马齿苋提取物在大鼠体内组织分布研究-孟一晗

26第18卷 第4期 2016 年 4 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 18 No. 4 Apr .，2016马齿苋提取物在大鼠体内组织分布研究孟一晗，张文洁，李镝，英锡相（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600）摘 要：目的：研究马齿苋提取物中6种活性成分在大鼠9种主要组织中的分布情况。

方法：采用高效液相色谱法测定口服给予马齿苋提取物后的组织生物样品，以葛根素作为内标物，乙腈-0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱。

该研究建立的高效液相色谱法可应用于大鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、肠以及肌肉中的咖啡酸、对香豆酸、东莨菪素、阿魏酸、槲皮素和橙皮苷的定量分析。

结果：口服给药后，对香豆酸和阿魏酸分布最为广泛，仅在较少组织中检测到咖啡酸、东莨菪素及槲皮素。

结论：该实验首次建立了高效液相色谱法同时测定马齿苋提取物中6种活性成分在组织中分布的测定方法。

该法简便、快速、重复性好，适用于大鼠口服马齿苋提取物后6种活性成分的体内组织分布研究。

关键词：组织分布；高效液相色谱法；马齿苋提取物中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 04- 0026- 04收稿日期：2015-09-03基金项目：辽宁省自然科学基金项目（2015020699）作者简介：孟一晗（1989-），女，辽宁沈阳人，硕士研究生，研究方向：药物分析。

通讯作者：英锡相（1964-），男，辽宁沈阳人，教授，硕士研究生导师，博士，研究方向：中药分析及药代动力学。

E-mail：yingxixiang@。

Study on Tissue Distributions of Portulaca oleracea L. Extract in RatsMENG Yihan，ZHANG Wenjie，LI Di，YING Xixiang（School of Pharmacy of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To investigate the tissue distribution of Portulaca oleracea L. extract（POE）in rat following oral administration. Methods ：The biological samples of the tissues after oral dosing were analyzed by a sensitive and specific HPLC method with gradient mobile phase of acetonitrile - 0.1% formic acid aqueous. The validated HPLC method was successively used for the quantitative analysis of the six components of POE. Results ：Ferulic acid and p-coumaric acid could be found in almost all tissues，by contrast，coffeic acid，scopoletin and quercetin were distributed mainly in stomach and intestine. Conclusion ：Six compounds were distributed rapidly in tissues with different absorbed concentrations in various tissues. This method possesses high sensitivity and specificity，under methodology validation，while the method also has good precision and accuracy，and high reproducibility，strong specificity.Keywords：tissue distribution；HPLC；Portulaca oleracea L. extract 马齿苋（Portulaca oleracea L.）为马齿苋科植物，广泛分布于温带和热带。

作为药食两用植物，药典中收载马齿苋的干燥地上部分入药，有清热解毒、凉血止血、止痢的功能[1]。

主治热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血。

药理学研究表明，马齿苋具有抗氧化、松弛骨骼肌和平滑肌、消炎止痛、抗菌和抗病毒等作用[2-5]。

目前许多学者[6-8]对马齿苋的化学成分进行了体内外分析，包括咖啡酸、对羟基香豆酸、东莨菪素、阿魏酸、槲皮素和橙皮苷等，然而目前关于马齿苋中活性成分在大鼠体内组织分布情况还未见报道。

因此本实验对大鼠口服马齿苋提取物，并采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定大鼠9种组织中咖啡酸（CA）、对香豆酸（p-CA）、东莨菪素（SCOP）、阿魏酸（FA）、槲皮素（QUER）和橙皮苷（HP）的含量，为马齿苋提取物的深度开发及临床准确、安全及合理用药提供参考。

1 材料与仪器1.1 材料与试剂马齿苋药材采集于河北安国，并经辽宁中医药大学鉴定教研室翟延君教授鉴定，用前干燥，粉碎，备用。

内标物葛根素（IS）和QUER 由中国药品生物制品检定所提供，CA、p-CA、SCOP、FA 和HP 由四川维克奇生物科技提供。

甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；乙腈（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；甲酸（分析纯，沈阳市试剂三厂）；纯化水（娃哈哈有限公司）。

Agilent l100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；HH-S 水浴锅（上海永光明仪器设备厂）；XW-80A 微型旋涡混合器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；XYJ80-2型离心机（金坛市金南仪器厂）；TGL-16C 高速台式离心机（江西医疗器械厂）；微量取样器（上海荣泰生化工程有限公司）；ZDHW 电子调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）。

