Taq DNA Polymerase
DNA聚合酶
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1234567890ABCDEFGHIJKLMNabcdefghijklmn!@#$%^&&*()_+.一三五七九贰肆陆扒拾，。青玉案元夕东风夜放花千树更吹落星如雨宝马雕车香满路凤箫声动玉壶光转一夜鱼龙Astar vPrimer3（在线服务）3、模板的制备PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌，可用溶菌酶加EDTA处理。所得到的粗制DNA，经酚、氯仿抽提纯化，再用乙醇沉淀后用作PCR反应模板。4、PCR反应条件的控制①PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子②镁离子浓度总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L③底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200umol/L④TaqDNA聚合酶2.5U（100ul）⑤引物浓度一般为0.1～0.5umol/L⑥反应温度和循环次数变性温度和时间95℃，30s退火温度和时间低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃延伸温度和时间72℃，1min/kb（10kb内）Tm值=4(G+C)＋2(A+T)循环次数:一般为25～30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增加，出现了所谓的“平台期”。编辑本段［PCR步骤］标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA 2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。
taqman荧光探针的原理
taqman荧光探针的原理TaqMan荧光探针是一种常用于实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）的探针。
其原理基于PCR扩增过程中的特定核酸序列的扩增和荧光信号的检测。
TaqMan荧光探针由三个部分组成：1. 引物（primers）：引物是设计用于扩增待测核酸序列的短小DNA 片段，通常有两个引物，一个用于扩增待测序列的起始位点，另一个用于扩增终止位点。
2. 探针（probe）：探针是一个含有荧光染料和一个对荧光染料发出信号具有抑制作用的化学修饰的短小DNA片段。
探针的序列与待测核酸序列的中间部分完全匹配。
3. Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）：Taq DNA聚合酶是一种热稳定的DNA聚合酶，能够在PCR反应中扩增DNA序列。
TaqMan荧光探针的工作原理如下：1. 引物与Taq DNA聚合酶一起作用，将待测核酸序列进行扩增。
引物会识别并结合到待测序列的起始位点和终止位点，Taq DNA聚合酶会沿着待测序列进行DNA合成，生成大量的扩增产物。
2. 在PCR反应中，TaqMan探针与待测序列中间部分的完全匹配，探针的5'端和3'端分别连接着两种不同的荧光染料（通常是荧光发射染料和荧光供体染料）。
3. 在PCR反应过程中，当Taq DNA聚合酶在扩增过程中到达探针的位置时，它会剪切探针，将发射染料和供体染料分离，导致荧光信号的释放。
4. 荧光信号可以通过实时荧光PCR仪器进行实时检测和记录。
荧光信号的强度与PCR反应中扩增产物的数量成正比，从而可以定量测量待测核酸的起始量。
TaqMan荧光探针的原理可实现高度特异性和灵敏度的实时定量PCR 分析，广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因突变分析等领域。
希望以上解释对您有所帮助。
如有任何进一步的问题，请随时提问。
pcr试剂盒原理
pcr试剂盒原理PCR试剂盒原理PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）试剂盒是一种用于分子生物学实验的试剂盒，它包含了进行PCR反应所需的各种试剂。
PCR试剂盒的原理是利用DNA的特性，在体外模拟DNA 复制过程，通过不断的循环反应，扩增目标DNA片段，从而获得足够数量的DNA用于后续实验分析。
PCR试剂盒的主要组成包括模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、缓冲液和辅助试剂等。
PCR试剂盒中的模板DNA是待扩增的目标DNA片段，可以是从细胞中提取出的全基因组DNA或特定基因的DNA。
模板DNA是PCR反应的起始物质，决定了PCR扩增的目标。
PCR试剂盒中的引物是一对短的单链DNA分子，它们的序列与目标DNA片段的两端序列互补。
引物在PCR反应中的作用是指导Taq DNA聚合酶在目标DNA上合成新的DNA链。
引物的选择非常重要，合适的引物序列可以确保扩增出特异性强、准确的目标DNA片段。
然后，PCR试剂盒中的Taq DNA聚合酶是一种特殊的热稳定DNA 聚合酶，能够在高温下保持活性。
Taq DNA聚合酶通过在引物的引导下，在PCR反应的不同温度环境中，依次进行DNA链的延伸、分离和合成。
Taq DNA聚合酶的热稳定性使得PCR反应可以在高温下进行，从而实现DNA的扩增。
PCR试剂盒中的dNTPs是PCR反应中的四种脱氧核苷酸三磷酸盐，它们是DNA合成的基本原料。
在PCR反应中，dNTPs被Taq DNA聚合酶利用，与模板DNA进行互补配对，从而合成新的DNA链。
PCR试剂盒中的缓冲液是为了提供适宜的反应环境。
缓冲液中含有适当的盐离子浓度和pH值，可以维持Taq DNA聚合酶的活性和稳定性，促进PCR反应的进行。
PCR试剂盒中还包含一些辅助试剂，如Mg2+离子、BSA（牛血清白蛋白）和阻止试剂等。
Mg2+离子是Taq DNA聚合酶催化反应的必需离子，它参与dNTPs与模板DNA的结合和酶的催化活性。
fast_taq_dna_polymerase
电话：400-004-8801 邮箱：cs@
传真：025-52335544 地址：南京市秦淮区中华路 302 号西华大厦 606 室
以上两反应PCR反应体系：
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组份 10×PCR反应缓冲液（含Mg2+）
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质量控制
SDS-PAGE检测纯度大于99﹪，经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基 因组中的单拷贝基因；室温存放4周，无明显活性改变。
dNTP Mix (2.5 mM each) 引物1 (10 μM) 引物2 (10 μM) 模板DNA
Fast Taq DNA聚合酶 ddH2O
体积 5 μl 4 μl 1 μl 1 μl 500 ng 2.5 U 至50 μl
热循环扩增条件：95℃ 2 min；95℃ 1 s，60℃ 1 s，72℃ 1 s；30 cycles；72℃ 10 s。
储存条件
-20℃, 保存1年。
主要技术参数
Fast Taq DNA聚合酶在扩增过程中的延伸速度为2 kb/s；最佳温度为55～65℃；dNTP的工作浓度为100～300 μM， 最佳Mg2+浓度为2～3 mM，最佳pH为8.1～9.1。
PCR推荐反应体系及Mg2+终浓度
taq酶标准
TAQ酶标准一、酶的分类TAQ酶（Thermostable DNA polymerase）是一种热稳定DNA聚合酶，属于DNA聚合酶的一种。
根据酶的来源和性质，可以将酶分为多种不同的类型，包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、酯酶、氧化还原酶、蛋白水解酶等等。
每种酶都有其特定的生物学功能和特点，在生物体内发挥着不同的作用。
二、酶的特性TAQ酶具有热稳定性，能够在高温条件下保持活性。
这种特性使得TAQ酶在PCR等高温反应中具有广泛的应用。
此外，TAQ酶还具有高催化效率和高度特异性，能够催化DNA合成等反应，且不易发生误合成。
三、酶的应用TAQ酶在生物学、医学和生物工程领域都有广泛的应用。
在生物学研究中，TAQ酶可以用于基因克隆、DNA序列分析、基因表达等实验中。
在医学领域，TAQ酶可以用于诊断和治疗各种疾病，例如遗传性疾病、癌症、病毒感染等。
在生物工程领域，TAQ酶可以用于基因工程、蛋白质工程等研究中。
四、酶的检测与定量对于TAQ酶的检测和定量，可以使用各种方法，例如活性测定、免疫分析、光谱分析等。
其中，活性测定是常用的方法之一，可以通过测定酶促反应速率来评估TAQ酶的活性。
免疫分析则可以通过检测抗体与TAQ酶的结合情况来定量。
光谱分析可以通过测定光谱变化来定量TAQ酶的浓度。
五、酶的纯化与制备TAQ酶的纯化与制备是保证其质量和应用的关键步骤之一。
通常采用的方法包括离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等。
其中，离子交换色谱是常用的方法之一，可以通过交换TAQ酶上的离子来达到纯化的目的。
亲和色谱则可以利用抗体与TAQ酶的特异性结合来纯化。
此外，还可以使用基因工程技术生产重组TAQ酶。
六、酶的结构与功能关系TAQ酶的结构与功能关系是理解其生物学活性的关键。
TAQ酶是一种球状蛋白，由多个亚基组成，每个亚基都具有催化活性。
结构决定功能，TAQ酶的结构决定了其在高温条件下的稳定性和催化效率。
此外，TAQ酶的结构也与其特异性有关，例如识别和结合DNA模板的能力。
赛默飞taq酶说明书 Thermo Scientific EP0402 Taq DNA Polymerase
