药物分析 第三章 药物的鉴别试验
药物分析-药物的鉴别试验
15
如： 丙二酰脲类鉴别试验只能证实是 巴比妥类药物，但具体是何种巴 比妥类药物不可确定。
5
初熔 终熔
6
3）熔点测定的注意事项：
a. 传温液 mp在80℃以下的，用水； mp在80℃以上的，用硅油或液体石蜡。
b. 毛细管 中性硬质玻璃管，长：9cm 内径：0.9~1.1mm
壁厚：0.10~0.15mm。
c. 升温速度 1~1.5 ℃/min。
d. 温度计 0.5℃刻度，且经校正。
7
（2）凝点
小供试品量，以m表示，单位为µg。 最低检出浓度---在一定条件下能观察出试验结果时
供试品的最低浓度，以1V表示。
25
最低检出量与最低检出浓度之间的关系：
m v 106 V
式中： — 试液的体积（mL）：鉴别时所取试
液的体积
V — 最低检出浓度的体积：指含有1 g 供
试品的溶液体积（mL）
钠盐鉴别试验等。
16
（三）专属鉴别试验
专属鉴别试验（specific identification test）是 证实某一种药物的依据。根据每一种药物化学 结构差异所引起的物理化学特性不同，选用某 些专属定性反应来鉴别药物的真伪。 如： 维生素B1，中国药典（2000年版）—硫 色素反应作为其专属鉴别试验。
m — 最低检出量( µg )。
26
空白试验
目的: 检查试剂和蒸馏水中是否含有待测组分。 方法：用蒸馏水代替试样进行测定。 对照试验 目的: 检查方法的可靠性。 方法: 用标样代替试样进行测定。
药物的鉴别试验
双键 本品加稀硫酸后使高锰酸钾褪色。
杂环上氮原子 生物碱沉淀反应 本品水溶液与苦味酸试液在
水浴上加热产生黄色沉淀。 本品加枸椽酸醋酐试液，置水浴上加热，即显
红紫色。
返回
硫酸奎宁
(C20H24N2ON2)2·H2SO4·2H2O
782.96
1.刚性平面结构
2.含氧喹啉环 3.硫酸根
N
H
HO
4.杂环氮原子 H3CO
其它鉴别方法——熔点法：见P102 返回
水杨酸
C7H6NO3 138.12
COOH
酚羟基
OH
水杨酸
酚羟基
在中性或弱酸性条件下，与三 氯化铁试液反应，生成紫堇色配位 化合物。
返回
对氨基水杨酸钠
C7H6NNaO3·2H2O 211.14
COONa
1.酚羟基
OH
2.芳伯氨基
3.钠盐
NH2
对氨基水杨酸钠
此外，熔点法可作为初步鉴别，常利用其与某些有机酸 类或盐类形成难溶于水的衍生物，测其熔点。
返回
维生素B1
C12H17ClN4OS·HCl 337.27
1.氨基嘧啶环和噻唑环
2.杂环氮原子 3.氯化物
H3C
N
4.硫元素
N
NH2 S N
+
OH
Cl HCl CH3
维生素B1
氨基嘧啶环和噻唑环 硫色素反应 噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的
药物的鉴别试验
实验组
主要药物
• 巴比妥类：苯巴比妥 • 芳酸类：水杨酸、对氨基水杨酸钠 • 芳香胺类：磺胺嘧啶 • 杂环类：异烟肼（吡啶类）、马来酸氯苯
那敏（吡啶类）、硫酸奎宁（喹啉类）
药物分析---典型药物的鉴别试验
氧化型
还原型
实验步骤：
• VC的鉴别：
•
取本品约 0.2g ，加水 10mL 溶解后，分成二等份，在一份中
加 AgNO3 0.5mL , 观察沉淀生成颜色；在另一份中加二氯靓酚钠 试液 1－2滴，观察并记录实验现象。
结构：
VA的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烯，具有许多立体异构体。 天然VA主要是反式VA，取代基R不同则可以是VA醇或其酯。
理化性质： 溶解性：脂溶性，溶于乙醚、石油醚等有机溶剂中，在乙醇中微溶，在水中
不溶。
不稳定性：易发生氧化、脱氢、脱水、聚合反应《中国药典》 紫外吸收特性：共轭多烯醇的侧链结构 与三氯化锑呈色 ：VA在氯仿溶液中能与三氯化锑作用，产生不稳定的蓝色。
实验步骤：
• VB1的鉴别：
•
取本品约 5mg ，加 NaOH 试液 2.5 mL溶解后，加 K3Fe(CN)6试液 0.5mL 与正
丁醇 5mL ，强力振摇 2分钟，放置使分层，观察上面的醇层荧光颜色；加稀
HCl 使成酸性，而后再加 NaOH 试液使成碱性，观察并记录实验现象。
ห้องสมุดไป่ตู้
•
K3Fe(CN)6试液配制：取 K3Fe(CN)6 1g , 加水 10mL 使溶解，即得。本液应临
典型药物的鉴别试验
-----维生素类典型药物的鉴别
张丽
实验目的
掌握维生素类典型药物的鉴别原理和鉴别方法：
维生素类典型药物：维生素A , B1 , C
熟悉维生素类典型药物的鉴别实验操作中的基本方法和试剂。
VA 鉴别实验原理
第3章 药物的鉴别试验(1)
【课堂练习】
• 1.鉴别的含义是什么？仪器分析用于药物的鉴别有哪 几种方法？
• 2.叙述硫酸盐的鉴别反应。 • 3.叙述氯化物的鉴别反应。 • 4.叙述钠盐的鉴别反应。
【练习】
（2）对照品对照法 美国药典多采用此法。
将对照品和供试品在相同的条件下绘制红外吸收图谱，对比 是否一致。
• 1.钠盐的焰色反应产生的焰色是( )
