血液生化指标的测定ppt课件
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19
尿素（mmol/L） =
A测 A标
× C标 (10 mM)
血清尿素正常值：2.9 – 8.2 mmol/L
20
生理性：高蛋白饮食；年龄增加。 病理性：1．血清尿素增加的原因可分为肾前、肾 性及肾后三个方面：
(1) 肾前性：失水引起血液浓缩，导致肾血流量减少，肾小球滤
过率降低使血尿素潴留，见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期 腹泻等。
蒸馏水（μ l） 15
工作液（ml） 1.5
标准管(S) ——
15 ——
1.5
样品管(U) 15 —— —— 1.5
4. 各管混匀，置37℃水浴15分钟，于505nm 波长处，以空白管调“零”点，测定各管吸 光度（A）值。 （试剂盒线性范围：
14
1、待测样品：血清 2、取三支试管，按下表操作：
加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 样品管(U)
11
3. 脲酶法测定血清尿素 （1）脲酶储备液及脲酶稀释液 （2）酚显色剂 （3）碱性次氯酸钠 （4）尿素标准液（10 mmol/L）
12
（一）血糖测定
1、待测样品：血清； 2、配制工作液: 等量混合R1与R2； 3、取三支试管，按下表操作：
13
加入物
空白管(B)
样本（μ l） ——
标准液（μ l） ——
4
+ 其最大吸收峰为505nm。红色醌类化合物的 生成量在一定范围内与葡萄糖含量成正比， 与同样处理的葡萄糖标准液进行比较，即 可求得血糖含量。
5
CH3 C C NH2 2H2O2+ CH3 N C O +
N 4-氨基安替比林
CH3 C C N
CH3 N C O
OH POD
N
红色醌亚胺
O
6
葡萄糖 ＋ O2 ＋ H2O GOD H2O2
(2) 肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂
肾炎、肾结核、肾动脉硬化、先天性多囊肾、肾肿瘤所致的尿毒症
21
(3) 肾后性：前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱
肿瘤，致使尿道受压、尿路堵塞，使上部压力增高，肾小球 滤过减少甚至停止，且管内尿素扩散入血液，导致血尿素增 高。
2．血清尿素减少较少见，严重肝病如急性 黄色肝萎缩、肝硬化、肝炎合并广泛性坏死， 导致尿素合成减少而使血液尿素减少。
8
CO(NH2)2 + H2O →2NH3+CO2
9
（一）材料：血清 （二）仪器：722S型分光光度计、恒温水浴
箱、涡旋混匀器 （三）试剂： 1. 葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶-过氧
化物酶法）
10
主要组成成分为： （1）R1：苯酚。 （2）R2：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、4-氨
基安替比林、POD、GOD、NaN3。 （3）标准液（5.55mmol/L）：1 × 1ml。
蒸馏水
0.02
——
——
尿素标准液
——
0.02
——
待测样本
——
——
0.02
酶缓冲液
0.25
0.25
0.25
充分混匀，37℃水浴 10分钟
酚显色剂
1
1
1
碱性次氯酸钠
1
1
1
15
3. 各试管充分混匀，置37℃水浴中加热10 min，在640 nm波长处，用空白管调零，分 别测定标准管，测定管吸光度值。
16
（一）实验结果 1. 吸光度值
A测
A标Biblioteka 葡萄糖测定尿素测定
17
G (mmol/L) =
A测 A标
× C标 (5.55mM)
G (mg/dl) = m mol/L × 18
空腹血糖的正常范围：3.9 – 6.1 mmol/L
18
+ 1．正常人的血糖为什么能维持在一定水平? + 2. 在那些情况下需做血糖含量的测定?
