大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

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HE染色实验步骤

HE染色实验步骤

HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术,用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。

在这个实验中,我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。

HE染色法是最常用的组织染色方法之一,用于观察组织结构和组织细胞的形态。

以下是HE染色实验的步骤:1.准备组织标本在进行染色实验之前,首先需要准备好需要染色的组织标本。

组织标本可以是新鲜的组织样本,也可以是已固定和包埋的组织切片。

在准备组织标本时,需要确保组织标本的质量和完整性,以保证染色结果的准确性。

2.制备切片将组织标本切割成薄片,通常厚度在5-10微米之间。

为了获得更好的染色效果,切片应该尽可能薄且均匀。

切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。

切片完成后,将切片放在载玻片上,待干燥。

3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂,去除切片中的脂肪物质。

脱脂时间一般为1-2分钟。

脱脂完成后,将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理,时间每次均为1-2分钟。

脱水处理的目的是去除切片中的水分,以便后续染色。

4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。

hematoxylin染料用于染色细胞核,eosin染料用于染色胞质。

染色时间根据实验需要,通常为1-10分钟。

染色完成后,将切片洗净并进行脱水处理。

5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。

脱水完成后,将切片放入透明剂中进行透明化处理,以使组织切片更加透明。

最后,将切片放入显微镜载玻片上,加入透明胶封片,并静置干燥。

6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中,用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。

观察时,可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。

通过观察和记录,可以得到关于组织和细胞的详细信息,为后续研究和分析提供参考。

7.结果分析根据观察和记录的结果,对染色切片进行分析和比较。

组织切片操作流程(肝脏切片)

组织切片操作流程(肝脏切片)

