应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位
利用噬菌体随机肽库筛选Rh(D)血型抗原的模拟表位
Ａ ｃ ｔ ａ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ０ １ ３ Ｊ ｕ ｌ ； ４ ８ （ ７ ）
・ ８ １ ７・
利 用噬菌体随 机肽库筛选 Ｒ ｈ（ Ｄ） 血型抗 原的模拟表 位
Ｒ ｈ（ Ｄ） 血 型抗 原模 拟表 位。方 法
（ Ｄ ） 抗体血清对噬 菌体 随机 十二 肽库进行 ３ 轮“ 吸附 一 洗 脱
一
扩增 ” 过 程筛选 ， 随机 挑取 噬菌 体克 隆 ； 用Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 检 测
在前期 已用抗 Ｒ ｈ（ Ｄ ） 单克隆抗体筛选噬菌体肽库 获得 Ｒ ｈ（ Ｄ） 血 型 抗 原 表 位 模 拟 肽 基 础 上 Ｊ ， 现 拟 用人源纯化 的混合抗 Ｒ ｈ（ Ｄ ） 多克隆抗体筛选肽库
安徽医科大学第一附属医院输血科 ， 合肥 作者简介 ： 刘淑均 ， 女， 硕士研究生 ；
沈继龙 ， 男， 医学 博 士 ， 教授， 博 士 生导 师 ， 责 任作 者 ， Ｅ —
每孔 包被 微孔 板 ， ４ ℃过夜洗板 ， 含５ ｇ ／ Ｌ牛 血 清 蛋 白（ Ｂ Ｓ Ａ） 的Ｎ ａ Ｈ Ｃ Ｏ ３ （ ｐ Ｈ ８ ． ６ ） 缓 冲液 ３ ７ ￣ １ ２ 封闭 １ ｈ ， Ｔ Ｂ Ｓ Ｔ（ ０ ． １ ％Ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ） 洗 涤 ６次 ， Ｔ Ｂ Ｓ Ｔ将 噬 菌体稀 释 到 ３×１ ０ ” 后 每孔 加 人 １ ０ ０ Ｉ ｘ ｌ 。室 温条 件 下 轻 摇 １
菌体展示 的多肽对 Ｒ ｈ（ Ｄ） 血型抗原结合 的模 拟作用。结果
经过 ３轮筛选和相应鉴定后得 到 ６个抗 Ｒ ｈ（ Ｄ） 抗体 的特 异性噬菌体克 隆 ， 其 中 ４个 克 隆展 示相 同的氨 基 酸序 列 为
鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的表位预测
Ｃｈｉ ｅ ｅ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＺｏｏ ｏｓ ｓ ｎ ｅ
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
２ ０８， ２ （ １ ０ ４ １ ）
文 章 编 号 ：０ ２ ６ ４ ２ ０ ） １ １ １ —０ １ ０ —２ ９ （ ０ ８ １ — ０ ４ ３
鼠疫 耶尔 森 氏菌 Ｆ １抗 原 的表 位预 测
Ｆ １抗原 是一 种 荚膜 蛋 白 ， 鼠疫 菌 的毒 力 、 对 致
Ｍ ＫＫＩ Ｓ ＡＩ Ｆ Ｓ ＶＩ ＡＬ ＧＴ ＡＴ Ｉ ＡＮＡ ＤＬ ＴＩ ＤＮＧＮＩ Ｉ Ｍ ＤＴＥＬ ＬＶＧＴＬ ＧＧＹＫＴＧＴ ＴＬ
王 文敬 ， 董文其 ， 李 明
摘 要 ： 目的 预 测 Ｆ １抗 原 的 Ｂ细 胞 表 位 ， 抗 Ｆ 为 １单 克 隆 抗 体 的 制 备 提 供 理 论 依 据 ， 索 适 合 我 国 鼠 疫 耶 尔 森 菌 探 （ ｅ ｓ ｉ ｐ ｓ ｓ 蛋 白 Ｂ细 胞 表 位研 究 的可 行 性 方 案 。方 法 采用 Ｅ ＯＳ 网络 平 台 以及 Ｄ Ｙ ｒｉ ａ ｅｔ ） ｎ ｉ ＭＢ Ｓ ＮＡＳａ ｒ ｔａ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ软 件 分 析 Ｆ Ｐ ｌ蛋
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ ： Ｔｈｅ ｐｕ ｐ ｓ ｆｔ ｓ ｓ ｕ ｓｔ ｐ ｅ ｃ ｈｅＢ ｅｌｅ ｔ ｅ ｎ Ｆ１ ｎｔｇｅ ｆＹｅ ｓｎ ａ ｐｅ ｔｓ ｎ ｏｒ ｅ Ｏ ｐ ｏ ｉ ｅ ｒ ｏ ｅ ｏ ｈｉ ｔ ｄｙ ｉ Ｏ ｒ ｄｉｔｔ ｃ ｌ ｐｉｏｐ ｓ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｉ ｉ ｓｉ ｉ ｄ ｒ ｔ ｒ ｖ ｄ ｔ ｈｅ ｒ ｔｃ ｅ ｅ ｅ ｅ ｆ ｒｐｒ ｐ ａ ｉ ｆｍ ｏｎ ｃ ｏ ａ ｎｔｂｏ ｅ ｇａｎｓ ｎｔｇ ｎ ａ Ｏ ｅ ｐｌ ｅａ ｆ ａ ｉ ｌ ｅ ｈ ｒｐｒ ｔ ｃ ｈｅ ｔ ｏ ｅ ｉａｌｒ ｆ ｒ ｎｃ ｏ ｅ ａｒ ｔｏｎ ｏ ｏ ｌ ｎ ｌａ ｉ ｄｉｓａ ｉ ｔＦ１ ａ ｉｅ ｎｄ ｔ ｘ ｏｒ ｅ ｓｂ ｅｍ ｔ ｏｄ ｏ ｏ ｏ ｏｌ ｆ ｔ ｄｙ ｎ ｈ ｃ ｌ ｅ ｉｏｐ ｓ Ｂａ ｅ ｈｅ ａ ｉｏ ａｃｄ ｓ ｑｕｅ ｅｏｆＦ１ ａ ｉ ｎ，ｔ ｅ Ｂ ｅｌｅ ｔ ｅ ｒ ｎ ｙ ｅ ｎ ｔ ｅ — ｏｒｓ ｕ ｉ ｇ ｔ ｅ Ｂ ｅｌ ｐｔ ｅ ． ｓ ｄ ｏｎ ｔ ｍ ｎ ｉ ｅ ｎｃ ｎｔｇｅ ｈ ｃ ｌ ｐｉｏｐ ｓ ｗｅ ｅ ａ ａｌｚ ｄ ｏ ｈｅｓ ｃ ｏｎ ａｒ ｔ ｕ ｔ ｅ，ｆｅ ｉ ｌｔ ｄ ｙ ｓ ｒ ｃ ｕｒ ｌ ｘｂｉｉｙ，ｈｙ ｏ ｄｒ ｐｈｉ ｃｔ ｎｄ ａ ｉｅ ｃ ｉ ｄｅ ＮＡ Ｓｔ ｒ Ｐｒ ｅ ｎ ｏ ｔ ａ ｅ ａ ｌ ｉｙ ａ ｎｔｇ ｎｉ ｎ ｘ ｂｙ Ｄ ｉ ａ ｏｔ ａ ｓ ｆｗ ｒ ｎｄ ＥＭ ＢＯＳＳ ｐｌｔｏｒ ． Ｉ ｓ ａｆ ｍ ｔｗａ
噬菌体展示技术的原理及其应用
1990年Scott等首次将随机序列肽与丝状噬菌体表面蛋 白g 融合展示在噬菌体表面，建立了噬菌体展示随机肽库。
• pVIII (50aa, ~2700 copies) • pVI (112aa, 5~8copies)
http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S1415-47572005000100001&script=sci_artt1ex0t
载体的插入位点
11
pIII 和pVIII 噬菌体展示系统
4
特点
该技术的主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在 同一病毒颗粒内，即在噬菌体表面展示特定蛋白质，而在噬 菌体核心DNA中则含有该蛋白的结构基因。另外，这项技术 把基因表达产物与亲和筛选结合起来，可以利用适当的靶蛋 白将目的蛋白或多肽挑选出来。
5
Phages
•Filamentous phages
• The combination of the phage and peptide is known as a Fusion Protein
13
选择方法：
淘选（Panning)
而不是
筛选（Screening)
14
非展示系统
展示系统
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淘选系统 淘选方法
固相 完整细胞 组织，器官
常规法 正负法 竞争法
M13 Fd F1
利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽
