阿司匹林抑制ox_LDL诱导内皮细胞炎症分子表达的研究

L ine 1: Cells w ithout any treatm ent; line 2: Cells treated with 011 g ・L - 1 ox2 LDL; line 3: Cells treated with 013 g・L - 1 ox2 LDL; line 4:
Cells treated with 215 mmol・L - 1 ASA alone; line 5: Cells treated with 5 mmol・L - 1 ASA alone; line 6: Cells p reincubated with 5 mmol・L - 1 ASA for 30 m in and then stim ulated with 011 g・L - 1 ox2 LDL; line 7: Cells p reincubated with 5 mmol・L - 1 ASA and then treated with 013 g・ L - 1 ox2 LDL; line 8: Cells p reincubated with 215 mmol・L - 1 ASA and then treated w ith 011 g ・L - 1 ox2 LDL; line 9: Cells p reincubated with 215 mmol・L - 1 ASA and then treated with 013 g・L - 1 ox2 LDL
[6]
, 而这种作用的
机制尚未完全阐明 。本研究的目的是观察阿司匹林 是否抑制 ox2 LDL 对内皮细胞损伤的影响 。
1 材料与方法 1. 1 材料 I型胶原酶 ( C0130 ) 购自美国 Sigma 公
m in后 , COX 2 2 表达明显降低 。 ② 阿司匹林降低 ox2 LDL 诱
ox2 LDL 诱导内皮细胞 ROS产生 。 013 g・L
-1
司 ,特级胎牛血清 ( SH30070103 ) 、 DM EM 低糖细胞 培养基 、 胰蛋白酶购自美国 Hyclong公司 , 内皮细胞 生长 因 子 ( 1103484001 ) 购 自 美 国 Roche 公 司 ,
COX 2 2 抗体 ( sc 2 1746 ) 、 ICAM 2 1 ( sc 2 8493 ) 抗体购自
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中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2007 Ap r; 23 ( 4 ) : 472 ～5
阿司匹林抑制 ox2 LDL 诱导内皮细胞炎症分子表达的研究
吴 伟北京医院老年医学研究所 ,北京 100730)
A: Cells without any treatm ent; B: Cells treated with 013 g ・L - 1
ox2 LDL; C: Cells p reincubated with 215 mmol・L - 1 ASA and then stim 2 ulated with 013 g・L - 1 ox2 LDL; D: Cells p reincubated with 5 mmol・ F ig 1 Effects of ASA on CO X 2 2 expression in duced by ox2 LDL in HUVEC s L - 1 ASA and then stim ulated with 013 g・L - 1 ox2 LDL
随之增加 ,使用 5 mmol ・L 阿司匹林能够明显抑 制 COX 2 2 的表达 。单独使用阿司匹林对内皮细胞 基础水平的 COX 2 2 表达没有明显影响 。
- 1
F ig 2B Effects of ASA on I CAM 2 1 expression in duced by ox2 LDL in HUVEC
[ 4, 5 ] [1 - 3]
文献标识码 : A 文章编号 : 1001 - 1978 ( 2007 ) 04 - 0472 - 04 摘要 : 目的 评价阿司匹林对 ox2 LDL 刺激内皮细胞炎症蛋 白表达的影响 。方法 使用培养人脐带内皮细胞 ,用氧化型 低密度脂蛋白刺激内皮细胞 16 h,终止反应后用 SDS2PAGE 分离蛋白 ,使用 W estern B lot分析蛋白表达的变化 。 ROS测 定使用 DCFH 2 DA 荧光标记 , 用流式细胞仪测定荧光强度 。 结果 ① 阿司匹林抑制 ox2 LDL 诱导内皮细胞 COX 2 2 表达 。 使用 ox2 LDL 刺激内皮细胞 16 h, COX 2 2 表达增加 , 分别用
应 。蛋白分析使用 SDS2PAGE 电泳 , 用特异性抗体 染色 ,洗 3 次后用辣根过氧化酶标记的二抗结合 ,用 ECL 进行发光处理 ,在 X 线片上曝光成像 。 1. 5 RO S (活性氧测定 ) 使用 ROS测定试剂盒 , 用 ox2 LDL 刺激细胞 ,使用 1 ∶ 1 000 DCFH 2 DA 荧光 剂标记细胞 1 h,然后洗细胞 3 次 ,用流式细胞仪测 定细胞的荧光强度 。 1. 6 CO X 2 2、ICAM 2 1 的测定 将不同浓度的 ox2 LDL 与内 皮 细 胞 共 同 孵 育 16 h 后 终 止 反 应 , 用 W estern blot的方法分析 COX 2 2、 I CAM 2 1 的表达 。
