移植性肿瘤动物模型
食管鳞癌患者来源移植瘤模型B-NDG小鼠与BALBc裸鼠的比较
2015年中国新诊断食管癌47.8万人，37.5万人死于食管癌，分别占2015年癌症新诊断人数和死亡人数的11.1%和13.3%［1］。
对于食管癌的治疗，手术仍是主要治疗方法［2］，大多数患者预后较差，5年生存率不到20%［3］。
放、化疗仍是治疗食管鳞癌患者（ESCC ）的主流方法，然而药物有效率低且并发症大［4-6］。
近年来，以分子为靶标的治疗已发展成为食管癌中一种有希望的有效治疗方法。
主要是抗EGFR 抑制剂［5］，很多药物仍处于临床试验阶段，对于ESCC 患者是否安全有效仍有待评估。
因此建立模拟患者来源的ESCC 特异性的模型对临床前研究、药物评估、治疗和预后具有重要的转化意义。
目前已知的研究食管癌的动物模型不少，许多已进入主流研究平台［7-9］。
患者来源的移植瘤（PDX ）模型，PDX 模型是将患者手术切除的肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠体内，这不仅能够高度保留患者肿瘤组织的异质性、病理特征，还保存了肿瘤细胞间相互作用及肿瘤微环境［10］。
PDX 模型可以直接携带患者身上肿瘤靶标的模型，并且药效反应与临床结果一致［11］，因此PDX 模型对于ESCC 患者精准用药的筛选具有很大的优势。
目Comparison of B-NDG ®and BALB/c mouse models bearing patient-derived xenografts of esophageal squamous cell carcinomaGUAN Liuliu 1,2,ZOU Qingqing 1,2,LIU Qian 2,3,CHEN Size 1,2,31Department of Oncology,3Scientific Research Center,First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University;2Guangdong Provincial Engineering Research Center for Esophageal Cancer Precise Therapy,Guangzhou 510080,China摘要：目的探讨不同品系的小鼠对于食管鳞癌患者来源的异种移植瘤（ESCC PDX ）成瘤率的影响，为ESCC 的临床个体化治疗建立更优势的临床前动物模型。
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定实验肿瘤学的需要导致肿瘤动物模型的产生,借以研究人类肿瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。
肿瘤动物模型可来自于动物的自发肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤。
一前两者由于对动物品系要求严格、实验周期较长或缺少实验一致性而较少使用。
移植性肿瘤动物模型具有特性明确、生长一致性好、实验周期短、瘤株分布广泛、可反复复制等优点,在肿瘤研究中占有重要地位。
可移植性肿瘤,是把动物或人的肿瘤移植到同系、同种或异种动物,经传代后,组织类型和生长特性已趋稳定,并能在受体动物中继续传代,又称为可移植性肿瘤细胞。
二可移植性肿瘤移植于同系或同种动物,称为同种移植,是国内外最常用的肿瘤动物模型复制方法之一。
同种移植的优点是,可供选择使用的细胞系或细胞株多,许多细胞系在世界范围分布广泛,并且这些细胞的生物学特性已经比较明确,一般都有明确的背景资料,使一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速度一致、个体差异较小,成活率高,易于对照观察,这些都是便于科研成果相互比较和交流的有利因素三在接种过程中，应把握注射深度，否则易造成内脏损伤。
接种后三天即开始观察有无肿瘤形成。
本实验具有周期短、制作方便、成功率比较高、较好重复性和稳定性的明显优势，是一种较为理想的肿瘤实验动物模型，值得推广。
肝癌肿瘤模型建立：抗肿瘤药物及制剂的药效学评价，可通过建立小鼠荷瘤数据模型，探索肿瘤生长的本质及其发生发展的规律，探究其抗肿瘤效果。
方法：小鼠右腋下注射H22肿瘤细胞，注射部位发生癌变，小鼠肿瘤生长明显，切片结果证明实验成功，模型构建完成，使小鼠荷瘤，观察肿瘤生长，记录体重数据并建立动物模型。
1材料与方法1.1实验材料1.1.1动物及分组：取20只昆明鼠随机分成A组（10只），B组（5只），C组对照组（5只），编号饲养。
1.1.2试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蜡等。
1.1.3仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，切片机等。
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。
近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。
为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。
小鼠成瘤实验：取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。
选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型，每组10 只。