利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽刘思远;许向云【摘要】目的:将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽.方法:用纯化的Sur-vivin蛋白包被35 mm的塑料培养皿,加入随机12肽的噬菌体肽库,用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体.通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富集效果,筛选阳性噬菌斑,制作DNA测序模板进行测序.结果:经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果.从第3轮筛选产物中挑取8个蓝色噬菌斑(阳性克隆)进行测序,DNA测序结果表明,具有一致性序列GIANNFFTLKIS.结论:从噬菌体随机肽库中,筛选到能与Survivin蛋白特异性结合的一段短肽,为Survivin蛋白的进一步研究奠定基础.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2010(042)005【总页数】3页(P524-526)【关键词】噬菌体肽库;筛选;Survivin;结合肽【作者】刘思远;许向云【作者单位】呼和浩特市卫生学校,内蒙古,呼和浩特,010050;呼和浩特市疾病预防控制中心,内蒙古,呼和浩特,010030【正文语种】中文【中图分类】R392.1细胞增殖和凋亡调节失控与肿瘤的发生发展密切相关。
近年研究发现凋亡蛋白抑制因子(Inhibitors of apoptosis protein,IAPs)家族在凋亡的基因调控中发挥重要作用[1]。
1997年Ambrosini等发现了定位于人染色体17q 25的Survivin基因,其编码蛋白为142个氨基酸,分子量约为16.5 kDa,是IAPs家族中最小的成员[2,3]。
与其他IAPs因子不同,Survivin仅表达于胚胎发育组织,在分化的正常组织中沉默,但特异性地表达于几乎所有人类的肿瘤组织,在100多种肿瘤特异性表达基因中,其表达特异性列前四位[2～7]。
有资料显示Survivin作用于caspase凋亡途径的会聚点,即直接抑制终末效应蛋白caspase-3和caspase-7的自发活化,强烈抑制由于二者过度表达诱发的凋亡[8,9]。
噬菌体展示肽库技术及其在分子病原细菌学研究中的应用
粒上只含有少数几个拷贝 ， 因而对于获得 高亲和力 的多肽很 有好处 ， Ｐｌ几乎是 目前所有 噬菌体展示 库 的骨架 。而 故 ｌ Ｉ ｐ 只能融合较小的外 源肽段 ， Ⅶ 携带肽段 太大会影响噬菌体粒子的组装与感染能力， 但其拷贝数高 ， 重组噬菌体作为免疫 原时 ， 可产生 良好的免疫应答反应 ， 在疫苗研制中应用价值大 。
噬菌体展示肽库技术在分子病原细菌学 中的应用 ； 并对今后的研究方 向进行 了展望 。 关键词 ： 噬菌 体展示肽库 ； 病原 细菌学 ； 应用 中图分 类号 ： ８２ ６ Ｓ５ ． １ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：１７ － ８ （ ０ １ ０ － ３ －５ ６ ２７ ３ ２ １ ） １０ ４０ ９ ０
的线索和依据 。
噬菌体表 面展示技术是 Ｓ ｉ ｍｔ １８ ｈ于 ９ ５年首先建立起来 的～种新 的生物技术 Ｊ它将 外源基 因插 入丝状噬菌体基因 ， 组 中， 从而使表达的外源肽或蛋 白与噬菌体衣壳蛋 白融合而展示在噬菌体表面 ， 被展示 的蛋 白或肽可 以维持相 对稳 定的
空间结构和生 物学 活性 ｌ。１９ ， ｏ 等 首次将 随机序列肽与丝状 噬菌体表面蛋 白 ｇ ４ ９０年 Ｓ ｔ Ｊ ｃｔ 融合 展示在噬菌体表面 ， 建 立了噬菌体展示随机肽库 。之后 ， 噬菌体 肽库技术讯速发展 ， 已广泛用 于抗原 表位筛选 、 免疫 学诊断 、 疫苗研制 、 物筛 药 选等方面 ， 尤其在蛋 白质结构研 究 、 】抗原表位 分析 、 ” 人工抗体制 备 、 ］激素 或病毒受 体结合序 列及酶 的底 物或抑制 剂序列 的确定 、 因子拮抗剂的研 制和寻找细胞 内信号蛋 白等研究 中发挥 重要作用 。笔者从 噬菌体展示 技术 的基 细胞 Ｊ
克隆。以６ 肽为例 ， 至少应获得 １ １ ０ ～０ 以上的独立克隆。 肽库的建立基于以下事实：１含有关键残基的小肽可以模 （）
应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位
应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位周飞园1王璐1△梁芷妍1林璧慧2李佳恒1王宇1井多娜1张绪富2戴迎春1（1.南方医科大学公共卫生学院流行病学系，广州 510515；2.南方医科大学中医药学院，广州 510515）中图分类号R392.11 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）02-0383-06［摘要］目的：利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒（NoV）的抗原模拟表位。
方法：包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体（scFv），用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。
ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用；阳性克隆测序后进行生物信息学分析，合成多肽鉴定其抗原性。
结果：发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”，综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位，且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原（HBGAs）受体的结合。
结论：“MG-D-W”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段，可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。
［关键词］诺如病毒；12肽库；抗原模拟表位；单链可变片段抗体Screening antigen mimic epitope of Norovirus by phage random 12-peptide libraryZHOU Feiyuan1， WANG Lu1△， LIANG Zhiyan1， LIN Bihui2， LI Jiaheng1， WANG Yu1， JING Duona1，ZHANG Xufu2，DAI Yingchun1. 1. Department of Epidemiology， School of Public Health， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China； 2. School of Traditional Chinese Medicine， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China ［Abstract］Objective：To screen mimic epitope of Norovirus （NoV） by Ph.D.-12 phage display peptide library. Methods：Sin‐gle-chain variable fragment antibody （scFv） with high specificity and neutralizing ability against GⅡ.4/GⅡ.6/GⅡ.17 NoV were coated and screened for 3 rounds with Ph.D.