• A．黄绿色 E．鲜黄色
B．紫堇色
C．绿色
D．砖红色
• 2.药物鉴别的主要目的是（ ）
• A.判断药物的优劣
B.判断药物的真伪
• C.确定有效成分的含量
• D.判断未知物的组成和结构 E.判断药物的疗效
• 3.常用于药物鉴别的方法有（ ）
• A.化学鉴别法
B.红外光谱鉴别法
（2）奋乃静 取本品，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中含10ug的溶液， 照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）测定，在258nm与313nm的波长 处有最大吸收，在313nm与258nm处的吸光度比值应为0.12～0.13。
（3）尼群地平 避光操作。取本品，加无水乙醇制成每1ml中约含 20ug的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）测定，在 236nm与353nm的波长处有最大吸收，在303nm的波长处有最小吸 收。在353nm与303nm的波长处的吸光度比值应为2.1～2.3。
3. 硫酸盐
（1）取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀； 分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
（2）取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分 离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。
药物的鉴别试验 药物分析
5. X射线粉末衍射法
第5节 色谱鉴别法
利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱 行为（比移值或保留时间）进行的鉴别试验。 采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，并进行比较， 根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。
• 加硝酸银-黄色沉淀不溶于氨水或硝酸溶液； • 通入Cl2，臵换出I2，三氯甲烷吸收显紫色，使淀粉变蓝。
第3节 化学鉴别试验
2. 其他无机酸根离子
硫酸根： • 酸性下加氯化钡-白色沉淀，沉淀酸中不溶解； • 加醋酸铅→白色沉淀，沉淀在醋酸铵或氢氧化钠中溶解； 硝酸盐： • 硫酸介质中，加入硫酸亚铁，接界面-棕色环（Fe(NO)SO4）； • 加硫酸、铜丝，红棕色蒸气（NO2）; 磷酸盐： • 中性条件下，加硝酸银，生成浅黄色沉淀，溶于氨溶液或稀硝酸； • 和氯化铵镁反应—白色结晶沉淀； • 和钼酸铵试液、硝酸反应—黄色沉淀（溶于氨）
HO CH COOH HO CH COOH
+
Ag(NH3)2OH
2 Ag +
HO C COONH4 HO C COONH4
+ 2NH3 + 2H2O
第3节 化学鉴别试验
三、常见有机酸根的鉴别
3. 苯甲酸盐
①
FeCl3反应
COONa 7 3FeCl3 2OH中性 溶液
COO Fe3(OH)2 OOC
USP采用对照品法
试样制备方法： 压片法、糊法、膜法、溶液法
第4节 光谱鉴别法
特征区 指纹区
第4节 光谱鉴别法
3. 近红外光谱法(Near-Infrared spectrometry)
第三章 药物的性状检测和鉴别技术
实例解析
实例3-2：维生素E粉性状描述与分析 【性状】本品为白色或类白色的颗粒或粉末
；易吸潮
第二节 药物的鉴别技术
鉴别技术
鉴别技术指收载在质量标准正文鉴别项下的 药物真伪识别试验技术 要求：专属，再现，灵敏，操作简便、快速 一般来说，某一项鉴别试验只能鉴别药物的 某一特征，不能作为判断药物真伪的唯一依 据 鉴别往往通过一组试验(2~3条)才能完成
紫外-可见光谱鉴别法
方法： 2. 吸收特征的一致性 (5)利用最大吸收波长和相应吸光度比值的一致 性
配制成一定浓度的试液， 测定最大吸收波长、最小吸收波长和相应的吸 光度 计算最大吸收波长与最小吸收波长的吸光度的 比值
紫外-可见光谱鉴别法
方法： 2. 吸收特征的一致性 (5)利用最大吸收波长和相应吸光度比值的一致 性
性状项确认
原
制
料
剂
药
鉴
鉴
别
别
鉴别项下规定的试验
第一节 药物性状检测技术
药物的性状反应了药物特有的物理性质，是 药物质量的重要表征之一。
性状项：外观、臭、味、一般稳定性、溶解 度以及物理常数。
外观感官 一般稳定性
溶解度
盐酸奥昔布宁
外观感官 溶解度 物理常数
三 二一
主
物 溶外
理 解观
常 度感
数
冰水中冷却
沸
沉淀
原理
低温条件下，钠离子与焦锑酸钾试液生产致 密的沉淀物
2Na++K2H2Sb2O7
2K++Na2H2Sb2O7
致密 沉淀
氯化物的鉴别
方法 (1)氯化银沉淀
供 稀硝酸 试+ 品 硝酸银
03药物的鉴别-药物分析
>>药品的鉴别>>鉴别方法
第一节 化学鉴别法
