鬼臼毒素MPEG修饰脂质体的制备及体外释放的研究

病、睾丸癌等的治疗。但在临床应用中发现鬼臼毒 素的 ADR 症状较严重，为了降低其 ADR 并能更好 地发挥其生物活性，扩大其临床应用，因此，考虑将 其制成新型给药系统。目前，国内外已将鬼臼毒素 制成固体脂质纳米粒[2]、脂质体[3]、胶束[4]等的报道， 但由于其稳定性差、包封率低、体内半衰期短等因 素，限制了其在临床应用和推广。聚乙二醇磷脂衍
鬼臼毒素(批号 HL0509，质量分数 98%，西安 和霖生物工程有限公司)；卵磷脂 Epikuron (EPC，德 国 Dessuga 公司惠赠)；胆固醇(Chol，中国惠兴生化 试剂有限公司)；MPEG 2000（Sigma 公司）；丁二酸 酐（上海凌峰化学试剂有限公司）；吡啶（南京化学 试剂有限公司）；1，4-二氧六环（上海凌峰化学试剂 有限公司）；N，N-羰基二咪唑（上海延长生化科技发 展有限公司）；丙酮、氯仿、甲醇、无水乙醚、异丙醇 等均为分析纯。
1 仪器与试药
微孔滤膜（0.45 μm，上海市新亚净化器件厂）； Zeta Plus 型粒径电位分析仪（Brook haven 公司）； Microcon YM-100 KD 型 超 滤 管（ 截 留 分 子 量 100 kDa，Millipore 公司）；透析袋（中国医药集团上 海化学试剂公司，截留分子量 8~12 kDa)；Agilent 1100 型高效液相色谱仪、AVATAR 360 FT-IR 型红外 光谱仪（美国 Thermo Nicolet 公司）；Bruker AV-300 型核磁共振波谱仪（瑞士 Bruker 公司）；SPA-400 型 原子力显微镜(日本 SEIKO 公司)。
通脂质体慢(P＜0.05)。结论：该法制备 PPT-MPEG 修饰脂质体，具有粒径小、包封率高以及明显的缓释效果。
【关键词】 鬼臼毒素；MPEG 修饰脂质体；正交设计；体外释放
【中图分类号】 R 927.11
【文献标志码】 A 【文章编号】 1672-7878(2012)03-0186-004
Preparation and in Vitro Release of MPEG-modified Liposomes Containing Podophyllotoxin
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生物中存在较长的极性基团（乙氧基）可与水分子形 成氢键，并在脂质体的表面形成一层水化膜，增加了 脂质体膜的稳定性，以及延长了药物在体内的循环时 间。笔者以提取的天然磷脂酰乙醇胺为原料，合成了 甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(MPEG-PE)，将其制 成鬼臼毒素-MPEG-修饰脂质体（PPT-MPL），并考察 了 PPT-MPL 的粒径、包封率；并以溶液剂、普通脂质 体为参比，考察了 PPT-MPL 体外释放行为。
合成甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺（MPEG-PE），并用薄膜分散法制备脂质体；以包封率为指标，运用正交试验法
设计优化脂质体处方和工艺，采用改进的超滤法测定脂质体的包封率，以及透析法研究体外释放行为。结果：优化
后的 PPT-MPL 平均粒径为（106.20 ±4.10）nm，包封率为（83.30±2.50）%；加入血浆后 PPT-MPL 体外释放速率比普
（1 mmol）溶于二氯甲烷 12 mL 中，另取 N，N-羰基二 咪 唑 0.784 5 g( 约 4.8 mmol) 溶 于 二 氯 甲 烷 5 mL 中，滴加入上述溶液中，室温搅拌活化 3 h。取 PE 932.5 m（g 约 1.25 mmol）与三乙胺 0.6 mL 溶于二 氯甲烷 10 mL 中[7]，滴加入上述活化的反应液，置室 温搅拌 4 h，减压浓缩，用冰乙醚 50 mL 沉淀，抽滤， 所得淡黄色沉淀用少量二氯甲烷溶解，加冰乙醚再沉 淀，重复 3 次；沉淀物用异丙醇重结晶，减压干燥，得 淡黄色固体 MPEG-PE 为 1.82 g，其收率为74.2%。 将 MPEG-PE 应用 IR 和 1HNMR 表征结果：其 主要吸收峰（归属）在 IR 中为 1 659.48 cm－（1 酰胺 羰基吸收峰），1H-NMR 中为 7.429 (s)(CO-NH 质子 峰)、3.379(s) 和 3.652(d)（ 分 别 为 MPEG 部 分 的 CH3O 和 CH2CH2O 质子峰）以及 1.426(s) 和 0.879
网络出版地址：/kcms/detail/32.1726.R.20120801.1123.016.html
鬼臼毒素 MPEG 修饰脂质体的制备及体外释放的研究
王 娟*1，栾立标*2
中国药科大学药剂教研室，南 京 210009
【摘 要】 目的：制备鬼臼毒素（PPT）MPEG 修饰脂质体（PPT-MPL），以及考察 PPT-MPL 体外释放行为。方法：
WANG Juan*1，LUAN Li-biao*2
Dept.of Pharmaceutics，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009
ABSTRACT Objective: To prepare MPEG-modified liposomes containing podophyllotoxin (PPT-MPL) and to study their in vitro release behavior. Methods: Methoxy-poly(ethylene glycol)-phosphatidylethanolamine (MPEG-PE) was synthesized by two-step process and used as a drug carrier material. PPT-MPL was prepared by thin-film dispersion method. The preparation was optimized by orthogonal design. An improved