胃癌患者胃粘膜EB病毒检测及意义

胃癌患者胃粘膜EB病毒检测及意义
徐晓凤朱炳良朱亚平 EB病毒（Epstein-Barr Virus）为含包膜的双链DNA病毒，属人类疱疹病毒4型，已经证明EB病毒与低分化鼻咽癌及多种淋巴瘤紧密相关。

最近几年来通过检测胃癌组织细胞中EBV基因组发觉EBV感染与胃癌的发生有关［１］；但是，目前的研究尚不足以明确这种关系。

作者于2005年对泰州地域162例胃粘膜标本进行EB病毒检测，以探讨本地域EBV感染与胃癌的相关性。

1 材料与方式
标本及来源
病例来源于医院胃镜检查者162例，男108例，女54例，平均年龄岁。

其中对照组94例，慢性浅表性胃炎64例、胃溃疡16例、慢性萎缩性胃炎14例；胃癌组68例，其中贲门胃体癌42例、胃角癌14例、胃窦癌12例；胃癌诊断均有病理学证明。

不能及时检测标本置-20℃冷冻保留。

引物合成
参考文献［２］报导的序列设计引物，由上海××公司合成。

引物Ⅰ5’—GTACTCATCACCGGGTCTC—3',引物Ⅱ5'—
TTCGGGTTGGAACCTCCTTG—3'，扩增的产物长度为269bp。

试剂和仪器
Tag DNA多聚酶，4种脱氧核苷酸（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），蛋白酶K，DNA提取液，TAE缓冲液，琼脂糖，溴化乙锭，液体石蜡等；美国ABI-7000荧光分析仪。

核酸提取
取米粒大小的胃镜钳取活检组织1～2块，在 Eppendorf管顶用足量生理盐水漂洗3次，加300μl裂解液（10mmol/L Tris-HCl，pH ，1%SDS，300μg/ml蛋白酶K），用研磨器研磨成匀浆，55℃孵育1h，按常规的酶/氯仿方式抽提蛋白［３］，乙醇沉淀核酸，漂洗晾干，50μl TE缓冲液（）溶解，取5μl作模板。

EBV阳性对照由××公司提供。

PCR扩增
50μl反映体系中，含1×PCR Buffer（ 50 mmol/L Tris-HCl，50 mmol/L KCl，%明胶） mmol/L MgCl2，200μmol/L 4×dNTPS，1U Taq DNA聚合酶，上下游引物各为μmol/L，PCR模板5μl，上覆25μl液
体石蜡，扩增程序为94℃预变性5 min，然后94℃ 30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃再延伸5 min。

产物分析
取PCR产物15μl在2%琼脂糖凝胶中电泳，凝胶用溴乙锭染色，在80v电压下电泳20min后在紫外灯下观看结果，与阳性对照处于同一名置的为阳性，不然为阴性，阴性对照无扩增带。

PCR分子量标记选择Puc19—DNA/MSPI Marker23，EB阳性应在269bp处。

2 结果
162例EBV DNA检出率，见表1。

表1 162例胃粘膜标本EBV检测结果(略)
对照组EBV感染率为%（1/94），胃癌组EBV感染率为%（6/68）。

胃癌组与对照组用χ2查验，P<，不同有显著性；慢性萎缩性胃炎EBV感染率为%（1/14），胃癌组EBV感染率为%（6/68），P>，不同无显著性意义。

3 讨论
EB病毒是一类可引发世界人口普遍感染的病原微生物，其与胃癌发生的关系在最近几年来已成为研究热点。

Shibata1991年第一次运用原位杂交技术和PCR技术在淋巴细胞浸润的低分化胃癌中检测到EBV，随后又在1992年证明美国16%典型胃腺癌有EB病毒的存在，同时，日本的Tokunaga等用一样的方式证明在日本人中的%的胃癌与EB病毒相关。

国内有武汉报导胃癌组织中EBV检出率为%［4］，本资料胃癌组EBV检测阳性率为%，与对照组的%，不同有显著性（P<）。

胃癌的EBV阳性率比其它地域略低，可能与所用引物不同或各地域感染率不一致有关。

但能初步说明泰州地域EB病毒与胃癌的发生有相关性。

对EBV感染的研究多采纳原位杂交法，该法技术要求高，灵敏度低。

作者采纳PCR法检测EBV,并在本实验中采纳了阳性对照和Marker PCR分子量标记，双重对照，保证了结果的准确、靠得住，操作简便、有效，适用于临床标本。

EB病毒的致癌机制尚未完全说明。

此刻以为，EB病毒第一出此刻非肿瘤细胞内，携带EB病毒的胃上皮细胞可能逃幸免疫监视，在长期的暗藏进程中，EB病毒可能抑制宿主细胞的防御功能，慢慢造成细胞转化，最后致使肿瘤发生。

研究EB病毒与胃癌的关系有重要的临床意义，在初期胃癌中，若是EB病毒阳性，那么无淋巴结转移，能够幸免传统的根治术，但关于中晚期的胃癌，却无明显的区别，因此
EBV检测关于临床医治手腕的选择具有指导价值。

EB病毒对胃癌发生的作用，还存在专门大的不合。

本实验慢性萎缩性胃炎患者 EBV感染率为%，这与胃癌组织EBV阳性率%不同无显著性（P>），可能与样本量少有关，因此，还有必要对该地域二者的相关性进行大样本的进一步观看研究。

【参考文献】
1 Wu MS, Shun CT, Wu CC, et al. Epstein Barr virus associated gastric carcinomas: relation to H. pylori infection and genetic alterations J. Gastroenterology, 2000 , 118(6) : 1031～1038.
2 赵军理.胃粘膜损伤中EB病毒感染与P53抑癌基因突变的研究. 中国病毒学杂志,1999,14(4):296～302.
3 美. F·M 奥斯伯. 精编分子生物学实验指南. 北京：科学出版社,.
4 龙焱华. 91例胃粘膜EB病毒感染的检测. 中华消化内科杂志,1998，15(3):182～183.。