高效液相色谱_荧光检测法测定人血清中丙戊酸钠浓度_崔一民
高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量
第 卷第 期色 谱年 月高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量α肖 红 张石宁南京医科大学附属脑科医院 南京提 要 建立了血清中丙戊酸的高效液相色谱快速分析法∀用 柱 硫酸水溶液为流动相 检测波长 流速 线性范围 Λ ∗ ρ 最低检测限 Λ 平均回收率为 日内与日间的变异系数分别为 ν 和 ν ∀关键词 高效液相色谱法 丙戊酸 血浓度分类号前言丙戊酸钠和丙戊酸镁为目前较常用的抗癫痫药∀临床监测血中丙戊酸常用气相色谱法 荧光偏振分析法 高效液相色谱法 ∀这些方法很繁琐∀本文建立的高效液相色谱直接分析法不需衍生反应 可用于临床药物监测及药物动力学研究∀实验部分试剂及血样 丙戊酸钠标准对照品 连云港制药厂 Α 苯溴乙酮 比利时 公司 其它试剂为分析纯∀水为重蒸去离子水∀空白血清来自江苏血站∀病人血样采自本院单服丙戊酸钠一个月以上的癫痫病人 服药后 抽血 分离血清放入冰箱中备用∀色谱条件 岛津 型高效液相色谱仪 紫外检测器 数据处理机 色谱柱为 ≅ 粒径 Λ 流动相为硫酸水溶液 流速 检测波长 柱温 ε 灵敏度进样量 Λ ∀色谱图见图∀图 标准品 α 血清 β 和血清 标准品 χ 色谱图Φιγ Χηρο ατογρα σοφστανδαρδϖαλ ροιχαχιδ ασερυ β ανδστανδαρδ σερυ χ血样处理 取血清 加入 硫酸 和 正戊烷 振荡 离心取上层正戊烷液于另一试管中 在 ε水浴中挥干 残渣用 Λ 水溶解 进样 Λ ∀结果与讨论线性关系及检测限 在空白血清中加入不同浓度的丙戊酸钠 分别配制成系列浓度标准血清各按 节处理后测定 得浓度Χ与峰面积Α的线性回归方程Α ≅ Χρ ∀线性范围为 Λ ∗最低检测浓度为 Λ ∀ 回收率及精密度 配制浓度分别为 Λ 的含丙戊酸标准血清各 份分析测定测得丙戊酸的平均回收率为 结果见表 ∀取浓度为 Λ 含丙戊酸的标准血清份 当日测定 求得日内变异系数为 ν 另取样品 份 每日测一份 连续 天 求得日间变异系数为 ν ∀表 血清中丙戊酸的回收率 νΤαβλε Ρεχοϖερψοφϖαλ ροιχαχιδινσερυ ν配制浓度Λ测得值Λ 回收率平均回收率讨论 流动相 值的变化 对丙戊酸的分离影响较大∀ 时 丙戊酸峰与血清中杂质峰不能分离 时 丙戊酸峰扩展 拖尾严重∀故本文选定流动相最佳 值为 ∗ ∀用两种方法同时测定了 份标准加样血清和 份服用丙戊酸钠病α本文收稿日期 修回日期表 衍生化法与直接法测定比较 Λ ολ ΛΤαβλε Χο αρισονβετωεενδεριϖατιζατιον ετηοδανδδιρεχτ ετηοδ Λ ολ Λ样品衍生化法测得值直接法测得值ΛΛ Λ人血清 见表 ∀结果表明本法快速 准确 可以作为临床用药监测血药浓度的一种方法∀参考文献王宏毅 阮旭中 宋丙鹏 临床神经病学杂志∗∆ετερ ινατιονοφςαλ ροιχΑχιδΛεϖελινΣερυ βψΗιγηΠερφορ ανχεΛιθυιδΧηρο ατογρα ηψΝανϕινγΒραινΗοσ ιταλ ΝανϕινγΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ ΝανϕινγΑβστραχτ ≅ Λ Λ Λ ρ Λ ν ν Κεψωορδσ色 谱卷。
一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法[
专利名称：一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：代伟,李兰兰,虎亚光,杨涛
申请号：CN202010320591.6
申请日：20200422
公开号：CN111337601A
公开日：
20200626
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，是将催化剂、丙戊酸衍生化试剂置于密闭玻璃管中，采用一锅煮合成法制备得到的衍生物。
本发明提供的一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，利用超声化学原理，加速分子运动，促进衍生化反应，提高反应效率，缩短反应时间；采用“一锅煮”的方法，简化衍生化反应后处理步骤，无需蒸干或氮气吹干再加流动相溶解进样，可减少因挥发或氮气吹干导致的衍生化产物的损失；而采用衍生化结束后冰浴冷却吸取下层溶液直接进样，后处理方法简便，同时减少误差，为高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度提供一种高效、快捷、方便的衍生化方法。
申请人：代伟
地址：730050 甘肃省兰州市七里河区七里河北街89号(甘肃省妇幼保健院)
国籍：CN
代理机构：兰州锦知源专利代理事务所(普通合伙)
代理人：勾昌羽
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HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化
HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【摘要】为了研究HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度衍生时的最佳衍生条件,探讨不同衍生条件对血药浓度的影响,本实验采用L9(34)正交实验设计,以衍生试剂浓度、催化剂浓度、衍生温度和衍生时间为考察因素,确定最佳衍生条件.结果显示,A2B2C3D1为最佳衍生条件,即衍生试剂为2.0 mg/mL,催化剂浓度为20%,衍生温度为60℃,衍生时间5 min为最佳衍生条件.不同的衍生条件对测定结果有显著影响(P<0.05),且衍生反应的主次因素为衍生试剂浓度>衍生温度>催化剂浓度>衍生时间.由此可知,优化后的衍生条件方法回收率高,节约时间和成本,简便可行.