-12 phage library. ELISA was used to identify binding activity of phage with scFv and its competi‐tion with NoV P protein. Positive clones were sequenced and bioinformatic analysis was performed， antigenicity was identified by syn‐thetic peptides. Results：A sequence was found to be with highly homologous to GⅡ.6 VP1 region： MG-D-W， suggesting that it was a specific epitope of GⅡ.6 NoV. Peptide containing "MG-D-W" was further synthesized， which could competitively inhibit binding of P protein to HBGA receptor. Conclusion：MG-D-W is a peptide with high affinity for NoV scFv and likely mimics antigenic epitope of GⅡ.6 NoV bound to scFv.［Key words］Norovirus；12-peptide library；Antigen mimic epitope；Single-chain variable fragment antibody诺如病毒（Norovirus，NoV）是导致非细菌性胃肠炎散发及暴发的主要病原体，约占全球急性胃肠炎发病率的1/5［1］。
噬菌体随机12肽库中VEGF模拟表位的筛选及初步鉴定
噬菌体随机12肽库中VEGF模拟表位的筛选及初步鉴定【摘要】目的：从噬菌体随机12肽库中筛选能与抗血管内皮生长因子(vef）mab阿瓦斯汀(avastin)特异性结合的多肽. 方法：用avastin为靶分子，对噬菌体12肽库进行3轮生物淘洗，随机挑取80个克隆，elisa法鉴定其亲和性，将亲和性高的阳性克隆进行dna序列测定，推导与噬菌体外壳融合的12肽氨基酸序列. fmoc固相法合成12肽，戊二醛交联12肽与血蓝蛋白（klh），打点印迹（dot blot）检测偶联物能否与avastin 结合. 结果：elisa显示，42个噬菌体克隆与avastin有较强的亲和性，测序发现41个阳性克隆表达的融合12肽的序列一致，1个不同；化学合成的12肽能与avastin特异性结合，12肽klh偶联物也能与avastin特异性结合. 结论：初步证明12肽模拟了vef部分表位.关键词】avastin(bevacizumab) 细菌噬菌体肽库血管内皮生长因子交联0引言血管生成是肿瘤生长和转移的前提［1］. 血管内皮生长因子(vef) 是促进血管形成过程中的关键因子［23］.肿瘤组织中vef表达水平与肿瘤血管化的程度、恶性程度呈正相关［45］. 因此，vef是肿瘤抗血管生成治疗中比较理想的靶分子. 噬菌体随机肽库含有的大量不同序列结构多肽可作为任何靶抗原表位的模拟肽，运用肽库筛选时不需要靶蛋白的任何结构，只需靶抗原的mab就可以获得具有免疫原性和抗原性的多肽，它们反映了抗原结合位点的特定的构像［67］. 我们利用抗vef mab 阿瓦斯汀（avastin）对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选，旨在筛选出能与avastin有高亲和力的噬菌体克隆，并分析其展示的多肽序列能否模拟vef的表位.1材料和方法1.1材料抗vef mab avastin(罗氏公司)；噬菌体随机12肽库（新英格兰生物公司）；pe8000（华美生物公司）；ipt,x al、辣根过氧化物酶（hrp）标记的抗噬菌体单克隆羊抗体(hrp anti m13，皮尔斯生物技术公司）；血蓝蛋白（klh，西格玛公司）. 550型elisa读数仪（美国伯乐公司）.1.2方法1.2.1vef模拟表位肽的筛选1.2.1.1噬菌体库的生物淘洗用100 /l avastin 150 μl包被96孔板的1个孔，4℃过夜，封闭后加入100 μl tbst稀释10 μl 12肽库，室温作用1 h，用1 ml/l tbst冲洗10次. 加入洗脱液(0.2 mol/l lycine hcl,1 /l bsa)100 μl作用8 min，吸出洗脱液，再用1 mol/l tris hcl 15 μl中和上述洗脱液. 吸取1 μl洗脱液测定滴度，其余液体加入20 ml lb培养基（含er2738 200 μl，四环素贮液20 μl）进行扩增和纯化. 按以上步骤进行第2,3轮筛选，但分别用3，5 ml/l tbst洗涤.1.2.1.2阳性噬菌体的鉴定第3轮筛选完成后，挑选80个分割良好的噬菌体克隆分别进行扩增和纯化. 将纯化好的噬菌体分别加入预先包被了avastin和人il15 mab（阴性对照）的96孔板中，室温作用1 h；加入hrp标记的抗m13（1℃2000）抗体，作用1 h. opd显色，测定a490 nm值，以a490 nm值高于阴性对照2.1倍作为阳性克隆.1.2.1.3阳性噬菌体与avastin结合的剂量依赖实验以5 m/l avastin包被96孔板,每孔100 μl，同时对每个avastin包被孔设立il15 mab的包被孔为阴性对照，4℃孵育过夜. 加入封闭液（5 m/l bsa,0.1 mol/l nahco3, ph 8.6），4℃封闭2 h，将阳性噬菌体稀释至5×1014pfu/l后作倍比稀释（pfu：噬菌斑形成单位），直至其滴度为1.9×1010pfu/l ，分别加入avastin 及il15 mab包被孔，100 μl/孔，室温孵育2 h，每孔加入hrp标记的小鼠抗m13噬菌体mab（1℃5000）100 μl，室温孵育1 h，opd显色后测定a490 nm值.1.2.1.4阳性噬菌体单链dna的提取及测序取500 μl上述噬菌体贮液，加入200 μl pe8000/nacl放置10 min，离心10 min，弃上清，沉淀重悬于100 μl碘化物缓冲液中，加入250 μl乙醇，室温作用100 min，离心100 min，弃上清，用700 ml/l 乙醇洗沉淀，短暂真空干燥. 沉淀重悬于30 μl te(0.01 mol/l tris hcl，1 mmol/l edta)中，取上述溶液5 μl送上海生工生物公司测序.1.2.2人工合成12肽与avastin结合的剂量依赖实验将不同稀释度的合成12肽加入对应的孔中（初始浓度为16 /l，倍比稀释至终浓度为0.25 /l），每孔100 μl ,4℃过夜；封闭2 h，将avastin和il15 mab分别加入对应孔中,每孔100 μl，室温反应1 h；每孔加入小鼠抗人i抗体（1℃1000) 100 μl，室温反应1 h；每孔加入hrp标记的山羊抗小鼠抗体（1℃5000) 100 μl，温孵育1 h，opd显色后测a490 nm值.1.2.3人工合成12肽与klh偶联［8］将10 m klh融于2 ml ph 10的硼酸盐缓冲液中，温和震荡，加入12肽15 m，缓慢滴入3 ml/l戊二醛溶液1 ml，震荡2 h至溶液变为黄色，加入1 mol/l甘氨酸作用30 min. 将反应物在ph 8.5的硼酸盐缓冲液中4℃透析过夜，更换缓冲液继续透析4 h.1.2.4偶联物的dot blot鉴定［9］取12肽klh偶联物5 μl，缓慢点在nc膜上，待干透以后，以含2 /l bsa的tbs（ph 7.3）封闭2 h. 5 ml/l tbst洗涤3次，每次5～10 min. 