药物与一定试剂在适当条件下与药物 发生氧化、缩合、脱水等化学反应，产生 颜色、荧光、沉淀或气体等现象而对药物 进行真伪鉴别的方法。化学法是药物鉴别 中最常用的方法，其仪器简单，操作简便 快速。
方
气相色谱法、高效液相色谱法等、旋光法。
法 生物学法：生物法、微生物法等
生化方法：酶法、免疫法等
按 一般鉴别试验：鉴别为某类药物
范
围 专属鉴别试验：鉴别为某个药物
>>药品的鉴别>>鉴别方法
1、一般鉴别试验（补充） 验证某一类药物共同具有结构特征（多
种药物具有）的试验。通过一般鉴别试验 ， 只能证实是某类药物，而不能证实是哪一 个药物。
>>药品的鉴别>>化学鉴别方法
4.气体生成反应鉴别 胺类：强碱下加热，氨臭味 含Ｓ：强酸下加热，Ｈ2Ｓ气体 含碘：直火加热，紫色碘蒸气 含乙酸酯或乙酰胺：水解，加乙醇，香味。
>>药品的鉴别>>化学鉴别方法
5.衍生物熔点测定： 药物与试剂反应，得产物。测定产物
的熔点。
化学鉴别法学习要求—— 1.记住常见特征反应（名称、对象）
紫外光 可见光
200 400
760 nm
>>药品的鉴别>>光谱鉴别方法>>紫外法
小结
1.物质对光选择性吸收
溶液颜色产生原因：
选择性吸收白光中某种颜色的光。被吸收的
颜色与溶液颜色称 “互补色”。
可见光
药物分析第三章章 药物的鉴别试验
第三章 药物的鉴别试验
4．荧光反应鉴别法
• （1）药物本身在可见光下发射荧光。（2）药物 溶液加硫酸呈酸性后，在可见光下发射荧光。
• （3）药物和溴反应后，遇可见光下发射荧光。 • （4）药物和间苯二酚反应后，经加热可发射荧光。
第三章 药物的鉴别试验
（二）光谱法
• 红外光谱鉴别法 • 定义：利用红外吸收光谱进行分析的方法称为红
液1滴，即显紫色。 COO-
OH
O-
6
+ 4FeCl3
Fe Fe + 12HCl
2 3
• 方法②取供试品溶液，加稀盐酸，即析出 白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试 液中溶解。
第三章 药物的鉴别试验
• 酒石酸盐
• 方法①取供试品的中性溶液，置洁净的试管 中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热， 银即游离并附在试管的内壁形成银镜。
第三章 药物的鉴别试验
（一）性状
• 溶解度
• 溶解度是药物的一种物理性质，一定程度 上能反应其纯度。《中国药典》（2010年 版）采用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、 微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描 述药物在不同溶剂中的溶解性能，并可作 为药物精制或制备溶液时的参考依据。
第三章 药物的鉴别试验
第三章 药物的鉴别试验
（三）色谱鉴别法
• 薄层色谱鉴别法
• 薄层色谱法用于鉴别，以比移值和斑点颜色作为鉴别依据， 来把握供试品与对照品的同一性。
• （1）供试品与同浓度对照品溶液颜色（或荧光）与位置 （Rf）应一致，而且主斑点大小与颜色深浅应大致相同。
• （2）供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、 紧密的斑点。
H HO C COOH HO C COOH + 2Ag(NH3)2OH
药物的鉴别试验
•2
二、 药物试验的项目
性状项和物理常数确认
原
制
料
剂
药
鉴
鉴
别
）
定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和
物理常数等。
外观
溶解度
物理常数
性 状 （Description）
外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味 等性质。
•20
荧光反应鉴别法
①药物本身在可见光下发射荧光 如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光
②药物与适当试剂反应后发射荧光 如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿色
碱性
VB1
硫色素（蓝色荧光） K3Fe(CN)6
•21
气体生成反应鉴别法
①大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物， 可经强碱处理后加热产生氨气。 红色石蕊试纸变蓝 硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色
2、HPLC、GC鉴别法
•30
薄层色谱鉴别法 薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。 在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法
。 通过Rf值，斑点颜色进行定性。 HPLC、GC鉴别法 供试品和对照色谱峰保留时间一致。 在鉴别试验中，通常含量测定同时用于鉴别的一种方法。