%In order to optimize the derivatization conditions when the HPLC method was adopted to monitoring the serum concentration of sodium valproate, and investigate the influence of different derivatization conditions on serum concentration of sodium valproate, L9 (34) orthogonal experimental design was used to determine the optimal derivatization conditions, the concentration of derivatization reagent, catalyst concentration, temperature and time was used as study factors. Results showed that A2B2C3D1 combination was the optimal derivation conditions, so the best derivation condition was that the concentration of derivatization reagent was 2.0 mg/mL, the catalyst concentration was 20%, the reaction temperature was 60℃, and time was 5 min. Different derivatization conditions had a significant effect on the determination results (P< 0.05). The primary and secondary factors for the derivatization reaction were derived reagent concentration > derived temperature >catalyst concentration >derivatization time. These findings in our research showed that the optimized derivation condition method had high recovery rate, saves time and cost, and simple and feasible.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】6页(P176-181)【关键词】衍生条件;丙戊酸钠;血药浓度;正交实验;优化【作者】胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【作者单位】石河子大学药学院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学药学院,新疆石河子 832002【正文语种】中文【中图分类】R927.2丙戊酸（valproic acid，VPA）钠是临床上常用的一线抗癫痫药，是癫痫综合征、大发作、失神性发作、肌阵挛性发作的首选。
高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量
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高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量
最低 检 出质 量 浓 度 为 １６ ｇ ｍ ， 均 回收 率为 ９ ．７ ， ．４￣ ／ Ｌ 平 ８ ３ ％ 其他 常 用抗 癫 痫 药物 不 干扰 测 定 ， 分析 范 围 内具有 良好 的 线性 关 系。 在 结论 该 方
丙戊 酸钠又名二丙 基乙酸钠 ， 至今仍 是临床上使用 较多 的抗
癫痫 药 物 。 由于 丙 戊 酸 钠 的 治疗 剂量 范 围 窄 ， 效 及 毒 性 与 血 药 浓 疗 度 关 系密 切 ， 患 者 间个 体 差 异 很 大 ， 且 因此 对 其 体 内血 药 浓 度 进 行 监 测 十分 必 要 。 丙戊 酸钠 分 子结 构 中缺 乏 有 效 的 紫外 吸 收 ， 用 因 采 紫外 检 测 的高 效 液 相 色 谱 （ Ｐ Ｃ 法 测 定 其 血 药 浓 度 时 灵 敏 度 较 ＨＬ） 低 且 干 扰 因素 多 ， 以 大 多 采 用 荧 光 检 测 的 Ｈ Ｌ 所 Ｐ Ｃ法 ， 检 测 条 件 但 要 求 比较 高 。 者 利 用 丙 戊 酸 钠 与 溴 苯 乙酮 在 一 定 条 件 下 衍 生 化 笔 后 具 紫 外 吸 收 的特 点 ， 立 了 比较 简 单 的紫 外 检 测 的 Ｈ Ｌ 建 Ｐ Ｃ法 ， 并 常 规监 测 了 ２ 例 癫 痫 患 者 ， 报 道 如 下 。 ０多 现
２ ０ 第 ｌ 第 ６期 ０９年 ８卷
药物 研究
高效液相色 谱法测定人血清 中丙戊酸钠 含量
展 翔 徐 ，
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度杨涛;沈杰【摘要】目的建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)005【总页数】6页(P679-684)【关键词】高效液相色谱法(HPLC);同型半胱氨酸(Hcy);半胱氨酰甘氨酸(CysGly);半胱氨酸(Cys);谷胱甘肽(GSH)【作者】杨涛;沈杰【作者单位】复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040;复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2生物硫醇，如半胱氨酸（cysteine，Cys）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），在生物组织和体液中广泛分布，并且在生物系统中起着非常重要的作用［1-2］。
反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
ｌ ｅＩ ／ ｈ ａ ｇ （ ４ ４ Ｚ ８．ｈ ｉ ； ｉ ｅ ｒｎ ｅ １ ７ ｎ ｒ ｆ ４ ｔ￡ ， 】Ｌ ） （【Ｌ ＿】 ：Ｔｈ ｌｏ 帆 １ ’ Ｉ ． （ ｃｍｃｈ ｄ
