阿托伐他汀钙对成骨前体细胞(3T3-E1)增殖与分化的影响及其与内质网应激的联系
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Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｙ ＡＮＧ Ｎａｉｌｏｎｇ，Ｅ—ｍ ａｉｌ：ｎａｉｌｏｎｇｙ＠ １ ６３．ｔｏｍ ；ＬＵ Ｏ Ｈ ｕａｎ，Ｅ—ｍ ａｉｌ：１ ０５６８３７２２＠ ｑｑ．ｃｏｒｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ
Ｕｎｄｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｓｐｉｎｄｌｅ ｏｒ ｐｏｌｙｇｏｎａ１．② Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＬＰ （Ｐ ＜ ０．０５），ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍｏｓｔ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎ １０一 ｍｏｌ／Ｌ． ③ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ（３Ｔ３－Ｅ１）ａｎｄ ｉｔｓ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗ ｉｔｈ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ
Ｗ ＡＮＧ Ｑｉｎｇ，ＬＵＯ Ｈｕａｎ，ＸＵ Ｌｉｌｉ，Ｗ ＡＮＧ Ｂｉｎ，ＬＩＵＨｕａｎ—ｎａ，ＹＡＮＧ Ｎａｉｌｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｄａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ
３ Ｔ３一ＥＩ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗ ｅｅｎ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ， Ｂｉｐ，ＰＥＲＫ ，ａｎｄ Ｅｉｆ２ａ． Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｌｏｇａｒｉｔｈｍ ｉｃ ｐｈａｓｅ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗ ｅｒｅ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｔｏ ｂｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗ ｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｔｏｐａｌ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎ ０ ， １０ ～ ，１０～ ， １Ｏ～ ｍ ｏｌ／Ｌ ．Ａｆｔｅｒ ２４ ｈｏｕｒｓ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｗ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＣＣＫ 一 ８ ｃｏｌｏｒｉｍ ｅｔｒｉｃ ｍ ｅｔｈｏｄ ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＬＰ ｗａｓ ｍ ｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｓｓａｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｙｍ ｂｏｌｉｃ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｅａｌ ｔｉｍ ｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｒ ｅｓｕｌｔｓ
阿托 伐 他 汀 钙 对 成 骨 前 体 细 胞 （３ Ｔ３一Ｅ １）增 殖 与 分 化 的影 响及 其 与 内质 网应 激 的联 系
王 青 罗 欢 徐 丽 丽 王 宾 刘 焕 娜 杨 乃 龙
青 岛 大学 医 学 院 附 属 医 院 内分 泌 科 ，１Ｉｉ东 青 岛 ２６６００３
中 图 分 类 号 ： Ｒ５８９．９ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １００６·７１０８（２０１８）０７—０９１０—０５ 摘 要 ： 目的 观 察 不 同浓 度 阿托 伐 他 汀 钙 对 成 目 前 体 细 胞 （３Ｔ３一Ｅｌ细 胞 ）增 殖 与 分 化 影 响 ，分 析 该 过 程 内质 网 应 激 相 关 基
９１０
中 骨 质 疏 松 杂 志 ２Ｏｌ８年 ７月 第 ２４卷 第 ７期
ｒｏｓ，Ｊｕｌｙ ２０１８，Ｖｏｌ ２４，Ｎｏ．７
Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ＷＷＷ．ｗａｎｔａｎｇｄａｌｅ．ｃｏｎ］．ｃｎ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—７ｌ０８ ２０１８．０７ ０１４
· 论 著 ·
Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｆ２ａ表 达 的 关 系 。 方 法 ３Ｔ３．Ｅｌ细 胞 培 养 至 刘 数 期 ，加 入 含 不 同 浓 度 阿 托 伐 他 钙 ０、１０ 、Ｊ０ 、１０ ｍｏｌ／Ｌ培 养 液 继 续 培养 细 胞 ，２４ ｈ后 利 用 ＣＣＫ一８比色 法检 测 细 胞 增 殖 能 力 ，碱 性 磷 酸 酶 测 定 试 剂 盒 测 定 ＡＩ Ｐ活 力 ，实 时 定 量 ＰＣＲ 技 术 检 测 内质 网应 激 标 志 性 基 冈 Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｔ２ａ表 达 水 平 。结 果 镜 下 观 察 ３Ｔ３一Ｅ１细 胞 呈 梭 彤 或 多 角 形 等 形 态 ，生 长 状 态 良 好 。② 与 对 照 组 相 比 ，不 同 浓 度 的 阿 托 伐 他 汀钙 作 Ｈｊ于 细 胞 ２４ ｈ后 ，均 呵促 进 ３Ｔ３一Ｅｌ细 胞增 殖 许 增 加 ＡＬＰ活 性 （Ｐ ＜０．０５）， 其 Ｉ＋ｌ以 １０ ｍｏｌ／１ 阿 托 伐 他 钙浓 度 增 殖 最 明 。③ 实 时 定 量 ＰＣＲ结 果 显 示 ，阿 托 伐 他 汀 钙 组 Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｆ２ａ表 达 均 高 于 对 照 组 （Ｐ＜０．０５）。 结 论 阿 托 伐 他 汀钙 可 促 进 ３ １＂３一Ｅ１细 胞 增 殆 ，促 进 细 胞 ＡＩ Ｐ活 性 增 加 ，提 示 阿托 伐 他 汀 促 进 增 殖 的 作用 呵能 与 内质 网应 激 通 路 相 关 ，为 骨 质 疏 松 的 临 ｒ末治疗 及 药 物 研 发 提 供 新 的思 路 。 关 键 词 ：阿托 伐 他 汀 钙 ；成 骨 前 体 细 胞 ；细 胞 增 殖 ；内 质 心 激