组织切片操作流程(肝脏切片)---本文旨在介绍肝脏切片的操作流程,为科研人员提供参考。

肝脏切片是一种常见的组织切片技术,在研究肝脏病变、疾病机制等方面具有重要意义。

以下是肝脏切片的操作流程。

准备工作1. 样本采集:从实验动物或患者中获得肝脏样本。

确保样本新鲜且符合研究要求。

2. 样本固定:将肝脏样本放入10%中性缓冲福尔马林中进行固定。

固定时间一般为24小时,可根据需求适当延长。

3. 脱水:将固定的肝脏样本进行脱水处理,依次放入浓度递增的乙醇中(例如70%、80%、90%、95%、100%),每次脱水时间约为1小时。

切片操作1. 组织包埋:将脱水的肝脏样本置于熔点为60摄氏度左右的石蜡中,温度控制在55-60摄氏度,使其充分浸渍石蜡。

2. 石蜡固化:将包埋的肝脏样本在冷却台上冷却,使石蜡固化。

3. 切片:使用旋转式切片机将石蜡固化的肝脏样本切割成薄片,常见厚度为3-5微米。

4. 切片传送:用切片刷将切好的肝脏切片均匀地传送到预涂玻片上。

5. 干燥:将玻片置于60摄氏度的烤箱中进行干燥,通常需要2-3小时,直至切片完全贴附于玻片上。

6. 染色:根据需要进行染色处理,在肝脏切片上滴加适当染色剂,如血液学染色剂、免疫组织化学染色剂等。

7. 盖片:将已染色的肝脏切片背面朝上覆盖玻片盖片,确保切片封装完整。

8. 固定:使用适当的固定剂(如蜡胶)将玻片和盖片固定在一起。

存储和保存1. 标记:在玻片上标记样本信息,如标本编号、日期等。

2. 包装:使用专用的玻片包装袋将肝脏切片包装好,避免切片受损。

3. 存储:将包装好的肝脏切片存放在冷藏箱中,温度控制在4摄氏度左右,确保切片的保存时间。

4. 归档:按照项目或实验的顺序对肝脏切片进行归档,便于后续查找和分析。

以上是组织切片操作流程(肝脏切片)的详细步骤。

在进行实际操作时,请严格按照实验室的安全规范操作,并根据具体实验要求适当调整流程。

希望本文对您的科研工作有所帮助。

肝纤维组织切片及H.E染色详细操作步骤

肝纤维组织切片及H.E染色详细操作步骤

肝纤维组织切片及H.E染色详细操作步骤(一)取样断头处死大鼠,解剖、取肝、称重;(二)固定将肝组织立即放入10%福尔马林固定液中。

(三)脱水脱水的程序为70%一80%一95%一100%。

各级酒精2—4小时,视材料的大小、厚薄而定。

100%酒精有硬化组织的作用,时间不宜太长,一般不超过3小时。

脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织,脱水时间要适当延长。

(四)透明脱水后的肝组织放在专用二甲苯皿器中,透明10分钟(有的文献是30-60min,哪个合理?);更换二甲苯后再浸泡10分钟。

(五)浸蜡(透蜡)依据石蜡熔点不同,设置熔点50—52℃为第一缸蜡,52—54℃为第二缸蜡,54—56℃为第三缸蜡。

依次浸蜡2—3小时(具体多长时间合适?)。

温箱内的温度调节至略高于石蜡熔点2—3℃,与石蜡的熔点相配合。

(六)包埋将液态的石蜡倒入金属包埋框或包埋的纸盒中,再将浸好蜡的组织块平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蜡凝固后去掉包埋框,完全冷却变硬后再修整蜡块,要求组织外围的石蜡保留适中以便切片。

(七)切片前的准备工作1.修整蜡块将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去,四周留约2mm的石蜡边。

蜡块两边要切成平行的直线,否则切下的蜡条弯曲,也不可修成圆角,致蜡带容易分开不能成条。

2.玻片处理玻片用76X26mm载片,厚度l-1.5mm。

新的玻片也必须擦洗干净,否则染色时引起切片脱落,方法有①煮沸洗涤法、②洗液浸泡法。

最后经95%酒精浸泡脱脂、烘干。

将洗净的载玻片上均匀涂抹薄薄的一层蛋白甘油(防止组织脱片){蛋白甘油如何配置?},放置冰箱备用。

(八)切片制作过程1.将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上,使蜡块的切面与刀口成平行方向,刀的倾斜度通常为15°,转动轮转推进器,调节切片厚度为6μm,切成厚度均匀的切片。

2.左手持毛笔,右手旋动切片机转把,切片带出来之后,用毛笔轻轻托起,再用眼科镊轻镊蜡片,以正面放入展片箱中,其水温40—43℃左右。

正常肝脏切片实验报告

正常肝脏切片实验报告

实验日期:2023年4月10日实验目的:通过观察正常肝脏切片,了解肝脏的解剖结构、组织学特征以及肝小叶的组成,并学习肝脏的基本功能。

实验材料:1. 正常肝脏组织样本2. 切片机3. HE染色试剂盒4. 显微镜5. 图像采集系统实验方法:1. 样本处理:取新鲜正常肝脏组织样本,去除脂肪和结缔组织,用生理盐水清洗,并用刀片切成约2mm厚的组织块。

2. 切片制作:将组织块固定于切片机上,使用切片机将组织块切成连续切片,厚度约为5μm。

3. 染色:将切片放入染色缸中,按照HE染色试剂盒说明书进行染色,包括苏木精染色、盐酸酒精分化、伊红染色和酒精脱水等步骤。

4. 显微镜观察:将染色后的切片用显微镜观察,使用10倍和40倍物镜观察肝小叶的组成、肝细胞的结构和肝内胆管等。

实验结果:1. 肝小叶结构:正常肝脏切片显示肝小叶呈多角棱柱体,由中央静脉、肝索和肝窦组成。

肝索由肝细胞构成,呈放射状排列,中央静脉位于肝小叶中央。

2. 肝细胞结构:肝细胞呈多边形,具有明显的细胞核和丰富的细胞质。

细胞质中可见丰富的线粒体、内质网和高尔基体等细胞器。

3. 肝内胆管:肝内胆管呈细长的管状结构,与肝细胞相连,负责分泌胆汁。

4. 肝血窦:肝血窦是肝细胞与血液之间的通道,血液中的氧气、营养物质和代谢废物通过肝血窦与肝细胞进行交换。

讨论:1. 正常肝脏切片显示的肝小叶结构是肝脏的基本功能单位,由肝细胞、肝血窦和中央静脉组成。

肝细胞是肝脏的主要细胞类型,具有代谢、解毒、储存和分泌等功能。

2. 肝细胞内的细胞器,如线粒体、内质网和高尔基体,对于肝细胞的代谢和功能至关重要。

线粒体是细胞的能量工厂,内质网负责蛋白质的合成和修饰,高尔基体则参与蛋白质的分泌和转运。

3. 肝内胆管在肝脏的胆汁分泌和排泄中起着重要作用。

胆汁是肝脏分泌的一种消化液,含有胆盐、胆固醇、胆色素等成分,有助于脂肪的消化和吸收。

4. 肝血窦是肝细胞与血液之间的界面,负责物质交换。

石蜡切片制作和HE染色实验报告

石蜡切片制作和HE染色实验报告

石蜡切片制作和HE染色一、目的要求:简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、伊红染色法(简称H.E染色法),借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。

