黄芩苷对STZ诱导糖尿病大鼠肾组织保护作用实验研究

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糖尿病肾病是糖尿病严重的并发症之一,属微血管病变,其发 生机制较为复杂,与醛糖还原酶和蛋白激酶C激活、 蛋白非酶糖化、 反应性氧化应激及生长因子作用等多种因素有关[1]。 研究表明,中草 药及其提取成分如黄芩苷等对糖尿病微血管病变具有一定的保护 作用 。 本实验通过研究黄芩苷对糖尿病大鼠的干预作用,探讨其对 糖尿病大鼠肾组织的保护作用,并分析其与AngⅡ、 TGF-β1的关 表 1 各组大鼠血糖值(mmol/L, x ± sn=12)
注:与空白组比 *P＜0.05,**P＜0.01;与模型组比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01 表 3 各组大鼠 18 周末血浆 Ang Ⅱ及肾组织 Ang Ⅱ含量比较( x ± s) 组 别 鼠 血浆 AngⅡ 肾组织 AngⅡ
空白组 模型组 黄芩苷低剂量组 黄芩苷中剂量组 黄芩苷高剂量组 数 12 12 12 12 12 (pmol/L) 162.42±31.64 ** 429.13±93.67 398.45±89.98 ΔΔ 218.82±82.69 ΔΔ 199.32±90.78 (pmol/L) 610.31±131.26 668.17±125.35 576.67±140.23 639.79±129.22 601.32±130.54
2.3 各组大鼠血肌酐、24h 尿蛋白总量比较
实验第18周末,如表2所示,与空白组相比,模型组大鼠血肌酐、 24h尿蛋白含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,黄芩苷中、 高剂 量组大鼠血肌酐、 24h尿蛋白含量显著降低,具有统计学差异(P<0. 01)。
2.4 血浆 Ang Ⅱ与肾组织 Ang Ⅱ含量变化:
组 别 空白组 模型组 黄芩苷低剂量组 黄芩苷中剂量组 黄芩苷高剂量组 鼠 数 12 12 12 12 12 血肌酐(μmol/L) 76.32±16.27 ** 36.91±29.64 201.76±20.35 ΔΔ 174.29±28.43 ΔΔ 156.78±28.43 24 小时尿蛋白总量 (mg) 2.81±0.37 ** 60.93±12.33 44.32±20.87 ΔΔ 22.77±19.87 ΔΔ 23.32±23.56
注:与空白组比 *P＜0.05,**P＜0.01;与模型组比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01
注:与空白组比 *P＜0.05,**P＜0.01;与模型组比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01
作者简介:汪玉芳(1982 —),女,安徽太湖人,工程师,硕士研究生,研究方向:保健食品的开发。
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黄芩苷对 STZ 诱导糖尿病大鼠肾组织保护作用实 验研究
汪玉芳 黄远英
(汤臣倍健股份有限公司 广东广州 510663)
摘要:目的 探讨黄芩苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织的保护作用及其相关机制。 方法 将用STZ造模成功的糖尿病大鼠48只,随机 分为模型组、 黄芩苷低、 中、 高剂量组,每组12只,另设空白组12只。 持续给药18周。 给药结束后测血糖、 24小时尿蛋白总量、 血浆及肾组织中血管 紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量、 转化生长因子β1(TGF-β1)。 结果 与模型组比较,黄芩苷中、 高剂量组能明显降低糖尿病大鼠血肌酐和24小时尿蛋白量, 降低血浆中AngⅡ的含量,减少TGF-β1的表达。 结论 黄芩苷对糖尿病大鼠肾组织具有较好的保护作用,其机制可能通过降低糖尿病大鼠血浆中Ang Ⅱ含量,抑制TGF-β1过度表达,改善肾小球毛细血管和基底膜的通透性,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。 关键词:糖尿病 黄芩苷 AngⅡ TGF-β1 中图分类号:Q3-3 文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2016)03-0017-02
