RP_HPLC测定藏药六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量

中图分类号 : R917
文献标识码 : A
藏药六味能消胶囊由大黄 、藏木香 、诃子等六味药材组成 , 宽中理气 , 润肠通便 , 调节血脂. 适用于胃 脘胀痛 、厌食 、纳差及大便秘结 , 还适用于高脂血症及肥胖症. 大黄 、藏木香是其中两味主要药物 , 我们建 立了六味能消胶囊中芦荟大黄素 、大黄酸 、大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚的含量测定方法 , 已另文发表. 现 代研究表明 , 土木香内酯和异土木香内酯是藏木香的主要活性成分 , 具有显著的抗炎 、保肝活性 , 可抑制 感染人型结核杆菌 , 还能清除活性氧自由基[1] . 本实验建立了六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯 的反相高效液相色谱法 ( RP2H PL C) 含量测定方法 , 并对三批样品进行含量测定 , 为更为全面地控制六味能 消胶囊的内在质量提供参考.
1 实验部分
11 1 仪器与试药 美国 Water s 2695 高效液相色谱仪 ; 2996 二极管阵列检测器 ; Empower 色谱工作站 ; BSzz4S 型电子分
析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司) . 土木香内酯对照品 (批号 : 1107602200506 , 含量测定用) 、异土 木香内酯对照品 (批号 : 07612200402 , 含量测定用) 购自中国药品生物制品检定所. 乙腈为色谱纯 , 其它试 剂为分析纯. 六味能消胶囊由西藏藏药股份有限公司提供. 11 2 方法与结果 11 21 1 色谱条件
图 1 土木香内酯 、异土木香内酯对照品溶液( A) 、供试品溶液( B) 和阴性样品溶液( C) 的色谱图
11 21 6 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10μL , 进样 , 按“11 21 1”项下条件测定峰面积 , 以峰面积为纵坐标 ,
进样量为横坐标 , 进行线性回归 , 得回归方程. 土木香内酯 : Y = 61 428 ×105 X + 71 761 ×103 , r = 01 999 8 ; 异土木香内酯 : Y = 71 183 ×105 X + 11 201 ×104 , r = 01 999 8. 结果表明 , 土木香内酯 、异土木香内酯均在 01 30～11 50μg 范围内呈良好的线性关系. 11 21 7 精密度试验
ZEN G Rui1 , Q U Yan2 , GAO Yu2ming1
11 Ethnic Pharmaceutical Ins titute of Southwes t University for Nationalities , Chengdu 610041 , China ; 21 Pharmaceutical Ins titute of Chengdu University of TCM , Chengdu 610075 , China
参考文献 :
[ 1 ] 罗达尚. 中华藏本草 [ M ]. 北京 : 民族出版社 , 1997 : 254. [ 2 ] 王秀丽 , 栾 杨 , 刘拥军 , 等. 气相色谱法测定土木香中土木香内酯含量 [J ]. 山东中医药大学学报 , 2005 , 29 (4) : 322. [ 3 ] 张永萍 , 李 颖. 气相色谱法测定土木香药材中土木香内酯和异土木香内酯的含量 [J ] . 中国药科大学学报 , 1993 ,
Abstract : Objective To establish t he H PL C met ho d for t he determinatio n of alantolacto ne and isoalantolac2 to ne in Liuwei Nengxiao Cap sule. Met ho d ODS column (250 mm ×41 6 mm , 5μm) of Kro masil ; t he mo2 bile p hase co ntaining a mixt ure of aceto nit ril - 01 05 % p ho sp horic acid solutio n (58 ∶42) ; flow rate 11 0 mL ·min - 1 ; and t he wavelengt h as 194 nm , were utilized fo r t his st udy. Result s Alantolacto ne and isoalantolacto ne showed good correlatio n in t he ranges of 01 30～11 5μg ( r = 01 999 8) . The average recov2 ery was 981 2 % for alantolacto ne ( RSD = 11 67 % , n = 5) and 971 7 % for isoalantolacto ne ( RSD = 11 48 % , n = 5) . Co nclusio n The met ho d is simple , accurate and sensitive and can be used to co nt rol t he qualit y of Li2 uwei Nengxiao Cap sule in it s p roductio n. Key words : H PL C ; alantolacto ne ; isoalantolacto ne ; Liuwei Nengxiao Cap sule
11 21 3 供试品溶液的制备 取本品 1 g , 精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 加入甲醇 50 mL , 超声处理 (功率 400 w , 频率 42 k Hz)
30 min , 放冷 , 过滤并定容于 50 mL 量瓶中 , 摇匀 , 用 01 45μm 微孔滤膜滤过 , 作为供试品溶液. 11 21 4 阴性对照溶液的制备
24 (4) : 248. [ 4 ] 王焕云 , 张 伟. 薄层扫描法测定蒙药查干 - 汤中土木香内酯的含量 [J ] . 中国民族医药杂志 , 2005 , 11 (4) : 33.