二、实验原理:易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性;而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。

在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。

而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。

如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。

所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。

脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明对比。

伊红是细胞浆的良好染料。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。

经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。

再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。

故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

三、实验用具:单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、染色缸、树胶瓶、毛笔、熔蜡箱(或恒温箱)、展片台(或烫板)、烤片盒、切片托盘。

He染色切片制作(各动物、全过程、操作要点、注意事项)

He染色切片制作(各动物、全过程、操作要点、注意事项)

He染色切片制作(各动物、全过程、操作要点、注意事项)石蜡切片制备基本步骤一、准备工作(一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

(二)配制:硫酸洗液的配制清洁液(洗液)的配制:成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸(ml) 1000 200 100重铬酸钾(mg) 63 120 100蒸馏水(ml) 200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水 2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中,边倒边用木棒轻轻搅拌(三)载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。

二、常用液体的配制(一)缓冲溶液:1.磷酸盐缓冲液A液:0.1mol/L磷酸二氢钠B液:0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0)2.枸椽酸缓冲溶液A液:0.1mol/L枸椽酸B液:0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2)(二)固定剂:1.甲醛:10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水 900ml注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2.10%中性福尔马林钙固定液甲醛液 10ml蒸馏水 90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置24小时取上清液使用。

3.4%多聚甲醛:8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水 100ml加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。

病理片HE染色步骤

病理片HE染色步骤

病理片HE染色步骤病理片HE染色步骤:烤片80度半小时(1)二甲苯(Ⅰ)5min(2)二甲苯(Ⅱ)5 min(3)二甲苯(III)5min(4)100%乙醇(Ⅰ)2min(5)90%乙醇(Ⅱ) 2 min(6)80%乙醇(III)2min(7)70%乙醇(IV)2 min(8) 流水冲洗5min(9) 苏木精液染色5 min(10) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(11) 1%盐酸乙醇1-3 s(12)流水过洗至返蓝(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇(Ⅰ)2-3 s(17) 100%乙醇(Ⅱ)3-5 s(18) 二甲苯(Ⅰ)2 min(19) 二甲苯(Ⅱ)2 min(20) 二甲苯(Ⅲ)2 min(21) 中性树胶封固* 冷冻切片HE染色步骤:(1)冰冻切片固定10~30 s(2)水洗1~2 s(3)苏木精液染色(60℃)30~60 s(4)流水洗去苏木精液5~10 s(5)1%盐酸乙醇1~3 s(6)稍水洗1~2 s(7)促蓝液返蓝(8)流水冲洗15~30 s(9)0.5%曙红液染色30~60 s(10)蒸馏水洗1~2 s(11)80%乙醇1~2 s(12)95%乙醇1~2 s(13)无水乙醇1~2 s(14)石炭酸二甲苯2~3 s(15)二甲苯(Ⅰ)2~3 s(16)二甲苯(Ⅱ)2~3 s(17)中性树胶封固。

H-E染色评定标准:(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;(2)染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。

组织切片HE染色与免疫组化

组织切片HE染色与免疫组化

1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。

2、已经固定好的组织依次在70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 %的乙醇溶液中浸泡15-20 min,3、再浸入乙醇和二甲苯(1:1)的混合溶液中15-20 min,然后浸入二甲苯直到透明,将透明的组织浸入石蜡和二甲苯(1:1)的混合溶液中浸泡1 h,用石蜡进行固定。

4、包埋、切片2组织切片HE染色染色结果:细胞核呈蓝色,细胞的细胞质呈粉红色。

步骤:1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min,再次用二甲苯进行脱蜡15 min,2、浸入二甲苯和酒精混合溶液(1:1)3 min,依次浸入100%、95 %、90%、80%、70%、50%乙醇各2 min。

3、苏木素染色5 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s,自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %乙醇2 min,伊红浸泡5 s。

4、 95 %、100 %、100 %乙醇各2 min,最后连续2次二甲苯各15 min,封片。

3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 ℃烘箱内烤片20 min, 然后取出待冷却后,进行脱蜡。

2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min,依次浸入100 %、95 %、80 %乙醇、蒸馏水各2 min。