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.04.00818卷 辽宁中医药大学学报 1.2 动物健康Wistar大鼠，雌性，体重180~220 g，大连大学实验动物中心提供，实验动物研究严格按照实验室动物保护指导原则进行，试验期间自由饮水，大鼠给药前禁食12 h。

1.3 马齿苋提取物制备取干燥马齿苋药材，剪碎，50%乙醇浸泡48 h后滤过，残留物加水提取2次，每次2 h，浓缩蒸干，得马齿苋提取物并于4 ℃保存，备用。

2 方法2.1 色谱条件色谱柱：KR C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；预柱：KR C18（5 μm，35 mm×8.0 mm）（大连科技发展公司）；流动相：（A）乙腈（v/v）and（B）0.1% 甲酸水（v/v）作为流动相，梯度洗脱条件为5%（A）0~15 min，12%（A）15~35 min，平衡10 min，整个过程分析时间为45 min，流速为1 mL/min，检测波长：320 nm；内标物：葛根素；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.2 系列标准溶液制备分别精密称取CA、p-CA、SCOP、FA、QUER、HP 和IS对照品，分别置于量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，即得浓度为235、221、227、327、259、242、212 μg/mL 的对照品储备液，于4 ℃冰箱保存。

将储备液倍数稀释，分别配制成6个浓度的组织系列对照品溶液，即CA（0.05、0.1、0.2、0.5、1.25、5.0 μg/mL），p-CA （0.05、0.1、0.2、0.5、1.25、5.0 μg/mL），SCOP（0.1、0.2、0.4、1.0、2.5、10.0 μg/mL），FA（0.1、0.2、0.4、1.0、2.5、10.0 μg/mL），QUER（0.075、0.15、0.3、0.75、1.875、7.5 μg/mL）和 HP（0.4、0.8、1.6、4、10、40 μg/mL）的标准系列溶液，于4 ℃冰箱保存，备用。

2.3 生物样品采集制备与测定2.3.1 空白生物样品制备组织样品：取10只空白大鼠（禁食12 h，自由饮水）。

12 h后取脏器（肝、心、脾、肺、肾、胃、脑、肠和肌肉），取出后，用生理盐水洗净并去除内容物，用滤纸吸干组织表面水分，称取一定重量，并加入生理盐水2∶5（w∶v），匀浆处理，吸取上清作为空白组织样品于-20 ℃冰箱保存，备用。

2.3.2 质控（QC）样品制备精密吸取200 μL空白组织匀浆液，分别各加入50 μL工作溶液，制备成低、中、高3种浓度的QC样品。

CA、p-CA组织浓度分别为0.13、0.70、4.00 μg/mL；SCOP、FA组织浓度分别为0.25、1.40、7.98 μg/mL；QUER组织匀浆浓度分别为0.19、1.05、5.99 μg/mL；HP组织浓度为1.00、5.70、32.0 μg/mL。

将QC样品于4 ℃冰箱保存，备用。

2.3.3 组织样品处理取25只大鼠，随机分成5组，每组5只（禁食12 h，可自由饮水），灌胃给予POE溶液（8.4 mL/kg）。

给药10、30、60、90、150 min后将大鼠处死，取肝、心、脾、肺、肾、胃、脑、肠和肌肉。

生理盐水冲洗组织表面并用滤纸吸走水分后称重。

处理过程中将胃和肠内容物清理干净。

所有样品于-20 ℃低温保存备用。

准确称量组织样品0.2 g，加入0.5 mL生理盐水，匀浆处理。

取200 μL匀浆液，加入20 μL乙酸，10 μL内标溶液，1 mL甲醇，涡旋混合1 min，3000 r/min离心15 min，分取上清液，置于50 ℃氮气流下吹干，残留物加100 μL流动相复溶，涡旋溶解1 min，10000 r/min离10 min，取上清液20 μL，过0.45μm进样检测，记录色谱图。

3 方法学考察3.1 方法专属性组织样品：在拟定色谱条件下，大鼠各组织（以胃为例），各组分色谱峰分离度良好，无内源性物质干扰。

大鼠的空白胃匀浆液样品色谱图（图1-A），空白胃匀浆液样品中加对照品色谱图（图1-B），马齿苋提取物灌胃给药30 min后加内标胃样品色谱图5：FA；峰6：QUER；峰7：HP。