加入10 m/l avastin室温孵育2 h. tbst同法洗涤后，加入ap羊抗人二抗，室温孵育1 h. 洗涤后显色，以不加戊二醛的反应体系产生的蛋白及无关12肽klh偶联物为对照.1.2.5分光光度法计算偶联物的结合比取klh溶液、12肽溶液、结合物溶液，分别测定其a280 nm值，根据朗伯比尔定律计算3种溶液在280 nm处摩尔吸光系数ε. 由光的加合性原理可知ε结合物=ε12肽+εklh ，结合物中klh与12肽的结合比由以下公式计算：结合比= （ε结合物εklh）/ε12肽.2结果2.1噬菌体库生物淘洗在3轮生物淘洗中，阳性噬菌体的得率逐渐增大(表1)，表明所淘选的噬菌体得到了选择性的富集.表1亲和淘选对噬菌体的富集（略）2.2阳性噬菌体克隆的鉴定elisa结果显示80个噬菌体克隆中有42个噬菌体可以较好地与avastin结合，而不与对照il15 mab结合，确定这42个为阳性噬菌体克隆(图1).图1阳性噬菌体克隆与抗体的结合力（略）2.3阳性噬菌体特异性分析随着阳性噬菌体投入量的增大，a490 nm值也增大，表明噬菌体与avastin的结合呈剂量依赖性，也表明阳性噬菌体与avastin的结合为特异性（图2）.2.4阳性噬菌体克隆测序对42个阳性噬菌体克隆进行dna序列测定，根据所测得的dna序列推导其所编码的融合12肽氨基酸序列，发现41个阳性克隆所展示的12肽具有同样的序列,一个噬菌体展示的序列不同.图2阳性噬菌体与avastin结合的剂量依赖试验（略）2.5人工合成12肽与avastin结合的剂量依赖性化学合成的12肽可与avastin特异性结合，该结合呈剂量依赖性(图3).图3人工12肽与avastin结合呈剂量依赖关系（略）2.6偶联物dot blot 结果及结合比12肽klh偶联物与avastin可特异性结合（图4），偶联物中12肽与klh的结合比为520.1：12肽klh偶联物；2：klh；3：无关对照12肽klh 偶联物.图412肽klh偶联物与avastin结合的dot blot 鉴定（略）3讨论avastin是针对vef的第一个上市的单克隆抗体，它具有良好的抗肿瘤及抗血管生成效果［1012］，然而avastin又存在价格昂贵、不良反应较多等缺点，从而限制了其应用，如果能找到vef的表位，并以此构建针对vef的自体疫苗，便可避免mab的诸多缺点. 噬菌体展示技术，多肽人工合成技术和蛋白质化学偶联技术为构建这种疫苗提供了平台，已有研究者应用这些技术成功构建了自体疫苗，如anelika使用cetuximab筛选了efr的模拟表位，构建了针对efr的自体疫苗［13］.按照以上思路构建的vef模拟多肽制备疫苗，与传统的直接用重组的人vef作为抗原刺激机体相比具有以下优点：制备简单，价格低廉；避免了vef潜在的引起肿瘤的作用；性质稳定，无内毒素和感染源等.我们用avastin对噬菌体随机12肽库进行了3轮生物淘洗，在特异性噬菌体得到富集后，随机挑选80个噬菌体克隆，确证其中42个噬菌体克隆与avastin具有较高的亲和性，然后提取噬菌体dna后进行序列分析，发现有41个噬菌体表达的融合12肽序列完全一致，这一结果提示该12肽模拟了vef的表位. 但同时发现这41个噬菌体与avastin的结合力却有差异，分析原因是噬菌体在扩增后滴度不同，导致等体积噬菌体悬液与avastin的结合力不同. 我们将在下一步试验中优化扩增噬菌体的条件，使扩增后的噬菌体滴度一致，从而减少这种差异.在本实验中，我们直接合成了筛选的12肽，但由于合成的12肽所处的环境与表达在噬菌体表面时不同，所以阳性噬菌体虽然能与avastin结合，而我们仍然要验证合成的12肽能否与avastin结合，结合试验表明合成的12肽能够与avastin结合，且结合呈剂量依赖性，12肽脱离噬菌体后性质不变.12肽是小分子物质，分子量只有1700 ku，抗原性很弱，不能直接诱导机体产生体液免疫反应，因此必须将12肽与分子量大的载体蛋白连接，使之具备抗原性. 载体和连接方法的选择我们采取了以下原则［14］：①12肽的氨基酸组成；②连接过程不能影响12肽的结构特异性；③连接反应的效率高、产物均一、易于纯化；④连接后载体蛋白不能对12肽产生空间位阻. 根据以上原则我们选取klh作为载体，连接方法为戊二醛法，最终成功的将12肽与klh连接，打点印迹表明偶联物能与avastin结合，12肽与载体蛋白偶联后结构未受影响. 小分子物质与载体连接后需要测定两种物质的结合比，方法有化学法、放射性示踪法、分光光度法等. 本试验中，我们在对12肽、klh、连接产物进行的紫外全波段扫描中发现这3种物质在280 nm处均有吸收峰，于是决定使用分光光度法测定结合比，成功测得偶联物中12肽与klh 结合比为520. 试验表明，分光光度法具有操作简便，安全性高、结果比较可靠的优点.。
噬菌体肽库应用的研究进展
噬菌体肽库应用的研究进展高双荣;钟雪云【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2002(018)004【摘要】@@ 噬菌体随机肽库(peptide random library)是近年来新兴的一门技术,是把一个随机结合的DNA片段偶连到噬菌体M13表面蛋白gⅢ的N端,成为融合蛋白,而gⅢ蛋白并不影响随机肽的结构或活性.其主要特点是将所需蛋白质的基因型和编码这个蛋白的基因型紧密联系起来,在此基因分子克隆基础上针对某一目标进行筛选.这样能够非常有效地筛选出与目标蛋白特异结合的氨基酸序列或结构.它是探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探测未知蛋白空间结构表位的有利工具,在蛋白分子相互识别的研究、新型疫苗的研制以及肿瘤治疗等研究领域产生深远的影响.本文拟对噬菌体肽文库的现状和前景作一综述. 1 噬菌体表位文库的构建【总页数】5页(P433-437)【作者】高双荣;钟雪云【作者单位】暨南大学医学院病理学教研室,广东,广州,510632;暨南大学医学院病理学教研室,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展 [J], 裴亚峰;胡骁飞;王耀;侯玉泽;张改平;邓瑞广2.噬菌体肽库技术筛选肿瘤靶向短肽的研究进展 [J], 张洋(综述);张小明;刘刚(审校)3.噬菌体随机肽库技术在细胞特异性多肽筛选中的研究进展 [J], 周玉琴(综述);吴明月(审校)4.噬菌体展示肽库技术应用的研究进展 [J], 李芳秋;朱扣军;武建国5.应用噬菌体肽库筛选能封阻霍乱噬菌体VP1转染菌细胞的寡肽 [J], 王多春;阚飙;高守一;刘延清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
预测鼠疫耶尔森氏菌F1 抗原的CTL表位
预测鼠疫耶尔森氏菌F1 抗原的CTL表位王文敬;张艳玲;李明【摘要】目的预测鼠疫菌F1抗原的CTL表位,为鼠疫菌表位疫苗研究奠定基础,并为绘制鼠疫菌抗原表位图谱提供一种可行的研究手段.方法采用nHLAPred网络预测法对F1抗原的CTL表位进行预测.结果预测得到了鼠疫菌F1抗原的特异性CTL优势表位:120～128 SPKVNGENL和153～161 KLAAGKYTD.结论利用nHLAPred法,并结合其他T细胞表位预测方法,可得到抗原的CTL表位,准确率较高,可作为表位图谱绘制的有效工具.【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》【年(卷),期】2009(030)003【总页数】4页(P120-122,128)【关键词】鼠疫菌;F1抗原;CTL表位;预测【作者】王文敬;张艳玲;李明【作者单位】南方医科大学生物技术学院,广州,510515;南方医科大学生物技术学院,广州,510515;南方医科大学生物技术学院,广州,510515【正文语种】中文【中图分类】R254.8鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌引起的烈性传染病，激发宿主免疫系统对病原体的免疫应答作用是预防和治疗鼠疫的关键，而针对这类感染性疾病的治疗性疫苗则旨在诱发或增强宿主抗感染细胞的毒性作用，即加强CTL(细胞毒T淋巴细胞)的免疫识别和效应作用。