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｛ ｊ ７ Ｉ ４１ 采 ￣ｍ 摘要： 目的 ： 剧定凡血 清中丙戊瞳钠浓度 方 以反相高效液 搠色谱法 甲辞 水 ｆ ０ Ｉ】为流 动 相 蹬测 波 长 为 ２ ，： ； 用衍 生 击： ‘ 法 ． 己 境鞋 美 为 内标 结 果 雨 戊驻 钠 求 度 在 １ ４ ２ ８ ｆ ｇ 【ｌ ￡ 环 ● ７ １ Ｉ 范禹 内呈 现 ＆奸 线 性 关 系 结论 ： 方 法 简 便 、 确 ． 合 于 ｆ １ 谴 准 适 朱血 药 浓 度监 羽 ！ 关 键词 ： 反扫 高效 液 千 色谱 法 ： 戊 酸 钠 ； 生 化 目 丙 衍 Ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｎ ｅ ｒ ｔｏ ｆ Ｖａ ｐ ｏ ｃ Ａｃ ｄ ｉ ｅ ｎ Ｗ ｉｈ ＲＰ— ＨＰ ｅ ｅ ｍ ｎ ｔｏ ｆ ｔ ｅ Ｃｏ ｃ ｎｔ ａ ｉ ｎ ｏ ｌ ｒ ｉ ｉ ｎ Ｓ ｒ ｍ ｔ ＬＣ
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EMIT法与HPLC法测定人血中丙戊酸浓度的比较
【 文章 编 号１ ６ ４ ４ ２ （ ０ ） ９ ｃ 一 ０ — ３ １ ７ — ７ １ ２ １ ０ （ ）０ ５ ０ １
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改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度
改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度沈陈军;陈新贵;王勇;胡秀萍【摘要】Objective:To improve the high performance liquid chromatography( HPLC) for determination of the sodium valproate concentration in human serum in order to supply evidence with rational use of this drug.Methods:Cyclohexanecarboxylic acid was used as the internal standard.The serum samples were extracted with n-hexane after acidification and precipitation by sulphuric acid ,and subjected to treatment with 2-bromoacetophenone as derivative rea-gent and triethylamine as catalytic agent.Then the samples were determined by HPLC as protocol:chromatographic column,ZORBAX SB-C18(150 mm × 4.6 mm,5 μm);mobile phase,methanol-water(72∶28) at flow rate of 1.0mL/min;detection wavelength set at 248nm;the column temperature at 25℃, and sample size in 10 μL.Results:The linear range of sodium valproate was 13.3-160.7 μg/mL(r=0.9979,n=6).The recovery rate for the sodium valproate in low,middle and high concentration and extraction recovery rate was 88.6%-107.2% and 82.1%-89.5%,respectively.The RSD of intra-day and inter-day were less than 6.4% and 8.2%,respectively.Conclusion:The modified HPLC technique can satisfy the needs of clinically monitoring the valproate concentration in patients,for it has higher specificity and accuracy as well as better linear dependence and reduced laboratory cost.%目的：建立改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度，为临床合理使用丙戊酸钠提供依据。
HPLC测定人血浆中丙戊酸钠的浓度
ｍＩ 。方 法 回 收 率 为 ９ ８ ． １ ４ ～１ ０ ５ ． ９ ３ ， 萃 取回收率为 ８ ３ ． ５ ８ ～８ ７ ． ５ ８ 。 日内 日问 Ｒ Ｓ Ｄ ％１ ０ 。结 论 该 方 法快速 、 准确 、 重复性好 ， 适 用 于 临 床 丙戊 酸 钠 的 血 药 浓 度 监 测 。
关 键 词 ：高效液相色谱法 ；丙戊酸钠 ； 药 动学 ； 血药浓度
中图分 类号 ： Ｒ ９ ６ ９
文献 标 志码 ： Ａ
文章 编 号 ：２ ０ ９ ５ ４ ７ ２ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７ —０ ０ ２ ２ —０ ２
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运用高效液相色谱法测定血液中4种抗癫痫药的浓度-药学论文-基础医学论文-医学论文
运用高效液相色谱法测定血液中4种抗癫痫药的浓度-药学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——PB、PHT 和CBZ 是传统的一线抗癫痫治疗药物, 由于这3 种抗癫痫药物的有效血药浓度范围较窄, 患者之间个体差异较大, 抗癫痫作用和毒性与在体内的血药浓度有很大的相关性, 需要进行血药浓度的监测和个体化给药。
LTG 是一种苯三嗪类的新型广谱抗癫痫药, 由于该药与目前常用的抗癫痫药如PHT、CBZ 等在药动学上存在相互作用, 导致个体间血药浓度差异较大, 临床使用时也需要进行血药浓度的监测和个体化给药。