PRODUCT INFORMATIONTaq DNA Polymerase (recombinant)#EP0402 500 ULot: __ Expiry Date: __ Concentration: 5 U/µLStore at -20°C/onebioOrdering InformationTaq DNA Polymerase (recombinant)Component #EP0401 #EP0402 #EP0405 #EP0406 Taq DNA Polymerase,5 U/µL100 U 500 U 5 x 500 U 10 x 500 U 10X Taq Buffer withKCl0.6 mL 2x1.25 mL 10x1.25 mL 20x1.25 mL 10X Taq Buffer with(NH4)2SO40.6 mL 2x1.25 mL 10x1.25 mL 20x1.25 mL 25 mM MgCl2 0.6 mL 2x1.25 mL 10x1.25 mL 20x1.25 mL Taq DNA Polymerase (recombinant), LCComponent #EP0403 #EP0404Taq DNA Polymerase, 1 U/µL 100 U 500 U10X Taq Buffer with KCl 0.6 mL 2x1.25 mL10X Taq Buffer with (NH4)2SO4 0.6 mL 2x1.25 mL25 mM MgCl2 0.6 mL 2x1.25 mL Rev.12 V DescriptionTaq DNA Polymerase is a highly thermostable DNApolymerase of the thermophilic bacterium Thermusaquaticus. The enzyme catalyzes 5’→3’ synthesis of DNA,has no detectable 3’→5’ exonuclease (proofreading)activity and possesses 5’→3’ exonuclease activity. Inaddition, Taq DNA Polymerase exhibits deoxynucleotidyltransferase activity, which frequently results in the addition ofextra adenines at the 3’-end of PCR products.Recombinant Taq DNA Polymerase is ideal for standardPCR of amplicons 5 kb or shorter.Applications•Routine PCR amplification of DNA fragments up to5 kb (1).•Generation of PCR product for TA cloning.•DNA labeling (2-4).•DNA sequencing (5).SourceE.coli cells with a cloned pol gene from Thermus aquaticusYT1.Definition of Activity UnitOne unit of the enzyme catalyzes the incorporation of10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotidefraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70°C.Enzyme activity is assayed in the following mixture:67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 6.7 mM MgCl2,1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/mL BSA,0.75 mM activated salmon milt DNA, 0.2 mM of each dNTP,0.4 MBq/mL [3H]-dTTP.Storage BufferThe enzyme is supplied in: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0),1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl,0.5% (v/v) Nonidet® P40, 0.5% (v/v) Tween® 20 and50% (v/v) glycerol.10X Taq Buffer with KCl100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 500 mM KCl,0.8% (v/v) Nonidet P40.10X Taq Buffer with (NH4)2SO4750 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 200 mM (NH4)2SO4,0.1% (v/v) Tween 20.Inhibition and Inactivation•Inhibitors: ionic detergents (deoxycholate, sarkosyland SDS) at concentrations higher than 0.06, 0.02 and0.01%, respectively (6).•Inactivated by phenol/chloroform extraction.PROTOCOLTo prepare several parallel reactions and to minimize thepossibility of pipetting errors, prepare a PCR master mix bymixing water, buffer, dNTPs, primers and Taq DNAPolymerase. Prepare sufficient master mix for the numberof reactions plus one extra. Aliquot the master mix intoindividual PCR tubes and then add template DNA.1.Gently vortex and briefly centrifuge all solutions afterthawing.2.Place a thin-walled PCR tube on ice and add the followingcomponents for each 50 µL reaction:10X Taq Buffer 5 µLdNTP Mix, 2 mM each (#R0241) 5 µL (0.2 mM of each)Forward primer 0.1-1.0 µMReverse primer 0.1-1.0 µM25 mM MgCl2* 1-4 mMTemplate DNA 10 pg - 1 µgTaq DNA Polymerase 1.25 UWater, nuclease-free (#R0581) to 50 µLTotal volume 50 µL*Volumes of 25 mM MgCl2, required for specific final MgCl2concentration:Final concentration of MgCl2, mM 1 1.5 2 2.5 3 4Volume of 25 mM MgCl2 to be addedfor 50 µL reaction, µL2 3 4 5 6 83.Gently vortex the samples and spin down.4.If using a thermal cycler that does not use a heated lid,overlay the reaction mixture with 25 µL of mineral oil.5.Perform PCR using recommended thermal cyclingconditions:StepTemperature,°CTimeNumber ofcyclesInitial denaturation 95 1-3 min 1Denaturation 95 30 s25-40Annealing Tm-5 30 sExtension72 1 min/kbFinal Extension 72 5-15 min 1 GUIDELINES FOR PREVENTING CONTAMINATIONOF PCR REACTIONDuring PCR more than 10 million copies of template DNA are generated. Therefore, care must be taken to avoid contamination with other templates and amplicons that may be present in the laboratory environment. General recommendations to lower the risk of contamination are as follows:•Prepare your DNA sample, set up the PCR mixture, perform thermal cycling and analyze PCR products in separate areas.•Set up PCR mixtures in a laminar flow cabinet equipped with an UV lamp.•Wear fresh gloves for DNA purification and reaction set up.