因此，CTL表位的预测及鉴定工作，是鼠疫疫苗研发过程中不可缺少的核心内容。
鼠疫菌的F1抗原含有许多抗原决定簇，并对T 细胞有刺激作用，故以F1抗原作为免疫原的亚单位疫苗优势明显。
实验证明，单独使用重组F1抗原疫苗和重组V抗原疫苗对鼠疫菌的攻击都能起到保护作用；若将二者联合，可使模型动物对鼠疫菌的抵抗力提高到109 致死量，其保护作用更强，在小动物模型实验中能抵抗更高剂量强毒鼠疫菌的攻击[1]。
T细胞表位的预测研究始于对Th(辅助性T细胞)表位的预测，受B细胞表位预测思路的影响，到了上世纪90年代初，MHC-I类分子晶体结构的阐明和多种CTL表位基序的发现，使CTL表位预测研究率先取得突破，这也带动了MHC- II类分子晶体结构与各种Th表位基序的揭示。
应用噬菌体肽库筛选NMDA受体抗原表位
应用噬菌体肽库筛选NMDA受体抗原表位李桂新;孙长凯;程桂芝;罗建红;李芳【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2006(28)5【摘要】目的利用噬菌体展示随机肽库技术,进行NMDAR1抗原表位研究.方法以R1JHL单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体展示随机12肽文库.经过4轮的筛淘,ELISA结合实验鉴定阳性克隆,提取阳性克隆噬菌体单链DNA进行序列分析.结果对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序列分析,获得一阳性克隆序列HYNLSSDRKVRL,与R1JHL单克隆抗体识别序列相比,两者存在一致性序列DRK.结论 DRK可能为NMDA受体抗原表位.【总页数】2页(P343-344)【作者】李桂新;孙长凯;程桂芝;罗建红;李芳【作者单位】116023,大连医科大学附属第一医院检验科;大连医科大学脑疾病研究所;大连医科大学免疫学教研室;浙江大学医学院分子中心;大连医科大学免疫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.应用噬菌体随机十二肽库筛选旋毛虫Ts87蛋白抗原表位 [J], 顾园;魏骏飞;李洁;崔世娟;赵夕;诸欣平2.应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究 [J], 张蓓;许晏;温浩;杨晨晨;林仁勇;王俊芳;张春桃;王俨;卢晓梅;张静萍;张琰3.应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位 [J], 尹可欣;迟象阳;任军;房婷;刘树玲;刘炬;杨秀旭;李建民;于长明4.应用CSFV-E2基因噬菌体肽库筛选猪瘟病毒抗原表位 [J], 汤波;范学政;徐璐;王琴;黄伟;刘俊;沙莎;陈蕾;周远成5.两种方法筛选噬菌体肽库所获日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性比较 [J], 雷家慧;姜昌富;李天群;魏兰英;朱晓华;潘虹;时红波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位
应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位罗军;李妍;赖建平;龙敏;张文炳;龙北国【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2008(028)004【摘要】目的筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP 的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.%Objective To identify epitope of neutrophil-activating protein(NAP) of Helicobacterpylori(Hp).Methods Using the mouse monoclonal antibodies against NAP as selective molecular and immunoscrcening phage-display random 7-peptides library.The positive clones were sequenced and analyzed.Phage clones were chosen to immunize mice and to evaluate the potential of phagotopes as effective vaccines.Results One mimotope(FAHLATQ)showeda good match with the NAP at 140-143 AA(AHLA)and the serum of mice induced by the phage clone clearly recognized NAP.Conclusion This study suggests thatthe antigenic epitope could be mapped through screening the phage-display peptide library with monoclonalantibody and a mimotopo of NAP providing an ahernative approach for the diagnosis and development of avaccine for Hp.【总页数】6页(P357-362)【作者】罗军;李妍;赖建平;龙敏;张文炳;龙北国【作者单位】510515,广州,南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系;南方医科大学生物技术学院;广州大学化学化工学院食品科学系;510515,广州,南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系;510515,广州,南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系;510515,广州,南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.应用噬菌体随机十二肽库筛选旋毛虫Ts87蛋白抗原表位2.应用噬菌体随机肽库筛选2型登革病毒E蛋白的抗原表位3.应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位4.应用噬菌体随机肽库筛选2型登革病毒E蛋白的抗原表位5.应用噬菌体随机十二肽库筛选猪传染性胸膜肺炎菌体抗原模拟表位因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
噬菌体随机肽库技术及其应用
噬菌体随机肽库技术及其应用
杨海燕;李妍;董文其
【期刊名称】《热带医学杂志》
【年(卷),期】2006(6)4
【摘要】噬菌体随机肽库是噬菌体呈现技术的重要分支,是应用噬菌体表面呈现技术将外源编码多肽基因随机克隆入噬菌体载体中而构建的噬菌体肽库。