Determination of Alantolactone and Isoalantolactone in the Tibetan Madicine Liuwei Nengxiao Capsule by RP2HPLC
2 讨 论
本实验参考文献[2 - 3] 对样品的制备方法进行研究 , 发现甲醇超声提取法的提取率较高且方法简便 , 快 捷 , 故采用该方法处理样品. 对样品溶液和对照品溶液进行了全波长扫描 , 结果土木香内酯和异土木香内 酯分别在 194 nm 和 195 nm 有最大吸收 , 故选择 194 nm 作为检测波长. 分别采用乙腈 - 水 、甲醇 - 水作为 流动相 , 摸索色谱的最佳测定条件 , 结果发现 , 乙腈 - 水的干扰较小. 并经过多次调整乙腈 - 水的配比 , 选 择了乙腈 - 01 1 %磷酸溶液 (58 ∶42) 作为流动相 , 色谱峰对称性良好 , 干扰小.
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
第 5 期 曾 锐 , 等 : RP2HPL C 测定藏药六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量
文章编号 : 1673 - 9868 (2009) 05 - 0121 - 03
RP2HPLC 测定藏药六味能消胶囊中 3 土木香内酯和异土木香内酯的含量
曾 锐1 , 瞿 燕2 , 高宇明1
11 西南民族大学 民族药物研究所 , 成都 610041 ; 21 成都中医药大学 药学院 , 成都 610075
按全方比例分别称取除藏木香外其他药材适量 , 按六味能消胶囊的制备工艺制得缺藏木香的阴性样 品 , 照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液. 11 21 5 各样品溶液的 H PL C 色谱图
分别吸取供试品溶液 , 阴性对照溶液各 10μL 及对照品溶液 5μL , 注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件 进行测定. 记录其色谱图 , 结果表明六味能消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯色谱峰分离良好 , 且阴性 样品溶液无干扰 , 见图 1.
目前 , 对土木香内酯和异土木香内酯的定量分析 , 报道较多的方法主要有气相色谱法[3] , 薄层扫描 法[4] 等 , 本研究建立的反相高效液相色谱分析法较气相色谱法耗时较长 , 检测限较高 , 但重现性好 ; 较薄 层扫描法定量准确 , 简便和实用. 本研究对六味能消胶囊中的活性成分土木香内酯 、异土木香内酯建立了 含量测定方法 , 该方法简便 、灵敏 、准确且专属性较强 , 可有效地控制六味能消胶囊的产品质量. 这对于民 族药的新药研究及质量控制具有一定的意义.
