应用STR-PCR方法快速诊断Down’s综合征

应用 STR 一 PCR 方法快速诊断 Down’综合征 5
赖红梅 刘政云
[ 摘要】 目的 探讨应用 PCR 一 R 分型技术快速产前诊断 Do ‘ T S n w 5综合征的方法。方法 选 择21 号染色体上的4 个多态位点 D IS1435、 I Sl l 、 IS1270 、 l l412 进行 PCR 扩增， Z Z D Z D 2 D 尿素聚丙 烯酞胺凝胶电 银染分型， 泳， 根据谱带的条数和浓度进行判断是否为2 三体。结果 应用此方法可 1 以检出所有的由核型分析确诊的2 三体， 例产前诊断筛出3 例2 三体患儿(有3 条带图谱或2: 1 1 0 3 1 图谱) 。结论 该方法不用细胞培养， 避免放射性标记， 并可进行早期的产前诊断， 该方法与传统的方 法操作比 较简单、 速度快， 是一种产前诊断和大规模筛查2 三体的良 1 好方法。 【 关健词J 唐氏综合征;基因诊断;短串联重复序列 T七 a P C t o o STR 一 eP l a in f i PCR 勺 ing 谧 bno】浮t r Pid pr aO 山 p c e ‘ o a 褪 n e d agn璐 f D w sy dr 招o o n n o e m 从I H n 一 o g 脸1， 口刀2丙 一Y n l加r 如朋ZP a l ter i妙an c ild陀 ho h l ， a咭杨12《 )30 ， 沼 u g n 比 a n e c n n e a d h n s a r h s 洲 】
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[ Ab tr ct 】 o h e “ T r seach t e 叩 s a j c ve o e h plication o STR 一 t i飞technolo盯to r id n na a f pCR y P v a e r tl i 笋 f d 砚 osis o D0w syn迁 me Meth以 Am 诉 f ur spe if c se uen e w r cho ed to chr osome 2l n o r . 如 P I o c i q c e e s m o D ZIS1435， ISl l ， IS1270 ， l l412 b PCR. T e a川 i ed pr ducts wer a a zed using t e pa e Z D Z D Z D y h plif o e nl y h g
PCR 反应条件一样， ℃预变3 mi 后， 5 9 n 两步法循环 30 次;95℃变性 15 5， 复性和延伸l min。最后 60℃ 60℃ 后延伸4 mi 。 5 n 荧光PCR 扩增条件基本相同， 但使用金牌 T qDNA 聚合酶及其缓冲液， a 模板量为 0. 01 林 95℃预变性 10 min。 9， 1. 2. 3 PCR 产物的检测 PCR 产物用 PAGE/ 银染 法检测。荧光 PCR 产物在 AB 31 测序仪上进行分 J 0 析。G ne ca 3. 1 软件进行定量分析。 e s n 1. 2. 4 DS 的基因诊断 4 个 STR 位点中 有一个或 多个位点在其特异性扩增片段长度范围内出现 1: 川 的3 条带或1: 川 的3 个峰， S 的诊断标 作为D 准， 强度比 2 : 1 的2 条带( 峰) 作为辅助诊断指 为
及。 联重复序列( shor ta dem r pea ， ) 具 短串 t n e t 5跟
有高度的多态性和易于检测、 分型而成为第二代 DNA 分型技术的主要工具。为此， 我们尝试联合应 用四 STR 位点进行 DS 的基因诊断和产前诊断， 个 以降低 DS 的发病率。
1 对象与方法
色体上的4 个 S R 位点见表 1， T 参照基因数据库 (w . gdb. or ) 对其引物序列进行修改或自行设 w g 计， 使该4 个 5皿 位点引物的退火温度一致( Tm = 8 5 ℃) 。荧光标记物是每对引物的上游序列 5’ 端用 6 一 M荧光ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ料标记。用 PE2 0 热循环仪分别 A F 4
ele加Phor sis a d sil er sta ning to det mline t e 21 t s0my. R胎 妇 In a a zed 30 ca es O a iotic f uid e n v i e h i r 川 nl y s f n i l sam ling ， P S three ca es a DS ( t r e ba ds f f l heter 2yg us or t h nd f r he而 一 r zy即 ， s r e he n O u r l o o O w a s o hete o us) the e f r st o 30 is nor a . Coucl画o This met o need not cel educa es a oid ng the r dio ma ing and ca ml n hd l t v i a k r n pr 屹 t e prena a d ag宜 o the ea ie Pe 记 T e me od is m r simple and raP1 t a t d tiona t eed h t l i losis f l r r r i h h t o e d hn r i a l e h m t d ， is a g以 etho O Prenata and check w t la ge 一 l e chr oso e ZI. o It 记n1 d f l i h r sca m m o
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唐氏综合征( Do n‘s n r me，) 又称先天愚 w s yd o DS 型， 三体综合征， 1 2 是一种最常见的先天性常染色 体数目畸变， 发病率为0. 1 % ， 2 产前诊断以羊水细 胞染色体核型分析为主， 难度较大， 周期长， 不易普
扩增各ST 位点片段， R 反应总体积2 闪， R C P 5 含样 本 DNA O 05 卜 l x EX 缓冲液( 含 2 o mm心L . 9， M : ) ， 林 dN，， 邪1 2( mol ) X 引物5 一 pmol ， S U EX 10 0. Taq DNA 聚合酶( T KaRa 公司) 。 个 5跟 位点的 a 4