3、高压抗原修:将3 L柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。

切片置于切片架上,放入锅内,使切片位于液面以下,盖高压锅压阀。

当压力锅开始慢慢喷气时(加热5-6 min)计时1-2 min,然后将压力锅端离热源,冷水冲至室温后,蒸馏水冲洗,PBS洗,片子室温冷却20 min,再次PBS洗。

4、免疫组化具体方法参照SP试剂盒(福州迈新):1、室温,正常非免疫动物血清封闭30 min;2、一抗4 ℃ 12 h;3、用PBS清洗两次,每次2 min;4、室温,内源性过氧化物酶阻断1 h;用PBS清洗三次,每次2 min;5、室温,生物素标记的二抗30 min;用PBS清洗三次,每次2 min;6、室温,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶30 min,7、DAB显色5 min,蒸馏水冲洗;8、Gill’s苏木素复染3 min;9、自来水流水冲洗5 min;依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min;10、最后用二甲苯透明,封片,镜检,拍照。

组织切片制作及he染色流程实验报告

组织切片制作及he染色流程实验报告

组织切片制作及he染色流程实验报告In the field of biology and biomedical research, tissue sectioning and histological staining are common techniques used to study the microscopic structure of tissues. These techniques are important for understanding the cellular composition and organization of tissues, as well as for diagnosing diseases and monitoring treatment effectiveness. In this report, I will provide an overview of the processes involved in tissue sectioning and histological staining.在生物学和生物医学研究领域,切片制作和组织染色是常用的技术,用于研究组织的微观结构。

这些技术对于理解组织的细胞组成和结构以及诊断疾病和监测治疗效果非常重要。

在本报告中,我将概述涉及到的组织切片制作和组织染色过程。

Tissue sectioning is the first step in preparing samplesfor microscopic examination. The goal of tissue sectioningis to obtain thin slices or sections of the tissue that can be mounted on slides for further analysis. To achieve this, the tissue needs to be properly fixed, processed, embeddedin a medium, and cut into thin sections.组织切片是准备样品进行显微镜检查的第一步。

肝脏切片

肝脏切片

大鼠肝脏脂肪组织石蜡包埋切片本实验室现提供整体实验课题外包服务,如大鼠肝脏,脂肪组织石蜡切片,免疫组化整体实验代做,小鼠心肌细胞培养,后续Western blot,荧光定量PCR检测等,因本实验室自己课题量也较多,所对外承接课题数量有限,如有需要的同学请在线提前预约(即将毕业研究生优先)。

制作优质大鼠各器官石蜡切片1.1标本:大鼠各个脏器———心、肝、脾、肺、肾、大脑、脊髓、胃肠、垂体、胸腺、淋巴结、肾上腺、卵巢、睾丸、子宫、膀胱、附睾。

1.2固定液:中性甲醛溶液,固定时间为24h。

1.3取材:心脏:最大纵断面取1块,厚度为2mm肝脏:右叶纵断面取1块,厚度为2mm;脾脏:纵断面取1块,厚度为2mm肺脏:纵断面取1块,厚度为2mm;肾脏:最大面剖开取一半,包括皮质、髓质和肾盂;大脑:最大面剖开取一半;脊髓:横断面剖开取1块,厚度2~3m;胃:沿大弯侧剪开,纵切一长条,长1cm,宽2mm;肠:横断面切取一段,约2mm;垂体:全包;胸腺:全包;淋巴结:全包;肾上腺:全包;卵巢:全包;xx:横断面剖开取一段,厚度2mm;睾丸:最大面剖开,取半;附睾:纵断面剖开取半;膀胱:剖开取半。

1.4包埋:胃肠、子宫、膀胱立埋,其余脏器平埋,蜡温为65~70℃。

1.5切片:厚度4μm,摊片水温56℃左右,选取无皱折的4片。

动物组织石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色切片置70℃的烤箱中30min入二甲苯脱蜡20min;入梯度乙醇100%→95%→85%→75%,自来水冲洗2min;入苏木精30min,取出自来水冲洗2min;入盐酸乙醇分化5s,自来水冲洗2min;入伊红5s,自来水冲洗2min;入梯度乙醇75%→85%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%入二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ;中性树胶封片。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下:(一)固定与修块取组织块放入Bouin氏液中,组织块的直径应小于7mm。

6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。

(二)脱水与透明1.75%乙醇50分钟2.85%乙醇50分钟3.95%乙醇(I)30分钟4.95%乙醇(II)30分钟5.100%乙醇(I)30分钟6.100%乙醇(II)30分钟7 1/2二甲苯(乙醇与二甲苯等体积)20分钟8.二甲苯(I)20分钟9.二甲苯(II)10分钟(可依据透明效果而定)若脱水不好,二甲苯溶液颜色会变混浊。