•31
• 1.有机氟化物
有机氟 氧瓶燃烧 无机氟离子 pH4.3 蓝紫色络合物
碱液吸收 茜素氟蓝 硝酸亚铈
•9
2. 有机酸盐
(1) 水杨酸盐
鉴别方法一： 水杨酸 + FeCl3
红色配位化合物 紫色配位化合物
鉴别方法二：
水杨酸盐+稀盐酸→水杨酸（白色沉淀）→ 溶于醋酸铵 (2) 酒石酸盐
药物鉴别方法
第三章药物的鉴别本章讲授鉴别药物常用的方法和药物一般鉴别试验，其中以化学鉴别法、紫外分光光度法、红外光谱法、熔点测定法和薄层色谱法为重点。
第一节常用鉴别方法一、药物鉴别的目的和特点1、鉴别目的所谓鉴别就是依据药物的组成、结构与性质通过化学反应、仪器分析或测定物理常数，来判断药物的真伪。
鉴别项下规定的试验方法，仅适用于判别药品的真伪，对于原料药还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。
不仅对药品具有鉴别意义，物理常数的测定结果，也反映药品的纯度，是检定药品质量的主要指标之一。
性状观测是药品检验工作的第一步，也是不可省略的极其重要的一步。
只有性状符合规定的供试品，方可继续检查杂质限量和测定含量，否则不必进行检查和含量测定。
2、特点①为已知物的确证试验。
根据中国药典或局颁标准鉴别药物时，供试品都是已知物，鉴别的目的是确证供试品的真伪，而不是鉴定未知物的组成和结构。
②鉴别试验是个别分析，而不是系统分析。
其试验项目比较少，一般在四、五个项目以内，有的只做一、两项试验就可以做出明确结论。
③通常选用药物的化学鉴别反应、红外特征吸收、紫外-可见特征吸收、测定熔点、色谱行为、生物活性、旋光性、折光率或放射性等不同方法鉴别同一种供试品，综合分析实验结果，做出判断。
④鉴别制剂时，要注意消除辅料的干扰。
鉴别复方制剂中的不同成分时，要注意消除各成分间的干扰。
二、化学鉴别法根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应产生不同颜色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论。
如果供试品的反应现象和质量标准中的鉴别项目和反应相同，则认定为同一种药物。
化学鉴别法是药物分析中最常用的鉴别方法。
它有一定的专属性和灵敏度，且简便易行。
如阴阳离子鉴别反应的专属性灵敏度都比较高。
所以，简单无机药物只要用阴阳离子分析就可确定其成分。
而有机定性分析也有一定的专属性，把几种有机定性分析反应综合起来进行分析归纳，就可以作出准确结论。
药物的鉴别 一般鉴别试验和专属鉴别试验的区别
二、一般鉴别试验
中国药典（通则0301）收载一般鉴别试验： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐 无机酸盐等
三、专属鉴别试验
依 据： 证实某一种药物的依据， 根据每一种药物化学结构上的差异所
引起的物理化学特性，选用某些特有的灵 敏的反应，来鉴别药物的真伪。
收载在药品质量标准正文中。
专属鉴别试验与一般鉴别试验的区别
一般鉴别试验依据某类药物共同的特点,区 别不同类药物。
专属鉴别试验在一般鉴别试验的基础上，利 用各种药物的化学结构差异,鉴别各个药物 单体。
实例1——巴比妥药物的鉴别
共性：丙二酰脲(CONHCONHCO-)可与某些金属离 子(Ag+、Cu+、Hg2+ 等）反应 呈色或产生沉淀。
药物分析技术
第三章 药物的鉴别试验
第三章 药物的鉴别试验
鉴别试验的项目
一．性状鉴别 二．一般鉴别试验 三．专属鉴别试验
二、一般鉴别试验
依 据： 某一类药物化学结构的特征及其理化性质，通过
化学反应来鉴别其真伪的方法。
无机药物：组成中的阴离子和阳离子的特殊反应； 有机药物：典型的有机官能团反应。
• 只能证实某一类药物，不能证实哪一种。 • 仅供确认药物中单一化学成分。 • 混合药物或有干扰物时，除另有规定，否则不适合。
实例1——巴比妥药物的鉴别
一般鉴别试验
实例1——பைடு நூலகம்比妥药物的鉴别
专属鉴别试验
实例2
四氮唑法: C17位上有α-醇 酮基的药物,如皮 质激素分析。
思考题
查阅药典中，盐酸普鲁卡因的鉴别实验，并分析哪 几项是一般鉴别实验，哪项是专属鉴别试验？
药物的鉴别试验
使偏振光向左旋转者(反时针方向) 为左旋，以“－”符号表示 8
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
3、吸收系数
吸光物质在给定波长、溶剂和温度等条件下，单位浓度、单位 液层厚度时的吸收度
摩尔吸收系数 溶液浓度 1mo/L l
(ε)
液层厚度 1cm
溶液浓度 1%g/ml
1cm 百分吸收系数 液层厚度
系改正。
外观：指药品的外表感观和色泽，
包括聚集状态、晶型、色泽以及臭、味
如： 维生素B1 “本品为白色 结晶或结晶粉末；
（色泽） （聚集状态）
有微弱的特臭，味苦；
（臭）
（味）
干燥品在空气中迅即吸收约4%的水分”
4
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
溶解度
