实验大鼠取材方案
大鼠取材方案
实验大鼠取材方案［取材内容］1. 取大歸脉血分离血衆血清-80 C保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80 C保存。
3. 取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽保存备用。
6. 取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰探保存备用。
13. 取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
［试剂及药品］戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 应二醛磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或 4 戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液［器材］备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、2ml 、无菌手貳冰箱、冰盒、液氮罐［取材动物］Wistar大鼠［取材步骤］1. 取材大鼠前夜禁食自由飮扎2. 腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）或10%水合氯醛（300mg/kg）将动物麻醉。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
实验报告-大鼠
姓名：薛桂凤学号：132015200300实验报告（二）一、实验目的：1.掌握大鼠的抓取和固定。
2.掌握大鼠的编号与标记方法。
3.掌握大鼠的常用实验方法。
4.掌握大鼠的常用麻醉方法。
5.掌握大鼠的安死术。
6.掌握大鼠的釆血方法。
7.了解小鼠的采尿、粪的方法。
8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。
二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水三、实验内容1.抓取：两种方法。
第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。
第二种方法类似单手抓取小鼠的方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。
2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。
3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。
4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色可标记99只动物。
5.给药：（1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于0.1ml （麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针）（3）腹腔注射0.01-0.02ml/g（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药）（4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药）6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。
7.大鼠的采尿、粪的方法（1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便（2）长期大量采集：使用代谢笼8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药量为 1.26ml，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。
大鼠的骨髓间充质干细胞提取
大鼠的骨髓间充质干细胞提取第一步，SD大鼠麻醉处死，75%乙醇皮肤消毒，无菌条件下迅速剪开两侧后肢皮肤及肌肉，取股骨及胫骨，浸泡在PBS中。
