ATP荧光仪原理

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ATP荧光仪原理、使用和注意事项

一ATP荧光仪原理:

1 ATP(三磷酸腺苷)是活细胞能够直接利用的能量物质,它是一种有机分子,存在于所有的有机物中,多数食品本身也都含有一定量的ATP,因此检测ATP可以作为判断是否洁净的指标。

2 ATP荧光仪与Ultrasnap配合使用,采用生物发光技术检测残留的ATP以作为表面清洁度的指标。表面ATP的存在表明表面没有充分清洗,有滋生细菌的可能。

3 ATP荧光仪只能检测表面存在的总ATP,但它不能区分ATP是来自于微生物产生的亦或是因未充分清洗而残留在表面上的,所以不能直接将systemSURE II ATP荧光仪测定的RLU读数与标准平板计数相对比。但是,ATP水平与微生物数目有着密切的相关性:

①与平板计数的相关性为80-90%,但不会达到100%;没有统计上的显著差异;

②ATP与CFUs间的相关性表明ATP的监控可对表面/机器是否达到运转所要求的洁净度做出快速判断;

③使用者一旦确定了与之采用的CFUs水平相对应的RLU起始数值,就无需在以后的工作中再进行大量的微生物检测;

4 ATP荧光仪采用化学反应检测ATP,用ATP拭子采集标本。ATP拭子被缓冲液浸湿,这样有助于从干燥或湿润的表面提取生物物质(ATP)。拭子也含有一种可以冲破生物膜的试剂,使其下可能存在的生物体暴露出来。标本采集后,拭子应浸泡在能将细胞内ATP释放出来的容剂中。而后细胞内部释放出的ATP、以及拭子从设备表面抹取的ATP再和ATP拭子独特的液体试剂一起反应。

5 ATP拭子独特的液体试剂含有两种萤火虫酶---荧光素和荧光素酶,虫荧光素和虫荧光素酶在ATP存在的条件下会发光。发出的光可由ATP荧光仪进行检测。检测的发光量与ATP的总量成正比。数值越高,表明ATP的量越多,也就意味着表面的残留物越多。荧光仪以RLU(相对光单位)数值显示结果。在ATP 拭子中发生的ATP反应所产生的光以光子的形式发散出来。光子是微小的能量束,也是光的基本单位。ATP荧光仪对这些光子进行检测后直接以RLU数值的形式显示出来。SystemSURE II检测的光子数量越多,RLU的数值就越大。因此这种线性比例使得人们很容易在洁净与不洁表面之间做出判断。(备注:荧光仪检测的是总的ATP量,这些ATP来自细菌、酵母菌和霉菌体内以及食品加工设备表面的食物残渣中。所以RLU读数与微生物菌落形成单位(CFU)并不相同。由于荧光仪检测总ATP,它不能分辨其显示的RLU读数是微生物体内的ATP检测值还是残留物中的ATP检测值,或者是两者的结合。因此不能在ATP/RLU数值和标准平板计数之间进行比较。)

二ATP荧光仪使用:

ATP含有独特的高灵敏度液态稳定一体化试剂。检测物体表面上的细菌或其它微生物以及食物残留物中所含的总ATP活性,给出快速全面的洁净检测结果。

1 检测仪器:(备注:①试剂为公司研发的,测试时以Hygiena仪器为基准,来确定试剂活性,没有任何问题后,才可以使用本公司仪器来进行检测②ATP的配制:母液浓度10-9mol/mL逐渐向下稀释6个梯度10-10mol/mL、10-11mol/mL、10-12mol/mL、10-13mol/mL、10-14mol/mL、10-15mol/mL,ATP稀释液为无菌去离子水)

第一步:仪器最低灵敏度的测试(试剂反应体系为300uL发光物质:50uL10-15mol/mL ATP标准溶液)

方法:取一只检测试剂棒,将300uL发光试剂注入检测管底部,使用微量移液器吸取50uL10-15mol/mL ATP标准溶液注入试管,轻晃试剂棒3次,以便混匀溶液,将试剂棒放入仪器进行检测。

备注:ATP10-15mol/mL浓度的发光值是仪器和试剂质量最重要的指标之一,直接反应出仪器和试剂的精确性及产品是否可以使用。测试时以Hygiena仪器为基准,Hygiena光值一般在40-60RLU之间,我公司仪器为Hygiena光值上下浮动15左右。

第二步:仪器重复性的测试(试剂反应体系为300uL发光物质:50uL10-14mol/mL ATP标准溶液)

方法:同第一步,重复操作三次。测试时以Hygiena仪器为基准,Hygiena及我公司仪器光值一般在350-550RLU左右。

备注:对任何仪器和试剂来说重复性都是最重要的指标。

第三步:仪器相关线性的测试

2 实际检测:(试剂为Ultrasnap ATP拭子)

第一步:取标本(拭抹表面以获取标本。如需获得清洗水溶液标本,则将棉拭子浸入水中3到4秒钟。

第二步:进行检测(将拭子插入检测管,用拇指和中指捏住球管,从吸阀处折断。轻挤球管两次,挤出球管内液体。)

第三步:测量结果(将检测管放入发光仪中,盖上盖子,开始检测。)

概括的说:拭抹、崩断、挤压!

三注意事项:

1 反复冻融:反应体系中有酶的存在,所以反复冻融后活性有所降低。(以10-14mol/mL浓度的ATP

为标准,试剂为本公司试剂)

方法:取5mL发光试剂,融化后,取300uL测试,将剩余试剂放回-20℃,彻底冷冻后再次融化测试,反复10次。

结论:试剂的保存条件在-20℃,但运输途中难免会使试剂发生冻融现象,冻融会使所有酶制剂发生活性的降低,我们所做的是尽量使其在合理冻融次数内,活性可以保持在一定范围内,考虑到实际运输及使用情况,试剂在反复冻融条件下进行测试,确定失效期限(试剂失效标准:测试数值降低)为反复冻融不超过次。

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