实验第18周末,如表3所示,与模型组相比,黄芩苷中、 高剂量组 大鼠血浆中AngⅡ含量明显降低(P<0.05),而各组大鼠肾组织中 AngⅡ含量并无明显统计学差异。
2.5 肾组织 TGF- β 1 的表达水平
正常大鼠肾组织细胞胞浆内,可见少许黄色染色物质,TGF-β 1呈阴性表达,模型组大鼠肾组织细胞胞浆或胞膜布满棕黄色颗粒 状物质,TGF-β1呈强阳性表达;由表4可知,模型组肾组织中TGFβ1表达较空白组显著升高,与空白组相比具有统计学差异(P<0. 01);黄芩苷中、 高剂量组较模型组TGF-β1表达显著降低,具有统 计学差异(P <0.05)。
3 讨论
更正启示
<正>《生物技术世界》 杂志2016年第 13 卷第2 期226 页上的" 实验在高中物理教学中的作用浅谈 "一文"作者单位"应 为 "吉林省白城市镇赉县第三中学校 吉林镇赉 137300 "。 <正>《生物技术世界》 杂志2016年第 13 卷第2 期127 页上的" 多样性护理对2型糖尿病患者治疗依从性与治疗效果的影 响 "一文"作者单位"应为 "（1.郑州市第三人民医院 2.郑州市第九人民医院 河南郑州 450053） "。 《生物技术世界》编辑部 河南郑州 450000；
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织TGF-β1含量。 1.2.4 统计学方法 数据均采用 SPSS 16.0统计软件进行分析。 所有数据均经正 态性检验,符合正态分布的数据采用 x±s 表示,组间差异性显著 分析采用单因素方差紧张素系统较为活跃,血 管紧张素Ⅱ可通过增加肾小球囊内压、 从而诱导细胞生长因子的基 因表达,促使肾小球系膜细胞增生肥大、 血管内皮细胞损伤等一系 列途径刺激胶原蛋白合成、 同时减少其降解,最终导致肾小球硬化 的发生。 高血糖和血管紧张素Ⅱ等因素协同作用,通过蛋白激酶-C 途径刺激肾小球系膜细胞TGF-β1的转录[3]。 TGF-β1通过自分泌 和旁分泌作用增加细胞外基质合成、 抑制其降解,因此,TGF-β1与 AngⅡ在糖尿病肾小球肥大和基质增生中起着非常关键的作用[4]。 本实验研究证实,黄芩苷组血浆AngⅡ含量明显降低,表明黄芩苷可 通过降低血浆中AngⅡ含量过高而阻止其发生肾损害。 同时,黄芩苷 组肾小管TGF-β1含量较模型组明显降低,而TGF-β1的表达与 AngⅡ的含量相互促进,协同作用,加重肾损害的发生。 黄芩苷可同 时降低血浆AngⅡ和肾小管TGF-β1含量,可以推测黄芩苷通过降 低血浆AngⅡ的含量,下调肾小管TGF-β1活性表达可能是其防止 或改糖尿病肾损害的作用机制之一。 综上所述,本研究表明,黄芩苷 对糖尿病大鼠肾组织具有较好的保护作用,表现为减少血肌酐和尿 白蛋白排泄,抑制肾小球节段性系膜细胞增生,有效减轻肾小管空 泡变性和肾小管上皮细胞坏死。 其机制可能通过降低糖尿病大鼠血 浆中AngⅡ水平,减少的肾小球TGF-β1的表达,改善肾小球毛细 血管和基底膜的通透性,进而有效保护糖尿病大鼠肾组织。 参考文献 [ 1 ] 林善锬. 糖尿病肾病发病机制的研究进展[ J ] . 中华内科杂志, 2001,40(11)782-783. [2]李萍,刘长山.黄芩甙对糖尿病患者红细胞醛糖还原酶活性及早期 糖尿病肾病的影响[J].中国老年学杂志,2001,21:334-335. [3] Wolf G,Chen Y,Sharma K,et al.High glucose-induced proliferation in mesangial cells is reversed by autocrine TGF- β[J]. Kidney Int,1992,42:647-656. [4]Pantsulaia T.Role of TGF-beta in pathogenesis of diabetic nephropathy[J].Georgian Med News,2006,131:13-18.
