葡萄球菌生物膜的形成及影响因素pdf

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ｔｉｖｅｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒａｓｓａｙｕｓｉｎｇｔｒｙｐｔｉｃａｓｅｓｏｙｂｒｏｔｈ．Ｇｌｕｃｏｓｅ，ａｌｃｏｈｏｌａｎｄＮａＣｌｗｅｒｅａｄｄｅｄｔｏｔｈｅｍｅｄｉｕｍｓｅｐａｒａｔｅｌｙｔｏｔｅｓｔｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｏｎｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＢｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙ２６．２０ｏｏｆＳ．ａｕｒｅｕｓ，ａｎｄ１２．７％ｏｆｃｏａｇｕｌａｓｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（ＣＮＳ）ｉｓｏｌａｔｅｓａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＣＲＡ．Ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆｂｉｏｆｉｌｍ－ｆｏｒｍｉｎｇｂｙＳ．ａｕｒｅｕｓｉｎＴＳＢ，ＴＳＢ＋０．２５％ｇｌｕｃｏｓｅ，ＴＳＢ＋２％ａｌｃｏｈｏｌ，ＴＳＢ＋４％ａｌｃｏｈｏｌ，ＴＳＢ＋２％ＮａＣｌａｎｄＴＳＢ＋４０ｏＮａＣｌ
三、方法（一）生物膜定性
作者单位：１．大连医科大学附属二院检验科，１１６０２７，
２．大连大学检验系９９级。作者简介：聂大平（１９５６一），女，主任检验师，硕士，主要从事细菌与抗生素相互作用研究。
凝固酶阴性葡萄球菌（ＣＮＳ）和金黄色葡萄球菌（金葡菌）已成为静脉导管或其他医疗装置相关感染的主要病原菌，这与葡萄球菌产生细胞间脂多糖赫
材料与方法
一、菌株药物的作
用，并降低机体免疫功能和细胞的吞噬功能，致使感染难以治愈［［１－２１。为了解葡萄球菌形成生物膜的状况及影响因素，我们用刚果红和半定量微量平板法对１４０株葡萄球菌进行生物膜定性定量分析，同时了解葡萄糖、乙醇、氯化钠等因素对生物膜形成的影响，现报道如下。
按文献［１〕选择血平板分离
通讯作者：王玉梅，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｅｓｉｅｏ７２５，ｓｔｕｄｅｎｔ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ，
的单个菌落接种于刚果红培养基（刚果红０．８ｇ／Ｌ，脑心浸液干粉４７ｇ／Ｌ，蔗糖３６ｇ／Ｌ），３７ ℃培养
ＢｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｆａｃｔｏｒｓ
ＮＩＥＤａ－ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧＹｕ－ｍｅｉ，ＷＡＮＧＷｅｉ－ｄｏｎｇ，ＬＩＵＴｉｎｇ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｅｃ－ａｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＤａｌｉａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０２７，Ｃｈｉｎａ）
ａｕｒｅｕｓａｎｄＣＮＳｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓｃｏｕｌｄｆｏｒｍｂｉｏｆｉｌｍ．ＧｌｕｃｏｓｅａｎｄａｌｃｏｈｏｌｃａｎｆａｃｉｌｉｔａｔｅｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ；Ｂｉｏｆｉｌｍ
二、生物膜半定量检测结果阳性株筛选条件为：阴性对照平均值士３倍标准差（ＣＮＳ阴性对照为０．０７９士０．０１７），阳性标准＞０．１３，ＣＮＳ生物膜阳性率ＴＳＢ，ＴＳＢ－０．２５０ｏＧ１ｕ，ＴＳＢ－２０ｏＡｌｃ，ＴＳＢ－４％Ａｌｃ，ＴＳＢ－２０ｏＮａＣｌ和ＴＳＢ－
收集本院住院、门诊病人的尿、痰、分泌物和伤口等标本中葡萄球菌１４０株，有７９株是ＣＮＳ，其余６１株为金葡菌。二、试剂及仪器培养基：胰酪膝大豆肉汤（ＴＳＢ杭州天和微生物试剂有限公司），脑心浸液琼脂（ＯＸＯＩＤ产品）；葡萄糖（Ｇｌｕ）、蔗糖、氯化钠（ＮａＣＩ）、无水乙醇（Ａ１０，刚果红、蕃红花Ｔ均为国产分析纯。％孔板酶标仪ＥＬ３４０为美国产品。