高效液相色谱法同时测定血清中LTG、PB、PHT 和CBZ 浓度国内已有报道。
文献［1-3］中使用的流动相依次为甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(20∶13.5∶66.5)、乙腈-磷酸盐缓冲液(30∶70)、甲醇-磷酸盐缓冲液(56∶44, V/V,pH5.5), 所用流动相多含有无机盐或酸, 在实际临床应用中操作繁琐, 不利于日常工作的开展。
本实验室采用甲醇-水(55∶45) 为流动相, 建立了更为简单、方便的高效液相色谱法,同时测定上述 4 种药物的血药浓度, 适用于医疗机构开展常见抗癫痫药物的血药浓度监测。
1仪器与试药1. 1仪器戴安P680 高效液相色谱仪, AUW120D 电子天平( 日本岛津), WH-866 旋涡混合器, TGL-16A(B) 高速离心机。
1. 2试药LTG 对照品( 中国食品药品检定研究院, 批号：100775-200401) ；PB( 中国食品药品检定研究院, 批号：1222-9602) ；PHT( 中国食品药品检定研究院, 批号：100210-201002) ；CBZ( 中国食品药品检定研究院, 批号：100142-201105) ；甲醇为色谱纯；水为重蒸水。
1. 3统计学方法采用DAS2.0 药物代谢动力学软件对数据进行回归分析。
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度摘要】目的：建立人体外周血中丙戊酸钠浓度检测方法。
方法：色谱柱Pronaos EP-C18柱，流动相：乙腈-水（70:30），流速：1.0mL?min-1，进样量为20μL，柱温35℃，检测波长λ=248nm。
结果：本法在丙戊酸钠浓度（X）为11.5～115μg?mL-1(r=0.9999)内线性关系良好。
三种不同浓度（11.5、46.0、115.0?g?mL-1）相对回收率分别为98.26%、99.35%、99.47%，精密度的RSD小于5%。
结论此法样本需求量少，血浆处理方法简单，具有专一性，适用于临床丙戊酸钠血药浓度监测。
【关键词】丙戊酸钠；血药浓度检测；高效液相色谱【中图分类号】R446.112 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）13-0376-02丙戊酸钠为广谱抗癫痫药，其抗痫谱广、疗效高，是较理想的抗癫痫药物。
近年来，临床用于治疗偏头痛、原发性三叉神经痛、迟发性运动障碍等也有较好疗效[1-2]，但其在临床上的治疗指数低，安全有效血药浓度范围较窄，而且服药周期长，容易发生不良反应[3]。
患者长期服用丙戊酸钠治疗的过程中，密切注意影响丙戊酸钠血药浓度波动的因素，必须综合考虑各方面的因素，实行个体化给药，以血药浓度为依据，而确保患者的用药安全。
本法通过优化血浆中丙戊酸钠提取方法，减少干扰因素，通过HPLC法测定肿瘤患者血浆中丙戊酸钠的含量，其专属性强、结果可靠，为临床使用丙戊酸钠做好药学监护提供了依据。
1.仪器与试药LC100高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；BSM电子天平（上海卓精电子科技有限公司），HX-03超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）。
丙戊酸钠对照品由中国食品药品生物制品检定研究所提供（批号：100963-201302）；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；正己烷、甲醇、三乙胺均为分析纯；空白血浆由血库供应。
高效液相色谱法测定丙戊酸镁血药浓度的方法改进及质控评价
高效液相色谱法测定丙戊酸镁血药浓度的方法改进及质控评价杨颖达;何秋月;李德秀;王天褀【摘要】目的改进测定人血清中丙戊酸镁浓度的高效液相色谱法.方法血清样品经1.0 mol/L硫酸沉淀,以环己甲酸为内标,以2-溴-4′-硝基苯乙酮为衍生试剂.采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Hypersil C18柱(200 mm×4.6 mm,10μm),流动相为甲醇-水(81:19),检测波长为265 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃.并对2016年度医院216份质控样本进行统计分析.结果内标和丙戊酸镁衍生物的保留时间分别为4.1 min和5.4 min,质量浓度线性范围为11.0~200.0μg/mL(r=0.9993),平均回收率为98.2%~102.5%,批内、批间精密度RSD<2.3%,稳定性试验RSD<3.9%,2016年度质控数据批间RSD<15%,符合2015年版《中国药典(四部)》要求.2016年度质控基本符合正态分布,所有质控数据均为在控.结论改进后的方法简便、快速、准确,适用于临床丙戊酸镁血药浓度监测,室内质控评价保证了血药浓度监测质量.%Objective To improve the HPLC method for determining the concentration of magnesium valproate in human serum. Methods The serum was precipitated by sulfuric acid ( 1. 0 mol/L ) , the cyclohexane carboxylic acid was used as an internal standard and 2-bromo-4′-nitroacetophenone was used as derivation agent. The HPLC method was used, the chromatographic column was C18 column ( 200 mm × 4. 6 mm, 10 μm ) , the mobile phase was methanol-water ( 81:19 ) , the detection wavelength was 265 nm, the flow rate was 1. 