心得体会：①鼠龄4周，重量在160-200g之间的雄性SD大鼠。
老鼠太老了，骨髓都分化的太厉害，没有年幼老鼠的骨髓这么有活力。
雌的也行，但是雌的比较厉害，咬人。
Wistar 大鼠行不行，也行，但是就品种而言，SD的生存力更强大。
②我个人认为引颈处死不人道。
麻醉药品为氯胺酮、安定、阿托品各一支混到一起，腹腔麻醉，保证30秒老鼠躺倒，安乐死。
如果你水平够高，可以直接用注射器抽取心脏内的血液，可以减少手术中老鼠出血较多而影响术野不清的问题。
③老鼠的两支前肢取下来也行，但老鼠太小，前肢更小，如果你的确需要大量的细胞取下来也无妨。
浸泡的15ml的一次性离心管中（也可以用培养皿），管中提前加好含有青链霉素的PBS 10ml就行了，青链霉素的浓度为500U／ml，这样是区别于生长液中青链霉素浓度，组织抑菌是200-500U／ml，生长液抑菌是20-100U／ml。
就当初步的消毒吧！④整个手术过程要快，一般控制在20分钟之内，时间长了，骨髓会凝，不利于后期的冲洗。
老鼠浑身都是宝，可以叫上研究脂肪的，嗅鞘的，心肌的其他人员一起来，把剩下不要的老鼠尸体给别人，做实验要巧花钱。
一般老鼠一条腿的一根股骨就够种在一个60mm的皿里了，具体根据个人经验而言。
第二步，⑴将装有骨头的离心管置于紫外线下消毒30分钟后移至超净台，倒掉PBS后，再用含青链霉素的PBS清洗骨头三遍。
⑵去掉骨头两侧的骨骺端，暴露出骨髓腔，用5ml的一次性注射器吸取5.2ml的细胞生长液，用针头插到骨头的一端冲洗，然后换另一端接着冲。
将骨髓冲出的细胞生长液至60mm培养皿中（皿最好倾斜45度），冲洗数次直至将绝大部分骨髓冲出。
⑶换1ml注射器的针头，反复在培养皿中吹吸细胞悬液2-3次后再全部吸到无菌容器中，大约此时的细胞悬液为5ml。
老鼠实验方案
老鼠实验方案槲皮素肺、心含量的测定1. 药动物学试验实验鼠（150g~200g，265±？？g表达准确些）给药前禁食12h，自由饮水。
用0.5%的羧甲基纤维素钠溶液分别将橙皮素和甘草次酸制成悬浮液，高浓度（溶液组成：槲皮素+0.5%羧甲基纤维素钠）灌胃给药（橙皮素）20mg.kg-1，低浓度（溶液组成：槲皮素+0.5%羧甲基纤维素钠+甘草次酸）灌胃给药槲皮素)10mg.kg-1。
空白对照组实验鼠灌胃0.5%羧甲基纤维素钠。
将实验鼠按三雄三雌随机分组，每组共6只。
按要求给药，根据分布相、平衡相、消除相分别在给药后1.5小时、3小时、4小时、空白组为灌药后1小时宰杀实验鼠，迅速取出肺、心组织，用生理盐水冲洗，置于冻存管中（放置分别是1雌、1雄、2雌、2雄共4支离心管），于冰箱中冷冻保存。
2.溶液的配制槲皮素储备液：精密称取橙皮素25mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制得500ug.ml-1的橙皮素贮备液，使用时用甲醇稀释至所需浓度。
橙皮素内标液：配制橙皮素浓度为0.2mg.ml-1溶液50ml，即0.2 mg.ml-1*50ml=10mg，槲皮素百分含量97%，则将M槲皮素=10mg/97%=0.0103g溶解于甲醇中配制成浓度为0.2mg.ml-1的橙皮素内标液.3. 组织样品的处理从冰箱中取出肺、心组织样，解冻，将组织先剪成几大片，剔除组织周围其他杂质成分如血块等，再剪碎，滤纸吸干。
▲分别称取组织0.2g，按2.5ml.g-1组织加入生理盐水（0.5ml）、20ul内标液（橙皮素浓度为0.5mg.ml-1）制成组织匀浆液。
在组织匀浆液中再加入甲醇600ul，涡旋60s，3500（可以转数更高，建议最好10000，以节约时间，和充分沉淀）转每分钟，离心15min，定量吸取上清液800ul（尽可能吸多，但所有过程要求取出体积一致），50摄氏度氮气流下吹干（即已预处理过的组织干样）冰箱冷藏备用。
大鼠取材方案
实验大鼠取材方案［取材内容］1. 取人皿汀脉L分页亠浆、亠涓-80C保存。
2. 取人.帚门叩献血分岛血I青-80 C保存。
3. 农人鼠巾:犬腺却织制各甲状腺匚瓷观察标木乂余菲.沢浅氮讹廉保存峯比.4. 战人就胸腺细次制卜比版汨次匸饥（虫肃:木、免寢汎化规察呼Y JU汨织液殂沐桥保存备用。
5. 敗人和门厂汉「各F叽织1筈抚农琳•仁免疫汕牛观察标木比余汇汉分装液齟沐拣保存备用。
6. 敗,m即织制幻匚汉匚後証瞬林仁免■疫汨•化观护必具余汀织分炷液也冰冻保存备用。
7. 敗人細灿脚却制紐川浏汉匚後証瞬标仁免■疫汨•化观护必貝氏側分炷液也冰冻保存备用。