试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次。
于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。
应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。
第21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。
解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。
取材：1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。
当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。
每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。
于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。
血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。
于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。
顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。
肿瘤动物模型及应用
小鼠 大鼠、小鼠
肺癌 肝癌
诱发性模型的比较医学
▪ 病因学人体肿瘤较为近似。癌变过程基本表 现了人体肿瘤发生发展的全过程。
▪ 诱发条件相对单一，剂量较大，与实际情况 差异较大。
▪ 实验周期一般6～10个月。 ▪ 相对而言肿瘤恶性程度中等，但不同的模型
其恶性程度也不相同。 ▪ 诱癌物来源困难，对实验环境和防护要求高。
▪ 缺点：生长缓慢，不易同时获得大批病程基 本一致的动物，可供选择的模型较少。
▪ 应用：多用于肿瘤发病机理等深入研究。很 少用于一般药效学研究。
常见模型介绍
▪ 小鼠自发性乳腺癌 C3H（MMTV/L病毒）
▪ 小鼠自发性白血病 AKR、Afb 、C58
▪ 大鼠自发性肝癌 LEC （肝炎 结节 肝癌）
肝转移灶→皮下移植（扩增）→胃原位
每次筛选传代不少于6只动物
黑色素瘤的体内筛选
高转移模型的验证
▪ 体外验证 细胞增殖能力 损伤愈合试验
迁移试验、侵袭实验 黏附实验（同质、异质） ▪ 体内验证 转移特性验证及病理学观察
肿瘤转移模型的比较医学
▪ 就肿瘤转移的研究而言，体内模型优于体外模型， 自发性转移模型优于实验性转移模型，人体肿瘤模 型优于动物源性肿瘤模型，原位移植高转移动物模 型优于皮下移植高转移动物模型。
移植部位及途按径不同分为： ▪ 异位移植（多采用皮下移植） ▪ 原位移植
移植性模型复制的影响因素 实验动物
常见同种移植性模型
▪ 腹水性模型 P388白血病，S180肉瘤，H22肝癌等
▪ 实体瘤模型 W256肝肿瘤，C26肠癌，VX-Ⅱ乳头状瘤
▪ 转移性模型 Lewis肺癌 ，B16黑色素瘤
免疫缺陷小鼠
▪ 实验转移肿瘤模型 尾静脉→肺 脾→肝 足垫→淋巴结 左心室→骨
肿瘤动物模型的构建
肿瘤动物模型的构建第一类是皮下移植瘤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发，T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤：首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒 3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次，然后用眼科剪剪开约0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
卵巢肿瘤原位移植动物模型的建立
【 摘 要 】 目的 ： 立 能 够 模 拟 临 床 肿 瘤 发 展 过 程 的 卵 巢 癌 动 物 模 型 。 法 ： 处 于 埘 数 生 长期 的 人 卵 巢癌 细胞 建 方 将
株 Ｓ Ｏ ３ ２ １ ６ 只 ） Ａ ７ ０多 水平 细 胞 数 （ ｘ ０ 个 ／ 、 ｘ ０ 个／ 、 × 个／ 、 ．ｘ ０ 个 ／ 和 ２ １ ／ ） Ｋ Ｖ （ ｘ ０ 个／ 、 ２ ８ ２ １ 只 ５ １ 只 １ １ 只 １ １ 只 ５ × Ｏ 个 只 裸 鼠皮 下 注 射 ， ２ ８ （ ．ｘ ０ 个 ／ ） 腔 注射 。 Ｓ Ｏ 第 ３代 连 续 传 代 皮 下 瘤 组 织 进 行 裸 鼠 右侧 卵巢 包 膜 下 移 植 。 Ａ ７ ０ １ １， 只 腹 ５ 取 Ｋ Ｖ３ 结果 ： 卵巢 癌 细胞 株 Ｓ Ｏ ３皮 下 注 射 、 织 块 原 位 移 植 成 瘤 率 均 １ ０ Ｋ Ｖ 组 ０ ％。 原 位 移 植 卵 巢 癌 裸 鼠 ６ ８周 时 剐腹 探 查 见 ～ 局部形成较大包块 ， 与周 围组 织 发 生 粘 连 ， 腹腔 暗红 色血 性 积 液 伴 脏 器 广 泛 性 转 移 ， 巴结 转 移 。卵巢 癌 Ａ ７ ０细胞 淋 ２８
Ｃ ｒ ｓｏｄｎ ｔｏ： ＵＪ －ｉ ｇ Ｅ ． ｉｊｌ ｗ ｈ ａ ｈ ｏ ｏｒ ｐ ｎ ｉｇ ｕｈ ｒＬ ｅｑａ ． 一ｔｌ ｑ＠ ｚ ｅ ｔ． ， ｅ ａ ｉ ｎ ａ： ｌ ｃｎ