葡萄糖酸 ＋
H2O2 ＋ 4-氨基安替比林＋酚 POD (红色) ＋ H2O
醌亚胺
7
尿素在脲酶的作用下产生氨离子和二氧化碳， 氨离子在碱性介质中与酚显色剂生成蓝色物 质，其最大吸收峰为640nm。 蓝色化合物的吸光度值在一定范围内与反 应体系中的尿素浓度成正比，与同样处理的 尿素标准液作比较，可对血清中的尿素作定 量分析。
实验五
1
2
1.掌握GOD-PAP酶法测定血清葡萄糖的原理和方法； 2.掌握脲酶法测定血清尿素氮的原理和方法。 3.熟悉分光分析技术的原理、应用及其操作步骤。 4.了解血糖及血清尿素氮测定的临床意义。
3
（一）实验原理
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用 氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过 氧化氢；在过氧化物酶（peroxidase，POD） 的催化下，过氧化氢氧化4-氨基安替比林（4aminoantipyrine ）和酚（phenol）缩合为红色 醌类化合物
22
+ 请预习 + 实验六 质粒DNA提取及酶切鉴定
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尿素（mmol/L） =
A测 A标
× C标 (10 mM)
血清尿素正常值：2.9 – 8.2 mmol/L
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生理性：高蛋白饮食；年龄增加。 病理性：1．血清尿素增加的原因可分为肾前、肾 性及肾后三个方面：
(1) 肾前性：失水引起血液浓缩，导致肾血流量减少，肾小球滤
过率降低使血尿素潴留，见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期 腹泻等。
蒸馏水（μ l） 15
工作液（ml） 1.5
标准管(S) ——
15 ——
1.5
样品管(U) 15 —— —— 1.5
4. 各管混匀，置37℃水浴15分钟，于505nm 波长处，以空白管调“零”点，测定各管吸 光度（A）值。 （试剂盒线性范围：
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1、待测样品：血清 2、取三支试管，按下表操作：
加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 样品管(U)
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3. 脲酶法测定血清尿素 （1）脲酶储备液及脲酶稀释液 （2）酚显色剂 （3）碱性次氯酸钠 （4）尿素标准液（10 mmol/L）
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（一）血糖测定
1、待测样品：血清； 2、配制工作液: 等量混合R1与R2； 3、取三支试管，按下表操作：
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加入物
空白管(B)
样本（μ l） ——
标准液（μ l） ——
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+ 其最大吸收峰为505nm。红色醌类化合物的 生成量在一定范围内与葡萄糖含量成正比， 与同样处理的葡萄糖标准液进行比较，即 可求得血糖含量。
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CH3 C C NH2 2H2O2+ CH3 N C O +
N 4-氨基安替比林
CH3 C C N
CH3 N C O
OH POD
N
红色醌亚胺
O
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葡萄糖 ＋ O2 ＋ H2O GOD H2O2
(2) 肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂
肾炎、肾结核、肾动脉硬化、先天性多囊肾、肾肿瘤所致的尿毒症
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(3) 肾后性：前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱
肿瘤，致使尿道受压、尿路堵塞，使上部压力增高，肾小球 滤过减少甚至停止，且管内尿素扩散入血液，导致血尿素增 高。
2．血清尿素减少较少见，严重肝病如急性 黄色肝萎缩、肝硬化、肝炎合并广泛性坏死， 导致尿素合成减少而使血液尿素减少。
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CO(NH2)2 + H2O →2NH3+CO2
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（一）材料：血清 （二）仪器：722S型分光光度计、恒温水浴
箱、涡旋混匀器 （三）试剂： 1. 葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶-过氧
化物酶法）
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主要组成成分为： （1）R1：苯酚。 （2）R2：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、4-氨
基安替比林、POD、GOD、NaN3。 （3）标准液（5.55mmol/L）：1 × 1ml。
蒸馏水
0.02
——
——
尿素标准液
——
0.02
——
待测样本
——
——
0.02
酶缓冲液
0.25
0.25
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充分混匀，37℃水浴 10分钟
酚显色剂
1
1
1
碱性次氯酸钠
1
1
1
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3. 各试管充分混匀，置37℃水浴中加热10 min，在640 nm波长处，用空白管调零，分 别测定标准管，测定管吸光度值。
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（一）实验结果 1. 吸光度值
A测
A标Biblioteka 葡萄糖测定尿素测定
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G (mmol/L) =
A测 A标
× C标 (5.55mM)
G (mg/dl) = m mol/L × 18
空腹血糖的正常范围：3.9 – 6.1 mmol/L
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+ 1．正常人的血糖为什么能维持在一定水平? + 2. 在那些情况下需做血糖含量的测定?
葡萄糖酸 ＋
H2O2 ＋ 4-氨基安替比林＋酚 POD (红色) ＋ H2O
醌亚胺
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尿素在脲酶的作用下产生氨离子和二氧化碳， 氨离子在碱性介质中与酚显色剂生成蓝色物 质，其最大吸收峰为640nm。 蓝色化合物的吸光度值在一定范围内与反 应体系中的尿素浓度成正比，与同样处理的 尿素标准液作比较，可对血清中的尿素作定 量分析。
实验五
1
2
1.掌握GOD-PAP酶法测定血清葡萄糖的原理和方法； 2.掌握脲酶法测定血清尿素氮的原理和方法。 3.熟悉分光分析技术的原理、应用及其操作步骤。 4.了解血糖及血清尿素氮测定的临床意义。
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（一）实验原理
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用 氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过 氧化氢；在过氧化物酶（peroxidase，POD） 的催化下，过氧化氢氧化4-氨基安替比林（4aminoantipyrine ）和酚（phenol）缩合为红色 醌类化合物
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+ 请预习 + 实验六 质粒DNA提取及酶切鉴定
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