•Use reagent containers dedicated for PCR. Use positive displacement pipettes, or use pipette tips with aerosol filters to prepare DNA samples and perform PCR set up. •Use PCR-certified reagents, including high quality water (e.g., Water, nuclease-free, (#R0581)).•Always perform “no template control” (NTC) reactions to check for contamination.GUIDELINES FOR PRIMER DESIGNUse the ThermoScientific REviewer primer design software at /reviewer or follow general recommendations for PCR primer design as outlined below: •PCR primers are generally 15-30 nucleotides long. •Optimal GC content of the primer is 40-60%. Ideally, C and G nucleotides should be distributed uniformly along the primer.•Avoid placing more than three G or C nucleotides at the 3’-end to lower the risk of non-specific priming.•If possible, the primer should terminate with a G or C at the 3’-end.•Avoid self-complementary primer regions, complementarities between the primers and direct primer repeats to prevent hairpin formation and primer dimerization.•Check for possible sites of undesired complementary between primers and template DNA.•When designing degenerate primers, place at least3 conservated nucleotides at the 3’-end.•When introducing restriction enzyme sites into primers, refer to the table “Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments” located on/onebio to determine the number of extra bases required for efficient cleavage. •Differences in melting temperatures (Tm) between the two primers should not exceed 5°C.(continued on reverse page)Estimation of primer melting temperatureFor primers containing less than 25 nucleotides, the approx. melting temperature (Tm) can be calculated using the following equation:Tm= 4 (G + C) + 2 (A + T),where G, C, A, T represent the number of respective nucleotides in the primer.If the primer contains more than 25 nucleotides specialized computer programs e.g., REviewer™ (/reviewer), are recommended to account for interactions of adjacent bases, effect of salt concentration, etc.COMPONENTS OF THE REACTION MIXTURE Template DNAOptimal amounts of template DNA in the 50 µL reaction volume are 0.01-1 ng for both plasmid and phage DNA, and 0.1-1 µg for genomic DNA. Higher amount of template increases the risk of generation of non-specific PCR products. Lower amount of template reduces the accuracy of the amplification.All routine DNA purification methods are suitable for template preparation e.g., Thermo Scientific GeneJET Genomic DNA Purification Kit (#K0721) or GeneJET™ Plasmid Miniprep Kit (#K0502). Trace amounts of certain agents used for DNA purification, such as phenol, EDTA and proteinase K, can inhibit DNA polymerases. Ethanol precipitation and repeated washes of the DNA pellet with 70% ethanol normally removes trace contaminants from DNA samples.MgCl2 concentrationDue to the binding of Mg2+ to dNTPs, primers and DNA templates, Mg2+ concentration needs to be optimized for maximal PCR yield. The recommended concentration range is 1-4 mM. If the Mg2+ concentration is too low, the yield of PCR product could be reduced. On the contrary, non-specific PCR products may appear and the PCR fidelity may be reduced if the Mg2+ concentration is too high.If the DNA samples contain EDTA or other metal chelators, the Mg2+ ion concentration in the PCR mixture should be increased accordingly (1 molecule of EDTA binds one Mg2+). dNTPsThe recommended final concentration of each dNTP is0.2 mM. In certain PCR applications, higher dNTP concentrations may be necessary. Due to the binding ofMg2+ to dNTPs, the MgCl2 concentration needs to be adjusted accordingly. It is essential to have equal concentrations of all four nucleotides (dATP, dCTP, dGTP and dTTP) present in the reaction mixture. To achieve 0.2 mM concentration of each dNTP in the PCRmixture, use the following volumes of dNTP mixes:Volume ofPCR mixturedNTP Mix,2 mM each(#R0241)dNTP Mix,10 mM each(#R0191)dNTP Mix,25 mM each(#R1121)50 µL 5 µL 1 µL 0.4 µL25 µL 2.5 µL 0.5 µL 0.2 µL20 µL 2 µL 0.4 µL 0.16 µLPrimersThe recommended concentration range of the PCR primersis 0.1-1 µM. Excessive primer concentrations increase theprobability of mispriming and generation of non-specific PCRproducts.For degenerate primers higher primer concentrations in therange of 0.3-1 µM are often favorable.CYCLING PARAMETERSInitial DNA denaturationIt is essential to completely denature the template DNA