中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2007 Ap r; 23 ( 4 )
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mmol・L 阿司匹林处理 30 m in, 然后用 011 g ・
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L 或 013 g・L 的 ox2 LDL 刺激细胞 16 h, 使用细 - 1 - 1 胞裂解液 ( 100 mmol・L Tris, 50 mmol・L NaC l,
收稿日期 : 2006 - 01 - 15,修回日期 : 2007 - 02 - 28 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No 30471925) 作者简介 : 吴 伟 ( 1963 - ) , 男 , 主管技师 , 研究方向 : 免疫学 , Tel:
010 2 58115045, E 2 mail: weiwu123@163. com;
215 mmol・L 和 5 mmol ・L 阿司匹林处理内皮细胞 30
-1 -1
。 ox2 LDL 刺激血管内
皮细胞促使黏附分子 、 cytokine 增加 、 抑制 NO 以及 。近年的研究表明非甾体类抗 炎药物阿司匹林 ( acetylsalicylic acid, ASA ) 对动脉 粥样硬化炎症变化具有保护作用
g・L - 1 ox2 LDL; line 3: Cells p reincubated with 215 mmol・L - 1 ASA for 30 m in and then stim ulated with 013 g・L - 1 ox2 LDL; line 4: Cells p rein2 cubated with 5 mmol・L - 1 ASA and then stim ulated with 013 g・L - 1 ox2 LDL
ox2 LDL 刺激内
皮细胞 16 h后细胞内 ROS明显增高 , 但阿司匹林仅部分阻 止 ROS的产生 。结论 非甾体类抗炎药物阿司匹林对 ox2
LDL 诱导 COX 2 2、 ICAM 2 1 有明显的抑制作用 ,但不能完全阻
美国 Santa C ruz公司 。 ROS测定试剂盒 ( S0021 ) 购 自 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 。流 式 细 胞 仪 为
COULTER 公司产品 ,型号 EP ICS XL。 1. 2 内皮细胞培养 取新鲜脐带 ,用 I型胶原酶消
止 ox2 LDL 诱导的 ROS产生 。这些结果表明阿司匹林能够 减轻氧化脂质诱导的内皮细胞炎症损伤反应 。 关键词 : 阿司匹林 ; 氧化型低密度脂蛋白 ; 内皮细胞
化、 收集脐静脉血管内皮细胞 , 使用低糖 DM EM 培 - 1 养液 ,加入 100 μ l penicillin G, 100 m g・L strep to2
mycin, 20% 特 级 胎 牛 血 清 , 20% 内 皮 生 长 因 子 ( ECGF ) ,在 5% CO2 、 37 ℃ 温育箱中培养 , 用第 3 ～ 5 代内皮细胞进行实验 。 1. 3 ox 2 LDL 的制备 将新鲜血清用梯度超速离
动脉粥样硬化是一个慢性血管炎症损伤性疾
2 结果 2. 1 阿司匹林对 ox 2 LDL 诱导 CO X 2 2 ( cyclooxy2 gena se 2 2) 表达的影响 结果显示 ox2 LDL 增强了 COX 2 2 的蛋白表达 , ox2 LDL 剂量增加 COX 2 2 表达量
L ine 1: Cells without any treatm ent; line 2: Cells treated with 013
h,用硫代巴比妥法确认低密度脂蛋白的氧化程度 。 1. 4 W estern blot分析 将培养细胞分别用 215、 5
effects on LPS2induced immunological liver injury and in fact aggravated LPS2induced NO p roduction and he2 patic GSH dep letion and increased LPS2induced mor2 tality in m ice p rim ed w ith BCG . Conclusion NAC has a dual effect on LPS2induced i mm unological liver injury. Pretreatm ent w ith NAC p rotects against LPS2in2 duced immunological liver injury via counteracting