【 ｂｔａ ｔ Ｏ ｊｃｉ ：ｏｅｔ ｌｈａ ｎｎ ｌ ｏ ｅ ｗｔ ｏａａ ｒｔ ｏ ａｔ ｓ ｌｅｔｅｃｎ ａ ［ｌ ｄｖｌ ｍ ｎ． Ａ ｓｒｃ 】 ｂｅｔ ｅ Ｔ ｓ ｂｓ ｎａｉｒ ｄｌ ｉ ｖｆ ｎｅ ＇ｎｍ ｉ ａ ｌ ｉ ｔ ｌ ｅｅ ｐ ｅｔ ｖ ａｉ ａｍ ｈ ｉ ａ ｉ ｏ ｍｕ ｔ ｈ ｉｃ ａ… ｌ ｏ
如何正确地选择肿瘤动物模型？
如何正确地选择肿瘤动物模型？展开全文导读在中国，每天约有7710例患者死于癌症，每分钟大概6人死于癌症，因此，癌症的研究无疑成为生物医学的重中之重，动物模型在肿瘤发生发展及药物研发上扮演着至关重要角色。
那么面对不同的肿瘤模型，究竟怎样的动物模型才可以准确反映人类肿瘤发展情况呢？这就是我们本期内容，告诉大家什么样的肿瘤动物模型才是你真正想要的。
首先我们要知道，最大的问题不是如何去建立模型，而是建立什么样的模型。
因为不同的模型会导致实验结果有较大出入，肿瘤学研究工作者应当熟悉该领域已有的研究成果，查阅全面资料后，才能为自己的课题选到合适的实验动物肿瘤模型。
第一步，需要明确你的实验目的根据设定的实验目标来选择最合适的动物模型，才能得到科学的结论和理想的结果。
肿瘤动物模型的应用一般分为：肿瘤发生发展机制研究、抗肿瘤药物筛选、免疫疗法相关研究等。
第二步，了解已有的各类常见肿瘤模型分类及特点肿瘤动物模型一般分为：①CDTX（肿瘤细胞系移植模型）②P DTX（人源肿瘤组织异种移植模型）③诱发性肿瘤动物模型④基因修饰肿瘤模型⑤自发性肿瘤动物模型；每个模型介绍详情可点击往期文章（3.4肿瘤动物模型介绍）。
第三步，进一步细化到模型的每一个不定因素主要包括以下几个不确定因素：（1）细胞系的选择根据研究的肿瘤类型以及基因型选取相应的肿瘤细胞系，用于荷瘤的细胞要保证较好的生长状态，无污染，处于对数生长期。
不同肿瘤细胞系的成瘤率不同，结合自身选取成瘤率高的细胞系进行实验。
如乳腺癌细胞有几十种，根据来源有鼠源和人源的，根据分型有三阴性与非三阴性的，如果要更贴近人类三阴性乳腺癌的研究，一般会选择易荷瘤的MDA-MB-231细胞。
（2）小鼠品系的选择肿瘤细胞系移植模型分为两种：将人的肿瘤细胞系或肿瘤组织移植到小鼠体内和将小鼠的肿瘤细胞移植到小鼠体内，前者为异种移植因此必须选择具有免疫缺陷的小鼠（如：nude，NOD/scid，NSG），后者为同种移植，因此选择与肿瘤细胞系来源一致的小鼠（C57BL/6品系来源的黑色素瘤细胞系B16F10以及路易斯肺癌细胞系LLC就要选择C57BL/6品系的小鼠）。
肿瘤动物模型
三.移植性肿瘤动物模型及其研究方法
定义：模型是指将动物或人体肿瘤移植到同种或异种动物体内连续传代而形成移植
性肿瘤动物的肿瘤
实验动物选择：移植性肿瘤常用动物为小鼠、大鼠和地鼠
肿瘤细胞的选择：筛选抗癌药物时，最好选用
3类瘤株，及肉瘤、腹水型肿瘤和白血病株。在众多 移植性肿瘤中，小鼠Lewis肺癌、小鼠黑色素瘤B16 及小鼠白血病P388是目前最受重视和应用最广的。
操作方法（例：人胃腺癌SGC-7901)：
1.超净台内将移植瘤剪成2~3mm3大小的瘤块，用套管针接种在BALB/c裸小鼠右侧 腋窝皮下 2.接种24h后随机分组，开始给予受试药进行实验治疗，试验周期6周左右 3.停药次日，称体重，剥取肿瘤并称重，计算瘤重抑制率。
观察指标与疗效评价：
1.动物在接种肿瘤后6周左右形成1g以上的瘤块（平均瘤重），则表明移植肿瘤 成功
结果：一般情况下，接种3~5d形成肿瘤，移植成功率可达85%，移植成功后可
用以观察受试药的疗效
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瘤细胞悬液接种法
每次接种的动物数量较多时可采用此法。具体方法是：无菌操作取 出瘤块，将数个瘤块混合后剪成小块，放入玻璃匀浆器中，加无菌生理 盐水向一个方向转动研磨后，经滤网过滤，加生理盐水稀释成1:3~1:4 （肿瘤g：生理盐水ml）的瘤细胞悬液，用台盼兰染色法计数活细胞数， 用1ml注射器注射到接种部位，每个接种点接种0.2ml(一般含 1×106~1×107个细胞数）。通常接种到腋窝皮下，每只动物可选用多个 接种点。
诱发性肿瘤动物模型建立方法
物理方法：放射性物质致瘤，用放射线照射或局部注射放射性同位素。 化学方法：使用化学致癌物，如苯并芘（benzpy rene）、甲基胆蒽
肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法.
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瘤株的组织学类型和生长特征趋于稳定，并 能在同系、同种或异种动物体内移植并连续传代。
生长特征，包括接种成活率、生长速度、自 动消退率、宿主寿命与宿主反应等。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即为细 胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系 所组成。
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(3)瘤细胞悬液接种法 如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞 悬液接种:
取几个瘤块 --->除去坏死部分 ---> 混合瘤块 ---> 剪成小块 --->匀浆器单向研匀 ---> 放入无菌容器 ---> 生理盐水稀释成1:3~1:4悬液