atthe beginning of PCR to ensure efficient utilization of thetemplate during the first amplification cycle. If the GC contentof the template is 50% or less, an initial 1-3 min denaturationat 95°C is sufficient. For GC-rich templates this step shouldbe prolonged up to 10 min. If longer initial denaturation stepis required, or the DNA is denatured at a higher temperature,Taq DNA Polymerase should be added after the initialdenaturation step to avoid a decrease in its activity.DenaturationA DNA denaturation time of 30 seconds per cycle at 95°Cis normally sufficient. For GC-rich DNA templates, this stepcan be prolonged to 3-4 min. DNA denaturation can also beenhanced by the addition of either 10-15% glycerol or10% DMSO, 5% formamide or 1-1.5 M betaine. The meltingtemperature of the primer-template complex decreasessignificantly in the presence of these reagents. Therefore,the annealing temperature has to be adjusted accordingly.In addition, 10% DMSO and 5% formamide inhibit DNApolymerases by 50%. Thus, the amount of the enzymeshould be increased if these additives are used.Primer annealingThe annealing temperature should be 5°C lower than themelting temperature (Tm) of the primers. Annealing for30 seconds is normally sufficient. If non-specific PCRproducts appear, the annealing temperature should beoptimized stepwise in 1-2°C increments. When additiveswhich change the melting temperature of the primer-templatecomplex are used (glycerol, DMSO, formamide and betaine),the annealing temperature must also be adjusted.ExtensionThe optimal extension temperature for Taq DNA Polymeraseis 70-75°C. The recommended extension step is 1 min at72°C for PCR products up to 2 kb. For larger products, theextension time should be prolonged by 1 min/kb.Number of cyclesThe number of cycles may vary depending on the amount oftemplate DNA in the PCR mixture and the expected PCRproduct yield.If less than 10 copies of the template are present in thereaction, about 40 cycles are required. For higher templateamounts, 25-35 cycles are sufficient.Final extensionAfter the last cycle, it is recommended to incubate the PCRmixture at 72°C for additional 5-15 min to fill-in any possibleincomplete reaction products. If the PCR product will becloned into TA vectors (for instance, using Thermo ScientificInsTAclone PCR Cloning Kit (#K1213)), the final extensionstep may be prolonged to 30 min to ensure the highestefficiency of 3’-dA tailing of PCR product. If the PCR productwill be used for cloning using Thermo Scientific CloneJETPCR Cloning Kit (#K1231), the final extension step can beomitted.TroubleshootingFor troubleshooting please visit/onebioReferences1. Innis, M.A., et al., PCR Protocols and Applications: A LaboratoryManual, Academic, New York, 1989.2. Celeda, D., et al., PCR amplification and simultaneous digoxigeninincorporation of long DNA probes for fluorescence in situ hybridization,BioTechniques, 12, 98-102, 1992.3. Finckh, U., et al., Producing single-stranded DNA probes with theTaq DNA polymerase: a high yield protocol, BioTechniques, 10, 35-39,1991.4. Yu, H. et al., Cyanine dye dUTP analogs for enzymatic labeling ofDNA probes, Nucleic Acids Res., 22, 3226-3232, 1994.5. Innis, M.A., et al., DNA sequencing with Thermus aquaticus DNApolymerase and direct sequencing of polymerase chain reaction-amplified DNA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 9436-9440, 1988.6. Weyant, R.S., et al., Effect of ionic and nonionic detergents on theTaq polymerase, Biotechniques, 9, 309-308, 1990.7. Lundberg, K.S., et al., High-fidelity amplification using a thermostableDNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus, Gene, 108, 1-6,1991.CERTIFICATE OF ANALYSISEndodeoxyribonuclease AssayNo conversion of covalently closed circular DNA to nickedDNA was detected after incubation of 10 U of Taq DNAPolymerase with 1 µg of pUC19 DNA for 4 hours at 37°C.Exodeoxyribonuclease AssayNo degradation of DNA was observed after incubation of1 µg of lambda DNA/HindIII fragments with 10 U Taq DNAPolymerase for 4 hours at 37°C.Ribonuclease AssayNo contaminating RNase activity was detected afterincubation of 10 U of Taq DNA Polymerase with 1 µg of[3H]-RNA for 4 hours at 37°C.Functional AssayTaq DNA Polymerase was tested for amplification of 950 bpsingle copy gene from human genomic DNA and foramplification of cDNA.Quality authorized by: Jurgita