ｗｅｒｅ１４．７％，２９．６０ｏ，３２．７００，１９．６００，１３．１％ａｎｄ１４．６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＡｓｆｏｒＣＮＳｉｓｏｌａｔｅｓ，ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｉｎｃｏｒｒｅ－
Ａｂｓｔｒａｃｔ；ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅ，ａｌｃｏｈｏｌａｎｄＮａＣｌｏｎｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｉｏｆｉｌｍ－ｆｏｒｍｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＣｏｎｇｏｒｅｄａｇａｒ（ＣＲＡ）ａｎｄａｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａ－
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物膜的菌落变为黑色，不产生生物膜的菌落仍然为
红色。
２６．２００，７９株ＣＮＳ中有１０株产生生物膜，阳性率为１２．７００。两者阳性率差异有显著性（才＝４．０５，尸
＜０．０５）。
（二）生物膜半定量按文献［２］血平板分离的单个菌落接种于５ｍｌＴＳＢ，调成０．５麦氏浓度，３７０Ｃ培养１２ｈ。分别用ＴＳＢ，ＴＳＢ－０．２５％Ｇｌｕ，
ｓｐｏｎｄｉｎｇｍｅｄｉａｗｅｒｅ１３．９０ｏ，２７．８％，２６．５０ｏ，２２．７％，１８．５０ｏａｎｄ２１．５０ｏｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＣｅｒｔａｉｎｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＳ．
ＴＳＢ－２％ＮａＣＩ，ＴＳＢ－４０ｏＮａＣｌ，ＴＳＢ－２０ａＡｌｃ（Ａｌｃｖ／ｖ）、ＴＳＢ－４０ｏＡｌｃ１：１００稀释后，加人％孔板，每孔２００川，每株菌６个平行孔，３７ ℃培养２４ｈ后，使用蒸馏水洗板３次，加人０．１％蕃红花Ｔ染液２００川染１
２４ｈ后，再在室温放置２４ｈ，金葡菌置７２ｈ。产生生
中国杭感染化疗杂志２００５年４月３０日第５卷第２期ＣｈｉｎＪＩｎｆｅｃｔＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ａｐｒ．２００５，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．２
聂大平’ ，王玉梅，，王卫东’ ，刘婷２
摘要：目的了解临床标本中葡萄球菌形成生物膜的状况，及葡萄糖、乙醇、氛化钠对生物膜形成的影响。方法采用刚果红、微量平板法检测生物膜形成及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。结果刚果红法检测金黄色葡萄球菌（金葡菌）、凝固酶阴性葡萄球菌（ＣＮＳ）生物膜阳性率分别为２６．２％和１２．７％；生物膜半定量法，金葡菌：普通肉汤、０．２５％葡萄糖、２％，４％乙醇，２００，４００抓化钠阳性率分别为１４．７００，２９．６％，３２．７％，１９．６％，１３．１％和１４．６％；ＣＮＳ分别为１３．９％，２７．８％，２６．５％，１８．５％和２１．５００。结论临床标本葡萄球菌相当一部分能产生生物膜，葡萄糖、乙醇能促进生物膜形成。关键词：葡萄球菌；生物膜中图分类号：Ｒ３７８．１１文献标识码；Ｂ文章编号：１００９－７７０８（２００５）０２－０１０６－０３
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中国抗感染化疗杂志２００５年４月３０日第５卷第２期ＣｈｉｎＪＩｎｆｅｃｔＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ａｐｒ．２００５，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．２
・实验研究・
葡萄球菌生物膜的形成及影响因素
ｍｉｎ，再用蒸馏水洗板３次，加人蒸馏水２００川，用酶
标仪４９０ｎｍ比色，读取数值。每个％孔板包括空白对照（单纯ＴＳＢ）、阴性对照。选刚果红培养阴性，半定量培养２０次均与空白对照吸光度值相近，为阴性对照株。四、统计学处理卡方检验和方差分析对６组生物膜阳性率及吸光度进行统计学处理。