实验大鼠取材方案

实验大鼠取材方案

[取材内容]

1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。

2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。

3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。

4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻

保存备用。

5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻

保存备用。

6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮

冰冻保存备用。

7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮

冰冻保存备用。

8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保

存。

9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液

氮冰冻保存备用。

10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装

液氮冰冻保存备用。

11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装

液氮冰冻保存备用。

12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保

存备用。

13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存

备用。

14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存

备有。

[试剂及药品]

戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液）

[器材]

备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、

2ml、1.5ml）、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器（10ml、5ml、2ml）、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐

[取材动物]

Wistar大鼠

[取材步骤]

1.取材大鼠前夜禁食，自由饮水。

2.腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。用5ml的注射

器，配合5.5～7号针头。腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作轻柔，防止刺伤腹部器官。尤其是对于体重较小的大鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。

3.修剪去颈部及腹部毛发，75%酒精消毒。

4.沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下

组织，暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露门并游离静脉，将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管，低温静置过夜，4℃离心（3000-3500/min）10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。

5.把胃与脾之间的薄膜除去，可见到在其下方有如树枝状的肉色组织，分为左、右两叶，

钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织，结扎止血。胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余组织全部液氮冰冻保存备用。生理盐水冲洗操作器械。

6.剔除脾周组织，放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①从脾脏一端切

取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②继续切取脾约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；③其余组织液氮冰冻保存备用。

7.从剑突继续向上剪开皮肤自颌下，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露胸廓及颈浅肌

层。沿正中剪开胸廓、胸膜，避免损伤胸腺的胸腔脏器。暴露心脏，找到上下腔静脉后确认右心房，5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。加4ml静脉血入肝素锂真空采血管，摇匀，室温静置10分钟，4℃离心（3000-3500/min）5分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。2ml加入普通真空采血管，低温静置过夜，4℃离心（3000-3500/min）5分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。

8.展开肠系膜，于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织，剔取肠系膜淋巴结数枚，放

置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②其余组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

9.上端于贲门上端结扎食管，下端于直肠远端结扎直肠末端，钝锐结合完整取下胃肠道。

10.离断胃，放置于无菌培养皿，残端结扎。①沿胃大弯剖开，生理盐水洗涤，切取约1mm

×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条，浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余胃组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

11.①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm，距回盲部10cm处切取回肠10cm，生理盐水洗涤，

切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条（做标记），浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

12.结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲

洗，称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

13.于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏，表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。在肾脏的前方内侧，

和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。右侧肾上腺呈豆状，长轴指向后内侧，左侧呈卵圆形，长轴指向腹外侧。钝锐结合摘取两侧肾上腺。①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②右叶肾上腺放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

14.剪开后腹膜，结扎剪断双侧肾门，钝锐结合，取下双侧肾脏，剔除肾周筋膜组织，放置

于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①于中间肾门部横行切开左侧肾脏，切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右侧肾脏放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

15.大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。性成熟的大鼠睾丸和附睾下降

入阴囊，使表面凸出并突向后方。小心剪开双侧阴囊，可见椭圆形睾丸，钝锐结合，摘取双侧睾丸、附睾，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。

16.颈白线钝锐结合分离颈前肌群，直至气管，向上显露甲状腺。仔细操作，切取包括甲状

软骨在内的甲状腺。①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

17.大鼠胸腺由两叶组成，似等边三角形。大部分位于胸腔前纵膈，顶端近喉部，基底部附

着于心包腹面的前上方。钝锐结合完整取下胸腺，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余组织置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。

18.整体取下大鼠心肺组织，剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血

迹。①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右肺组织置于无菌