每只动物接种0.2ml；整个操作应在30min内完成；每 次抽吸前应将细胞混匀。
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[结果判定] 给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时 间和位置。 肿瘤结节长到一定程度,每周用脚规测量皮下肿 瘤2次。测定肿块的最大径(a)和最小径(b)。 肿瘤体积(cm3) = ab2/2
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将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线 的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤其 应观察肿瘤能否完全消退。
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它比前述的自发性和诱发性动物肿瘤更易实施。 现有移植性肿瘤接种成功率可达100%, 可在同一 时间内获得大量(数十至百余只动物)、生长相当 均匀的肿瘤。
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一、动物的选择
移植性肿瘤常用的动物为小鼠、大鼠和地鼠。 研究药物的抗肿瘤作用可选择三种或三种以上小 鼠、大鼠的移植性肿瘤进行实验治疗；抗肿瘤药 物筛选时，每批动物的来源应一致；
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一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法
小鼠肿瘤模型
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。
其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。
小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。
多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 关于构建瘤种可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。
2. 关于腹水传代观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml 注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。
三代后可用于试验。
3. 关于接种进行试验这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。
然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。
关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。
接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。
接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。
放射肿瘤学基础
缺点：
• 必须是悬浮生长细胞，成团生长，不分离。
多细胞球体生长曲线的测定
• 在显微镜下以测微尺测量20～40个球体 的直径，取其平均值，以天数为横坐标， 平均直径为纵坐标．获得多细胞球体的 生长曲线。 • 生长较慢的肿瘤细胞不适合于球体培养。 因它需要较长的培养期，使实验周期延 长，而且要消耗大量的培养液。
特点：
•
重复性、稳定性、定量性好
• 因常用小鼠故对人体缺乏反应性
Animal Tumor Models in Vivo Routes of Challenge
• • • • • • • IP (Intraperitoneal) SC (Sub-cutaneous) IM (Intra-Muscular) ID (Intra-dermal) IV (Intravenous) IT (Intra-thecal) PO (Orally)
生长速率的变化。
• 一是从照射时算起，肿瘤再长到与照 射当时同等大小所需的时间； • 一是从照射时算起，肿瘤长到指定大 小所需的时间（TX射线），与对照组肿
瘤长到同等大小所需时间（T肿瘤）相
比较。
• 优点：照射的剂量范围大(从几个戈瑞
到几十戈瑞均可），但是每个剂量点
需要8～10只动物，实验周期较长，从
1. Inject mice with enough cells to form a tumor
2. Irradiate when 6mm diam
3. Determine the dose of radiation that is needed to cure 50% of mice. Threshold-sigmoid 100 curve that goes from Percent of 10% to 90% cure mice with 50 tumors over about 10Gy in a clinical fractionation 0 scheme (which is 0 10 20 30 40 50 60 70 80 hard to do in mice).