试验法：①供试品准确称取研成细粉
微溶
系指溶质1g(ml)能在溶剂100～不到1000ml中溶解;
极微溶解 系指溶质1g(ml)能在溶剂1000～不到10000ml中溶解；
几乎不溶或不溶 系指溶质1g(ml)在溶剂10000ml中不能完全溶解。
5
物理常数
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1、熔点 1）定义：Ch.P 规定,熔点系指一种物质由固体熔化成 液体的温度、熔融同时分解的温度，或在熔化时自初熔至全 熔的一段温度。 如： 雌二醇：175～180℃ 醋酸地塞米松：223 ～ 233 ℃
16
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
4.托烷生物碱类
此类生物碱中具有莨菪酸结构，有Vitali反应,显紫色。
水解
3HNO3
莨菪酸
三硝基衍生物
KOH (C2H5OH)
KOH
深紫色 17
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
药物分析实验药物鉴别
药物分析实验药物鉴别药物分析实验是对药物进行检测和鉴别的过程，通过实验手段确定药物的成分、纯度和质量指标，以确保药物的安全性和有效性。
药物鉴别则是分析实验的一个重要环节，通过对药物样品进行检验和比较，确定其真实性和真实性，以避免假药和次品的流入市场，保障患者的用药安全。
药物鉴别主要通过观察样品的物理性质、化学性质和生物活性来进行判断。
具体的实验过程如下：1.外观检查：首先要对样品的外观进行检查，包括颜色、形状、大小、气味等方面。
正品药物通常具有明确的特征，如颜色均匀一致、形状整齐等；而假药或次品往往会有颜色不正、形状不一致等缺陷。
2.显微镜检查：使用显微镜对药物样品的微观结构进行观察，包括药物表面的形状、结晶形态、颗粒分布等。
正品药物往往具有清晰的结晶形态和合理的颗粒分布，而假药或次品通常会有不规则的结晶形态和颗粒分布。
3.熔点测定：熔点是指物质从固态到液态的温度，不同药物具有不同的熔点范围。
通过测定样品的熔点，可以判断其是否符合正常范围。
正品药物的熔点通常在一个较窄的范围内波动，而假药或次品的熔点则可能不稳定或超出正常范围。
4.化学试剂检查：根据药物成分的特点，使用相应的化学试剂进行鉴别。
常用的化学试剂包括酸碱指示剂、络合剂、还原剂等。
通过与药物样品的反应，可以判断其含有的特定成分或特征功能基团。
5.色谱分析：色谱技术是药物分析的重要手段之一，可以对复杂的药物混合物进行分离和鉴定。
常用的色谱方法包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
通过测定药物样品在特定色谱条件下的保留时间和色谱图谱，可以鉴别其成分和相对含量。
6.生物活性测定：对于药物而言，其生物活性是评价其有效性和安全性的重要指标之一、生物活性测定可以采用不同的生物体或细胞作为实验对象，通过观察样品对其生理或生化功能的影响，来评价药物的质量和效果。
以上是药物鉴别的一些常用实验方法，通过组合使用这些方法，可以对药物样品进行全面的鉴别和判定。
药物分析-鉴别实验(本科生实验)
实验一药物的鉴别实验——大山楂丸的鉴别一、目的要求1. 掌握药物的化学鉴别和薄层色谱鉴别试验。
2. 掌握药物分析的前处理方法。
3. 熟悉其它药品检测方法及要求。
二、主要仪器与药品超声仪、水浴锅、烤板器；移液管、蒸发皿、分液漏斗、漏斗、锥形瓶、展缸、薄层色谱板；乙醇、甲醇、正丁醇、氯仿、丙酮、水、盐酸、镁粉。
三、实验方法大山楂丸组方为山楂、六神曲（麸炒）、炒麦芽，为棕红色或褐色的大蜜丸。
1. 化学鉴别取本品9 g，剪碎，加乙醇40 mL，超声10分钟，滤过，取续滤液10 mL蒸干，残渣加水2 mL，加热使溶解（分三次加入，溶液合并），用正丁醇3 mL振摇，萃取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解。
溶液（a）加少量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5分钟后，即显橙红色。
2. 薄层鉴别取上述溶液（a），作为供试品溶液。
另取熊果酸对照品，加甲醇制成对照品溶液。
吸取上述两种溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
四、注意事项1. 移液管的使用移取溶液前，先用吸水纸将尖端外的水吸除掉，然后用待吸溶液转洗3次。
吸取溶液时，将移液管直接插入液面下1~2 cm深处。
用右手拿移液管，左手拿洗耳球，排出球内空气，紧接管口上，使溶液缓慢上升，管内溶液上升至标线以上时，移去洗耳球，右手食指迅速按紧管口，把移液管提出液面，左手拿容器，倾斜45°，将管的尖端垂直紧贴容器的内部，食指稍松，使液面缓慢下降，待管中溶液的凹液面与刻度线相切时，用食指紧按管口，使溶液不再外漏。
此时溶液恰好为管上所示容量。
用左手拿另一洁净的容器，右手将移液管放入容器，方法同上，待溶液自然流完，停15 s后取出移液管。