0mL/min, and th e column temperature was 25 ℃. Totally 216 quality control samples of the hospital in 2016 were statisti-cally analyzed. Results The retention time of cyclohexanecarboxylic acid derivate and magnesiumvalproate derivative were 4. 1 min and 5. 4 min, respectively, the linear range was 11. 0-200. 0 μg/mL ( r=0. 9993 ) , and the average recovery was 98. 2% -102. 5%, the RSDs of within batch and between batch were less than 2. 3%, RSD of stability was less than 3. 9%, RSD of quality control data in 2016 were less than 15%, which accorded with the requirement of Chinese Pharmacopoeia ( 2015 Edition, Volume Ⅳ) . The quality control basically accorded with the normal distribution in 2016, and all the quality control data were in control. Conclusion The improved method is simple, rapid and accurate, it is suitable for monitoring the concentration of magnesium val-proate in serum, and the internal quality control ensures the monitoring quality of serum concentration.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2017(026)023【总页数】4页(P10-13)【关键词】丙戊酸镁;高效液相色谱法;血药浓度监测;质控评价【作者】杨颖达;何秋月;李德秀;王天褀【作者单位】湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000【正文语种】中文【中图分类】R914.1;R971+.6丙戊酸镁（magnesium valproate）是继丙戊酸钠后的临床一线抗癫痫药[1]。
柱前衍生HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度及其临床应用
例数
9 12 2
百分率 / %
39. 1 8. 7 52. 2
3 讨论 3. 1 色谱条件的选择 本法采用 2 溴苯乙酮为衍生化试剂 , 在三乙胺的催化下 , 反应完全彻底 ; 经试验发现 VPA 在波长 262 nm 处吸收最强 ; 流动相选择甲醇 ∶ 水 ( 65 ∶ 35) , 基线稳 定 ,流动相不需使用缓冲液等盐类物质 ,有利于保护色谱柱 ; 萃取选用二氯甲烷 、 二氯甲烷 /乙醚 、 正戊烷 、 正己烷 [ 4, 5 ] ,经反 复试改 ,用正戊烷提取药物峰形理想 ,分离效果好 ,柱效高 ,正 戊烷虽然沸点很低 ,但在常温下 ,其挥发性对吸取操作无影响 , 水浴温度高于其沸点 ,因此水浴过程中 ,正戊烷逐渐挥发至干 或近干 ,部分样品有微量液体残留 ,所以最后仍需氮气吹干 。 3. 2 临床监测 进行临床应用的过程中 ,抗癫痫药大都有不 良反应 ,在剂量不当或药物相互作用而至血药浓度过高时尤 易发生 。因此 ,在整个治疗期内宜高度警惕 ,结合血药浓度监 测结果来随时调整剂量 [ 6, 7 ] 。柱前衍生 HPLC 法测定 VPA 血 药浓度 ,方法简便快捷 ,精密度好 ,回收率高 , 试验成本低 , 适 用于丙戊酸钠的临床血药浓度监测. 53 99. 41 UV 法 93. 89 96. 12 98. 06
甲氧苄啶含量 [ J ]. 中国药业 , 2008, 17 ( 21) : 29 - 30.
[6] 严宏凤 . UV 法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑和甲氧苄
啶的含量 [ J ]. 中兽医医药杂志 , 2008, 27 ( 3) : 46.
有 2 例 ,占 8. 7% ,患者均为自行超量服用出现了头晕 、 乏力 、 震颤 、 共济失调等不良反应 ,停药一周后中毒症状消失 ; 在有 效范围内的有 12 例 ,占 52. 2% 。结果见表 3。
高效液相色谱仪测定丙戊酸的方法探讨
０．１５ｍｇ·ｍＬ一，放 置 于 ４℃ 冰箱 中 备 用 。 ２．２．３ 衍 生化试剂的配制 ：精密称量 Ｗ一溴苯乙酬 ０．２５００ｇ放 置于 ２５ｍＬ容培瓶 中，用 少 量 乙腈 溶 解 ，然 后 加 乙腈 定 容 到 ２５ｍＬ，摇 匀 ，配 置 成 浓 度 为 １０ｍｇ·ｍＬ 的 Ｗ一溴 苯 乙酮 乙腈 溶 液 ，放 置于 ４℃冰箱 中备用 。 ２．３ 样品处理及 ＨＰＬＣ分 析 将 血样 离心 （４５００ｒ·ｒａｉｎ ） 分离出血清 ，精 密 吸 取血 清 ＩＯ０￣Ｌ，加 内标 溶 液 ５０１ｘＬ，再 加 ５０ｔ．ＬＬ ０．２ｍｏｌ·Ｌ 氨 水 、１００￣Ｌ １．０ｍｏｌ·１ 硫 酸 、２ｍＬ乙 醚 ， 涡旋革 取 １０ｒａｉｎ，５０００ｒ·ｒａｉｎ～．离心 ５ｎｌｉｒｌ。取 Ｌ层 乙醚 层 ｌｍＬ于具塞玻璃 管 中，加 １０ｔｘＬ三 乙胺 ，ｌＯｐ．Ｌ澳 苯 乙酮 ，涡旋 ２０ｓ，盖 上 塞 反 应 １０ｒ ａｉｎ，去 塞 ５５℃ 水 浴 反 嘘挥 乙 醚 ｌＯｍｉｎ。 加 １００１ｘＬ甲醇 ，涡旋 ｌｍｉｎ进 样。在上 述色 谱条件下 测定 ，记 录 内 标 及 ＶＰＡ衍 生 物 的峰 面 积 。 ３ 结 果 ３．１ ＨＰＬＣ法 色 谱 行 为 在 上 述 所 定 实 验 条 件 卜，样 及 空 白血清的色谱图 （见 图 １）。由 １町 ，ｍ样 ｒ｝Ｉ内标峰 和样 品 峰 能 与 其 他 成 分 的 色 谱峰 很 好 的分 离 ．他 们 的 保 留 ｝ｌ寸问 分 别 为 １０．２７０ｎｆ ｉｎ、１７．８４３ｎｆ ｉｎ。