裸鼠的肿瘤移植模型研究
裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。
随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。
其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。
一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。
这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。
这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。
二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。
这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。
同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。
三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。
一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。
2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。
在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。
此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。
3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。
移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。
四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。
2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。
3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。
缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。
犬传染性肉瘤与原位移植性动物肿瘤模型
【 键 词 】 犬 ； 染 性 肉瘤 ； 位 移 植 肿 瘤 ； 物 模 型 关 传 原 动 【 图分 类号 】Ｒ ３ 中 ７ —３ 【 献标 识 码 】Ａ 文 【 文章 编 号 】１０ ．８７ ２０ ）４０ １． ０５４ ４ （０ ７０ ．３７０ ４
ｎ ｏ ｌｓ ｏ ｅ ｉａ ｙ ｔｍ ｎ ｄ ｇ ． Ｔ ｉ ｔｍｏ ｓ ｕ ｉｕ ｎ ｏ ｃ ｌｇ ｅ ａ ｓ ｔｃ ｎ ｂ ｐ ｌｅ ｉ ｈ ｍｏｒ ｎ ｐａ ｔｔ ｎ ａ ｄ ｅ ｐ ａ ｍ ｆｔ ｇ ｎｔｌｓ ｓｅ ｉ ｏ ｓ ｈｅ ｈ ｓ ｕ ｒ ｉ ｎｑ ｅ ｉ ｎ ｏｏ ｙ ｂ ｃ ｕ ｅ ｉ ａ ｅ ａ ｐ ｉｄ ｎ ｏ ｔａ ｓ ｌｎａｉ ｎ ｏ ｘ ｎ ｔａ ｓ ｌｎａｉｎ．Ｔ ｉ ｅ ｉｗ ｗａ ｅ ｉｎ ｄ ｏ ｄｅｃ ｉ ｔｅ ｉｌｇｃ ｅ ｔ ｒｓ ｏ ｅ ｏｒ ｎ ｐａ ｔｔ ｏ ｈ ｓｒ ｖｅ ｓ ｄ ｓｇ ｅ ｔ ｓ ｒｂ ｈ ｂｏｏ ｉａ ｆａｕｅ ｆＣＴＶＳ ｃ ｌｓ ａ ｄ ｎ ｅｔｇ ｔ ｈ ｐ ｒ ａ ｈ ｏ ｅ ｌ ｅｌ ｎ ｉｖ ｓｉａｅ ｔｅ ａ ｐ ｏ ｃ ｆ ＣＴ ｕ ｒｍｏ ｅ ．ＣＴ ｕ ｒｍｏ ｅ ｓ ｒｌａ ｌ ｎ ａ ｅ ｅｏ ｅ ｎ ｖ ｒｏ ｓ ｔ ｕ ｓｗｈｉｈ ｒｓ ｍｂｅ ｗｅｌｔｅ ｃ ａａ ｔｒ ｔ ｓ ＶＳ ｔｍｏ ｄ １ ＶＳ ｔｍｏ ｄ ｌｉ ｅｉｂｅ ａ ｄ ｃ ｎ ｂ ｄ ｖ ｌｐ ｄ ｉ ａ ｉｕ ｉ ｅ ｅ ｓ ｃ ｅ ｅ ｌ ｌ ｈ ｈ ｒ ｃｅ ｓｉ ｉ ｃ ｏ ｅ ｔｍｏ ．Ｉ ａｌｂ ｐ ｌ ｄ ｉ ａ ｇ ｎｍａｓ ａ ｄ ｓ ｍｅ ｏｇ ｎ ｆ ｃ ｌ ｏ ｂ ｒｎ ｐａ ｔｄ，ｐ ｖｄ ｓａ ｂ ｉ ｏ ｄ ａ ｇ ｆ ｆｔ ｕ ｒ ｔｃ ｒ ｅ ａ ｐｉ ｎ ｌｒｅ ａ ｉ ｌ ｎ ｏ ｒ ａ ｓｄｉｆ ｕ ｔｔ ｅ ｔａ ｓ ｌｎｅ ｈ ｅ ｉ ｏ ｒ ｉｅ ａ ｓｆｒａ ｗｉｅ ｒ ｅ ｏ ｓ ｎ
