微生物细菌鉴定试验汇总ppt课件

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1.糖发酵试验
【原理】：
各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖 （苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有 的分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来 鉴别细菌。
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金葡
表葡、腐生
S
新
生
霉 素
R
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－
链球菌 肠球菌
表葡
腐生
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链球菌属鉴定流程
触酶试验：阴性
观察血平板上溶血环
β-溶血环
杆菌肽 、CAMP、 胆七 、高盐
非β-溶血环
Optochin、杆菌肽、
胆七 、高盐
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非β溶血链球菌鉴定
菌种 肺炎链球菌 草绿色链球菌 牛链球菌
Optochin 敏感试验
1
触酶试验
原理：
有触酶的细菌能催化过氧化 氢生成水和初生态氧，继而 形成氧分子出现气泡。
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触酶试验方法
方法：
➢ 用接种环取备检菌少许，置于洁净 的玻片上，滴加3%的过氧化氢1～2 滴，观察结果。
➢ 试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌 少许，置于装有3%过氧化氢的试管 内，观察结果。
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应用： 主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。
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CAMP试验
原理：
B群链球菌能产生一种胞外因子— — CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β-溶 血毒素的活性，因此，在两菌交界处 出现箭头样的溶血增强区。
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CAMP试验方法
方法：
取血平板一块，用产生β-溶血毒素 的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此 线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养， 观察结果。
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触酶试验结果
应用： 用于革兰阳性球菌初步分属。
注意事项：
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血浆凝固酶试验
原理：
有些细菌能产生血浆凝固 酶，可以使人和动物血浆中 的纤维蛋白原转化成纤维蛋 白，从而使血浆凝固。
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血浆凝固酶试验方法
方法：
➢ 玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端， 用接种环挑取待检菌落和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓 菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。
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氧化酶试验方法
方法： ➢ 滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴
试剂，观察结果 ➢ 菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结
果 ➢ 纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，
取足够的菌落，观察结果。 应用：用于科别鉴定试验。
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苯丙氨酸脱氨酶试验
原理：
有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以 使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯 丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色化 合物。
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苯丙氨酸脱氨酶试验方法
方法：
➢ 琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼 脂斜面上， 35℃培养24～48h，取出，将三 氯化铁试剂4～5滴滴于斜面上，观察结果。
➢ 快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上， 孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立 即观察结果。
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应用：多用于肠杆菌科的鉴定。 变 形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根 菌属为阳性。
间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶而不分泌游离 型凝固酶, 因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验阴性。
•玻片法
少许菌落 + 兔血浆 10 s 内出现凝集为阳性
试管法:
试管2支，各加0.5 ml兔血浆，取被检 菌和阳性对照菌分别加血浆混匀，37 ℃水浴3~4 h
阳性：金葡、中间葡 阴性：其它葡萄球菌
常用细菌生化反应
触酶试验
凝固酶试验
胆汁溶菌试验
氧化/发酵试验
氧化酶试验
苯丙氨酸脱氨酶试验
硝酸盐还原试验
糖发酵试验
吲哚试验（靛基质试验）
甲基红试验
V-P（Voges-Proskauer）试验
枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验
克氏双糖铁（KIA）复合试验
动力、吲哚及脲酶（MIU）精复品合ppt试验
➢ 试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支 管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照 菌肉汤培养物0.5ml，35℃培养3～4h后观察结果。
应用：主要用于金葡菌的鉴定。
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1）凝固酶试验
（3）种的鉴定
• 玻片法测定结合型凝固酶；试管法测定分泌型凝固酶。金黄色葡萄球菌、中
分解葡萄糖;
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原理：
硝酸盐还原试验
某些细菌能还原培养基中的硝酸盐-亚硝 酸盐、氨和氮。
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硝酸盐还原试验
原理：
使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中 获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还 原物。培养基中的亚硝酸基能与α萘氨和苯磺酸形成红色的N-α-萘氨 偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明 该菌还原硝酸盐。
(-)凝固酶(+)
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(-)商品化的胶乳凝集试验(+)
7
胆汁溶菌试验
原理： 胆盐、去氧胆酸钠和硫磺胆酸钠
能选择性地溶解肺炎链球菌，胆汁 降低细胞膜的张力-膜破损或裂解
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胆汁溶菌试验方法
方法：
➢ 平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的 菌落上，35℃30min观察结果。
➢ 试管法：于0.9ml培养了18～24小时的菌 液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆 盐0.2ml混匀，37℃水浴10～30min，观察 结果。
应用：
用于鉴定B群链球菌。
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3）CAMP试验
• 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄 球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本 法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验
标本
涂片：G+C
鉴
触酶试验
定
+
流
葡萄球菌、微球菌
程
－ (O) 氧化酶(双糖) + (F)
葡萄球菌
微球菌
+ 凝固酶试验 －
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硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜 面上，35℃培养18~24小时，然后依次 加入含α-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂 各1mL，30s后观察结果。
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应用：
有助于鉴别肠杆菌科、奈瑟菌属、布 兰汉菌属、假单胞菌属等
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氧化酶试验
原理：
某些细菌具有细胞色素氧化 酶，能将二甲基对苯二胺或四 甲基对苯二胺试剂氧化成紫红 色醌类化合物
S
R
R
胆汁溶菌试验 胆汁七叶苷试验
+
—
—
—
—
+
氧化-发酵试验
又称O/F试验或Hugh-Ldifson（HL）试验
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葡萄糖氧化/发酵试验
原理：
细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖;
发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G;
产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不