ZilinskieneNOTICE TO PURCHASER:Use of this product is covered by US Patent No. 6,127,155. The purchaseof this product includes a limited, non-transferable immunity from suitunder the foregoing patent claims for using only this amount of product forthe purchaser’s own internal research. No right under any other patentclaim, no right to perform any patented method and no right to performcommercial services of any kind, including without limitation reporting theresults of purchaser's activities for a fee or other commercialconsideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. Thisproduct is for research use only. Diagnostic uses under Roche patentsrequire a separate license from Roche. Further information on purchasinglicenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, AppliedBiosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California.PRODUCT USE LIMITATIONThis product is developed, designed and sold exclusively for researchpurposes and in vitro use only. The product was not tested for use indiagnostics or for drug development, nor is it suitable for administration tohumans or animals. Please refer to /onebio forMaterial Safety Data Sheet of the product.© 2012 Thermo Fisher Scientific, Inc. All rights reserved. Tween is aregistered trademark of ICI America, Inc. Nonidet is a trademark of Shell.All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and itssubsidiaries.。
热启动酶的原理及应用
热启动酶的原理及应用前言在现代生物科学研究中，热启动酶被广泛应用于DNA特异性放大技术，例如聚合酶链式反应（PCR）。
热启动酶是一种酶类蛋白，能够在高温条件下保持活性，具有特异性结合和扩增DNA的能力。
本文将介绍热启动酶的原理及其在科学研究和生物工程中的应用。
1. 热启动酶的原理热启动酶的原理基于一种天然存在的酶类蛋白，称为热稳定DNA多聚核苷酸激酶（Taq DNA polymerase）。
Taq DNA polymerase是从热温泉中的细菌Thermus aquaticus中分离得到的。
这种细菌栖息在温泉中，能够耐受高温环境。
因此，Taq DNA polymerase具备了在高温条件下保持稳定和具有DNA聚合能力的特点。
热启动酶通过添加特定的抑制剂和改变酶的活性形式，使其在低温下失去或降低DNA聚合酶活性，从而避免在PCR反应体系中的非特异性扩增。
当温度升高时，抑制剂被去除，酶活性被迅速激活，从而实现特异性DNA扩增。
2. 热启动酶的应用热启动酶作为PCR技术中常用的酶类蛋白，其应用非常广泛。
以下列举了一些热启动酶的主要应用领域：•分子生物学研究：热启动酶可用于DNA扩增、基因克隆、DNA测序等领域。
它的高温稳定性保证了PCR反应在高温环境下能够顺利进行，同时能够在DNA复制过程中起到高效率和高特异性的作用。
•医学诊断：PCR技术结合热启动酶的应用在医学诊断领域取得了重大突破。
例如，热启动酶可以检测疾病相关基因的突变，帮助诊断遗传性疾病、癌症等疾病。
•遗传学研究：热启动酶可以用于DNA指纹技术，通过扩增DNA重复序列，快速鉴定个体之间的遗传关系，对犯罪侦破、亲子鉴定等领域非常重要。
•生物工程：热启动酶在基因工程中常被用来扩增外源基因，从而用于遗传转化、重组蛋白表达等目的。
它的高特异性和高效率使得基因工程实验更加准确可靠。
•食品安全检测：热启动酶可以用于食品中病原菌和污染物的检测与鉴定，如大肠杆菌、沙门菌等。
Taq DNA 聚合酶 说明书
Taq DNA Polymerase Taq DNA Polymerase 是耐热的DNA 聚合酶，具有5’-3’ DNA 聚合酶活性和双链DNA 特异的5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。
使用该产品扩增得到的PCR 产物的3’末端附有一个“A ”碱基，可直接用于TA 克隆。
■产品说明PCR 、TA 克隆。
■应用范围用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol 脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U ）。
■活性定义无核酸内切、外切酶活性，也无核酸污染，其酶纯度检测大于99％。
■品质保证产品内容Taq DNA Polymerase （5U/µl ）2+10×Taq Reaction Buffer （Mg plus ）10 mM dNTP 保存条件：-20 ℃. E coli 重组蛋白。
■来源20mM Tris-Cl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.5%Nonidet P-40, 0.5%Tween-20和50% 甘油。
■储存缓冲液10×Taq Reaction Buffer ：100mM Tris-Cl(pH8.3@25℃), 500mM KCl, 15mM MgCl 。
2■反应缓冲液GeneCopoeia Inc.19520 Amaranth DriveGermantown, Maryland 20874USATel: 301-515-6982; 1-866-360-9531Fax: 301-515-6983Web: 产品套装编号: C0101A , 本套装包含以下产品:产品编号C01010A C01011A C10010C包装规格200µl1.25ml ×20.5mlTaq DNA 聚合酶生产经销商:能基因广州复能基因有限公司广州高新技术产业开发区广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器D 区8楼 (邮编: 510663)技术热线: 020-******** 电子邮箱: support @ 网址:■基本反应条件体系：1、PCR 10× Reaction Buffer Primer1Primer210mM dNTP TemplateTaq DNA Polymerase ddH O22.5µl0.5µl1~100ng(质粒)10~1,000ng(基因组)0.2µl up to 25µl反应物组成体积终浓度l ×0.2~1µM 0.2~1µM0.2mM1U /Reaction条件：2、PCR 94℃94℃Tm -5℃72℃72℃4℃2 min 30 sec 30 sec 1kb/min 7 min hold30 cycles}1. PCR 反应条件应根据模板、目的片段大小、引物结构等具体条件不同，设定最佳反应条件。
M5 Taq HiFi DNA 聚合酶使用说明书
北京聚合美生物科技有限公司Mei5Biotechnology,Co.,Ltd北京市昌平区回龙观龙域北街10号院1号楼四层422-1室（创集合大楼）热线电话：（86）************M5Taq HiFi DNA Polymerase （高保真Taq 酶）使用说明书产品名称单位货号M5Taq HiFi DNA Polymerase 500U MF231-01M5Taq HiFi DNA Polymerase5x500UMF231-05【储存条件】长期保存，请置于-20˚C ，有效期24个月。
经常使用，可置于4˚C 保存至少六个月。
【产品简介】Es Taq DNA Polymerase 是Taq 与Pfu DNA Polymerase 的优化混合酶，具有5′→3′DNA 聚合酶活性、5′→3′外切酶和3′→5′外切酶活性。
与Taq DNA Polymerase 相比，Es Taq DNA Polymerase 具有扩增效率高、错配率低的优良性能，能高效率扩增DNA 片段。
使用本品扩增得到的大部分PCR 产物3′端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A 克隆。
本产品适用于常规PCR 反应和对高保真性有要求的基因克隆等反应。
【单位定义】用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10nmol 脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U ）。
