生物培养基和溶液的配制

250 μ L、 0. 05% 溴酚蓝 250 μ L。
水定容至 1 L ,用 Whatman 1 号滤纸过滤 ,于 4 ℃保存 。
水定容至 100 mL ,分装后高压灭菌 。
26 3 mol/L NaAc(pH5 . 2) : 80 mL 水中溶解 40 . 81 g NaAc·3H2 O ,用冰醋酸约 11 . 4 mL 调 pH 至 5 . 2 ,加 27 2 mol/L NaAc(pH4 . 0) : 30 mL 水中溶解 27 . 22 g NaAc·3H2 O ,用冰醋酸约 56 mL 调 pH 至 4 .0 ,加水
附录 6 培养基与试剂的配制 定容至 100 mL ,分装后高压灭菌 。
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28 5 mol/L NaCl : 800 mL 水中溶解 29 . 2 g NaCl ,定容至 100 mL 。
29 0 . 15 mmol/L NaCl( 即 0 . 9% NaCl 溶液 ) : 90 mL 水中溶解 0 . 9 g NaCl ,定容至 100 mL 。 7H2 O 于 100 mL 水中 。
份贮存于 - 20 ℃备用 。 于 - 20 ℃ 。
16 100 mmol/L IPTG 母液 :溶解 238 . 3 mg 的 IPGT( 异丙基硫代 β D 半乳糖苷 ) 于 10 mL 水中 ,分成小 17 2 mol/L KCl :溶解 37 . 28 g KCl 于 250 mL 水中 。 18 10 mg/mL 溶 菌 酶 ( lysozyme) :用 10 m mol/L Tris
100 mL 水中 。
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附录 6 培养基与试剂的配制
液使用前配制 )
5 1×抽提缓冲液 : 0. 5% 的 2×抽提缓冲液 、 5 mol/L 尿素 、 10 mmol/L 巯基乙醇 、 5%苯酚 。 (1×抽提缓冲 6 DEPC( 焦碳酸二乙酯 ) 处理水 :0 .1%DEPC ,水 ,即加 1 mL DEPC(diethlpyrocarbonate) 于 1 L 水中 ,使
· 1) 混合液 (200 μ 12 革兰阴性裂解缓冲液 :上样缓冲液 (4 · L) : 160 μ L/40 μ L。
13 GTE 溶液 : 50 mmol/L glucose , 25 mmol/L Tris HCl(pH 8 . 0) , 10 mmol/L EDTA(pH 8 . 0) 14 1 mol/L HCl :加 8 . 6 mL 的浓盐酸至 91 . 4 mL 的水中 。 100 mL 。 15 1 mol/L HEPES :将 23 . 8 gHEPES 溶于约 90 mL 的水中 ,用 NaOH 调 pH(6 . 8～8 . 2) ,然后用水定容至
后分装成小份贮存于 - 20 ℃ 。
于9 . 5 mL 水中 ,盖好盖后 ,轻轻摇动 ,直至牛血清清蛋白完全溶解为止 。 不要涡旋混合 。 加水定容到 10 mL ,然
1 10 mg/mL 牛血清清蛋白 (BSA) :加 100 mg 的牛血清清蛋白 ( 组分 V 或分子生物学试剂级 ,无 DNA 酶 )
DEPC 的体积分数为 0 . 1% 。 在 37 ℃温浴至少 12 h ,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20 min ,以使残余的 DEPC
失活 。 DEPC 会与胺起反应 ,不可用 DEPC 处冷却后加入 ) 。
7 DNA 抽提缓冲液 : 150 mmol/L NaCl 、 10 m mol/L Tris HCl(pH8 . 0) 、 10 mmol/L EDTA(pH8 . 0) , 0. 1% 8 1 mol/L 二硫苏糖醇 (DTT) :在二硫苏糖醇 5 g 的原装瓶中加 32 . 4 mL 水 ,分成小份贮存于 - 20 ℃ ,或转
30 1 mol/L NaH2 PO4 · H2 O :溶解 13 .8 g NaH2 PO4 · H2 O 于 100 mL 水中 。 或溶解 26 .8 g NaH2 PO4 · 31 5 mol/L NaOH :溶解 20 g NaOH 颗粒于约 90 mL 水的烧杯中 ( 磁力搅拌器搅拌 ) ,NaOH 完全溶解后 32 1 mol/L NH4 Ac :用 300 mL 水溶解 38 . 5 g NH4 Ac ,补足至 500 mL 。 33 20%PEG 8000/2 . 5 mol/L NaCl(100 mL) :即 20 g PEG 8000 , 14 . 6 g 固体 NaCl ,补足 100 mL ,用磁力搅 34 10 mg/mL 蛋白酶 K(proteinase K) :将 100 mg 的蛋白酶 K 加入到 9 . 5 mL 灭菌后的去离子水中 ,轻轻 35 10× PBS 溶液 :8% NaCl 、 0 .2% KCl 、 0 .29% Na2 HPO4 ·12H2 O 、 0 .2% KH2 PO4 。 即 80 g NaCl ,2 g 36 40% PEG 3300 PEG 溶液 : 2. 5 mol/L NaCl 、 20% PEG 6000 。