ultrafiltration method was used to determinate liposome entrapment efficiency. In vitro drug release behavior was studied by dialysis method. Results: The average diameter and entrapment efficiency of the optimized liposomes were（106.20±4.10）nm and（83.30±2.50）%，respectively. In presence of plasma podophyllotoxin released more slowly in vitro from the MPEG-modified liposomes than the common liposomes(P<0.05).Conclusion: The optimized liposomes have smaller size，higher entrapment efficiency and more sustained release behavior. KEY WORDS podophyllotoxin；MPEG-modified liposomes；orthogonal design；in vitro release
（t（）分别为 PE 部分的 CH2 和 CH3 质子峰）。 2.2 MPEG 修饰脂质体的制备 2.2.1 MPEG 修饰脂质体混悬液 取一定比例量 的 EPC，Chol，MPEG-PE 和 PPT，置梨形瓶中，加入 氯仿溶解，并置 35 ℃ 下旋转减压除去有机溶剂， 使脂质均匀成膜，在 30 ℃ 下减压干燥过夜，加入 纯净水适量旋转水合，用 200 W 间歇式探头超声数 分钟，经 0.45 μm 微孔滤膜，滤过，即得 MPEG 修饰 脂质体混悬液。 2.2.2 普通脂质体与溶液剂 采用与“2.2.1”同法 制备，不加 MPEG-PE 制得，即得普通脂质体。称取 一定量的 PPT，加入 60% 乙醇溶液，超声溶解即得 溶液剂。 2.3 HPLC 分析方法学的建立 2.3.1 色谱条件 色谱柱为 ODS C18 柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（55∶45）；流速为 1.0 mL/min；检测波长为 292 nm；柱温为 25 ℃；进 样量为 20 μL。 2.3.2 标准曲线绘制及回收率测定 精密称取 PPT 10 mg，置 100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇 匀，制成 100 μg/mL 的贮备液。取此贮备液分别用 甲醇稀释定容，得 8，20，40 和 60 μg/mL 的系列质量 浓度溶液，并分别进样分析。以 PPT 的峰面积响应 值（A）对质量浓度（ρ）进行线性回归，得回归方程为 A＝9.429ρ－18.07(r＝0.999 8，n＝5)，线性范围为 8~ 100 μg/mL。经计算 8，40 和 100 μg/mL 标准液的回 收率，分别为 102.60%，98.50% 和 99.90%（n＝3）；日 内和日间 RSD 分别为 2.20%，1.60%，0.70%(n＝3) 和 3.00%，1.40%，1.10%（n＝3）。 2.4 脂质体处方及工艺的优化 在单因素考察的基础上，固定 MPEG-PE 用量
2 方法与结果
2.1 MPEG-PE 的制备 2.1.1 磷脂酰乙醇胺（PE）的提取 称取新鲜鸡蛋 （ 市售）410 g，取其蛋黄搅拌均匀，加入丙酮脱脂 3 次，得丙酮不溶物 51.02 g。将此不溶物中加入甲 醇提取 2 次，旋蒸浓缩成约 15 mL，加入适量丙酮， 搅拌，放入冰箱冷藏 1 h 后倾出上清液，旋干，得目硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇（6∶1） 洗脱，得磷脂酰乙醇胺（PE）黄色油状物 1.45 g。 2.1.2 MPEG-PE 的合成 称取 MPEG-2000 4.78 g （2.39 mmol）与丁二酸酐 0.78 （g 7.8 mmol）溶于无水 吡啶 7 mL 中，置 50 ℃ 水浴中反应 5~6 h，TLC 监 测[6]。采用冰乙醚 80 mL（反应液）沉淀，抽滤，乙酸乙 酯重结晶 3 次，减压干燥，得 MPEG-COOH 白色固 体 4.40 g，其收率为 87.7%。称取此白色固体 2.1 g
[Anti Infect Pharm，2012，9(3):186~189]
鬼臼毒素(podophyllotoxin，PPT)属于木脂素类 化合物，其化学结构为 2，3-丁丙酯-4-芳基四氢萘的 母核。它主要用于蛇咬伤、痈疖肿毒、跌打损伤、风 湿筋骨痛及气管炎等症。0.5% 的鬼臼毒素酊剂为 WHO 推荐的治疗尖锐湿疣的首选药物，临床疗效显 著。近年来研究表明[1]鬼臼毒素还具有较强的抗肿 瘤、抗病毒的活性，适用于小细胞肺癌、淋巴癌、白血
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抗 感 染 药 学 Anti Infect Pharm 2012 September; 9(3) 王 娟，等.鬼臼毒素 MPEG 修饰脂质体的制备及体外释放的研究
·实验研究·
DOI：10.3969/j.issn.1672-7878.2012.03-006
网络出版时间：2012-8-1 11:23:49
【作者简介】：*1王娟（1986－），女，在读硕士研究生 【通信作者】：*2栾立标（1961－)，男，博士，教授 【联系电话】：13814039526
研究方向：药物释药系统研究 E-mail: luanlibiao@
ISSN 1672-7878/CN 32-1726/R Anti Infect Pharm 抗 感 染 药 学 2012 September; 9(3) E-mail: kgryx@ Tel: 86-512-65180291 Fax: 86-512-66607096