凡移液管上未写“吹”字的，其残留液不用吹出，若管上标有“吹”字，其残留液必须吹出。
药物分析药物的鉴别实验
?比旋度:一定波长与温度下，偏振光透过长 1dm且每 1ml中含有旋光性物质 1g的溶液时测得的旋光度
摩尔吸收系数 ε（L/mol·cm ） ?吸收系数：
百分吸收系数：在一定波长下溶液浓度在
1%（W/V）, 厚度为1cm 的吸收度, (药典
（四）色谱鉴别法 1、薄层色谱鉴别法
岛津CS-9000 双波长薄层扫描仪
瑞士CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪
1、薄层色谱 将吸收剂或支持剂均匀铺在玻璃板上（或聚酯薄
膜塑料或铝箔上），把要分离分析的样品点在薄层色 谱板上，用溶剂展开，在日光或紫外光下观察所获得 的斑点，从而达到分离、分析、鉴定目的。
优点：多数的药物分子含有特征吸收光谱的基团，可 作为鉴别的依据，可进行简单的定性分析，鉴定共 轭发色团，推断未知物骨架，可进行定量分析及测 定配合物配位比和稳定常数
缺点：不同的有机化合物具有不同的吸收光谱，但吸 收光谱较简单，必须采用多规定参数法提高专属性
示例一、二、三
2、红外光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属性很强、应 用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用 于组分单一、结构明确的原料药、特别适用于用其他方 法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合 成抗生素类药品。
2、沉淀生成反应鉴别法 （1）与金属离子生成沉淀； （2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）生成沉淀； （3）其它沉淀反应。
3、荧光反应鉴别法 药物本身发射荧光，与硫酸、溴、间苯二酚反应后发射 荧光；
4、气体生成反应鉴别法 药物与化学物质在加热条件下生成气体；
5、测定生成物的熔点法 :应用较少
（二） 光谱鉴别法 1、紫外光谱鉴别法（ UV）：测结构中共轭系统；
药物的鉴别 薄层色谱法
常采用对比法与对照品、已知药品，在相同条 件下进行色谱分离并比较。
TLC 法 （Rf样＝Rf对） PC法 HPLC法 （tR样＝tR对） GC法
(三) 色谱法
薄层色谱法 TLC
①器具与材料：
a) 薄层板 b) 点样器 c) 展开缸 d) 显色装置 e) 检视装置
(三) 色谱法
薄层色谱法 TLC
②操作步骤：
药物分析技术
第三章 药物的鉴别试验
第三章 药物鉴别试验的方法
理化鉴别法
鉴
别
方
Hale Waihona Puke 光谱鉴别法法药物的鉴别试验
显色反应 沉淀生成反应 气体生成反应
荧光反应 焰色反应 制备衍生物测定熔点 紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法 薄层色谱鉴别法
色谱鉴别法
HPLC、GC鉴别法 纸色谱鉴别法
(三) 色谱分析法
利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自 的特征色谱行为（保留时间，比移值）进行的鉴别 试验。
a) 制板 b) 点样 c) 展开 d) 检视
展开时,控制Rf在 0.2-0.8之间，Rf按 下式计算：
Rf1=d1/d Rf2=d2/d
(三) 色谱法
薄层色谱法 TLC
③特点： 薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。 在 鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。
样品 混合 对照品
药物分析鉴别试验
药物分析鉴别试验水杨酸盐(1)取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。
(2)取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀;分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。
丙二酰脲类(1)取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml 与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解;继续加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。
(2)取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。
有机氟化物取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法(本版药典二部附录ⅦC)进行有机破坏，用水20ml 与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，俟燃烧完毕后，充分振摇;取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色;同时做空白对照试验。