在每一步骤之后,要充分滤干组织块,一般用筒纸吸干组织块上的液体,以免影响其他液体的浓度,但也要防止组织块干燥。

全过程约需要5h。

(三)浸蜡、包埋与修蜡块1.浸蜡:将60℃恒温箱打开,使石蜡充分溶解,待脱水与透明结束后,将组织块转入石蜡里,放置于60℃恒温箱120分钟。

2.包埋:将60℃的石蜡倒入纸盒内,然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好,使切面朝下。

不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中,以保证切片和染色条件相同。

为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固,可将纸盒置于一玻璃板上(或大培养皿内),然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上,包埋时蜡盒底部要放平,做蜡块的蜡要反复冻融较好。

3.修蜡块:待纸盒内蜡凝固后,用刀片将其修成梯形,组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。

(四)切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。

可滴半滴甘油蛋白于载玻片上,用手指充分抹匀,呈半干状为佳。

切片厚约4-8μm,将切片在55℃左右水浴中展开,展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。

用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片,放入37℃烘箱中过夜。

每个组织块捞片2张。

过夜后,将载玻片置于玻片架上,进行下面的实验。

(五)脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架,将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干,减轻对其他试剂浓度的影响。

肝纤维化几种病理染色方法及意义归纳

肝纤维化几种病理染色方法及意义归纳

肝纤维化几种病理染色方法及意义归纳徐艳华;金刚;巴图德力根;苏日古嘎;孙德志【期刊名称】《中西医结合肝病杂志》【年(卷),期】2018(028)006【摘要】目的:归纳肝组织各种病理切片染色方法,探讨不同方法在大鼠肝纤维化病理诊断中的意义.方法:将实验大鼠分为正常组和模型组,每组各8只,模型组腹腔注射30%CCl4橄榄油溶液2.0ml/kg,1次/4天,共7次,建立肝纤维化模型.取材肝组织制作病理切片,分别进行HE染色、弹力胶原纤维染色、网状纤维染色、Masson(马松)三色染色、天狼星红染色.结果:正常组大鼠肝组织各种染色均呈现正常形态.模型组大鼠肝脏切片HE染色示肝细胞变性、坏死,呈现大面积假小叶组织结构,属坏死后肝硬变;弹力胶原纤维染色示大量胶原纤维沉积,汇管区周围胶原纤维沉积,纤维条索较粗且染色着色较深,包裹,已形成假小叶;马松染色示大量蓝色胶原纤维沉积,自汇管区周围向外延伸,纤维条索较粗且染色着色较深,表明胶原纤维较多,已形成假小叶;网状纤维染色示网状纤维失去正常分布状态,自汇管区周围网状纤维塌陷、融合、增粗、包裹并已形成假小叶;天狼星红染色示各型胶原纤维自汇管区向外扩展,偏光镜下观察可见胶原沉积、扩展已形成假小叶,其中大量红色I型胶原纤维、绿色III型胶原,少量疏网状II型胶原纤维和淡黄色IV型胶原纤维.结论:HE染色可以观察细胞形态,弹力胶原纤维染色、网状纤维染色、Masson(马松)三色染色均能诊断肝纤维化,而天狼星红染色可以对肝纤维化组织中各型胶原纤维进行分型.【总页数】3页(P352-353,后插1)【作者】徐艳华;金刚;巴图德力根;苏日古嘎;孙德志【作者单位】内蒙古民族大学附属医院内蒙古通辽,028007;内蒙古民族大学附属医院内蒙古通辽,028007;内蒙古民族大学附属医院内蒙古通辽,028007;内蒙古呼伦贝尔市新巴尔虎右旗结核病防治所;内蒙古民族大学附属医院内蒙古通辽,028007【正文语种】中文【相关文献】1.否定形式表示肯定意义的几种情况归纳 [J], 孙小峰2.肾脏疾病的病理研究中常用的几种特殊染色方法 [J], 王兰英3.肾脏疾病的病理研究中常用的几种特殊染色方法 [J], 王兰英4.病理标本中细菌L型的染色方法及意义 [J], 姚敏;于东红5.几种去除病理教学标本肺内组织液染色前方法的比较 [J], 陶彩云因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下:
(一)固定与修块
取组织块放入Bouin氏液中,组织块的直径应小于7mm。