8. 取人闕扬系膜淋巴结落织制备畅聚慎淋巴纭免疫纠化斑察标木贯余组织液氮冰拣保存。
9. 収人和「惻却制紐|粘琪叽织电遵观嘤标-仁免疫汕牛亦铀•讣兀余纭织分蕙我氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠沮织制金肠迫粘膜幼织匚说观秦械仁免疫汨化观祭标木英余组织分號液氮冰冻保存备用。
11. 敗丿爲£可肠汨汉制徉场道牯慎汀汉匸槿死察杠木.先疫汕比现察标木兀余泪汉分临液氮冰冻保存备用。
12. 堰人讹肾纠织制备芹仔纠親电镜观密标木、免疫泪化观察标爪右肾组织液氮冰栋探存备用。
13. 堰兴甌肾匕腺组织芹测制备肾匕II赴匚貌免疫绅化观察标木右切肾上腺掖氮彼冻保存备用。
14. 脱乂誠里凡汨汉片啊匸备电筈观奧瑞木、免疫泪化规験对；木左怛里丸液氮沐洙保辛备有。
［试剂及药品］戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 戊［鲨磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或4 .戊一咋、!」-壶讷、器械液卅械沾沅汨卷液［器材］备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、拣存管、那点钾真空采血佇、徽量移液器、高返离心机、注肘器10ml、5ml、2ml 、丿二菌亍贡‘冰彩、护:令：、浪罠［取材动物］Wistar大鼠［取材步骤］1. 脱材人氐孑視杂食门中竹2. 腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）或10%水合氯醛（300mg/kg）将动物麻醉。
提取大鼠骨髓的方法
提取大鼠骨髓的方法
提取大鼠骨髓的方法包括以下步骤：
1. 选取适当的实验动物，如SPF级、体重100~150g的SD大鼠。
2. 将大鼠断颈处死，然后将其置于体积分数为75%的乙醇中浸泡5分钟进行消毒。
3. 将工作台进行紫外消毒，并用通风机通风3分钟，以保持无菌环境。
4. 用75%酒精擦拭操作台和双手，确保无菌操作。
5. 准备好所需的工具，如大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子以及干净的培养皿。
6. 将大鼠仰卧放置在超净台内的干净培养皿上。
7. 使用眼科镊子沿腹股沟处提拉大鼠皮肤，并用眼科剪刀剪开腹股沟皮肤，暴露出腿部肌肉。
8. 从关节处将大鼠大腿剪下，并除去骨表面附着的软组织。
9. 如果剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净，可以使用无菌纱布擦拭，以便更方便地剔除肌肉组织，提高所分离细胞的纯度。
10. 用无菌PBS浸泡清洗骨骼。
11. 用眼科剪剪断两端骨骺，显露骨髓腔。
12. 将骨骼放置在10ml含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM完全培养液的无菌培养皿中。
13. 使用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔，重复冲洗3次，然后反方向冲洗3次，直至骨髓腔冲洗液变清亮。
14. 吹打细胞悬液，以便分散细胞。
15. 将骨髓悬液收集至15ml离心管中，在1000r/min室温下离心5分钟。
完成以上步骤后，即可提取到大鼠的骨髓细胞。
请注意，实验应在无菌条件下进行，以避免污染样本。
大鼠小鼠抓取实验报告
一、实验目的1. 观察大鼠和小鼠在抓取实验中的行为表现；2. 了解大鼠和小鼠的抓取能力；3. 探讨大鼠和小鼠的抓取行为与认知能力的关系。
二、实验材料1. 实验动物：大鼠、小鼠各5只，体重分别为200-250g和20-30g；2. 实验装置：抓取实验箱、电子天平、视频采集系统、记录表格；3. 实验材料：金属丝、塑料棒、棉球等。
三、实验方法1. 实验分组：将大鼠和小鼠随机分为两组，每组3只；2. 抓取实验：将金属丝、塑料棒、棉球等材料放入抓取实验箱中，观察大鼠和小鼠在抓取实验中的行为表现；3. 数据采集：使用电子天平测量抓取物品的重量，使用视频采集系统记录实验过程；4. 数据分析：对实验数据进行分析，比较大鼠和小鼠的抓取能力，探讨抓取行为与认知能力的关系。
四、实验结果1. 大鼠和小鼠在抓取实验中的行为表现：（1）大鼠：大鼠在抓取实验中表现出较强的抓取能力，能够轻松地抓取金属丝、塑料棒等物品。
