叶黄素的测定方法（立达尔公司企标方法）[优质文档]

叶黄素的测定方法
A1.原理
美国分析化学协会的分析方法——AOAC43.018—43.023
“关于干燥植物和饲料中叶黄素的测定方法”是国际上通用的测定叶黄素的分析方法
直接应用AOAC方法，会导致金菊黄复合预混合饲料中10—20%叶黄素的破坏。

这是由于金菊黄复合预混合饲料在生产过程中已经皂化，AOAC方法的皂化过程会使叶黄素水解和变性。

故采用下列简易方法：
A2.仪器
分析天平（准确到0.0001克）,恒温水浴锅,50ml、100ml棕色容量瓶,5ml、10ml移液管，50ml、100ml烧杯，分光光度计。

A3.试剂
丙酮（分析纯），无水酒精（分析纯），甲苯（分析纯），正己烷（分析纯），异丙醇（分析纯）。

提取剂（正己烷：丙酮：无水酒精：甲苯=10：7：6：7体积比）
丙酮—异丙醇混合液（丙酮：异丙醇=1：1体积比）
苏丹I标准溶液
A4.实验步骤
A4.1 称取0.5克金菊黄复合预混合饲料样品，于100ml棕色容量瓶中，精确到0.0001g加入约50ml提取剂，用胶塞塞紧，摇匀。

A4.2 用水浴锅加热10min，然后用自来水冷却至室温。

用提取剂定容至刻度，摇匀，静止10min。

A4.3 取上清液10ml至100ml 棕色容量瓶，加入30ml正己烷、20ml提取剂，然后用10%的硫酸钠溶液定容至刻度，剧烈振荡10min，置于暗处静止至澄清（15min）。

A4.4 取上清液5ml至50ml棕色容量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，测定溶液于474 nm 处的吸光度。

A4.5 计算
A474×F×5000
叶黄素（克/公斤）= ————————
m×236
注释：
A474：474nm处的吸光度。

F：仪器偏离因子=0.561/A474(工作液)
苏丹I标准溶液（工作液）的制备：（1）称0.0248克经过重结晶处理的苏丹I于100ml棕色容量瓶中，加丙酮—异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。

（2）取2ml于50ml棕色容量瓶，加丙酮—异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。

（3）于474 nm处测的吸光度，即可求得F。