摘要 : 目的 : 建立六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的高效液相色谱法含量测定方法. 方法 : 色谱柱为
Kro masil C18 色谱柱 (250 mm ×41 6 mm , 5μm) ; 流动相为乙腈 - 01 1 %磷酸溶液 (58 ∶42) ; 流速为 11 0 mL/ min ; 检 测波长 : 194 nm. 结果 : 土木香内酯 、异土木香内酯均在 01 30～11 50μg 范围内呈良好的线性关系 ; r 均为 01 999 8 ;
971 2
异土木香内酯
21 543 21 458 21 568 21 541 21 472
21 500 21 500 21 500 21 500 21 500
41 866 41 869 51 058 41 930 41 783
961 5 981 2 991 8 971 8 961 2
971 7
11 48
平均回收率分别为 981 2 %( RSD = 11 67 % , n = 5) 和 971 7 %( RSD = 11 48 % , n = 5) . 结论 : 该方法简便 、灵敏 、准确 ,
可作为六味能消胶囊的质量控制方法.
关 键 词 : 高效液相色谱法 ; 土木香内酯 ; 异土木香内酯 ; 六味能消胶囊
123
11 21 11 含量测定 分别精密吸取各供试品溶液 10μL 、对照品溶液 5μL 注入液相色谱仪 , 测定峰面积 , 计算样品中土木
香内酯和异土木香内酯含量. 结果三批样品中土木香内酯的平均含量分别为 21 21 ,21 31 ,21 25 mg/ g. 异土 木香内酯的平均含量分别为 21 53 ,21 55 ,21 48 mg/ g.
取已知含量的样品 5 份 , 每份约 1 g , 精密称定 , 分别精密加入土木香内酯 、异土木香内酯对照品 , 按 “11 21 3”项下方法制备供试品溶液 , 按“11 21 1”项下色谱条件测定 , 计算回收率. 结果见表 1.
表 1 加样回收率实验
成 分
样品含量 / mg
加入量 / mg
测得量 / mg
回收率
平均回收率
RSD
/%
/%
/%
21 247
21 200
41 318
971 1
土木香内酯
21 323 21 216
来自百度文库
21 200 21 200
41 482 41 442
991 1 1001 6
981 2
11 67
21 271
21 200
41 328
961 8
21 185
21 200
41 262
精密吸取对照品溶液 10μL 进样 , 重复 5 次 , 测得土木香内酯 、异土木香内酯峰面积的 RSD 分别为 01 91 %、11 28 %. 结果表明仪器精密度良好. 11 21 8 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液 , 分别于 0 , 2 , 4 , 8 , 12 , 24 h 进样 10μL , 测定峰面积 , 土木香内酯 RSD 为 11 36 % ; 异土木香内酯 RSD 为 11 77 %. 结果表明样品溶液在 24 h 内稳定. 11 21 9 重复性试验
Kro masil Cl8 色谱柱 (250 mm ×41 6 mm , 5 μm) . 流动相为乙腈 - 01 1 %磷酸溶液 ( 58 ∶42) ; 柱温 : 30 ℃; 流速为 11 0 mL/ min , 进样量 10μL ; 检测波长 194 nm ; 要求理论板数不低于 3 000. 11 21 2 对照品溶液的制备
取同一批供试品 , 按供试品溶液制备方法 , 重复制备样品 5 次 , 进行含量测定 , 测得的土木香内酯含量为 2125 mg/ g , RSD 为 11 92 % ; 异土木香内酯含量为 2151 mg/ g , RSD 为 2112 %. 结果表明方法重复性良好. 11 21 10 加样回收率试验
第 31 卷第 5 期 西 南 大 学 学 报 (自然科学版) 2009 年 5 月
Vol1 31 No1 5
J o urnal of So ut hwest U niver sit y (Nat ural Science Editio n)
May 2009
精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的土木香内酯对照品、异土木香内酯对照品适量 , 加甲醇分别制成每 1 mL含土木香内酯 、异土木香内酯各 013 mg 的溶液 ; 分别精密量取上述对照品溶液各 2 mL , 混匀 , 即得.
3收稿日期 : 2008 - 12 - 08 基金项目 : 四川省科技支撑计划资助项目 (2008SZ0081) . 作者简介 : 曾 锐 (1976 - ) , 男 , 博士 , 四川德阳人 , 主要从事药物分析与制剂研究.
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
122
西南大学学报 (自然科学版) 投稿网址 http :/ / xbgjxt1 swu1 cn 第 31 卷