【产品组份】MF231-01MF231-05M5Taq HiFi DNA Polymerase (5U/μl)100μl 5x 100μl 10x Taq HiFi PCR Buffer1.8ml5x 1.8ml【质量控制】经过多次柱纯化，SDS-PAGE 检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余DNA ；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一个月，无明显活性改变。
【操作示例】10×Taq HiFi PCR Buffer 5μl dNTPs (10mM)1µl Primer 1(10μM)2µl Primer 2(10μM)2µl Template DNA*10-200ng M5Taq HiFi DNA Polymerase,5U/µl 0.5µl ddH 2O 补足至50µl<*模板量：10~200ng 基因组DNA ，10~30ng 质粒，或1~2μl RT-PCR 反应后的cDNA 。
HiFiTaqDNAPolymerase
收藏该产品HiFiTaq DNA Polymerase (高保真Taq DNA聚合酶)产品信息GenStar HiFiTaq DNA Polymerase系在Taq酶的基础上，按最佳比例混合了具有3’→5’端DNA外切酶活性（即校读活性）的高保真DNA聚合酶，并且配备精心优化的PCR缓冲液，完美实现了扩增效率与保真性的兼容。
本产品适合扩增保真度要求较高，而Pfu酶无法有效扩增的片段，如基因诊断、较长DNA片段的克隆和点突变等应用。
使用HiFiTaq DNA聚合酶扩增的一部分PCR产物3’-末端附有突出的A碱基，可直接进行T载体克隆，加A处理后可提高TA克隆效率。
用途·较长基因克隆、测序·定点突变特点·高保真性：保真性是Taq酶的3~4倍，不含任何PCR反应增强剂·高效扩增：可扩增Taq酶无法合成的长片段DNA，对≤6 kb片段的扩增效率接近于Taq酶·高度灵敏：高纯度的酶带来优良的灵敏性，适合微量模板扩增·批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测产品组分HiFiTaq DNA Polymerase (5 U/μl) 100 μl10x HiFiTaq PCR Buffer 1 ml保存条件-20℃恒温保存一年活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制·以λ DNA为模板，可以有效扩增10 kb的DNA片段·以基因组DNA为模板，可以有效扩增单拷贝基因·无内切酶、外切酶污染·PCR检测无残留宿主基因组DNA·室温存放一周无明显活性降低FAQ:Q-1: HiFiTaq酶有哪些优势?A-1:HiFiTaq酶是由具有高效扩增能力的Taq酶与具有校读活性的高保真酶按最佳比例混合而成的。
taq dna聚合酶名词解释
taq dna聚合酶名词解释
Taq 聚合酶是从嗜热细菌水生栖热菌中提取的热稳定（热稳定）DNA 聚合酶。
它的主要功能是聚合酶链式反应(PCR) 技术，它使扩增特定DNA 序列的重复步骤自动化。
聚合酶链式反应可以使DNA 分子增加多达十亿倍。
这会产生大量特定基因，并在多种应用中下游使用。
Taq DNA 聚合酶已包含在称为家族A 的DNA 聚合酶家族中。
PCR 使用来自（仅）家族A 和家族B DNA 聚合酶的DNA 聚合酶。
家族DNA 聚合酶包括Tth 和Tma DNA 聚合酶以及Taq，并具有5'-3' 外切核酸酶活性，但通常缺乏3'-5'。
在没有3'-5' 核酸外切酶活性的情况下，A 族聚合酶在掺入碱基对时容易出错。
TaqDNA聚合酶
TaqDNA聚合酶科技名词定义中文名称：TaqDNA聚合酶英文名称：Taq DNA polymerase定义：编号：EC 2.7.7.7。
存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。
该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。
这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性。
目录Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是一种嗜热真细菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。
该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75～80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，70℃延伸率大于60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上) 或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性，该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成，但确有良好的热稳定性，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃时，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min，40min 和5～6min后，仍可保持50%的活性，实验表明.PCR反应时变性温度为95℃～20sec，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条件，也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因.Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性，其作用于类似逆转录酶.此活性温度一般为65～68℃，有Mn2+存在时，其逆转录活性更高.TaqDNA 聚合酶是Mg2+依赖性酶，该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度 很低的鲑鱼精子DNA 为模板，dNTP 的浓度为0.7～0.8mmol/L 时，用不同浓度Mg2+进行 PCR 反应10min ，测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L 时该酶催化活性最高，此浓度能最 大限度地激活TaqDNA 聚合酶的活性，Mg2+过高就抑制酶活性，当Mgcl2浓度在 10mmol/L 时可抑制40～50%的酶活性.由于Mg2+能与dNTP 结合而影响PCR 反应液中游离 的Mg2+浓度，因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度.一般反应 中Mg2+浓度至少应比dNTP 总浓度高0.5～1.0mmol/L.适当浓度的KCL 能使Taq DNA 聚合 酶的催化活性提高50～60%，其最适浓度为50mmol/L ，高于75mmol/L 时明显抑制该酶 的活性.该酶无校对活性，易产生错配碱基。
TaqDNA polymerase酶提纯方法
TaqDNA polymerase酶提纯方法1.划Ampicillin 凝胶平板37℃过夜；2.取单个菌斑，接种3ml LB super broth media+100ug/ml Amp. 37℃过夜，摇床培养；3.取0.1ml过夜细菌培养，加到100ml LB super media+100ug/ml Amp，37℃摇床培养到OD600=0.3，然后加入IPTG到0.5mM，然后继续摇床培养16h（此时，可留2ml作为SDS-PAGE分析（溶于Lammaeli buffer），另2ml作酶活性分析（保存于50% glycerol at -20℃））；4.离心（5000*rpm）搜集细菌，重新溶于3ml Buffer A（50mM Tris-HCl，PH7.9，50mM dextrose，1mM EDTA）+4mg/ml Lysozyme(Sigma),室温裂解15min；5.加入3ml Buffer B（10mM Tris-HCl，PH7.9，50mM KCl，1mM EDTA，0.5% Tween20,0.5% NP-40）。
混匀，于75℃水浴中摇60分钟；6.4℃离心10min，12000*rpm，用Sorvall RC2B超速离心机，SS34 Rotor；7.取上清裂解液，加入等量（6ml）的Storage Buffer（50mM Tris-HCl，PH8.0,100mMNaCl，0.1mM EDTA，0.5mM DTT，1% Triton X-100）含50% Glycerrol；混匀，再加入等量（12ml）的Storage Buffer含75% Glycerol。
再混匀。
储存在-20℃。
8.测蛋白质浓度（Bio-Rad kit，at 595nm）；9.跑SDS-PAGE检测Taq酶的纯度；10.Taq酶活性检测。
将提纯的Taq酶用Buffer B作对倍稀释一直到1:1600倍。
用买来的PromegaTaq酶作参照，进行PCR反应。
诺唯赞P111 P1122 Taq Master Mix说明书
Version 9.2Vazyme biotech co., ltd.产品概述本产品包含Taq DNA Polymerase 、dNTP 以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。
扩增体系中加入的保护剂使得2 × Master Mix 反复冻融后仍可保持稳定活性。
本品提供含有电泳缓冲液和染料的版本，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。
PCR 产物的3’端带A ，可直接克隆至T 载体，并适用于ClonExpress ®和拓扑克隆试剂盒(C112/C113/C115/C601)。