近年来,噬菌体随机肽库已成功地应用于基因治疗、表位研究、细胞信号传导与药物开发、寄生虫病研究、肿瘤导向治疗等领域,显示了广阔的应用前景。
本文就针对以上几个方面做一综述。
【总页数】4页(P463-466)
【关键词】噬菌体随机肽库;构建;表位
【作者】杨海燕;李妍;董文其
【作者单位】南方医科大学生物技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
1.利用噬菌体随机肽库筛选表达Aβ靶向肽的噬菌体 [J], 周先岭;徐文锐;陈贵海
2.应用噬菌体随机肽库技术筛选缓慢进展者HIV-1中和抗体模拟表位 [J], 张晓丽;韩晓旭;代娣;包名家;张子宁;赵敏;年华;尚红
3.噬菌体展示随机肽库技术的医学研究应用 [J], 史云龙;刘永明
4.应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽 [J], 顾颖;张军;王颖彬;李少伟;杨海杰;罗文新;夏宁邵
5.应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位 [J], 尹可欣;迟象阳;任军;房婷;刘树玲;刘炬;杨秀旭;李建民;于长明
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噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用
噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用侯凤香;刘珂;李培德;涂宜强;陈溥言;涂国众【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2012(033)003【摘要】The phage display peptide library is a widely-used epitope identification technology,which is combined with the protein screening. Phage display technique was used to screen out the proteins interacted with ORF1B copy enzyme protein of porcine respiratory and reproductive syndrome virus （PRRSV） . And the antiviral activity of the screening protein was further verified. The purified CTD protein of PRRSV ORF1B that coated high-affinity 96T board was used as the target protein. T7 phage display technology was applied to screen out the cDNA library of random 12-peptide library. And the screened clones were sequenced and analyzed. After the synthesis of the screened clone sequence, the anti-PRRSV effect of the synthetic polypeptide was verified in vitro. The results showed that 87 positive clones were obtained after 4 circles of phage screening. 11 screened 12-peptide were identified after sequencing. Through in vitro antiviral experiment, it was confirmed that P10 was a 12-peptide with high-antiviral activity. These results laid the foundation for the antiviral research of PRRSV.%噬菌体展示肽库是一种被广泛用于抗原表位鉴定,结合蛋白筛选的技术。
噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位
噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位孟淑芳;李秀华;尹红章;宋爱京;李德富【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2003(023)001【摘要】目的利用噬菌体随机肽库分析抗HIV-1核心区抗原p24单抗在抗原上的识别位点. 方法用抗HIV-1 p24单抗2C7和3H10作为筛选分子,对噬菌体肽库进行生物淘洗(biopanning),并通过DNA测序、ELISA效价测定等对所获得的噬菌体克隆进行鉴定,最后对合成的7肽位点通过间接ELISA及竞争抑制试验进行血清学分析. 结果序列分析结果表明,单抗2C7和3H10在HIV-1 p24上的抗原识别表位的保守序列分别为DHPXPXX和XXXXKAF.分别合成这2个7肽氨基酸序列P-C1(DHPSPWG)和P-H3(SPWLKAFGGGS),并分析其免疫学结合特性,结果表明与P-H3相比,单抗2C7的抗原识别表位P-C1的固相结合特性较好,固相P-C1检测血样,13份抗HIV阳性样本中,12份为阳性(检出率为92.3%),19份抗HIV阴性样本中,仅1份为假阳性结果(特异性为94.7%).与P-C1相比,单抗3H10的抗原表位P-H3的固相结合能力极差,但液相结合活性较好,血样与P-H3的抑制试验表明,13份抗HIV阳性样本中12份样本对P-H3的抑制率大于60%(12/13),而9份抗HIV 阴性样本中仅1份对P-H3的抑制率大于50%. 结论用抗HIV-1 p24单抗筛选噬菌体随机肽库,获得单抗在p24抗原上的识别表位的氨基酸序列,血清学结果表明这2个抗原表位存在于p24自然抗原上,在抗HIV-1的感染检测中具有潜在的应用价值.【总页数】5页(P67-71)【作者】孟淑芳;李秀华;尹红章;宋爱京;李德富【作者单位】100050,北京,中国药品生物制品检定所,卫生部生物技术产品质量标准化研究重点实验室;100050,北京,中国药品生物制品检定所,卫生部生物技术产品质量标准化研究重点实验室;100050,北京,中国药品生物制品检定所,卫生部生物技术产品质量标准化研究重点实验室;100050,北京,中国药品生物制品检定所,卫生部生物技术产品质量标准化研究重点实验室;100050,北京,中国药品生物制品检定所,卫生部生物技术产品质量标准化研究重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R37【相关文献】1.利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展2.利用噬菌体随机肽库筛选Rh (D)血型抗原的模拟表位3.应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位4.应用噬菌体随机肽库研究细粒棘球蚴抗原模拟表位5.运用噬菌体随机肽库分析系统性红斑狼疮的Sm抗原模拟表位因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