亚锡盐取供试品的水溶液1滴，点于磷钼酸铵试纸上，试纸应显蓝色。
亚硫酸盐或亚硫酸氢盐(1)取供试品，加盐酸，即发生二氧化硫的气体，有刺激性特臭，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。
(2)取供试品溶液，滴加碘试液，碘的颜色即消退。
托烷生物碱类取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2～3滴湿润，加固体氢氧化钾一小颗，即显深紫色。
汞盐亚汞盐：(1)取供试品，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。
(2)取供试品，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐转变为灰黑色。
汞盐：(1)取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成黄色沉淀。
(2)取供试品的中性溶液，加碘化钾试液，即生成猩红色沉淀，能在过量的碘化钾试液中溶解;再以氢氧化钠试液碱化，加铵盐即生成红棕色的沉淀。
(3)取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔表面，擦试后即生成一层光亮似银的沉积物。
芳香第一胺类取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。
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吸收系数
百分吸收系数( 收载的方法) 百分吸收系数(Ch.P收载的方法)E1%1cm=A/CL 收载的方法
(二)一般鉴别试验 (general identification test) )
是指依据药物的化学结构或理化特性, 是指依据药物的化学结构或理化特性,通过化学反 应类鉴别药物的真伪. 附录中有: 应类鉴别药物的真伪.ChP附录中有:丙二酰脲类,托 附录中有
第三章 药物的鉴别试验
基本要求 一,药物鉴别的意义与目的 二,药物鉴别的项目 三,药物鉴别的方法 四,鉴别试验的条件 五,鉴别反应的灵敏度
一,药物鉴别试验的意义与目的
它是药检工作的首药检工作中的首先项任务, 它是药检工作的首药检工作中的首先项任务,只有在 药物鉴别无误的情况下,才能进行药物的杂质检查, 药物鉴别无误的情况下,才能进行药物的杂质检查,含量 测定. 测定. 药物鉴别试验是用来证实贮藏在有标签容器中的药物 是否为其所表示的药物,而不是对未知物进行定性分析, 是否为其所表示的药物,而不是对未知物进行定性分析, 因为这些鉴别试验虽有一定的专属性,但不具备进行未知 因为这些鉴别试验虽有一定的专属性, 无确证的条件, 鉴别未知物. 无确证的条件,故不能鉴别未知物.
BaSO4
(三)专属鉴别试验 (specific identification test)
是证实某一种药物的依据, 是证实某一种药物的依据,是根据每一种药物的化 学结构的差异或理化性质的不同, 学结构的差异或理化性质的不同,选用某些特有的灵敏 的定性反应,来鉴别药物的真伪. 的定性反应,来鉴别药物的真伪.
5.无机金属盐( 5.无机金属盐(Na, K, Ca) 无机金属盐
焰色反应:Na显鲜黄色;K显紫色;Ca显砖红色 焰色反应:Na显鲜黄色; 显紫色;Ca显砖红色 显鲜黄色 铵盐: 铵盐: 供试品 + NaOH 使湿润的 红色石蕊 试纸变蓝 氨臭
使硝酸亚汞试液湿 润的滤纸显黑色
6. 无机酸根 氯化物: 氯化物: Cl- + Ag+ 硫酸盐: 硫酸盐: SO42- + Ba2+ AgCl 乳白色 白色
(五)干扰成分的存在
药物制剂的鉴别,其它成分则会干扰检查结果的现象观察. 药物制剂的鉴别,其它成分则会干扰检查结果的现象观察.
五,鉴别试验的灵敏度
(一)反应灵敏度和空白试验
反应灵敏度( 反应灵敏度(sensitivity) 是指在一的条件下, 是指在一的条件下,能在尽可能稀的溶液中观察出尽可能少 量的供试品,反应对这一要求所能满足的程度. 量的供试品,反应对这一要求所能满足的程度. 最低检出量( 最低检出量(minimum detectable quantity) 是指某一反应,在一定的条件下,能观察出的供试品的最小量. 是指某一反应,在一定的条件下,能观察出的供试品的最小量. 最低检出浓度( 最低检出浓度(minimum detectable concentration) 空白试验:是指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下, 空白试验:是指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下,除不 加供试品外, 加供试品外,其它试剂均同样加入而进行的试验 .