质量控制核酸外切酶残留检测：20 μl 本品与50 pmol 单链DNA 底物和双链DNA 底物在37℃下孵育16 h ，经变性PAGE 电泳，DNA 的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl 本品和0.3 μg pBR322 DNA 在37℃下孵育4 h ，经琼脂糖凝胶电泳，质粒的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA 残留检测：20 μl 本品中残留的核酸经E.coli gDNA 特异性的TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于10拷贝。
功能检测：50 μl PCR 体系中，分别以1 μl HeLa cDNA 、100 ng 人基因组DNA 、5 ng λDNA 为模板，扩增长度分别为2 - 10 kb 的5个不同目的片段，延伸时间设置为 1 min/kb 。
35个循环后取1/10 PCR 产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB 染色，可见有单一的相应条带。
保存条件-30 ~ -15℃保存；运输条件：≤0℃。
产品组分2 × Taq Master Mix 5 × 1 ml 15 × 1 ml 50 × 1 ml组 分P111-01P111-02P111-032 × Taq Master Mix (Dye Plus) 5 × 1 ml 15 × 1 ml 50 × 1 ml组 分P112-01P112-02P112-03* 不同模板最佳反应浓度不同，下表为50 µl 反应体系推荐模板使用量：反应体系ddH 2O2 × Taq Master Mix Primer1 (10 µM)Primer2 (10 µM)Template DNA*To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl动植物基因组DNA 大肠杆菌基因组DNA cDNA 质粒DNA λDNA0.1 - 1 µg 10 - 100 ng1 - 5 µl (不超过PCR 反应总体积的1/10)0.1 - 10 ng 0.5 - 10 ng实验流程a.该预变性条件适合绝大多数扩增反应，可根据模板结构复杂程度修改。
Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase简介：Taq DNA Polymerase 是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，其基因来源于 Thermus aquaticus polymerase ，该蛋白分子量为 94 kDa ，具有 5′→ 3′DNA 聚合酶活性和 5′→ 3′外切核酸酶活性，无 3′→ 5′外切核酸酶活性，扩增得到的 PCR 产物 3′端附有一个“A ”碱基，因此可直接用于 T/A 克隆。
本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于 PCR 法扩增 DNA 片段、DNA 序列测定等实验。
组成：单位定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板 / 引物，在74℃，30 分钟内，将10nmol 脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U ），浓度：5U/ul质控：经过多次柱纯化，SDS-PAGE 检测其纯度大于 99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余DNA ；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一个月，无明显活性改变。
操作步骤(仅供参考)：以下举例为常规 PCR 反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
(1)PCR 反应体系(50μl)试剂加入量 终浓度10×T aq PCR Buffer 5μl 1× dNTP Mix ，2.5 mM each 4μl 200μM each Forward Primer ，10μM 2μl 0.4μM Reverse Primer ，10μM 2μl 0.4μM Template DNA <1μg <1μg/reactionTaq DNA Polymerase(5U/μl) 0.25μlRNase-Free Waterup to 50μl编号 名称NP0101NP0101Storage Taq DNA Polymerase(5U/μl) 500U1000U-20℃ 10×T aq PCR Buffe r 1 ml 2×1ml -20℃使用说明书1份注意：a、引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM 作为设定范围的参考，扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度。
TaqDNAPolymerase（普通PCR酶）
TaqDNAPolymerase（普通PCR酶）产品说明：本酶由克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌诱导表达、分离纯化而成，其分子量为94 kDa。
T aq DNA Polymerase具有5’→ 3’聚合酶活性和5’→ 3’外切酶活性，无3’→ 5’外切酶活性。
TaqDNA Polymerase配合经优化的2 × TaqPCR Buffer (Mg2+ plus)，具有极高的扩增效率。
应用：●常规快速PCR扩增，最高可扩增8 kb产品规格：产NPP101-01 NPP101-02品组分TaqDNA Polymerase (5 U/ul) 100 ul2 ×TaqPCR Buffer (Mg2+ plus)3 × 2 ml NPP101-01 × 5 dNTP Mix (10 mM each) 250 ul活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，使10 nmol的dNTPs掺入酸不溶性物所需的酶量定义为一个活性单位（U）。
纯度：1）10 U的本酶和0.6 ug的λ-Hind III 在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2）10 U的本酶和0.6 ug的supercoiled pUC19 DNA在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
应用案例：【以λDNA为模板扩增1、3、5、8 kb的DNA片段】1、按下列组份配制PCR反应液H2O 21.5 - x ul2 ×TaqPCR Buffer25 ul(Mg2+ plus)dNTP Mix (10 mM each) 1 ul10 uM 正向引物 1 ul10 uM 反向引物 1 ul模板DNA x ul (< 5 ul)TaqDNA Polymerase (5 U/ul) 0.5 ul2、PCR反应条件95℃ 5 min95℃30 sec60℃30 sec 35 cycles｝72℃ 1 min/kb72℃ 5 min3、PCR扩增结果货号产品名称规格售价备注NPP101-01 Taq DNA Polymerase 500 U 140普通taq酶NPP101-02 Taq DNA Polymerase 500 U×5680。
Taq DNA Polymerase说明书
Taq DNA Polymerase说明书货号：PC1100规格：500U/1000U/2500U浓度：5U/ul保存：-20℃保存,有效期至少一年。
产品简介：Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94KD。
该酶具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’核酸外切酶活性，无3’-5’外切酶活性。
在PCR反应中，Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2kb/分钟，产物3’端带A，可直接用于T/A 载体克隆。
该酶无外源核酸酶和细菌基因组DNA的污染，稳定性好，特异性强。
活性定义：1单位(U)Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制：SDS-PAGE检测Taq DNA Polymerase纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液：20mM Tris-HCl(pH8.0);0.1mM EDTA;1mM DTT;100mM KCl;50%glycerol;稳定剂适用范围：用于小于6kb的对保真度要求不高的DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。
建议PCR条件：PCR体系（以50μl反应体系为例）Template<0.5μg上游引物（10μM）1μl下游引物（10μM）1μl10×Buffer（含Mg2+）5μldNTP（各2.5mM）4μlTaq DNA Polymerase0.5-1μlddH2O up to50μl注意事项：1、PCR反应体系加样时，最后一步加入Taq DNA Ploymerase，整个过程宜在冰上操作。
Taq酶
Taq 酶(2011-06-07 14:55:51)转载▼ 标签：taq 酶newprobe普博欣生物试剂杂谈 分类： 分子生物学试剂DNA polymerase（Taq DNA polymerase ）浓度2 U/μl注意事项：10×PCR Buffer冷冻后，Mg2＋会形成一个浓度梯度，使用时应该完全化冻并混匀，离心后再使用。