利用噬菌体展示技术筛选胰岛素模拟肽
利用噬菌体展示技术筛选胰岛素模拟肽裘锋平;詹金彪;王克夷【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2006(22)8【摘要】为了寻找能够模拟胰岛素生物活性的小肽,以胰岛素多克隆抗体为靶标,筛选噬菌体展示随机C7C环肽库.3轮筛选后,通过ELISA方法挑取与靶分子特异性结合的15个阳性克隆,测序获得两条序列,分析所得序列并合成相应短肽.通过细胞生物学活性检测,小肽CPTSQANSC(ZJ1)能够竞争性的抑制胰岛素与其受体的结合,并对正常小鼠和四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠,都有明显的降血糖作用.上述结果表明,小肽CPTSQANSC具有胰岛素样生物学活性.而小肽CVQPSHSSC(ZJ2)表现出胰岛素拮抗活性,能引起正常小鼠血糖升高.这表明筛选到了能够模拟胰岛素表位的短肽CPTSQANSC,可能为治疗胰岛素依赖性糖尿病提供了新线索.【总页数】5页(P647-651)【关键词】噬菌体展示;胰岛素;糖尿病;模拟肽【作者】裘锋平;詹金彪;王克夷【作者单位】浙江大学医学院生物化学教研室;中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.用噬菌体展示肽库技术筛选甲肝病毒抗原模拟表位 [J], 曹经瑗;李建东;郑惠惠;毕胜利;李德新2.利用噬菌体肽库技术筛选SARS病毒N蛋白表位模拟肽 [J], 杨海燕;陈光明;李明;董文其;宁云山;杨富强3.利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位 [J], 张扬;焦新安;刘文博;潘志明;高崧;张如宽;刘秀梵4.利用噬菌体随机七肽库技术筛选人膀胱癌相关表面标志物Her2、Survivin表位模拟肽 [J], 郭正辉;黄海;曹亿;陈杰青;许可慰;江春;韩金利;黄健5.利用噬菌体展示肽库筛选鸡传染性支气管炎病毒模拟抗原表位 [J], 安烨;王宏俊;张培君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
噬菌体展示随机肽库技术的医学研究应用
噬菌体展示随机肽库技术的医学研究应用史云龙;刘永明【摘要】噬菌体展示随机肽库是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因,产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的重组噬菌体库.近年来,噬菌体展示随机肽库已成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术,并被广泛应用于医学研究.笔者就其在肿瘤和自身免疫性疾病研究以及疫苗研制中的应用现状进行综述.【期刊名称】《华夏医学》【年(卷),期】2016(029)003【总页数】5页(P171-175)【关键词】噬菌体展示随机肽库;多肽筛选;抗原表位【作者】史云龙;刘永明【作者单位】桂林医学院生物化学与分子生物学教研室,广西桂林541004;桂林医学院生物化学与分子生物学教研室,广西桂林541004【正文语种】中文【中图分类】R37;R392.33噬菌体展示随机肽库（phage display random peptide library，PDPL）技术诞生于20世纪80年代。
1985年，Smith将源自限制性内切酶EcoRI的基因片段插入丝状噬菌体的基因Ⅲ中，得到了在外壳蛋白中融合表达该基因片段编码多肽的重组噬菌体颗粒[1]。
这些融合表达的EcoRI肽段可被EcoRI抗体所捕获，表明展示在噬菌体外壳表面的外源性蛋白与天然蛋白有着相同或相近的空间结构和生物活性。
1990年，Scott等[2]成功将PDPL技术应用于抗原表位的筛选。
目前，噬菌体展示随机肽库已是包含数十亿个随机肽段序列的大容量肽库，对蛋白靶分子而言是一种丰富的资源库。
30多年来，PDPL已发展成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术，并被广泛应用于医学研究。
PDPL是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因，产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的众多重组噬菌体。
PDPL作为一项新的技术平台，其特点，一是首次有能力通过基因信息与蛋白质功能无缝连接的方式同时研究众多的蛋白质变异体，并已被广泛而有成效地用于探索受体与配体相互作用结合位点、寻找高亲和力配体分子等蛋白质与蛋白质相互作用的研究[3]；二是不仅能筛选天然蛋白质上的线性抗原表位，而且还能筛选天然蛋白质不存在的模拟表位[4]。
噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位
噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位杨清浩;王祥卫;金燕;张立新【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2005(27)13【摘要】目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。
方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。
结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。
鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。
结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP 及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。
【总页数】3页(P1332-1334)【关键词】MCU1抗原;模拟表位;噬菌体随机7肽库;抗体【作者】杨清浩;王祥卫;金燕;张立新【作者单位】第三军医大学新桥医院泌尿外科;北京军事医学科学院附属307医院肿瘤分子室【正文语种】中文【中图分类】R373.9;R392.11【相关文献】1.利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展 [J], 裴亚峰;胡骁飞;王耀;侯玉泽;张改平;邓瑞广2.应用噬菌体随机肽库技术筛选丙肝病毒NS3抗原模拟表位 [J], 钟彦伟;成军;陈新华;王刚;洪源;王琳;李莉;张玲霞;陈菊梅3.利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原模拟表位 [J], 黄丽群;姚刚;薛峰;潘萌;孙兵;郑捷4.利用噬菌体随机肽库筛选Rh (D)血型抗原的模拟表位 [J], 刘淑均;沈继龙;卞茂红;张循善;闻慧琴5.用噬菌体随机12肽库筛选单纯疱疹病毒2型gD基因模拟抗原表位的研究 [J], 于爱莲;焦凤萍;王玉;洪源;成军;庄东明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位
噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位贺雪姣;师建国;陈果;李晓霞【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)011【摘要】目的利用噬菌体12肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体(EGFR)抗原模拟表位. 方法以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗及尼妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选表皮生长因子受体抗原模拟表位,经过3轮淘选后,选择可与西妥昔单抗及尼妥珠单抗有不同程度结合的噬菌体,对阳性产物进行克隆及测序. 结果发现17个和21个阳性噬菌体分别与西妥昔单抗及尼妥珠单抗不同程度地结合;阳性克隆测序结果分别获得了3种不同的氨基酸序列. 结论初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体展示的随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位.【总页数】3页(P1010-1012)【作者】贺雪姣;师建国;陈果;李晓霞【作者单位】第四军医大学基础部病理生理学教研室,西安710032;第四军医大学基础部病理生理学教研室,西安710032;第四军医大学基础部病理生理学教研室,西安710032;第四军医大学基础部病理生理学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定 [J], 任晓峰;秦昭恒;曹丽艳;葛旭颖2.两种不同噬菌体筛选方法所获的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位抗原性比较 [J], 雷家慧;姜昌富;李天群3.噬菌体展示技术筛选甲型H1N1流感病毒抗原模拟表位的研究 [J], 蔡炯;钟彦伟;荆霞;陈丽;李方;徐东平4.应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位 [J], 杨廷亚;王芳;姜平;胡波;范志宇;魏后军;薛家宾5.旋毛虫抗原模拟表位抗原的筛选及序列分析 [J], 潘虹;姜昌富;李天群;雷家慧;时红波;魏兰英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用噬菌体肽库筛选Endoglin的结合肽
应用噬菌体肽库筛选Endoglin的结合肽毕仙民;梁志清;侍立峰【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2007(29)7【摘要】目的利用噬菌体12肽库筛选可与Endoglin结合的活性小分子肽。
方法以rhEndoglin为靶分子,对噬菌体12肽库进行亲和筛选。
经过3轮筛选,随机挑取16个克隆,双夹心ELISA法鉴定其亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体克隆的DNA 序列,推断出与噬菌体外壳蛋白融合的氨基酸序列,竞争抑制实验检测优势克隆的特异性。
结果竞争性ELISA显示6个噬菌体克隆与rhEndoglin有较强的结合活性,经测序获得5种不同的多肽序列,其中2个克隆的氨基酸序列为:AHKHVHHVPVRL。
结论噬菌体随机肽库技术可以获得Endoglin结合肽的蛋白质序列。
【总页数】3页(P582-584)【关键词】噬菌体随机肽库;Endoglin;结合肽【作者】毕仙民;梁志清;侍立峰【作者单位】第三军医大学西南医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】Q503;Q513.2【相关文献】1.桃拉综合征病毒CP2蛋白的克隆表达及其结合肽的噬菌体肽库筛选 [J], 黄新新;陆承平;孔繁德;蔡强2.噬菌体肽库在筛选及鉴定高转移性肝癌特异性结合肽中的应用及其意义 [J], 黄维莉;吕永晨;迟宝荣3.噬菌体肽库筛选与SK-BR-3细胞表面HER2特异性结合的活性短肽 [J], 汪静;高晓娟;吴秀丽4.利用噬菌体七肽库筛选获得阿尔茨海默病β-分泌酶特异性结合肽的研究 [J], 朱瑞;刘莉;金丽娟;高小芳;王方5.应用噬菌体随机肽库筛选肿瘤MUC1/Y黏蛋白结合肽 [J], 张立新;李春海;孙丽亚;岳文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠 CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定
应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠 CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定刘思雪;胡梅;叶小研;黄花荣;钟英强【摘要】[ ABSTRACT] AIM: To pan the active peptides which specifically bound to the first and second extracellular membrane loops of rat CC chemokine receptor 5 ( CCR5 ) .METHODS: The technique of phage display peptide library was used and binding ability of the peptides was identified.The amino acid sequences of the first and second extracellular loops of rat CCR5 were searched in the protein database and chemically synthesized corresponding linear peptides were used as targets in the biopanning.After 3 to 4 rounds of screening with Ph.D.TM-7 Phage Display Peptide Library were per-formed, the specific phages were collected and primarily identified by ELISA.RESULTS:The sequences of the peptides displayed on the selected phages were GHWKVWL and HYIDFRW, both of them exhibited positive in phage binding ELISA and the binding to phages and targets were concentration dependent andsaturable.CONCLUSION:Two antagonis-tic active peptides specifically binding to CCR5 were successfully obtained by the technique of phage display peptide librar-y, and the binding ability to the first and second extracellular membrane loops of rat CCR5 were proved in vitro.%目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（ CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽，并鉴定其与CCR5的结合能力。