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安徽医科大学药学院学位论文鬼针草总黄酮对大鼠肝纤维化的保护作用Protective effect of total flavones of Bidens pilosa L (TFB) on experimental liver fibrosis in rats作者姓名× × ×指导教师姓名× × ×申请学位级别学 士 专业名称药品监督与管理 提交论文日期2008.5 论文答辩日期2008.6学位授予单位安 徽 医 科 大 学二〇〇八年五月鬼针草总黄酮对大鼠肝纤维化的保护作用× × ×安徽医科大学药学院合肥 230032摘要目的：观察鬼针草总黄酮（total flavones of Bidens pilosa L., TFB）对大鼠肝纤维化的保护作用。

方法：将大鼠随机分成正常对照组、CCl4模型组、TFB 40，80，160mg/kg组和秋水仙碱（Col）0.1mg/kg 阳性药对照组，除正常对照组外，其余各组采用四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型。

于造模第9周起，给药组分别灌胃相应的受试药物，正常对照组和模型组灌胃等容量的生理盐水，疗程10周。

实验结束后，取大鼠肝、脾，称重，计算肝、脾指数；取大鼠血清测血清中透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原肽（PCⅢ），Ⅳ型前胶原酶（CⅣ）的含量；同时取固定部位肝组织，测定组织中丙二醛（MDA），羟脯氨酸（Hyp）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。

结果：TFB160，80 mg/kg能显著降低肝纤维化大鼠肝、脾指数，血清中HA，PCⅢ，CⅣ含量和肝组织中MDA、Hyp含量，升高肝组织中GSH-Px活性（P<0.05）。

结论：TFB对CCl4所致大鼠肝纤维化有明显治疗作用,其机制可能与抑制脂质过氧化有关。

关键词：鬼针草总黄酮（total flavones of Bidens pilosa L., TFB），肝纤维化，脂质过氧化Protective effect of total flavones of Bidens pilosa L (TFB) on experimental liver fibrosis in ratscaozhuangCollege of pharmacy, Anhui Medical UniversityAbstract Aim: To observe the curative effect of total flavones of Bidens pilosa L (TFB) on experimental liver fibrosis in rats. Methods: Rat liver fibrosis was induced by CCl4 (50%, 0.1 mL/100 g body weight) twice a week in rats for 18 weeks. TFB (160，80，40mg/kg) was treated daily via gastrogavage at 9 week. The spleen weight and liver weight were weighed. The levels of Hyp, MDA contents, GSH-px activity in liver tissue were determinated using the kits. The HA、PCⅢ、C inⅣserum were assessed by radioimmunoassay. Results: CCl4 caused liverⅢⅣ, fibrosis, featuring increase spleen and liver weight，serumHA , PC, C and liver MDA and Hyp contents, decrease in GSH-px activity in liver tissue. Compared with model group, TFB (160,80mg/kg) treatmentⅢⅣ, significantly reduced spleen and liver weight; serum HA , PC, C liver MDA and Hyp content (P<0.01, P<0.05). Moreover TFB160, 80mg/kg could increase GSH-Px activity in liver tissue. Conclusions: TFB significantly reduces CCl4-induced liver fibrosis in rats, probably by exerting a protective effect by its free-radical scavenging ability. Keywords: total flavones of Bidens pilosa L(TFB); liver fibrosis肝纤维化是指各种原因所致的肝脏内纤维结缔组织增生肝脏内细胞外基质(ECM)弥漫性过度沉积性疾病，假小叶形成，其发生机制主要是肝内ECM合成与降解失衡，表现为ECM大量沉积。

肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化的中间环节，肝星状细胞(HSC)在此过程中起关键性作用。

肝纤维化的发展是一动态过程，这一过程一方面取决于各种病因和损伤因素的存在，另一方面，而且是更重要的，取决于肝内炎症活动性及其持续性。

消除了肝损伤的致病因素，肝内组织学病变活动性降低，肝纤维化便减轻或停止发展。

在多数情况下，纤维化发展的过程往往经历数月至数年。

因此，如能在肝纤维化早期采取抗纤维化措施，有可能使之停止发展或逆转[1]。

中医治疗慢性病，常显示特有的优越性。

临床研究证实鬼针草对肝纤维化有很好的治疗作用。

文献检索[2-3]鬼针草具有清热解毒，散瘀消肿等功效.其所含化学成分种类较多，活性成分以聚乙炔类和黄酮类成分为主。

文献检索[4-7]发现其醇提物有抗炎作用、清除自由基和免疫调节等作用。

本课题提取了其有效部位总黄酮，观察TFB对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用，并通过大鼠模型观察TFB对肝组织中MDA含量和SGSH-PX活性的影响，初步探讨其抗肝纤维化作用机制。