反应实验例：1.在一个无菌PCR反应管中加入以下成分成分名称加入量成分终浓度10×PCR Buffer with MgCl2 5 μl 1×dNTPs, 10mM each 1 μl200μM each上游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μM下游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μMDNA template variable <0.5 μg/50 μlTaq DNA polymerase (2U/μl)1μl 2 U/50 μl用高压灭菌双蒸水补至终体积50 μl。
实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分。
充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底。
然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。
2.PCR反应循环条件设置在PE9600型PCR仪上，扩增1.0 kb DNA片段的反应循环条件：94℃预变性5 min，然后按照下参数扩增25-35个循环：94℃变性30 sec，42-65℃退火30 sec，72℃延伸1-2 min，完成后，72℃后延伸5-10 min。
具体的退火温度由引物的Tm值决定。
各个温度持续的时间由扩增产物长度而定。
循环数主要取决于起始模板量。
Taq DNA polymerase的合成速度较快，每分钟延伸1-2 kb。
3.结果检测反应结束后，5μl扩增产物用含0.5μg/ml溴化乙啶（或合适浓度的其它DNA染色试剂），合适浓度的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳完成后在紫外透射仪下观察结果。
MIX-TAQ酶说明书EGT01-05,02-05产品说明书产品
使用说明书产品组成与保存温度产品说明： 2×Premix Taq DNA Polymerase 是经过优化的PCR 扩增预混液，适用于常规PCR ，含 有Taq DNA 聚合酶、dNTPs 、PCR 缓冲液等PCR 扩增除引物和模板外的必需组份。
产品 分为不含染料(EGT02-05)和含染料（EGT01-05）两种，含染料的反应结束后可直接进行电泳，不含染料的需要加上6×Loading Buffer 进行电泳。
使用方便，只需加入模板和引物，用 超纯水补足所需体积就可进行PCR 扩增反应，加样次数少，可大大减少误差和污染。
Premix Taq DNA Polymerase 是分子量为94KDa 的耐热性DNA 聚合酶，具有5’—3’DNA 外 切酶活性，无3’—5’外切酶活性，产物为3’单个粘性末端。
活性定义： 一个单位（U ）的DNA 聚合酶的活性定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精 子DNA 作为模板/引物，摄入10nmol 的全核苷酸所需的酶量。
质量控制： SDS-PAGE 检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残留DNA ；能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，活性无明显改变。
适用范围： 一般DNA 片段的扩增、DNA 标记、DNA 序列测定。
建议的PCR 反应体系： （以50μl 反应体系为例）模板DNA （2.5ng/μl ） 1μlForward Primer(10μM) 2μlReverse Primer(10μM) 2μl2×Premix Taq 25μldH 2O 补足50μl建议的PCR 反应条件注意事项：1、EGT01-05和EGT02-05可进行20次反应（每50μl 标准反应体系使用25μl 的EGT01-05和EGT02-05）。
2、建议冰上配置PCR 反应液，尽量避免Premix Taq DNA Polymerase 反复冻融。
[知识]几种不同DNA聚合酶比较
![[知识]几种不同DNA聚合酶比较](https://img.taocdn.com/s3/m/762ba82c590216fc700abb68a98271fe910eaf90.png)
合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。
目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。
Taq DNA聚合酶存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。
该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。
这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性，即具有5’-3’DNA聚合酶活性和对双链DNA特异的5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。
使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。
由于不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。
TaqDNA聚合酶还具有非模板依赖性活性，可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾，故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾；另一方面，在仅有dTTP存在时，它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾，产生3'端突出的单T核苷酸尾。
应用这一特性，可实现PCR产物的T-A克隆法。
适用于：普通PCR，TA克隆Super Taq DNA聚合酶Super Taq DNA聚合酶是由耐热的Taq DNA聚合酶和具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶按照最合适的比例混合而成，具有扩增效率高和错配率低的优良性能，使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。
适用于：要求效率高保真性好的PCR反应。
UlltraPF™DNA聚合酶UlltraPF™DNA Polymerase是一种耐热的超保真DNA聚合酶，具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性，具有比Pfu DNA Polymerase更好的保真性能和更快的扩增效率。
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Cat. No. : B500010 Package: 200 U/ 1000 U/5000U Storage: Store at -20°C Concentration: 5 U/μl Brand: 生工 Ready to use
产品说明
c 在 95°C 时的半衰期＞40 min。每个循环 Taq te DNA polymerase 的突变率＜2.2×10-5。生工
实验例
2 μl 2 μl 5 μl 3 μl 1 μl
1 μl
50 μl
1 2 3M4 5 6
1-6 为 6 次 PCR 的结果，上样 3 μl。1%的 琼脂糖凝胶 95°C 5 min 1 个循环{95°C 30 s，55°C 30 s，72°C 1 min} 25 个循环，72°C 10min。证明 Taq DNA polymerase 具有很好 的重复性和稳定性。 注：一般来说 Taq DNA Polymerase 的活力 随 MgCl2 的浓度增大而加强，通常 50 μl PCR 体系中 MgCl2 的浓度为 1.5 mM 如果
需要增加 PCR 产物量可加大 Mg2+用量，如 果 PCR 产物特异性不好，可酌情减少 Mg2+ l 的用量。
l
用途
常规 PCR 扩增、RT-PCR、产物可直接 TA
l
克隆
l
相关产 DNA Polymerase（B500010）
Taq Plus DNA Polymerase（B500013） Pfu DNA Polymerase（B500014） dNTPs（each 10mM）（B500056） Taq Polymerase PCR 扩增试剂盒 （B532491） Pfu Polymerase PCR 扩增试剂盒
的 Taq DNA Polymerase 无外源 核酸酶和 细菌 DNA 的污染，扩增效率高，稳定性好，
io 适合常规 PCR 扩增。使用本品扩增的 PCR
产物的 3’端附有一个“A”碱基，因此可直接克 隆于 T 载体上。
B 内含物
Taq DNA Polymerase
n 10×PCR Buffer o MgCl2（25 mM）
保质期
ng 24 months
单位定义 在 70°C，30 分钟内将 10 mol 的脱氧核糖核 酸聚合成多核苷酸片段所需要的酶量定义为 1 U。
10×PCR Buffer
Tris-HCl：750 mM (pH 8.8 @25°C), (NH4)2SO4: 200 mM, Tween-20：0.1% (v/v);
（B532493）
c 即用型 PCR 扩增试剂盒（Taq 酶）
（B532071）
te 即用型 PCR 扩增试剂盒（Pfu 酶）
（B532073）
io6×Sucrose DNA Loading Buffer
（B548310） DNA Marker D（100 bp-2000 bp）
B（B600335）
储存液
20 mM Tris-HCl (PH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0.5% Tween 20; 50% 甘油; 100 mM KCl。
50 μl PCR 体系 模板 DNA：
10~100 ng
上游引物（10~20 pmol）： 下游引物（10~20 pmol）： 10×PCR Buffer： Mg2+（25 mM）： dNTP（each 10 mM）： Taq DNA Polymerase（5 U/μl）： ddH2O 补齐到