在实验过程中，大鼠能够根据物品的重量和质地调整抓取方式，表现出一定的认知能力。
（2）小鼠：小鼠在抓取实验中的表现不如大鼠，抓取能力较弱。
在实验过程中，小鼠需要多次尝试才能成功抓取物品，抓取方式较为单一。
2. 抓取能力比较：（1）大鼠的抓取能力较强，能够轻松地抓取重量较大的物品；（2）小鼠的抓取能力较弱，只能抓取重量较小的物品。
3. 抓取行为与认知能力的关系：（1）大鼠在抓取实验中表现出较强的认知能力，能够根据物品的重量和质地调整抓取方式；（2）小鼠在抓取实验中的认知能力较弱，抓取方式较为单一。
五、实验结论1. 大鼠和小鼠在抓取实验中的行为表现存在差异，大鼠的抓取能力较强，小鼠的抓取能力较弱；2. 抓取行为与认知能力存在一定的关系，大鼠在抓取实验中表现出较强的认知能力，而小鼠的认知能力较弱；3. 抓取实验可以作为一种评估动物认知能力的方法，有助于了解动物的学习和适应能力。
六、实验讨论1. 本实验通过抓取实验评估了大鼠和小鼠的抓取能力，为研究动物认知能力提供了实验依据；2. 实验结果表明，大鼠和小鼠的抓取能力存在差异，这可能与它们的进化历程和生存环境有关；3. 抓取实验作为一种评估动物认知能力的方法，在实际应用中具有一定的局限性，需要进一步研究和完善。
(完整)动物实验大鼠软骨、滑膜的切取方法
(完整)动物实验大鼠软骨、滑膜的切取方法大鼠软骨切取方法：
脱颈处死,用碘酒消毒四肢皮肤,在无菌操作下，于股骨髁上5cm处截取股骨，于胫骨平台下3mm截取胫骨，小心取下膝关节,去除周围软组织:附着的组织如肌肉、脂肪、骨膜、滑膜,离断髌韧带、内外侧副韧带及前后交叉韧带，剪开髌骨两侧键膜,将髌骨向下翻转，打开膝关节，手术刀削取关节软骨组织，用15＃解剖刀片充分利用软骨的弹性，削下每个关节表面的软骨，不要误带软骨下骨和骨膜.
大鼠滑膜切取方法：
将大鼠浸泡于10 ％强力消毒冷溶液中10 分钟，在超净工作台，仰位固定，常规碘酒、酒精消毒术野。
沿膝关节正中纵行切开皮肤直至暴露出以膝关节为中心约3cm ×3cm 的区域，以有齿镊提起髌骨.沿髌骨上缘约013 ～014cm 处向下切割直至股骨，再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨, 此时即打开了膝关节腔, 可见由髌骨下缘向上延缓有一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。
完整剥离滑膜组织, 最后以眼科镊轻轻夹住其游离端, 用刀片完整切下, 用福尔马林固定, 包埋, 切片,
留待病理检测。
大鼠称重,腹腔注射10%氯胺酮0. 1 ml/100 g麻醉，仰位固定,沿左侧后腿膝关节正中纵行切开皮肤，直至暴露出以膝关节为中心约3cm ×3 cm的区域,沿膑骨上沿约0。
3～0. 4 cm处向下切割直至膑骨,再分别沿膑骨两侧向下分离至胫骨,此时即打开了膝关节腔,可见由膑骨下极向下延续有一层平滑光亮呈浅淡黄色的滑膜组织。
用眼科直镊钝性分离关节囊的滑膜层和纤维层，完整剥离滑膜组织，最后以眼科镊轻轻夹住其中央，用眼科剪完整剪下，置10%的中性甲醛中固定［ 2 ] 。
固定24 h
后,石蜡包埋,苏木精—伊红染色.。
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
1、材料和方法：
（1）实验材料：四只雄性大鼠
（2）实验方法：
a.用动物右侧膝关节把大鼠夹住，用手指按压背骨曲线处胸骨，使大鼠处于安静平卧状态。
b.取材时，用双钳片分开第4脊椎到第7脊椎之间的腰部软组织，可很清楚看到神经节，然后对神经节进行取材。
c.腰膨大段的肌节取材一般采用三层的钳取法，即用双夹钳先夹住神经节，再用单钳片夹住其上、下层细胞组织及膜，最后一次挤压，使神经节断裂，取材完毕。
2. 结果
实验完毕后，成功取得4只大鼠的腰膨大背根神经节，组织伤口恢复良好，没有出现肿胀、红肿等异常现象。
3、结论
本文提出的大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法，可以有效地提高实验效果，准确地取得大鼠腰膨大背根神经节，且低痛损伤。
大鼠膀胱原代上皮细胞的提取方法
大鼠膀胱原代上皮细胞的提取方法材料准备：1. 大鼠（如Sprague Dawley）。
2.适量的PBS（含有钙和镁离子）。
3.组织消化液（如0.25%胰蛋白酶和0.02%胰蛋白酶抑制剂混合的PBS）。