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ
Ｕｎｄｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｓｐｉｎｄｌｅ ｏｒ ｐｏｌｙｇｏｎａ１．② Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＬＰ （Ｐ ＜ ０．０５），ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍｏｓｔ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎ １０一 ｍｏｌ／Ｌ． ③ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ（３Ｔ３－Ｅ１）ａｎｄ ｉｔｓ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗ ｉｔｈ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ
Ｗ ＡＮＧ Ｑｉｎｇ，ＬＵＯ Ｈｕａｎ，ＸＵ Ｌｉｌｉ，Ｗ ＡＮＧ Ｂｉｎ，ＬＩＵＨｕａｎ—ｎａ，ＹＡＮＧ Ｎａｉｌｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｑｉｎｇｄａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ
３ Ｔ３一ＥＩ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗ ｅｅｎ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ， Ｂｉｐ，ＰＥＲＫ ，ａｎｄ Ｅｉｆ２ａ． Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｌｏｇａｒｉｔｈｍ ｉｃ ｐｈａｓｅ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗ ｅｒｅ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｔｏ ｂｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗ ｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｔｏｐａｌ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎ ０ ， １０ ～ ，１０～ ， １Ｏ～ ｍ ｏｌ／Ｌ ．Ａｆｔｅｒ ２４ ｈｏｕｒｓ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｗ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＣＣＫ 一 ８ ｃｏｌｏｒｉｍ ｅｔｒｉｃ ｍ ｅｔｈｏｄ ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＬＰ ｗａｓ ｍ ｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｓｓａｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｙｍ ｂｏｌｉｃ ｅｎｄｏｐｌａｓｍ ｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｅａｌ ｔｉｍ ｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｒ ｅｓｕｌｔｓ
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王 青 罗 欢 徐 丽 丽 王 宾 刘 焕 娜 杨 乃 龙
青 岛 大学 医 学 院 附 属 医 院 内分 泌 科 ，１Ｉｉ东 青 岛 ２６６００３
中 图 分 类 号 ： Ｒ５８９．９ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １００６·７１０８（２０１８）０７—０９１０—０５ 摘 要 ： 目的 观 察 不 同浓 度 阿托 伐 他 汀 钙 对 成 目 前 体 细 胞 （３Ｔ３一Ｅｌ细 胞 ）增 殖 与 分 化 影 响 ，分 析 该 过 程 内质 网 应 激 相 关 基
９１０
中 骨 质 疏 松 杂 志 ２Ｏｌ８年 ７月 第 ２４卷 第 ７期
ｒｏｓ，Ｊｕｌｙ ２０１８，Ｖｏｌ ２４，Ｎｏ．７
Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ＷＷＷ．ｗａｎｔａｎｇｄａｌｅ．ｃｏｎ］．ｃｎ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—７ｌ０８ ２０１８．０７ ０１４
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Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｆ２ａ表 达 的 关 系 。 方 法 ３Ｔ３．Ｅｌ细 胞 培 养 至 刘 数 期 ，加 入 含 不 同 浓 度 阿 托 伐 他 钙 ０、１０ 、Ｊ０ 、１０ ｍｏｌ／Ｌ培 养 液 继 续 培养 细 胞 ，２４ ｈ后 利 用 ＣＣＫ一８比色 法检 测 细 胞 增 殖 能 力 ，碱 性 磷 酸 酶 测 定 试 剂 盒 测 定 ＡＩ Ｐ活 力 ，实 时 定 量 ＰＣＲ 技 术 检 测 内质 网应 激 标 志 性 基 冈 Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｔ２ａ表 达 水 平 。结 果 镜 下 观 察 ３Ｔ３一Ｅ１细 胞 呈 梭 彤 或 多 角 形 等 形 态 ，生 长 状 态 良 好 。② 与 对 照 组 相 比 ，不 同 浓 度 的 阿 托 伐 他 汀钙 作 Ｈｊ于 细 胞 ２４ ｈ后 ，均 呵促 进 ３Ｔ３一Ｅｌ细 胞增 殖 许 增 加 ＡＬＰ活 性 （Ｐ ＜０．０５）， 其 Ｉ＋ｌ以 １０ ｍｏｌ／１ 阿 托 伐 他 钙浓 度 增 殖 最 明 。③ 实 时 定 量 ＰＣＲ结 果 显 示 ，阿 托 伐 他 汀 钙 组 Ｂｉｐ、ＰＥＲＫ、Ｅｉｆ２ａ表 达 均 高 于 对 照 组 （Ｐ＜０．０５）。 结 论 阿 托 伐 他 汀钙 可 促 进 ３ １＂３一Ｅ１细 胞 增 殆 ，促 进 细 胞 ＡＩ Ｐ活 性 增 加 ，提 示 阿托 伐 他 汀 促 进 增 殖 的 作用 呵能 与 内质 网应 激 通 路 相 关 ，为 骨 质 疏 松 的 临 ｒ末治疗 及 药 物 研 发 提 供 新 的思 路 。 关 键 词 ：阿托 伐 他 汀 钙 ；成 骨 前 体 细 胞 ；细 胞 增 殖 ；内 质 心 激