非小细胞肺癌患者靶向治疗前后自身配对血清差异蛋白的筛选PPT教案

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方法
所有样本同步采用弱阳离子分离微珠（WCX microbead） 预处理血清样本。采用Bruker公司的AutoflexTM基质辅助 激光解析离子化时间飞行（MALDI-TOF）质谱仪平台检 测。
数据用ClinPro Tools （Version 2.1）分析耐药前后血清差 异蛋白质峰。
All received former
chemotherapy ( 3 PR and
6 PD )
Median TTP: 172, range
127 - 378
Intens. [a.u.]
Medianx104 4
Survival: * 20071129guandongrenminyiyuan autoflex\13\1SLin Raw
then detected on the MALDI-
TOF-MS platform of Bruker
AutoflexTM. ClinProTools
(Version: 2.1) Software was
used to analyze the
结果
18份自身配对血清样本均成功获得质谱检测分析。 分析发现7个蛋白质峰在两组间表达有统计学显著
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patients
selection
Patients characteristics:
Median age 57 ( range 44-
71)
2 males and 7 females
Stage: IIIB (2); IV (7)
All adenocarcinoma
Effects: 4 SD, 5 PR
m/z
3242.09＊ 8690.36＊ 2952.64＊ 3224.04 1450.51＊ 1887.80＊ 3935.73＊ TTP (days) OS (days)
Patients
A
B
C
D
E
F
G
H
I
↓
↓
↓
-
↓
↓
↓
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-
↑
↑
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百度文库
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↑
paired sera samples at the time-points of one week before and just PD
after EGFR
TKI therapy
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结果
Tab 2. significant proteomic peaks between the self-matched serum samples befor and after EGFR TKI therapy
sampling serum
MB-WCX exchange enrichment
Bioinform atics
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MALDI-TOF
spectrometry
MALDI-TOF
MS
analysis:
All
samples were pre-separated
by WCX microbeads, and
4
2
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Intens. [a.u.]
Intens. [a.u.]
x1004
* 20071129guandongrenminyiyuan autoflex\9\1SLin Raw
5
4
3
2
1
x1004
* 20071129guandongrenminyiyuan autoflex\10\1SLin Raw
range 123 91-801 1
Intens. [a.u.]
0 x104
2.5
20071129guandongrenminyiyuan autoflex\4\1SLin Raw
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0 2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
20000 m/z
whileas↑means up-regulated. ＊indicates significant correlation with TTP (P<0.02), but not with OS.
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小结与展望
血清差异蛋白 3242.09, 8690.36, 2952.64, 3224.04, 1450.51, 1887.8 and 3935.73 (m/z)在NSCLC患者接受EGFR TKI 治疗出现耐药前后自身配对血清中表达显著改变.
初步分析提示上调或下调的血清蛋白与患者的疾病进展 时间（TTP）相关（P<0.02)，但与总生存无相关性。
该差异表达谱可能具有对TKI耐药预测 的意义。这些差 异蛋白的身份（ID）鉴定及其产生耐药的相关分子机制 需要进一步研究。
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MALDI-TOF技术可用于检测晚期NSCLC患者接受 EGFR TKI治疗耐药前后血清中的差异蛋白。但质谱 检测的稳定性及数值的重复性需要进一步研究。
性差异（P <0.05）。
分子量分别是3242.09、8690.36、2952.64、3224.04、
1450.51、1887.8及3935.73（m/z）。x104 6
* 20071129guandongrenminyiyuan autoflex\20\1SLin Raw
Intens. [a.u.]
初步分析提示蛋白差异峰的改变与患者的TTP有 相关性，而与总生存时间（OS）无相关性。
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结果
2952.64 Da
Fig 1. Significantly differential expression of protein peak of 2952.64 Da (m/z)
between
自身配对血清样本的收集：按照质谱检测标准程序，收集 患者在接受EGFR TKI前及治疗后出现进展前一周时的血 清，冻存于－80℃备用。
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Tab 1. numbering of pairs of serum samples of NSCLC patients sent for MALDI-TOF MS analysis
能否从血清中获得患者对TKI耐药相关的生物标 志物？
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目的
探索晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患 者接受上皮细胞生长因子受体 （EGFR）酪 氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗疗效相关的血 清生物标志物。
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方法
晚期NSCLC患者选择: 男性2个、女性7个。中位年龄57岁 （44－71）。IIIB 期患者2例及 IV期7例。均为腺癌。TKI 疗效4例SD，5例PR。均接受过以前化疗( 3 PR 及6 PD)。 中位进展时间为172天（127 – 378），中位生存为 429天 （191-801）。
Serum sampling time
Patients
AB C D E
FG H I
One week before TKI therapy First week after TKI
20 15 19 17 16 9∕ 2 ∕ ∕
85 7 ∕ ∕ ∕ ∕ 13
Timepoint of PD after TKI therapy 10 1 6 18 12
进一步能够用于NSCLC患者的EGFR TKI 耐药预测的 分子标签（molecular signature）需要进一步严谨设计 并扩大样本量进行鉴定和验证。
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谢谢!
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429,
Biomarker discovery/ identification
Samples collection: all serum samples were from
advanced NSCLC patients receiving EGFR TKI (Gefitinib/Elotinib) therapy. Sampling time was 9:00am without breakfast, and serum was collected from peripheral blood and kept under -70℃
非小细胞肺癌患者靶向治疗前后自身配 对血清差异蛋白的筛选
会计学
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1
背景
EGFR TKI 越来越多用于晚期NSCLC患者，包括 I线及II线治疗及老年患者。
患者使用EGFR TKI最终会出现耐药进展，其耐 药机制（EGFR T790M等，尚不完全清楚），预 测耐药的研究有助于及早更改治疗方案。
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378 172 377 165 127 273 168 168 361
700 290 754 191 429 562 273 801 268
↓means the protein peak (left column) down-regulated at the time point of PD after TKI therapy compared with one week before or the first week after TKI therapy,
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
m/z
结果
与基线对照相比，耐药时血清中有三个差异蛋白 （3242.09、2952.64及3224.04）显著下调。四个 蛋白（8690.36、1450.51、1887.8及3935.73）显著 上调。
其身份有待于进一步富集后分析或通过二级质谱 分离鉴定。