肿瘤动物模型常用建立方法
肿瘤动物模型常用建立方法肿瘤动物模型是用于研究和测试肿瘤发生、发展和治疗的工具。
建立适当的肿瘤动物模型对于揭示肿瘤的生物学特性和评估各种治疗方法的有效性至关重要。
以下是常用的肿瘤动物模型建立方法。
1. 移植瘤模型：这是最常见和简化的动物模型建立方法之一。
它涉及在动物体内或体外移植人类或动物来源的肿瘤细胞株。
这些细胞可以从肿瘤组织中分离得到，并在实验室中培养。
移植瘤模型的优点是易于建立和控制，但它不能反映肿瘤的整个发展过程。
2. 转基因模型：转基因动物模型是通过将特定的基因突变导入小鼠或其他动物体内来模拟肿瘤。
这些基因突变可以是人类肿瘤相关基因的突变，也可以是具有肿瘤形成潜能的其他基因的突变。
转基因模型可以提供更真实的肿瘤发展和治疗反应，但其建立过程相对复杂和耗时。
3. 化学诱发模型：这种方法通过给动物暴露于化学物质，如化学致癌物质或腺病毒，来诱发肿瘤的发生。
这些化学物质可以引起DNA损伤或基因突变，从而促进肿瘤的形成。
化学诱导模型可以提供与人类肿瘤相似的病理特征，但其应用范围受到化学物质的选择和剂量的限制。
4. 遗传模型：遗传模型使用特定品系的小鼠或其他动物，这些动物因其自身的遗传缺陷而具有高发生肿瘤的风险。
这些遗传模型可以是自然突变品系，也可以是通过基因工程技术引入的遗传缺陷。
遗传模型可以提供对特定肿瘤类型和易感因素的研究，但其适用范围受到特定品系的限制。
以上是常见的肿瘤动物模型建立方法。
根据具体研究目的和研究条件的不同，选择合适的肿瘤动物模型对于取得可靠的研究结果至关重要。
不同模型的优劣势需要综合考虑，并根据研究的需要进行合理选择。
小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段
小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段癌症是当今世界范围内的一种重大疾病，而且其影响范围越来越广泛，与此同时，由于癌症的病发机制尚不完全明确，因此对于防治癌症的研究和探索主要依靠动物模型研究。
小鼠肿瘤模型是目前研究肿瘤发病机制和癌症治疗的重要手段，在注射人类肿瘤细胞后，小鼠可呈现人体肿瘤组织细胞移植的特性。
相对于人体肿瘤实验和传统的肿瘤细胞培养，小鼠肿瘤模型的优异之处在于能够创造肿瘤微环境，仿真人体肿瘤的生长和转移过程，以提高癌症的治疗效果。
本文将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立方法以及常见的评价手段。
一、小鼠肿瘤模型的建立方法1.1 人体肿瘤细胞移植模型人体肿瘤细胞移植模型以人类肿瘤细胞在裸鼠或小鼠体内移植后的肿瘤实体为基础，分为无血液供应的固体肿瘤模型和有血液供应的血液源性肿瘤模型两种。
在移植人类肿瘤细胞时，要确保细胞的活力和数量，同时条件控制的严谨性也是建立模型成功的关键。
以草甸欧豆荚腺癌细胞(A549)为例，在室温下用胰蛋白酶消化并在热水浴中加温25分钟，离心后取上清液，将细胞恢复在人工营养的体外环境中培养至稳定生长。
然后注射生长正常的A549细胞到裸鼠的皮下尽处，便成为一个人体肿瘤细胞移植模型。
1.2 化学诱导肿瘤模型化学诱导肿瘤模型是通过注射某些化学物质来诱导荷尔蒙依赖性肿瘤，可以有效地模拟荷尔蒙依赖性肿瘤的发病原因及其恶化过程。
在采用二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠膀胱癌时，过程如下：将DMN溶于苏木精中，经过研磨混合后注射大鼠，每次剂量控制在4-25mg/kg，2个月后检查其膀胱肿瘤的形成情况。
化学物质注射后，不同的化学物质会引起不同部位的肿瘤，如DMN会引起膀胱癌。
