犬 科动物，因为骨肉瘤是犬科动物的多发肿瘤之一，其多 发于四肢骨骼的干骺端，这与人类骨肉瘤的好发部位颇 为相似，但其容易发生肺转移，且病程进展迅速。 Pirie-Shepherd 等[1]选用 4 只骨肉瘤位于四肢干骺端的 犬，行手术截肢。术前无肺转移，但在手术后 2.5~14.0 个月期间，4 只犬均死于骨肉瘤肺转移。自发性肿瘤模 型与人类骨肉瘤发生相似，理论上讲是很理想的动物模 型，但因为该模型受影响因素多，成瘤时间长，致瘤率 低，均一性及稳定性较差，不易行对照研究。所以目前 研究应用极少。 4.2 诱发型肿瘤模型 诱发型肿瘤模型是将致癌物质与 动物特定部位直接或间接接触，使靶器官产生肿瘤。其 操作相对简单，靶器官和诱癌剂相对恒定，成瘤率较高， 是一种较好的建立肿瘤模型的方法。但诱发肿瘤形成需 要较长时间，且浸润和转移能力低，恶性行为表达有限， 诱发肿瘤的恶性程度不高，多为高、中分化肿瘤，低分 化、恶性程度高肿瘤较少见。
小鼠骨肉瘤模型构建的关键
小鼠骨肉瘤模型构建的关键符策岗;曾艳;赵红卫;刘扬;肖运祥;陈海丹【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2016(26)1【摘要】目的探讨骨肉瘤动物模型荷瘤成功率的关键因素.方法 24只4～8周龄C3h小鼠,其中C3 h/HeJ型6只、C3h/HeN型18只,随机分为2组.A组采用一般脱毛膏脱毛后外侧腋下注射浓度为5×10 7个数量级/mL的LM8细胞悬液0.2 mL;B组采用动物剃毛器剃毛后外侧腋下皮下注射浓度为5×10 7个数量级/mL的LM8细胞悬液0.2 mL后每日给于注射处局部按摩,并分别记录肿瘤生长情况.结果A组成瘤率33％(4/12);B组成瘤率100％.结论不同的注射技巧对LM8的荷瘤过程及后期护理对成瘤率具有重要的意义.【总页数】3页(P73-75)【作者】符策岗;曾艳;赵红卫;刘扬;肖运祥;陈海丹【作者单位】三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学医学院,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000;三峡大学第一临床医学院,宜昌市中心人民医院脊柱外科/脊柱微创中心,脊柱医学与创伤研究所,宜昌443000【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.双示踪剂18F-NaF/18F-FDG PET/CT同时显像在荷骨肉瘤小鼠模型中的应用[J], 邓怀福;陈萍;蒋昌斌;孟悛非;高振华;王丽娟2.表达增强型绿色荧光蛋白的小鼠骨肉瘤体外和体内荷瘤模型的建立 [J], 杨晓;胡豇3.牛血清清蛋白在小鼠骨肉瘤模型PCR基因分型中的应用 [J], 谷俊侠;乔龙威;梁玉婷;冉德园;吕耀娟;郑其平4.Notch-1阻断剂对骨肉瘤小鼠模型肿瘤生长的抑制作用及相关分子机制探究 [J], 周彬;郭卫春5.小鼠腹膜透析模型的构建及腹膜转运关键蛋白的表达 [J], 张靖华;樊怡;马健飞;王力宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。