ABORhD血型定型检测试剂卡操作规程
abo及rhd微注凝胶卡标准操作流程
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ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南
输血相容性检测培训课件ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作指南【试验目的和原理】ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。
对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。
其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。
常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。
Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。
ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM 抗D抗体的凝胶。
A细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。
当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。
【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】1、用于输血前检测（1）鉴定ABO，以备选择 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2、用于围产期检查（1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。
（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。
人ABORHD血型抗原检定试剂使用说明书
人ABO、RHD血型抗原检定试剂使用说明书（微柱凝胶免疫检测法）[试剂名称]通用名：人ABO、RHD血型抗原检定试剂卡（微柱凝胶免疫检测法）英文名：HUMAN ABO、RHD BLOOD GROUPING `S CARDS （MIAOODUMN GEI IMMUNOASSAY）汉语拼：REN ABO、RHD XUEXING KANGYUAN JIANDING SHIJI KA（WEIZHUNINGJIAO MIANYI JIANCE FA）[原理、用途、特点]：本品将分子排阻层析原理应用于血型血清学检测，专供鉴定人ABO血型、RHD血型抗原，操作简单、快速，所需样本量少，使得临床检测规范化、标准化。
[本品成分]：本品系由聚丙烯塑料透明卡片，卡片上并排六支微柱型管中充填凝胶，从左向右顺序第1支至第3支和第4支至第6支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体试剂，称之为特异性胶，检测人红细胞ABO、RHD抗原。
[性状]：胶质均匀，胶面整齐，无气泡；液体透明，无杂质。
[适应症]：本品专供鉴定人ABO、RHD血型抗原的微柱凝胶免疫检测。
[用法用量]：标本采集：采集被检对象静脉血，将该血液制备成红细胞标本。
红细胞标本的制备：配制0.5%红细胞生理盐水悬液.[实验步骤]:(1)、将微柱凝胶试剂卡的6个凝胶管标号；（2）、将待检者0.5%红细胞悬液分别加入第1至第3管或第4至第6管中,每管50UL;(3)、即刻使用专用离心机离心，900r/min，2分钟、1500r/min，3分钟取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
16.卡式ABO、RhD血型检测操作规程
卡式ABO、RhD血型检测操作规程文件编号XN-XK-SXK-007第二版共 2 页生效日期年月日编写者：审批者：复审人：复审日期：医务科保管者：（签名）检验科主任：（签名）输血科：（签名）1.原理：在聚丙烯塑料透明卡片上的微柱型管中分别填充葡萄糖凝胶和抗A/抗B、或抗D，制成血型检测卡，在微柱凝胶中进行试验，用于检测人红细胞ABO、RhD血型。
2.标本采集与要求：采集被检对象静脉血，制成0.5～0.8红细胞生理盐水悬液。
3.试剂：长春博迅生物技术有限责任公司提供ABO、RhD血型检测卡。
4.仪器：4.1.F YQ型免疫微柱孵育器4.2.T D-3A型血型血清学用离心机5.操作步骤5.1.将试剂卡做好标记。
5.2.将待检红细胞悬液分别加入三支标注好的微柱型管中，每管1滴。
5.3.使用专用离心机离心5分钟，即2分钟900rpm，3分钟1500rpm取出肉眼观察结果。
6.结果观察：阴性结果：被检红细胞无相应的抗原与抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
阳性结果：红细胞抗原于相应抗体在微柱凝胶中形成特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性结果。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部凝集颗粒愈小，反应愈弱。
7.注意事项：7.1.为了便于鉴别，抗A微管略呈蓝色，抗B略呈黄色，抗D呈白色。
7.2.红细胞一定不能被细菌污染，否则会出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做实验。
如不得不用过夜血，则必须首先用该标本做阴性对照实验，已确定该标本是否可以做本试验。
7.3.如在微柱管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体反应，也不排除其他原因所致溶血，故对标本一定认真分析。
7.4.对于RhD阴性结果应作进一步确证试验，必要时送血型参比实验室。
8.参考文献：全国临床检验操作规程（第二版）。
S008红细胞ABO血型正定型RhD鉴定标准化操作规程
.资料Word.红细胞ABO血型（正定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型（正定型）与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正定型）与RhD血型。
三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。
微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，检测卡从左向右顺序第一支至第三支和第四支至第六支微柱凝集检测管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM试剂。
微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。
凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。
四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型（正定型）确认与RhD血型复查。
出五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；资料Word.六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）；2、试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：聚丙烯卡12卡×2检测人份/盒；5、贮藏条件；18-25℃避光保存。
6、有效期：自检定合格之日起12个月；7、试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥64；特异性试验合格。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、红细胞稀释悬液的制备：采用塑料试管将采集的标本配制成0.5～0.8%红细胞生理盐水悬液（10ul压积红细胞加入1.2ml生理盐水中）。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
人ABO、RHD血型抗原检定试剂使用说明书
人ABO、RHD血型抗原检定试剂使用说明书（微柱凝胶免疫检测法）[试剂名称]通用名：人ABO、RHD血型抗原检定试剂卡（微柱凝胶免疫检测法）英文名：HUMAN ABO、RHD BLOOD GROUPING `S CARDS （MIAOODUMN GEI IMMUNOASSAY）汉语拼：REN ABO、RHD XUEXING KANGYUAN JIANDING SHIJI KA（WEIZHUNINGJIAO MIANYI JIANCE FA）[原理、用途、特点]：本品将分子排阻层析原理应用于血型血清学检测，专供鉴定人ABO血型、RHD血型抗原，操作简单、快速，所需样本量少，使得临床检测规范化、标准化。
[本品成分]：本品系由聚丙烯塑料透明卡片，卡片上并排六支微柱型管中充填凝胶，从左向右顺序第1支至第3支和第4支至第6支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体试剂，称之为特异性胶，检测人红细胞ABO、RHD抗原。
[性状]：胶质均匀，胶面整齐，无气泡；液体透明，无杂质。
[适应症]：本品专供鉴定人ABO、RHD血型抗原的微柱凝胶免疫检测。
[用法用量]：标本采集：采集被检对象静脉血，将该血液制备成红细胞标本。
红细胞标本的制备：配制0.5%红细胞生理盐水悬液.[实验步骤]:(1)、将微柱凝胶试剂卡的6个凝胶管标号；（2）、将待检者0.5%红细胞悬液分别加入第1至第3管或第4至第6管中,每管50UL;(3)、即刻使用专用离心机离心，900r/min，2分钟、1500r/min，3分钟取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南
ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南1.介绍ABORhD血型定型检测试剂卡是一种常用的血液分析工具，用于确定人体血液的ABO血型和Rh/D血型。
本操作指南旨在为操作者提供准确、快捷地使用该检测试剂卡的步骤和要点。
2.材料准备- ABORhD血型定型检测试剂卡- 血液样本- 离心管- 显微镜- 阳性对照血清和阴性对照血清- 定量移液器3.操作步骤3.1 样本采集和处理- 使用消毒棉球清洁采血部位。
- 使用无菌注射器采集静脉血液样本。
- 将血液样本转移至离心管中，轻轻旋转离心管以使血液与抗凝剂充分混合。
- 将离心管置于离心机中，以3000rpm离心10分钟，分离血液中的红细胞。
3.2 取样并检测- 取出一张ABORhD血型定型检测试剂卡。
- 在卡上标记样本编号，并使用定量移液器吸取适量红细胞悬液滴于卡上。
- 沿指示箭头的方向，待悬液完全吸附在卡上后，使用5-6滴生理盐水洗涤红细胞悬液，不要过度洗涤。
- 滴加适量阳性对照血清于卡上，标记阳性对照血清位置。
- 滴加适量阴性对照血清于卡上，标记阴性对照血清位置。
- 在25°C±2°C的环境下，静置15分钟。
- 观察卡上各个区域的凝集反应，记录凝集结果。
4.结果解读- 根据凝集反应来判断血型。
- 如果出现红细胞聚集、凝结，即为阳性凝集反应。
- 未出现红细胞聚集、凝结，即为阴性凝集反应。
- 根据阳性和阴性凝集反应的位置，确定ABO血型和Rh/D血型。
5.操作注意事项- 操作前进行消毒，避免污染样本。
- 使用无菌注射器和离心管，确保血液样本的纯净性。
- 在操作过程中避免气泡的产生和进入。
- 在规定的时间内完成操作，避免时间过长或过短。
- 保持操作环境的恒定温度，确保操作结果准确可靠。
6.附件本文档涉及附件，请参阅附件部分。
7.法律名词及注释本文所涉及的法律名词及注释，请参阅法律名词及注释部分。
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
卡式ABO正反定型和RhD操作规程
1.方法原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB 型及O 型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或／和抗-B。
DiaMed系统采用微柱凝集技术，在微柱中加入凝胶，凝胶的间隙起到了分子筛的作用，通过离心来分离凝集和非凝集的红细胞，从而达到检测目的。
2.仪器：达亚美离心机3.试剂及配套品： ABO正反定/Rh定型卡，达亚美2号稀释液（ID-Diluent2），标准红细胞A1和B。
4.样本要求：4.1血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。
若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g×10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。
4.2 样本准备：5%样本红细胞制备：压积红细胞25 μl或全血50 μl悬浮于0.5 ml达亚美2号稀释液中。
5.操作程序 :5.1 取50μl A1,B 标准细胞（0.8%）分别加入A1,B管中。
5.2 取50μl 血清或血浆加入A1,B管中。
5.3 取10μl 5% 样本红细胞加入A, B, D, Ctl管中。
5.4离心10 分钟。
判读结果。
记录。
5.5 阳性（＋）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。
阴性（－）：细胞沉积在管底。
双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。
溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。
5.6 ABO血型判断6.临床意义6．1临床输血：当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗，医学教.育网搜集整理在输血前必须先选择血型相同的供血者，再进行交叉配血，完全相同后才能输血。
6.2在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体。
6.3不孕症和新生儿溶血症病因的分析。
6.4亲子鉴定等。
7.支持性文件：7.1中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第二版，东南大学出版社，19977.2 邱艳主编.全血成分血质量要求与血液标准化.中国标准出版社，2003 7.3 刘达庄主编．免疫血液学.上海科学技术出版社，2002.7：128-1377.4王培华主编.输血技术学.人民卫生出版社，第二版，20037.5李勇杨贵贞主编.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.第一版,中国科学技术出版社，1999。
ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程(盐水法)
ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程（盐水法）一．目的规范ABO/Rh (D) 血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。
二．职责血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型鉴定。
三．适用范围适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。
四．所需材料和设备1.材料抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。
2.设备普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。
五．操作步骤1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。
2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。
3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
页脚内容14.以1000r/分钟离心1分钟。
5.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。
6. ABO血型结果判定（见下表）：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型）受检者血清+试剂红细胞（反定型）抗-A 抗-B A细胞B细胞O细胞血型注：“＋”凝集；“－”不凝集7.Rh（D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性无凝集为Rh阴性。
8.凝集强度判断标准：页脚内容24+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；±镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；－（阴性）镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
【VIP专享】ABORhD血型定型检测试剂卡操作指南
输血相容性检测培训课件ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作指南【试验目的和原理】ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。
对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。
其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。
常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。
Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。
ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B 凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D 抗体的凝胶。
A细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。
当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。
【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】1、用于输血前检测（1）鉴定ABO，以备选择 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2、用于围产期检查（1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。
（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。
微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程
微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO和RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO正反血型和RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶免疫测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，则红细胞发生凝集形成红细胞免疫复合物。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
4.2.1ABO血型基础4.2.2Rh血型Rh血型系统包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。
5、样本采集和处理：受血者血样为EDTA-K2抗凝血。
抽取受血者静脉血1～2ml 于专用管（紫色头管）内，离心分离出血浆。
将细胞配成0.8%的悬液备用。