4.培养基（如DMEM/F12）。
5.15mL和50mL离心管、离心机。
6.显微镜和细胞计数器。
组织分离：1.用PBS冲洗大鼠膀胱，确保表面清洁。
2. 用无菌器械将膀胱切割成小块，大小约为1-2 mm33.将膀胱组织放入含有0.25%胰蛋白酶和0.02%胰蛋白酶抑制剂的组织消化液中，37°C孵育20-30分钟。
4.定期轻轻摇动培养皿，促进组织消化。
5.将组织过筛除去大块残留物。
6.把过滤后的细胞悬液用DMEM/F12培养基稀释。
细胞培养：1.将细胞悬液转移到15mL离心管中，离心200-300g5分钟，去除上清液。
2.加入PBS洗涤细胞，离心200-300g5分钟，去除上清液。
3.加入适量的DMEM/F12培养基，将沉淀复悬后转移到培养瓶中。
4.在37°C、5%CO2的条件下培养细胞。
5.每2-3天更换一次培养基，直至细胞密度达到80%-90%。
细胞鉴定：1.观察细胞形态和生长情况，以判断细胞纯度和健康状况。
2.可使用免疫细胞化学方法（如免疫组化和免疫荧光）来鉴定上皮细胞的特异性标记物，如细胞角蛋白、细胞间粘附分子等。
3.进行细胞功能实验，如细胞增殖、迁移和侵袭实验，以确认细胞的上皮细胞特性。
这些步骤可以帮助提取到高纯度和活力的大鼠膀胱原代上皮细胞，为后续研究提供可靠的细胞模型。
大鼠标本制备
先买40只大鼠，在实验室适应一段时间{一周到两周}，实验开始前准备2ml、20ml注射器，一次性手套、口罩、50ml广口瓶，购买试剂卵清蛋白（OV A）、氢氧化铝，再去3号楼4楼找老师要PBS缓冲液（PH7.2-7.4）
第一步配置致敏剂，40只大鼠每只腹腔注射1ml，最好配置50毫升制剂（包括浪费的10毫升），每只大鼠OV A10毫克，氢氧化铝20毫克，把两种成分（OV A10mg×50=500mg，氢氧化铝20mg×50=1000mg）溶解在50毫升PBS液中或生理盐水中，制成OV A浓度为10mg/ml、氢氧化铝20mg/ml。
制成之后，每只小鼠1ml腹腔注射（腹中线左侧，大鼠头部朝下，回抽有无液体和空气，避免注入膀胱、肠管）。
隔天注射一次，或其他方案，致敏两周，大鼠产生抗体，两周之后，用PBS溶液配制滴鼻液开始激发大鼠。
大鼠取材方案
大鼠取材方案实验大鼠取材方案[取材内容]1. 取大鼠静脉血分离血浆、血清 -80℃保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清 -80℃保存。
3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器 10ml、5ml、2ml 、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]Wistar大鼠[取材步骤]1. 取材大鼠前夜禁食自由饮水。
大鼠灌注固定取脑解剖取材
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
• 简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱 • 密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期间不时 • 震荡。注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小
的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
• 也可用10%福尔马林溶液，甲醛1：10稀释 甲醛100ml 磷酸二氢钠4g 磷酸氢二钠6.5g 蒸馏水900ml 或甲醛100ml加900mlPBS缓冲液。
常见问题
1.灌注取脑不可用于Western blot及PCR的原因
• 多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表 面结构不变，从而能使其对应的抗体，准确检测其表达 的位置和量。
• Western中，要用去污剂使各种蛋白发生变性、解聚， 并变成统一的线性肽链，从而能够用凝胶电泳进行分子 量的梯度分离。多聚甲醛会影响蛋白的解聚，从而使其 无法用凝胶分离。 另外，WB和免疫组化所使用抗体的 抗原表位也不同，WB的抗体一般识别蛋白的一级结构， 所以可能也无法识别甲醛处理的蛋白。
生理盐水冲洗
4%多基甲醛固定
取脑
保存或切片.