1.3 基因敲除技术建立小鼠肿瘤模型目前最为先进的小鼠肿瘤模型是通过基因敲除技术构建。
通过选择与癌症相关的基因，并在小鼠体内干扰其功能，从而让小鼠形成癌症。
其中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)是一种与人类肿瘤密切相关的基因，在建立小鼠肿瘤模型时被广泛用于其基因干扰的研究。
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移植性肿瘤动物模型
目前临床所使用的抗肿瘤药物，大多数是通过动物移植性肿瘤实验法筛选而被发现的，移植性肿瘤动物模型是现代肿瘤研究中应用的最广最有价值的模型。
其优点包括：（1）可使一群动物被同时接种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%；（2）对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效；（3）可在同种或同品系动物中连续移植，长期保留供试验用；（4）试验周期一般较短，试验条件易于控制等。
但是这类肿瘤生长速度快、增殖比高、体积倍增时间短、肿瘤生命性质简单，与人类肿瘤具有明显不同；特别是与人类的致死性实体恶性肿瘤生命性质、与生长发生机制差异更大。
存在着能够为现代肿瘤基础生命科学研究模拟人类恶性肿瘤综合生命性质的局限性、片面性。
现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，白血病P388，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，白血病L5170Y，P1534淋巴白血病，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，Gardner淋巴肉瘤，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway 骨肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Ｗagner癌肉瘤，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。
它们对抗癌药作用的敏感性大致可分为敏感，中度敏感，低敏感和不敏感瘤株四类，同样敏感株对抗癌药的疗效水
平也不相同。
（1）实验动物的选择：移植性肿瘤常用的动物为清洁级小鼠、大鼠和地鼠等，每批动物都应有一定的微生物及遗传背景，来源明
确，根据瘤株的要求选用近交系、远交系或杂交第一代（F1）
动物，一般雌雄皆可（乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌必须用雌性动
物），但每批实验只用一个性别。
（2）实验一般要求：需在无菌环境下进行。
可在接种罩、层流工作台或无菌室内操作。
动物处死后，新洁尔灭或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取；对腹水瘤应灭菌
的空针筒抽吸。
瘤块污染常是接种失败的主要原因。
在高温季
节，应注意瘤源的直接降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰
块。
（3）常用的皮下接种部位为右前肢腋下；肌肉接种常注射于大腿肌肉部；腹水型接种于腹腔内。
【肿瘤移植操作步骤】
1.肿瘤的移植
1）瘤悬液移植法：
（1）选择接种后肿瘤生长旺盛且无溃破而且动物健康状况较好的瘤源动物，颈椎脱臼处死，固定于蜡板上，用碘酊、酒精
消毒操作部位皮肤（消毒面积要尽可能大一些）。
切开皮肤，
在无菌条件下取下瘤块。
（2）将瘤块去除坏死组织，称重，剪成小块，用玻璃匀浆器或机
械匀浆器研磨均匀后放入无菌容器内，按照1：3 ~ 1：4的
比例加入生理盐水，稀释成瘤细胞悬液，使其细胞数为（1~2）
*107个/ml。
（3）用碘酊、酒精消毒动物的接种部位，用空针筒抽吸0.2ml细胞悬液，注射于接种部位。
每次抽吸前应将细胞悬液混匀，
整个操作应在30min内完成。
2）培养细胞的移植法：
（1）将单层培养的细胞消化脱壁后稀释为一定浓度的细胞悬液