6、试剂：6.10.9%的生理盐水；6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2长春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3长春博迅公司的TD-3A型血型血清学专用离心机；8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。
准备样本，标记卡。
8.1.2 0.8%样本红细胞制备：将8μl压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。
8.1.3 将50μlA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。
将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。
ABORhD血型定型检测试剂卡操作规程
ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程【试验目的和原理】ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。
对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。
其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。
常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。
Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D 抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。
ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。
A细胞、B 细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。
当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】1、用于输血前检测（1）鉴定ABO,以备选择ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2、用于围产期检查（1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。
（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。
3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。
ABO、RhD血型鉴定
ABO、RhD血型鉴定操作规程一、目的指导规范本科工作人员进行血液ABO、RhD血型鉴定工作。
二、适用范围输血岗位工作人员。
三、职责负责对申请输血的标本进行ABO、RhD血型鉴定。
四、标本2mlEDTA-K2抗凝全血。
五、实验器材载玻片、0.5~10ul加样枪、20~200ul加样枪、100~1000ul加样枪、一次性吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。
六、实验试剂抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗体），RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）；0.5%~1%A、B标准红细胞盐水悬液；ABO、RhD血型定型检测卡；0.9%生理盐水。
七、检测原理血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合，能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性抗-A、抗-B和RhD标准血清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准A 红细胞和B红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然IgM类抗-A 或抗-B。
微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
八、操作流程1、玻片法1.1查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好A、B、Rh，分别向所标注位置加5ul待检全血，再向相应位置滴加抗-A、抗-B、RhD标准血清一滴，混匀。
1.2查抗体：台式离心机3000r/min离心待检标本2min，上清备用。
取洁净载玻片一张，记号笔标注Ac、Bc，相应加入A型、B型标准红细胞一滴，再分别加入待检血浆（清）20ul，混匀。
1.3将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续15min，肉眼观察有无凝集反应。
如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。
2、微胶凝柱法2.1标本准备：待检全血3000r/min离心2min，上清液为待检血浆；取压积红细胞10ul加入1000ul生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。
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ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程
【试验目的和原理】
ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。
对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。
其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。
常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。
Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。
ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。
A 细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D 凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。
当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应
【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】
1、用于输血前检测