1．材料与方法1.1 动物 SD大鼠，♂，体重200－250g。

由安徽医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：皖医实动准第01号。

实验室温度控制在20～25℃，湿度在50－60％，自由饮水。

1.2 药品与试剂鬼针草总黄酮TFB：由本院天然药物化学实验中心提供，黄酮含量>50%,实验时用NS配成所需浓度；CCl4（四氯化碳）上海长江化工厂，实验前用灭菌精制花生油配成50％浓度；秋水仙碱，郑州致和药业有限公司；MDA、Hyp和GSH-Px测定试剂盒购ⅢⅣ由北京北方生物技术所出自南京建成生物工程公司。

HA,PC,C品；2．方法2.1 动物分组及肝纤维花模型的建立 48只大鼠, 分为正常对照组、模型组、TFB160，80，40mg/kg剂量组和秋水仙碱0.1mg/kg阳性药对照组，共6组，每组8只。

除正常对照组外，其余各组分别于大鼠背部皮下注射50%CCl4 0.1ml/100g, 每周2次，连续18周。

至第9周时，各给药组分别灌胃相应的受试药物。

每天1次，连续10周。

2.2 血清HA，PCⅢ，CⅣ的测定实验结束后，禁食8h后处死动物, 用放射免疫分析法测定血清HA，PCⅢ，CⅣ的含量,按说明书进行操作。

2.3 MDA、Hyp、GSH-Px的测定取适量肝左叶组织,制备2%肝组织匀浆，按试剂盒说明书完成。

2.4 统计学处理数据均以X±S表示，组间差异采用t检验。

3．结果3.1 TFB对肝纤维化大鼠肝脾指数的影响模型组大鼠肝、脾指数显著增加(P<0.01)，而TFB160，80mg/kg治疗后其肝、脾指数明显下降(P<0.05)，提示TFB能够降低肝纤维化大鼠的肝、脾重量。

见表1。

Hyp含量TFB提示表Hyp含组别剂量mg/kgHAng/mlPCⅢng/mlCⅣng/mlHypug/g肝组织正常组 - 274.87±31.47 2.91±1.68 4.75±1.58 219.72±18.70 模型组 - 827.75±334.09▲▲11.78±4.73▲▲7.66±2.06▲▲289.42±40.75▲▲TFB组 160 529.80±174.39* 6.78±2.95* 5.22±2.42* 248.33±36.34* TFB组 80 488.75±120.45*6.25±1.49**5.41±2.05* 235.01±33.21* TFB组 40 737.34±299.46 8.92±2.40 5.93±1.36 269.92±44.62 秋水仙碱 0.1 546.07±157.04* 7.38±2.25* 5.33±1.97* 240.26±30.84* ▲▲P<0.01 与正常组比较; **P<0.01, *P<0.05 与模型组比较3.3 TFB对肝纤维化大鼠肝组织中MDA含量和GSH-Px活性的影响模型组大鼠肝组织GSH-Px活性降低，MDA 含量升高，与空白组比较差异非常显著。

TFB160，80mg/kg组肝组织GSH-Px活性明显高于模型组（P < 0. 05），且TFB160，80mg/kg可明显降低血清中MDA 含量，与模型组比较有显著性差异，提示TFB可能通过抑制体内脂质过氧化而治疗肝纤维化。

见表3.3表3.3 TFB对肝纤维化大鼠肝组织中MDA含量和GSH-Px活性的影响(X±S, n=8)组别剂量Mg/mgMDAnmol/mgprotGSH-Pxumol/L. mgprot正常组 -3.80±0.96 24.65±4.79模型组 -9.36±2.87▲▲ 13.28±3.43▲▲TFB组 1606.66±1.52* 18.44±3.37**TFB组 806.66±0.53*18.56±2.90**TFB组 408.99±1.88 12.19±1.80秋水仙碱组 0.01 6.54±1.92* 17.53±3.99* ▲▲P<0.01与正常组比较; **P<0.01, *P<0.05 与模型组比较4. 讨论肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展的必经之路，不同原因(炎症、中毒、慢性淤胆、代谢障碍、血液循环障碍、营养障碍等)引起肝细胞(HC)慢性损伤，使枯否氏细胞(KC)激活，分泌多种细胞因子随同血小板、窦内皮细胞(SEC)和HC等分泌的细胞因子，和某些化学介质共同激活肝星状细胞(HSC)，使其转化为肌成纤维细胞(MFB)，再通过旁分泌和自分泌作用，大量合成、增殖以胶原为主的细胞外间质(ECM)，而降解相对不足，使ECM在肝内过多沉积，肝窦基底膜形成，肝窦毛细血管化，导致肝纤维化的形成和发展。