（2）对细胞悬液进行活细胞计数，方法如下：用新配制的0.05％伊红或0.1％台盼蓝生理盐水溶液．将细胞悬液稀释、混匀
后在血球计数盘上计数．染色者为死细胞、不染色为活细
胞。
按照计数结果将细胞悬液稀释至每毫升（1~2）*107个
细胞。
（3）用碘酊、酒精消毒动物的接种部位，用空针筒抽吸0.2ml细胞悬液，注射于接种部位。
每次抽吸前应将细胞悬液混匀，整
个操作应在30min内完成。
【移植性肿瘤研究法举例】
1.腋皮下接种实体瘤模型：
【实验原理】以小鼠肉瘤S180为实验模型，接种于同种宿主的前肢腋皮下，给予一定剂量的有抗癌活性的药物，可以抑制肿瘤在体内的生长。
本方法也适用于LL、B16、Hep等实体型移植性肿瘤模型，常用于抗肿瘤生长药物的研究。
【操作步骤】取接种于小鼠约7~10天的S180肿瘤，无菌条件操作，剔除包膜和坏死部分，选取完好的瘤块，至于玻璃匀浆器或机械匀浆器内，加入适量的生理盐水，配制成瘤细胞悬液，细胞数为（1~2）*107/ml，接种于同种异体小鼠前肢腋皮下，雄性体重18~22g，雌性体重17~21g，每次实验均用同一性别，每只小鼠注射0.2ml，一般实验可用10只动物为一组。
实验第0天，接种动物。
第一天，将动物称体重及随机分组并开始给药，包括实验用药，阴性对照（相应溶剂）及阳性对照药，可用腹腔或灌胃给药，。
至第11~14天，动物称体重，并剖取各组动物的肿瘤，称重，最后统计各组动物的抑瘤率。
2.Lewis肺癌自发肺转移模型
【实验原理】 Lewis肺癌为一株恶性程度较高的自发性肺内未分化上皮样癌，受体鼠为C57BL/6。
移植瘤主要通过血行散播在肺部形成转移灶。
移植于皮下、肌肉或者足趾等特定部位，移植瘤增殖形成原位瘤，若给予一定剂量的有抗癌活性的药物，则可抑制肿瘤在体内的生长。
随后肿瘤细胞开始侵袭周围的正常组织和血管，继之癌细胞进入血液循环转运至靶器官，粘附于血管壁上并穿过血管，癌细胞增殖成集落，最后形成转移瘤。
上述过程基本类似于人类肿瘤从生长到转移瘤形成所经历的一系列步骤，故称之为癌的自发肺转移模型。
常规接种对药物的敏感性较低，但可向肺自发转移。
如采用其培养细胞或制成的单细胞悬液尾静脉注射接种，则属于人工肺转移，也可在肺部形成肿瘤集落，它可用于肿瘤转移机制的探讨和抗肿瘤生长和转移药物的筛选和研究。
【操作步骤】取皮下接种10~14d的肿瘤作为瘤源，制成（1~2）*107/ml单细胞悬液，进行常规腋皮下接种（2*106~4*106/0.2ml），接种于同种异体小鼠，体重18~24g，6~7周龄。
或者细胞数为2*106/ml，尾静脉接种，每支小鼠0.2ml，接种次日开始治疗。
腋皮下或肌肉接种的实验，其处理方法同S180。
第21~30天结束实验，称动物体重，并剖取动物的肿瘤，称重，统计各组动物的抑瘤率；观察肺转移瘤和小鼠的生命延长效应，数转移瘤集落数，称肺重，计算自发性转移肺集落的抑制率，还可计算肺平均重量。
肺转移率% = （1- 给药组平均肺集落数/对照组平均肺集落数）* 100%
【实验说明】
3.B16小鼠黑色素瘤人工肺转移模型
【实验原理】 B16是C57BL/6小鼠耳根部皮肤上发现的自发性黑色素瘤，以后又在该瘤株中筛选出肺部高转移的集落株，小鼠静脉内移植后主要形成肺转移瘤，肺外转移极少。
该瘤细胞注入静脉内，在短时间内直接把大量瘤细胞输入血液循环，不经过癌转移的前几个过程，故称为“人工转移”模型，以区别于“自发性转移”模型。
该模型体现了肿瘤细胞进入血液循环后癌转移的几个步骤，对于研究肿瘤细胞在循环系统中的生成能力，瘤细胞附着、穿越靶器官血管的能力和探讨癌转移的器官特异性则有其独特的优势。
【操作步骤】取体外对数生长期的B16小鼠黑色素瘤细胞，经胰酶消化，以磷酸缓冲液配置成瘤细胞悬液，浓度为2.5*105/ml，，
相应宿主尾静脉接种0.2ml/只。
随机分组进行实验，3周后以颈椎脱臼法处死小鼠，称小鼠体重，剖取肺，称肺重，用解剖显微镜计数各肺叶的转移集落数，转移集落成黑色或灰黑色，相互间不融合。
【结果计算】计算给药组平均肺集落数与阴性对照组的平均肺集落数，计算肺转移抑制率。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。