及 ＶＰＡ 衍 生 物 的 保 留 时 间 分 别 为 １０ ２７０ｒ ａｉｎ、ｌ７．８４３ｒ ａｉｎ，标 准 曲 线 回 归 方 程 为 Ｙ＝７４．３６５Ｘ 一９．６０２８，Ｒ ＝０．９９７５，丙 戊 酸 钠 浓 度 在 １１．７２— １４０．６４ｐｇ·ｍＬ 范 围内内标峰 和样品峰 的峰 面积 比与丙戊酸 钠浓度 呈现 良好线性 关 系、结 论 此 方法快速准确 、经济有效 ，适合 用于 丙戊酸 钠 的 血 药浓 度 监 测
荧光偏振免疫法测定丙戊酸钠血清药物浓度
荧光偏振免疫法测定丙戊酸钠血清药物浓度作者：孙利伟闫红月来源：《中国实用医药》2010年第29期【摘要】目的检测丙戊酸钠血药浓度。
方法采用荧光偏振免疫(TDx)法。
结果测定目标血清血药浓度在有效范围内的占受试58.7%。
结论本方法简便、快速,适用于临床常规检查。
【关键词】荧光偏振免疫(TDx)法;丙戊酸钠;血药浓度Determination of concentration of sodium valproate(VPA)in Human blood serum by TDxSUN Li-wei,YAN Hong-yue.XinXiang Central Hospital,HeNan 453000,China【Abstract】 Objective To determine the concentration of of sodium valproate(VPA)in human blood serum.Methods Determined by TDx.Results The concentration of sodium valproate(VPA)was 58.7%in 50~100 μg/ml.Conclusion The method is accurate and rapid and suitable.【Key words】TDx;sodium valproate(VPA);Concentration of blood serum丙戊酸钠对人的各型癫痫均有效。
因个体差异大,荧光偏振免疫(TDx)法对临床使用丙戊酸钠患者血药浓度进行测定,以便指导合理用药。
1 仪器与试剂TdxFlx荧光偏振免疫分析仪(美国雅培公司);Anke KA-1000离心机(上海安亭科学仪器厂);丙戊酸钠试剂盒(美国雅培公司2010-04-08,65525Q100);丙戊酸钠定标液(美国雅培公司2009-08-08,57126Q100)。
反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
何林;余继英;吴正中;孙世明
【期刊名称】《中国药房》
【年(卷),期】2002(013)001
【摘要】目的:测定人血清中丙戊酸钠浓度.方法:以反相高效液相色谱法,甲醇-水(70:30)为流动相,检测波长为248nm;采用衍生化法,环己烷羧酸为内标.结果:丙戊酸钠浓度在14.47～248.0μg/ml范围内呈现良好线性关系.结论:该方法简便、准确,适合于临床血药浓度监测.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】何林;余继英;吴正中;孙世明
【作者单位】四川省人民医院药剂科,成都市，610072;四川省人民医院药剂科,成都市，610072;四川省人民医院药剂科,成都市，610072;四川省人民医院药剂科,成都市，610072
【正文语种】中文
【中图分类】R97
【相关文献】
1.柱前衍生化HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度 [J], 李炳东
2.柱前衍生高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度 [J], 汪宝军;胡庭杰
3.高效液相色谱-荧光检测法测定人血清中丙戊酸钠浓度 [J], 崔一民;孙培红;刘玉旺;赵侠;李荣;孙忠民
4.高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度 [J], 何汉军
5.改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度 [J], 沈陈军;陈新贵;王勇;胡秀萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法同时测定中毒患者血清中5种精神活性物质的浓度
高效液相色谱法同时测定中毒患者血清中5种精神活性物质的浓度果伟;赵晔;郭桂欣;张军;孙川;荣璋;段晓霞;李文标;翟屹民【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2013(034)002【摘要】Objective A high performance liquid chromatography ( HPLC) method with ultraviolet ( UV) detection ( 230 nm) was developed and validated for the quantification of 5 drugs, Risperidone, clozapine, reboxetine, 9-hydroxy Risperidone and norclozapine, in human serum. Methods Following a one-step liquid-liquid extraction with diethyl ether, the analyte and internal standard ( paroxetine) were separated using an isocratic mobile phase consisted of acetonitrile :methanol :butylamine '-acetic acid :deionized water = 20:2. 9:1. 1: 1=34. 3 on a reverse phase Inertsil CIB-3 column. Five drugs and IS were separated well under the chromatographic condition. The calibration curve was verified over the range of 100 - 1 600 μg/L and limit of detection( LOD) was 25 μg/L( S/N= 10). Results The imprecision of within and between batches were 3. 