蓝紫色络合物
2. 有机酸盐 (1) 水杨酸 红色配位化合物 水杨酸 + FeCl3 紫色配位化合物
(2) 酒石酸盐 供试品溶液(中性)+ 氨制硝酸银 供试品溶液(中性)
水浴中 水浴中
银镜
3.芳香第一胺类 3.芳香第一胺类 供 试 品 + β
4.托烷生物碱类 4.托烷生物碱类
此类生物碱中具有莨菪酸结构, Vitali反应,显紫色. 此类生物碱中具有莨菪酸结构,有Vitali反应,显紫色. 反应
制备衍生物: 药物+ 制备衍生物: 药物+试剂
具有荧光的衍生物
胺类,酰脲类, 胺类,酰脲类,酰胺类药物经强碱处理 生成氨气 ( NH3 ;NH(C2H5)2) 含硫药物经强酸处理后,加热, 含硫药物经强酸处理后,加热,生成硫 4. 气体生成反应鉴别法 化氢气体(H 化氢气体 2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有机药物,加热. 含碘有机药物,加热.生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后, 含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后,加 乙醇可产生乙酸乙酯
2. 沉淀生成鉴别法 与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应(如生物碱沉淀剂 如生物碱沉淀剂) 其它沉淀反应 如生物碱沉淀剂)
药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光
3. 荧光反应鉴别法 药物与溴反应后,在可见光下发出荧光 药物与溴反应后,
药物与间苯二酚溴反应后,发射出荧光 药物与间苯二酚溴反应后, 药物其它反应后, 药物其它反应后,发射出荧光
5. 制备衍生物测定熔点法
药物+ 新化合物有一定mp; 药物+试剂 新化合物有一定 药物酸化或碱化生成游离酸或碱. 药物酸化或碱化生成游离酸或碱.操作繁琐费时吸收波长, 测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度 规定吸收波长和吸收系数法 规定吸收波长和吸收度比值法 经化学处理后, 经化学处理后 测定其反应产物吸收光谱特性
第一法: 第一法:测定易碎的固体药品
熔点
第二法:测定不易碎的固体药品(脂肪酸,石蜡等) 第二法:测定不易碎的固体药品(脂肪酸,石蜡等) 第三法: 第三法:测定凡士林或其他类似的物质
比旋度:指在一定波长下,偏振光透过1dm且每 中含有 比旋度:指在一定波长下,偏振光透过 且每1ml中含有 且每
旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度. 旋光性物质 的溶液时测得的旋光度.可用于鉴 的溶液时测得的旋光度 别药物,检查药物的纯度和含量测定. 别药物,检查药物的纯度和含量测定. [n]TD = 100α/dL 摩尔吸收系数ε=A/CL 摩尔吸收系数
(二)提高反应灵敏度方法 1. 加入与水不混溶的有机溶剂提取浓集 2. 改变观测方法
�
烷生物碱类 , 芳香第一胺类 , 有机氟类 , 无机金属类
(Na, K, Li, Ca, Ba, Fe.,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等),有机酸 等 盐类(水杨酸盐),无酸盐类. 盐类(水杨酸盐) 无酸盐类.
1.有机氟化物 1.有机氟化物
茜素氟蓝 硝酸亚铈
有机氟
氧瓶燃烧
无机氟离子 pH4.3
(二)溶液的温度
温度过高可使产物分解,导致颜色变浅,甚至观察不到结果. 温度过高可使产物分解,导致颜色变浅,甚至观察不到结果.
(三)溶液的酸碱度
试反应物处于活化状态,反应产物处于稳定和以观察状态. 试反应物处于活化状态,反应产物处于稳定和以观察状态.
(四)试验时间
有机化合物的化学反应较慢,需要一定的反应时间和条件. 有机化合物的化学反应较慢,需要一定的反应时间和条件.
5. 药物鉴别方法新动向 制剂广泛采用 法鉴别 制剂广泛采用IR法鉴别
鉴别方法简练, 鉴别方法简练,专属性强 平均每个品种收载2个鉴别反应 平均每个品种收载 个鉴别反应
四,鉴别试验条件
(一)溶液的浓度
溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度,其大小影响结果的判断. 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度,其大小影响结果的判断. (如化学法中要观察沉淀,颜色;UV法中 max, A, E1%1cm) 法中λ 如化学法中要观察沉淀,颜色; 法中
三,鉴别方法
(一)化学鉴别法
三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 三氯化铁呈色反应 异羟戊酸铁反应(Ar-COOH;-COOR) 异羟戊酸铁反应
1. 显色反应鉴别法
茚三酮呈色反应(脂肪氨基, -氨基酸) 茚三酮呈色反应 脂肪氨基,α-氨基酸) 脂肪氨基 重氮化-偶合呈色反应 重氮化 偶合呈色反应(Ar-NH2;-NHCOR) 偶合呈色反应 氧化还原显色反应及其它颜色反应 与金属离子的沉淀反应
二,药物鉴别的项目
药物的鉴别试验包括: 药物的鉴别试验包括:性状和鉴别
性状( (一)性状(definition)
聚集状态, 聚集状态,晶形 外观 色泽 臭,味
物理常数: 相对密度,馏程,熔点,比旋度, 物理常数 相对密度,馏程,熔点,比旋度,吸收系数 , 折光率,黏度,酸值,碘值,皂化值, 折光率,黏度,酸值,碘值,皂化值,羟值
1.紫外光谱鉴别法 紫外光谱鉴别法
2. 红外光谱鉴别法
压片法 糊法 膜法 溶液法
TLC 法 (Rf样=Rf对) 样 对
3. 色谱鉴别法
PC法 法 HPLC法 (tR样=tR对) 法 样 对 GC法 法
4. 生物学法
是利用微生物或实验动物鉴别法 仪器鉴别方法增加快( 仪器鉴别方法增加快(2 :1) ) UV,IR,HPLC(USP),TLC,PC(BP)