[2]
系,为中药预防与治疗糖尿病肾病探索新的防治途径。
1 材料和方法 1.1 实验材料
SD大鼠70只,SPF级,雄性,8周龄,体重180-240克,由广州中医 药大学实验动物中心提供。 黄芩苷:上海隆垒生物科技有限公司;链 脲佐菌素(Streptozotocin,STZ);美国sigma公司;血糖试纸 “安妥” 牌:美国雅培公司;黄芩苷:上海隆垒生物科技有限公司;血糖试纸 “安妥” 牌:美国雅培公司;AngⅡ放免试剂盒:北京北方生物技术研 究所;TGF-β1 (V) sc-146 兔多克隆抗体:南京建成生物科技有 限公司。
组 别 空白组 模型组 黄芩苷低剂量组 黄芩苷中剂量组 黄芩苷高剂量组 鼠数 12 12 12 12 12 阳性面积率 0.650±0.078 ** 2.153±1.219 1.998±1.324 Δ 1.134±0.185 Δ 1.028±0.253
注:与空白组比 *P＜0.05,**P＜0.01;与模型组比 ΔP＜0. 05,ΔΔP＜0.01 表 2 各组大鼠血肌酐、24 小时尿蛋白水平( x ± s)
组 别 空白组 模型组 黄芩苷低 剂量组 黄芩苷中 剂量组 黄芩苷高 剂量组 1周 5.43±0.22 17.00± 3.39** 17.56± 1.38 18.84± 2.35 17.32± 2.84 6周 5.29±0.36 18.88± 2.71** 18.07± 2.11 16.22± 3.31 16.95± 2.99 12 周 5.51±0.28 19.03± 2.17** 18.62± 2.03 16.11± 3.55 16.33± 2.96 18 周 5.41±0.33 19.35± 2.28** 18.76± 2.13 15.48± 3.34 15.67 ± 2.87
2 结果 2.1 一般情况观察
与空白组相比,各模型组组大鼠出现懒动、 毛色干枯、 光泽较 差、 且进攻性增强。
2.2 大鼠各期血糖值
如表1所示,黄芩苷低、 中、 高剂量组及模型组大鼠各期血糖值 与空白组相比,具有统计学意义(p<0.01);黄芩苷低、 中、 高剂量组大 鼠血糖值与模型组相比,有降低的趋势,但未观察到有统计学差异。
1.2 实验方法
1.2.1 分组及糖尿病大鼠模型制备 全部动物适应性饲养7天,造模前称体重,测量空腹血糖。 留取 12只作为空白组,其他动物空腹腔注射STZ60mg/Kg体重(溶于新 配制的0.lmol/LpH4.4柠檬酸钠缓冲液中),以诱发糖尿病,若空腹 血糖16.5mmol/L以上,尿量及饮水明显增多者列入糖尿病实验对 象,筛选造模成功的糖尿病模型大鼠48只,随机分为模型组12只,黄 芩苷低、 中、 高剂量组各12只。 1.2.2 各组给药情况 各组在STZ注射后造模成功后开始进行给药。 黄芩苷低、 中、 高 剂量组给予黄芩苷75、 150、 300 mg/(kg · d)灌胃,空白组与模型组 给予等量纯水灌胃。 1.2.3 检测各组以下指标: 给药18周末测血糖,微量尿蛋白 (考马斯亮蓝法) 检测24h尿 蛋白总量;剪取肾组织匀浆,检测血浆及肾组织中AngⅡ含量,肾组 表 4 黄芩苷对各组大鼠肾组织 TGF- β 1 表达水平的影响( x ± s)