1% ~ 15.6% and 5.7% ~ 18.4% , respectively. The accuracy of within and between batches were 0. 1% ~ 8. 7% and 0. 3% ~13. 3%. Commonly used psychotropic drugs did not interfere with the drugs and internal standard. Conclusion This method was found to be rapid, simple, accurate, sensitive and more suitable for rapid qualitative and quantitative determination ofdrugs in the serum of overdosed patients.%目的建立可同时测定人血清中利培酮、9-羟利培酮、氯氮平、去甲氯氮平和瑞波西汀5种药物浓度的高效液相色谱-紫外检测法,并将该方法用于临床急性精神药物中毒患者的血液样本分析.方法以乙醚为溶剂进行一步液液萃取,待测物与内标帕罗西汀在Inertsil ODS-3柱,乙腈∶甲醇∶正丁胺∶冰醋酸∶去离子水(20∶2.87∶1.07∶1∶34.29)条件下可以基线分离.线性范围100 ～1 600 ng/mL,最低检测限25 μg/L(S/N=10).结果本方法批内精密度为3.1％～ 15.6％,批间精密度为5.7％～18.4％;批内准确度为0.1％～8.7％,批间准确度为0.3％～13.3％.常见精神科药物不干扰待测药物和内标.结论本方法简单、特异性好,可应用于急诊患者药物中毒检测.【总页数】5页(P270-274)【作者】果伟;赵晔;郭桂欣;张军;孙川;荣璋;段晓霞;李文标;翟屹民【作者单位】首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;太原精神病医院检验科,山西太原 030045;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088;首都医科大学附属北京安定医院临床精神药理实验室,北京 100088【正文语种】中文【中图分类】R971+.41【相关文献】1.高效液相色谱法测定地西泮中毒患者血浆与尿中地西泮浓度 [J], 李嫄;袁汀;段旭;徐英宏2.高效液相色谱法测定癫痫患者血浆中奥卡西平活性代谢物的浓度及其血药浓度与疗效关系评价 [J], 张全英;徐文俊;俞蕴莉3.高效液相色谱法测定急性安定中毒病人血清中安定浓度 [J], 曹学东;李巧圣;赵桂英;陆军;李晓霞;李建国4.高效液相色谱法对癫痫患者血清苯妥英钠浓度的测定 [J], 彭翠英;刘安元5.反相高效液相色谱法测定老年癫痫患者血清中丙戊酸的浓度 [J], 黄芳华; 陈红君; 唐原君; 朱李飞; 余自成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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低 、中 、高(5 、25 、75mg /L)3 种浓度的血清样品 , 分别测定其室 温放置 24h 的稳定性以及冻融 3 次的稳定性 。结果表明 , 丙戊
酸钠在血清中很稳定 。
同时考察衍生化后的样品的稳定性 , 结果表明 , 衍生化后
的样品 室温放置稳定性差 , 故所有衍生 化后的样品 均要求在
2h 内测定完毕 。
院伦理委员会审查批准 , 各受试者均自愿参加试验并在试验前
由本人签署知情同意书 。
2.6.2 给药及采血方案 :本试验采用两周期随机交叉试验设
计 。 20 名受试者每日晨 7 ∶30 口服国产或进口 复方丙戊酸钠
缓释片 500mg , 连续服用 3d 后于第 4d 、5d 、6d 晨 7∶30 服药前
±9.36)、(35.48
±9.44)m
g/L
,
且单次和多次服用两种制剂Cmssi n等效
。结论
:本检测方法快速
、灵敏
、经济
,
可用于
监测人血清中丙戊酸钠的浓度 。
关键词 丙戊酸钠 ;稳态谷浓度 ;高效液相色谱 -荧光检测
Concentration Determinati on of Sod ium Valproate in Human Serum by HPLC -Fluorescence Detection Method C UI Yimi n , SUN Peiho ng , LI U Yuw ang , ZHAO Xi a , L I Rong , S UN Z ho ng min(Dept .o f P harmacy , T he Fi rst Af fi liated Ho spi tal of Bei ji ng Universit y , Beijing 100032 , C hina)
浓度(mg/ L) 日内RSD(%) 日间RSD(%) 方法回收率(%) RSD(%)
5.00
3.33
6.34
105.72±3.52
3.33
25.00 75.00
3.70 4.45
3.94 3.43
103.02±3.81 99.26±4.42
3.70 4.45
2.4 稳定性考察
在 空白血清中加入不 同量的丙戊酸 钠标准溶液 , 配制成
co mpound ta blets w e re conducted alte rnately a t random o n 20 healthy m ale v oluntee rs ;the tr ough co nce ntra tio n o f so dium
v alpr oa te in human se rum w as dete rmined by HP LC -f luor esce nce de te ctio n and the data w ere analy zed by 3p 97 pro-
KEY WORDS S odium v alproa te ;S teady sta te tr oug h co ncentr ation ;H P LC -F luo rescence
丙戊酸钠(So dium V alpro ate)是一种广谱抗癫痫药 , 临床
应用过程中需进行血药浓度监测 , 且多采用荧光免疫偏振仪进