具体过程
大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木
板置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经 左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌 注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺 脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注 冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲 醛浸泡固定24小时。
大鼠灌注固定取脑解剖取材
4.灌注多长时间？灌注液多少？
• 每个人的灌注液用量都不一样，灌注速度 也能没有很清楚的说法，灌注时间也不确 定。主要还是看灌注成功的标志。现将看 到的比较详细的处理方法列出。灌注速度， 大家比较公认的是先快后慢。
• 短期灌注：采用心脏穿刺快速灌注20 min,其中生理盐水灌注50~ 100mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注150 mL。
• 下面是夹闭腹主动脉: • 每只大鼠先快速推注生理盐水50 ml冲洗,继而灌注固定液(如4%
多聚甲醛等)50~80 ml,先快后慢,需10~15 min,在灌注固定液过程 中,颈部逐渐变硬;灌注结束后,开颅取出脑组织,置于固定液中后 固定24 h
5.体循环与肺循环的鉴别
• 体循环时大鼠肝脏变白现象出现较早,在灌 注多聚甲醛后,四肢会出现明显的抽搐现象, 尾巴和四肢明显僵硬。若灌流针误插入右 心室,会导致灌流液沿肺循环途径灌流,这时 肝脏变白出现的较慢,四肢的抽搐现象没有 体循环明显,且鼻腔中有时会有灌流液流出。 因肺循环会影响组织器官的灌流效果,因此 进针时要准确,避免肺循环的发生。一旦出 现肺循环指征,应及时调整进针角度。
• 尤其是要做电镜时更明显。有的标记蛋白 要求较高，固定不好就难以染好。
3.用4%多聚甲醛固定但保存了2周才做石蜡切 片，对免疫组化有无影响？
固定时间过长蛋白多肽链都交连在一起了,抗原性就 很弱了，很可能没有阳性结果,抗原修复时一般的修复很 难把抗原性恢复. 可能会有影响，但不会太大。固定时间 长，抗原修复时间也要长一些。
从小脑处将脑组织向上推起，用小 剪刀剪断脑神经
注意事项 • 1.多聚甲醛气味刺激，配置时做好自我保护。 • 2.暴露心脏这一步骤，容易损伤肺、心脏或者肝脏，“夹持剑
突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成 人工气胸”，人工气胸后，肺萎缩，胸腔里的空间增大，提拉 剑突后，不容易损伤肺、心及肝脏，出血少。
大鼠抓取
大鼠的抓取最近在做大鼠的长毒实验，感觉抓大鼠时还是得好好学学。
恰好有战友提出这样的问题。
就把在园子里发的有关大鼠抓取得帖子整理一下。
一来自己可以再学习，二来也可以帮助战友。
treesea抓取动物时,请务必戴好手套,做到胆大,心细.以下为:1.小鼠:先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将小鼠置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。
有经验者可直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤。
2.大鼠:大鼠的抓取时基本同小鼠。
进行腹腔、肌肉皮下等注射和灌胃时，同样可采用左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中。
也可伸开左手之虎口，敏捷地从后，一把抓住。
silverman1、从背部直接抓取，食指从肩部上方绕过，拇指绕过腋窝，食指拇指对扣，其余手指直接握大鼠，这种手法抓的时候速度快，手也不会太早累，长时间抓很好用的。
楼主所说的也可伸开左手之虎口，敏捷地从后，一把抓住。
可能是这种方法吧。
不过头不能固定，比较凶的大鼠不要用。
2、从头部抓，食指中指从肩部上方绕过，拇指绕过腋窝，拇指中指对扣。
同时食指中指夹住大鼠的头，使其不能乱动。
相对1要费点时间，不过比较安全。
我一般都是用我说的第一种抓，如果大鼠太凶，就用第二种。
实在不行我才会试试用楼主说的那种(实在是太累了，抓不了一会手就酸了)。
不过我说的这两种方法前提是抓动物的人手要大一点，手指对扣时一定要紧，不要扣着鼠皮，那样大鼠很容易挣脱。
大鼠其实不是比较温顺的，只要它感觉不是很难受，一般来说大鼠的抓取保定抓取大鼠前最好戴上防护手套，右手轻轻抓住大鼠尾巴的中部并提起，迅速放在笼盖上或其他粗糙面上，左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行，以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。
DRG的取材
DRG的取材
DRG的取材，已经有很多⽂献报道，因为我最近也培养了DRG细胞，所以谈谈⾃⼰的经验：新⽣⼤⿏（红⽪）浸⼊酒精5min 处死，断头后剥开脊髓周围⽪和肌⾁，⽤显微镊剪开脊髓椎管，去除脊髓，使整个脊髓腔暴露，在解剖镜下，椎孔间的DRG 可以清晰看到，⼀个⿏应该有很多对DRG，⽤超细⼿术镊取DRG，动作要轻柔，不能将DRG夹坏。
取下的DRG放在冰PBS ⾥。
取好⾜够的DRG后，还需仔细将每个DRG的包膜剥去，这⼀步很重要，对下⼀步的组织块培养或消化培养时减少杂细胞都很关键。
这种⽅法要点就是要操作快，去除脊髓过程尽量减少出⾎，个⼈经验出⾎过多使DRG浸在⾎中会影响其活⼒。
实在有出⾎应该⽤冰PBS清洗⼀下。
还有就是剥好膜后也要放在新的冰PBS中去除⾎和杂质。
接下来就可以进⾏下⼀步操作了。
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实验大鼠取材方案[取材内容]1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。
2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。
3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。
4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。
5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保存。
9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保存备用。
13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液）[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、2ml、1.5ml）、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器（10ml、5ml、2ml）、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]Wistar大鼠[取材步骤]1.取材大鼠前夜禁食，自由饮水。
2.腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。
用5ml的注射器，配合5.5～7号针头。
腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠的头部向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔，防止刺伤腹部器官。
尤其是对于体重较小的大鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3.修剪去颈部及腹部毛发，75%酒精消毒。
4.沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露门并游离静脉，将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管，低温静置过夜，4℃离心（3000-3500/min）10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
5.把胃与脾之间的薄膜除去，可见到在其下方有如树枝状的肉色组织，分为左、右两叶，钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织，结扎止血。
胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余组织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗操作器械。
6.剔除脾周组织，放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②继续切取脾约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；③其余组织液氮冰冻保存备用。
7.从剑突继续向上剪开皮肤自颌下，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露胸廓及颈浅肌层。
沿正中剪开胸廓、胸膜，避免损伤胸腺的胸腔脏器。
暴露心脏，找到上下腔静脉后确认右心房，5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝素锂真空采血管，摇匀，室温静置10分钟，4℃离心（3000-3500/min）5分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
2ml加入普通真空采血管，低温静置过夜，4℃离心（3000-3500/min）5分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
8.展开肠系膜，于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织，剔取肠系膜淋巴结数枚，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②其余组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
9.上端于贲门上端结扎食管，下端于直肠远端结扎直肠末端，钝锐结合完整取下胃肠道。
10.离断胃，放置于无菌培养皿，残端结扎。
①沿胃大弯剖开，生理盐水洗涤，切取约1mm×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条，浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余胃组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
11.①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm，距回盲部10cm处切取回肠10cm，生理盐水洗涤，切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条（做标记），浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
12.结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。
①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
13.于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏，表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。
在肾脏的前方内侧，和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状，长轴指向后内侧，左侧呈卵圆形，长轴指向腹外侧。
钝锐结合摘取两侧肾上腺。
①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②右叶肾上腺放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
14.剪开后腹膜，结扎剪断双侧肾门，钝锐结合，取下双侧肾脏，剔除肾周筋膜组织，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏，切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右侧肾脏放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
15.大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊，使表面凸出并突向后方。
小心剪开双侧阴囊，可见椭圆形睾丸，钝锐结合，摘取双侧睾丸、附睾，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
16.颈白线钝锐结合分离颈前肌群，直至气管，向上显露甲状腺。
仔细操作，切取包括甲状软骨在内的甲状腺。
①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
17.大鼠胸腺由两叶组成，似等边三角形。
大部分位于胸腔前纵膈，顶端近喉部，基底部附着于心包腹面的前上方。
钝锐结合完整取下胸腺，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余组织置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
18.整体取下大鼠心肺组织，剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块，3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛固定；②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右肺组织置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
19.各取样标本细致编号登记。
20.大鼠废弃尸体处理。
[注意事项］1.戊巴比妥钠：配成1%生理盐水溶液，平均每只大鼠用量12.6mg（1.2ml左右）。
2.大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为5～10ml/kg。
3.完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎，不易寻找肠系膜淋巴结，所以先取淋巴结。
取下胃肠道，由专人操作，取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠，结合取材方案，多脏器并行取材缩短取材时间。