6小时左右后用双面
刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。

(二)脱水与透明
1.75%乙醇50分钟
2.85%乙醇50分钟
3.95%乙醇(I)30分钟
4.95%乙醇(II)30分钟
5.100%乙醇(I)30分钟
6.100%乙醇(II)30分钟
7 1/2二甲苯(乙醇与二甲苯等体积)20分钟
8.二甲苯(I)20分钟
9.二甲苯(II)10分钟(可依据透明效果而定)
若脱水不好,二甲苯溶液颜色会变混浊。

在每一步骤之后,要充分滤干组织
块,一般用筒纸吸干组织块上的液体,以免影响其他液体的浓度,但也要防止组织块干燥。

全过程约需要5h。

(三)浸蜡、包埋与修蜡块
1.浸蜡:
将60℃恒温箱打开,使石蜡充分溶解,待脱水与透明结束后,将
组织块转入石蜡里,放置于60℃恒温箱120分钟。

2.包埋:
将60℃的石蜡倒入纸盒内,然后用小镊子将各组织块按一定的顺
序排列好,使切面朝下。

不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中,以保证切片和染色条件相同。

为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固,可将纸盒置于一玻璃板上(或大培养皿内),然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上,包埋时蜡盒底部
要放平,做蜡块的蜡要反复冻融较好。

3.修蜡块:
待纸盒内蜡凝固后,用刀片将其修成梯形,组织块与蜡块边缘
之间的距离不得小于2mm。

(四)切片
在载玻片上擦少量甘油蛋白。

可滴半滴甘油蛋白于载玻片上,用手指充分抹
匀,呈半干状为佳。

切片厚约4-8μm,将切片在55℃左右水浴中展开,展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。

用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片,放入37℃烘箱中过夜。

每个组织块捞片2张。

过夜后,将载玻片置于玻片架上,进行下面的实验。

(五)脱蜡、染色与脱水
倾斜玻片架,将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干,减轻对其他试剂浓
度的影响。

全过程约需要60分钟。

1.脱蜡
(1)二甲苯(I)15分钟
(2)二甲苯(II)15分钟
(3)100%乙醇2分钟
(4)95%乙醇(I)1分钟
(5)95%乙醇(II)1分钟
(6)蒸馏水浸洗1分钟
2.染色
(7)xx精30秒钟
(8)自来水冲洗60秒。

(显微镜下观察效果)
(9)伊红(着色即可)10秒钟
(10)蒸馏水浸洗1分钟
3.脱水
(10)95%乙醇(I)1分钟
(11)95%乙醇(II)1分钟
(12)100%乙醇2分钟
(13)二甲苯(I)2分钟
(14)二甲苯(II)3-5分钟
(六)封片
将载玻片取下,滴加1~2滴中性树胶,用镊子夹住盖玻片的一角,盖上盖玻
片,之后倾斜载玻片,多余的中性树胶用筒纸吸干,室温下保存。

2.简要版:
肝组织HE染色切片制作过程
(1)取材与固定:
取大鼠肝右叶固定部位组织块,立即投入10%甲醛中,固
定48h。

(2)脱水透明:
组织修片,梯度酒精脱水,后二甲苯中透明。

动物组织切成0.2-
0.5cm的薄片,依次经过70%酒精2h--*80%酒精2h一95%酒精(I、II各2h)和无水酒精(I、II各1h)脱水,二甲苯透明(I、II各lh),以置换组织内的酒
精溶液。

(3)浸蜡包埋:
将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内,使石蜡浸入组
织并置换出其中的二甲苯。

将浸蜡的组织置于包埋器内,并滴入液化蜡进行组织包埋,后置于冰面上待其凝固。

(4)切片与贴片:
将蜡块固定于切片机上,切成5 u m厚的切片,在45"C
的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上,置于65℃烤箱烤3h。

(5)脱蜡:
切片置入二甲苯I、Ⅱ各15分钟,不同浓度酒精(100%5min
一95%5s一80%5s一70%5s)置换出其中的二甲苯,最后用PBS液洗净。

(6)HE染色:
将石蜡切片放入苏木精中染色5min一蒸馏水洗净一1%稀盐酸
分化一流水中充分冲洗返蓝,约20min;伊红染色5min,流水冲洗干净。

(7)脱水、透明:
染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%各5min),二甲苯透明(I、II各5min)。

(8)封固:
在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。

光学显微镜下观察组织病理变化,以i00倍放大率观察切片。

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