方法 :20 名健康男性志愿者两周期随机交叉多次口服国产和进口复方丙戊酸钠缓释片 , 采用高效液相色谱 -荧光检测法测定血清
中丙戊酸钠的谷浓度 , 并用 3p 97 程序对试验数据进行处理 。结果 :口服国产及进口复方丙戊酸钠缓释片 3d 后 , 血药浓度达稳态 ,
C ss mi
n分别为(38.17
取血测定Cms
s i
n
,
证明达稳态后于第 6d 进清淡晚餐后禁食 12h ,
第 7d 、8d 晨 7 ∶30 采集血样测定Cmssin 。2w k 后交叉服用另一制
剂 。离心分离血清 , 用高效液相色谱 -荧光检测法测定血清中
丙戊酸钠的浓度 , 待测样品置于 —20 ℃冰箱中保存 。
2.6.3 数据处理与统计分析 :将受试者口服国产及进口复方
6A 柱温箱(日本岛津公司)。
1.2 试剂 甲醇 、乙腈 (Fishe r Scientific (Hong K ong)Ltd., 为色谱
纯);三乙胺 (日本进口分装 , 中国医药公司北京采购供应站经 销 , 为分析纯);1 , 2 —丙二醇 (北京化学试剂公司 , 为分析纯); 盐酸 (北京化工厂 , 为分析纯);庚酸 (上海星火化工厂 , 为色谱
部在校学生 , 平均年龄 (22.10±1.74)a , 平均身高 (1.75 ±
0.07)m , 平均体重(66.35 ±6.85)kg 。受试者经心电图 、血压 、 血常规 、尿常规 、肝功能 、肾功能检查均正常 , 无吸烟 、饮酒史 ,
受试前 2w k 内未服用过任何药物 。该研究经北 京大学第一医
同 , 以为临床合理用药提供参考 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
LC -9A 高效液相色谱系统 , 包括 L C -9A 泵 、RF -535
荧光检测器 、SCL -6B 中心控制器 、C -R6A 积分仪 、CT O -
*副主任药 师 , 博士 。 研究方向 :临床药学与医 院药学 。 电话 : 010-66551122 -2043 。 E -m ail:cuiymzy @
行检测 。为探索其检测方法的多样性 , 笔者建立了一种快速 、灵
敏而且经济的高效液相色谱 -荧光检测法 , 测定多次口服国产
及进口复方丙戊酸钠缓释片血清中的谷浓度 , 对两种制剂的稳
态谷浓度
(C
ss mi
n)进行评价
,
旨在观察国产和进口复方丙戊酸钠
缓释片达稳态的时间以及Cmssin的波动情况 , 比较两种制剂的异
g r am.RESU L T S :T he bloo d co ncentr ation w as steady a fter 3d o ral administr ation of bo th the domestic and im po r ted so dium
v alpr oa te
sustained
中国药房 2005 年第 16 卷第 4 期
2.1 血样处理[ 1] 精 密吸 取 0.2ml 血清 样品 , 置 于 5ml 离心 管中 , 加入
100μg/ml 的庚酸内标液 20μl ,涡旋振荡混匀 ,再加入 0.1m ol/ L 盐酸溶液 0.2ml , 涡旋振荡混匀 1min , 加入乙醚 -1 , 2 —丙二 醇提取液 3ml , 涡旋振荡 3min , 于 4 000r /min 离心 10min , 吸 取上清液 , 用高纯氮吹干 , 残渣中加入三乙胺 10μl 和 1mg /m l 的 Br DM C 乙 腈 溶 液 0.5ml , 混 匀 , 于 60 ℃水 浴 中衍 生 化 40min ,冷却后进样 , 测定 。 2.2 标准曲线的绘制
纯);4 —溴甲基 —6 , 7 —二甲氧基香豆素 (Br DM C)(S IG M A 产 品);乙醚为重蒸乙醚 ;水为重蒸馏去离子水 。 1.3 药品
试验药品为国产复方丙戊酸钠缓释片 (杭州赛诺菲民生制 药有限公司生产 , 规格 :500m g/片 , 批号 :T -9904);对照药品 为进口分装复方丙戊酸钠缓释片(商品名 :德巴金缓释片 , 赛诺 菲 -温莎(英国)制药有限公司生产 , 杭州赛诺菲民生制药有限 公司分装 , 规格 :500mg /片 , 批号 :9909025);丙戊酸钠标准品 (由赛诺菲 -温莎(英国)制药有限公司提供 , 含量 :99.5 %)。 1.4 色谱条件
2.5 方法的专属性
空白血清 、标准品 +内标 、服药 lh 后的样品的色谱详见1 。
由图 1 可见 , 在本试验条件下 , 丙戊酸钠和内标均与血清 中的组分得到良好分离 , 丙戊酸钠的保留时间约为 8.2 min 。
2.6 血清中丙戊酸钠Cmssin的测定
2.6.1 受试者选择 :20 名健康男性志愿者均为北京大学医学
quiv ale nce either sing le o r multi -o ra l administr atio n.CO N CL U SI ON :T his HP L C -fluo rescence metho d is quick ,sensitive a nd
eco nomical , w hich can be use d to mo nito r the concent ration o f so dium v alpr oate in human serum .
-release
co mpound
t ablets.T he
C ss m in
of
domestic and impor ted pr oducts w er e(38.17 ±9.36)、 (35.48 ±
9.44)mg /L respectively .Cssmin of do mestic a nd impor ted so dium v alpr oa te sustaine d -release compound table ts w e re of bioe-
于健康人空白血清中加入不同量的丙戊酸钠标准溶液 , 使
其浓度分别为 1 、2 、5 、10 、25 、50 、75 、100mg /L ,按“2.1”项下方 法萃取 , 测定 。血清中丙戊酸钠的浓度按检测药物的色谱峰面 积计算 , 以药物浓度 (C)对药物色谱峰面积 A s/内标色谱峰面
积 A i 进行线性回归 。丙戊酸钠的线性范围为 1.0 ～ 100mg /L , 其直线回归方程为 C =9.5 300A s/A i +0.06 372 , r =0.9 995 。 丙戊酸钠的最小检测浓度可达 0.3mg /L(S/N =3)。 2.3 回收率与精密度试验