（1）鉴定ABO，以备选择ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2、用于围产期检查
（1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。
（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。
3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。
【样本要求】
1、建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml 。
（EDTA抗凝采血管为紫帽管）。
2、血液样本在采集后48小时以内检测。
【所需仪器设备及耗材】
1、Rh血型分型卡（含抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及自身阴性对照）
2、血型血清学离心机（用于离心分离血浆、洗涤红细胞）
3、微柱凝胶卡离心机
4、微量移液枪及吸头
【试验操作】按照下列步骤进行操作
一、被检血液样本的处理及反定型A型、B型红细胞的准备
二、ABO、RhD定型
4 向B
细胞孔中加入50微升0.8-1%浓度的B 型红细胞。
5
分别向A 细胞、B 细胞、Ctr 孔中加入25微升被检者血浆。
6 在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的液体在卡的样品槽中
呈水平状态，而不是偏向一侧。
7 将卡放入微柱凝胶卡离心机离心，LB-3000低速离心机第一档离心5分
钟，判读结果并记录。
【结果判读及解释】
1、反应阴、阳性的判读
反应图
反应强度
4+
3+
2+
1+
双群 阴性
红细胞分布
凝集红细胞在
凝胶顶部表面，
呈线条形
凝集红细胞开
始进入凝胶，但
集中在凝胶顶
部及上半部分
凝集红细胞进入凝胶内部的中下部分 凝集红细胞集中在凝胶下半部分，且向底部集中
离心后凝集的红细胞位于凝胶顶部；而阴性红细胞集中在微管底部
所有红细胞通过凝胶，沉积在微孔底部
必须注意：如果红细胞发生凝集，预期其凝集强度≥2+ ; 如果反应弱于2+则需要进一步试验才能准确定型。
2、阴阳性结果解释
-A -B -D Ac Bc ctr 管 结果 ≥2+ 0 ≥2+ 0 ≥2+ 0 A 型D 阳性 0 ≥2+ ≥2+ ≥2+ 0 0 B 型D 阳性 0 0 ≥2+ ≥2+ ≥2+ 0 O 型D 阳性 ≥2+ ≥2+ ≥2+ 0 0 0 AB 型D 阳性 ≥2+ 0 0 0 ≥2+ 0 A 型D 阴性 0 ≥2+ 0 ≥2+ 0 0 B 型D 阴性 0 0 0 ≥2+ ≥2+ 0 O 型D 阴性 ≥2+
≥2+
AB 型D 阴性
【注意事项】
1. 血液样本建议是抗凝的样本，尤其是EDTA 抗凝的样本，以避免红细胞凝集块加入
凝胶引起假阳性反应。
2.按照临床输血技术规范，血液样本在采集后应该在48小时内进行检测。
3. 凝胶卡在使用前需仔细检查，若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸、凝胶中有
气泡时，不可使用。
4. 撕开凝胶卡封口膜时，不宜用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。
5. 被检的红细胞悬液的浓度为0.8～1%，浓度过高或过低会影响检测结果。
6. 溶血、脂血、细菌污染等情况的样本可影响检测结果。
7.被检红细胞在配制成0.8-1%浓度前必须洗涤1次，保证充分去除血浆成分，且
没有纤维蛋白不溶物，否则会阻击红细胞在微柱凝胶中的沉降，呈现假阳性反应。
8. 在Ctr孔（自身阴性对照）孔结果为阳性时，试验结果无效。
可能原因是由于被检
红细胞已经致敏IgM抗体导致自发凝集，此时可以用DTT将已经致敏到红细胞上的IgM抗体破坏后再行Rh分型试验。
9. 人源血液样本存在潜在的传染性，凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。
10. 抗D凝胶不能鉴定弱D、部分D（如DⅥ）抗原。
对于患者，如果抗D凝胶管中患
者的红细胞反应为阴性，则确定为RhD阴性。
11. 若出现＜2+的弱阳性反应，须做进一步试验才能准确定型，即确认弱反应是由于
被检者的抗原减弱还是凝胶微孔之间的交叉污染引起。
12. 若出现混合视野反应，需要了解被检者近期3个月内是否有输血史，或被检者是
否为骨髓移植患者。
13. 由于6月龄以下的婴儿其血浆/血清中不似成人一样存在可预见的抗A/抗B抗体，
因此只做正定型不做反定型。
【ABO正反定型不一致原因分析】
如果血型定型正反定型结果不一致时，则不能准确定型，需要分析产生不一致的原因。
引起正反定型不一致的原因如下：
（一）正定型出现弱反应或缺失抗原
１.Ａ亚型、Ｂ亚型或ＡＢ亚型。
２.白血病导致Ａ或Ｂ抗原减弱。
３.何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。
４.由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－Ａ或抗－Ｂ抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。
需要将正定型的红细胞用生理盐水洗涤后再次定型可解决此问题。
５.骨髓移植
６.非ABO同型输血
（二）正定型红细胞上多余的抗原反应
１.自身凝集红细胞、抗体致敏红细胞导致。
２.细胞未洗涤，血浆蛋白引起的假阳性反应。
３.细胞未洗涤，血浆中存在针对正定型试剂中某种成分的抗体导致。
４.骨髓移植。
５.获得性B。
６.B(A)现象。
７.ABO非相合输注。
（三）正定型出现混合视野反应
１.近期输血
２.骨髓移植
３.异卵双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。
４.胎儿和母体出血。
（四）反定型血清中出现弱反应或反应缺失
１.年龄相关：新生儿以及小于6月龄的婴儿以及老年人。
２.ABO亚型有亚型抗体，如A2、A2B型人的抗A1。
３.低球蛋白血症（如白血病人、使用免疫抑制剂患者、免疫缺陷患者）。
４.移植患者使用抗排异药物。
５.双胞胎或双受精卵产生的嵌合体。
（五）反定型出现多余的抗体反应
１.冷自身抗体
２.特异性冷同种抗体
３.血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。
４.某些疾病导致球蛋白水平增高（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起缗钱状凝集。
５.输用大分子血浆扩容剂。
６.非ABO同型的移植
７.静脉注射免疫球蛋白。
（六）技术方面的错误
１.血液样本被污染，如混入其他人样本。
２.被检红细胞的浓度过高或过低。
３.忘记在反应体系中加入检测样本或试剂。
４.未按照试剂使用说明进行试验。
５.离心步骤离心时间不足或离心时间超时。
６.对试验结果记录或判读不正确。