4 ℃保存 。
2 CaCl2 溶液 ( 转化用 ) : 60 m mol/L CaCl2 、 15%甘油 ,即 4 .41 g CaCl2 ,75 mL 甘油 ,调 pH 至 7 .2 ,灭菌后 3 CTAB/NaCl : 10%十六环基三甲基溴化铵 (CTAB) 、 0 .7 mol/L NaCl 。 即溶解 10 g CTAB 4 g NaCl 于 4 2×抽提缓冲液 : 0. 6 mol/L NaCl 、 100 m mol/L Tris HCl(pH7 . 5) 、 40 mmol/L EDTA(pH8 . 0) 、 1% SDS
HCl (pH8 .0) 溶 液 配 制 ,并 分 装 成 小 份 保 存
1000 mL ,调 pH 至 7 . 0。
19 20 m mol/L 磷酸盐缓冲液贮备液 :称 121 . 7 g NaH2 PO4 和 173 . 2 g Na2 HPO4 溶于去离子水中 ,定容至 20 裂解缓冲液 ( 细胞 破碎法快速检测质粒 DNA 用 ) :TBS 100 μ L、 10% SDS 200 μ L、 21% 蔗 糖 溶 液 21 裂解缓冲液 : 10 mmol/L Tris HCl(pH7 . 4) , 10 m mol/L NaCl , 1 mmol/L 柠檬酸钠 , 1. 5%SDS 。 23 1 mol/L MgSO4 :溶解 12 g MgSO4 于足量的水中 ,定容到 100 mL 。 25 10%麦芽糖 : 10 g 麦芽糖溶解于水中 ,定容至 100 mL 。 22 考马斯亮蓝染料溶液 : 100 mg 考马斯亮蓝 G 250 溶于 50 mL 的 95%乙醇 ,加入 100 mL 磷酸 ,然后用 24 1 mol/L MgCl2 :溶解 20 . 3 g MgCl2 ·6H2 O 于足量的水中 ,定容到 100 mL 。
试剂甲 :由 3 种溶液配制而成 。 ① 2%Na2 CO3 ,0 . 4%NaOH ;② 1%CuSO4 溶液 ;③ 2%酒石酸钾钠 。 临用 试剂乙 :称 100 g 钨酸钠 , 25 g 钼酸钠 ,置于 2 L 的回流装置内 ,加 700 mL 蒸馏水 , 50 mL H3 PO4 和 100 mL
却到室温后 ,再在每 100 mL 的小份中加 1 mL 灭过菌的 1 mol/L MgCl2 。 萄糖 。
6 含 X gal 和 IPTG 的筛选培养基 :在事先制备好的含 100 μ g/mL Amp 的 LB 平板表面加 20 μ L 的 2% 7 NZYM 培养基 : 1% NZ 胺 A , 0. 5% NaCl , 0. 5%酵母提取物 , 0. 2% MgSO4 ,pH 7 . 5 。 即 10 g NZ 胺 A , 8 SOB 培养基 : 2%蛋白胨 , 0. 5%酵母提取物 , 10 mmol/L NaCl , 2. 5 mmol/L KCl 。 即 20 g 蛋白胨 ,5 g 酵 9 SOC 培养基 : SOB 培养基20 m mol/L 葡萄糖 。 即 99 mL SOB 培养基中 ,加 1 mL 灭菌的 2 mol/L 葡 10 TB 培养基 : 12 g 蛋白胨 , 24 g 酵母提取物 , 4 mL 甘油 ,溶解在 0 . 9 L 水中 ,各组分溶解后高压灭菌 。 冷 11 2 × YT 培养基 :16 g 蛋白胨 ,10 g 酵母提取物 ,5 g NaCl ,溶解在 0 .9 L 水 中 ,用 1 mol/L NaOH
母提取物 , 0. 6 g NaCl , 2. 5 mL 1 mol/L KCl ,用水补足体积到 1 L 。 分成 100 mL 的小份 ,高压灭菌 。 培养基冷
12 . 54 g K2 HPO4 溶在足量的水中 ,使终体积为 100 mL) 。 高压灭菌或用 0 . 22 μ m 的滤膜过滤除菌 。
65 mL 的水配制成 1 mol/L 二硫苏糖醇溶液 。 移 100 mg 的二硫苏糖醇至微量离心管 ,加 0 . 0 ,定容至 1 L 。 体 NaOH 调 pH 至 8 .
9 0 . 5 mol/L EDTA(pH7 . 6) :称取 186 . 12 g 的 Na2 EDTA·2H2 O 和 20 g 的 NaOH 溶于 800 mL 水中 ,用固 10 分离缓冲液 : 10 mmol/L Tris HCl(pH7 . 4) 、 10 m mol/L NaCl 、 25 m mol/L EDTA 。 11 Folin 苯酚试剂 :含有甲 、 乙两种试剂 。
· 50 的比例混合 , 前将②与③等体积混合 ,然后再将其与①溶液按 1 · 放置 30 min 后使用 。 试剂甲一天内有效 。
HCl ,充分混匀溶解后 ,以小火回流 10 h ,再加 150 g Li2 SO4 , 50 mL 蒸馏水以及数滴液溴 。 开口煮沸 15 min ,除