某大学生物工程学院《普通生物化学》考试试卷(3993)

某大学生物工程学院《普通生物化学》
课程试卷（含答案）
__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试
考试时间：90 分钟年级专业_____________
学号_____________ 姓名_____________
1、判断题（140分，每题5分）
1. 天然固醇中醇羟基在3位，其C3处的醇羟基都是α型。

（）答案：错误
解析：天然固醇C3处的醇羟基是β型。

2. 人类、灵长类的动物体内嘌呤代谢的最终产物是尿囊素。

由于后
者生成过多或排泄减少，在体内积累，可引起痛风症。

（）[山东
大学2017研]
答案：错误
解析：人类和其他灵长类动物、鸟类、爬行动物和昆虫嘌呤分解代谢
的最终产物是尿酸，尿酸体内积累，可引起痛风症。

3. 温和碱性条件下，RNA容易水解，DNA则否。

（）
答案：正确
解析：由于DNA的脱氧核糖无2′羟基，不能形成碱水解的中间产物；而RNA的核糖上有2′羟基，在碱作用下形成磷酸三酯，磷酸三酯不稳定，随即水解。

4. 生长激素具有弱的催乳素的功能。

（）
答案：正确
解析：生长激素和催乳素在一级结构和高级结构上都有很高的同源性，因此在生物活性上存在部分交叉。

5. 酶的最适pH与酶的等电点是两个不同的概念，但两者之间有相
关性，两个数值通常比较接近或相同。

（）
答案：错误
解析：最适pH是个变值。

酶的最适pH可以有多个，酶的等电点只有一个，两者之间没有相关性。

6. 雄性激素在机体内可变为雌性激素。

（）
答案：正确
解析：
7. 促性腺激素先作用于靶细胞内的受体，然后激活腺苷酸环化酶。

（）
答案：错误
8. 任何DNA拓扑异构酶改变DNA超螺旋时都不需要让DNA的链断开。

（）
答案：错误
解析：DNA拓扑异构酶Ⅰ改变DNA超螺旋时需要让DNA的链断开。

9. 缩短磷脂分子中脂酸的碳氢链可增加细胞膜的流动性。

（）
答案：正确
解析：
10. 脂肪酸的全程合成（脂酸合成酶系作用）需要丙二酸单酰CoA
作为中间物提供活化的二碳供体。

（）[山东大学2016研]
答案：正确
解析：
11. E．coli DNA的复制是定点起始单向进行的。

（）
答案：错误
12. 一切有旋光性的糖都有变旋现象。

（）[山东大学2017研]
答案：错误
解析：绝大多数单糖的性质可以反映分子结构的一定特征，由旋光性
可知分子中含有不对称碳原子，从变旋性可知其成环状态，然而单糖
不一定都成环状态。

多糖有旋光性，但无变旋现象。

13. 提高盐浓度可使DNA分子的熔点Tm升高。

（）[厦门大学2014研]
答案：正确
解析：
14. 磷脂双分子层的相变温度取决于磷脂和膜蛋白的含量。

（）[浙江大学2018研]
答案：错误
解析：磷脂双分子层的相变温度取决于磷脂的种类和含量。

15. 只有DNA在遭受损伤后可以被完全修复，其他生物大分子遭受
损伤后则通常被取代或降解。

答案：正确
16. 所有维生素都可以作为辅酶或辅基的前体。

（）
答案：错误
解析：
17. 由于生物膜具有流动性。

因此膜蛋白可进行侧向运动和翻转运动。

（）[南开大学研]
答案：错误
解析：蛋白质在质膜上运动，以扩散为主，没有翻转活动。

18. 细胞受体与腺苷酸环化酶同在质膜上，是相互分离的在功能上相关的两种蛋白。

（）[南京师范大学2005研]
答案：正确
解析：
19. 反义RNA指与mRNA特异性结合并互补的核苷酸片段，它阻断翻译过程，在基因表达调控中起作用。

（）[四川大学研]
答案：正确
20. 自然界的蛋白质和多肽类物质均由L型氨基酸组成。

（）
答案：错误
解析：自然界的蛋白质均由L型氨基酸组成，但多肽类物质就不一定，如多肽抗生素中的短杆菌肽S、酪杆菌肽等都含有D型氨基酸。

21. DNA只存在于细胞（真核与原核）中，病毒体内无DNA。

（）
答案：错误
解析：
22. 当环境中有一个比电子供体具有较高的ΔEΘ′的电子受体时，呼吸作用就能进行，这个电子受体不一定是氧。

（）
答案：错误
解析：
23. 氧化还原电位决定了呼吸链中传递体的排列顺序。

（）
答案：正确
24. 磷酸吡哆醛只作为转氨酸的辅酶。

（）[山东大学2017研]
答案：错误
解析：磷酸吡哆醛不仅是氨基酸代谢中的转氨酶的辅酶，同时也是脱羧酶的辅酶。

25. 蛋白质的亚基（或称亚单位）和肽链是同义的。

（）[中国科学技术大学研]
答案：错误
解析：亚基是肽链，但肽链不一定是亚基。

如胰岛素A链与B链，经共价的硫硫键连接成胰岛素分子，A链与B链不是亚基。

26. 尿素在肝脏的线粒体内生成。

（）[山东大学2016研]
答案：错误
解析：尿素的生成过程在肝脏的多个场所进行，并不仅限于线粒体。

27. 解偶联剂可抑制呼吸链的电子传递。

（）
答案：错误
解析：
28. 在脂双层分子中，因为脂分子的亲水头部朝向两个表面，因此脂分子是对称性分布的。

（）
答案：错误
解析：膜脂的不对称性分布是指同一种膜脂分子在膜的脂双层中呈不均匀分布。

如人红细胞膜外层含磷脂酰胆碱和鞘磷脂较多，内层则含磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺较多。

2、名词解释题（65分，每题5分）
1. 支原体
答案：支原体是指一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，也是在无生命培养基上生长繁殖的最小微生物，介于独立生活和细胞内寄生生活之间。

其细胞很小，细胞膜中含有甾醇，呈G－，以二分裂和出芽等方式繁殖，对抗生素较为敏感。

解析：空
2. 质粒（plasmid）[华中科技大学2016研]
答案：质粒是细胞中染色体或核区DNA中能够自主复制的较小的双链环状DNA分子，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物（多为原核生物）中，乃至于植物的线粒体等细胞器中。

细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。

解析：空
3. 核苷酶
答案：核苷酶是指催化核苷降解的酶，主要分两类。

一类是核苷水解酶，催化核苷水解成碱基和戊糖，主要存在于植物和微生物体内，催
化的反应不可逆；另一类是核苷磷酸化酶，催化核苷磷酸水解成碱基
和戊糖1磷酸，广泛存在于动、植物体内，催化的反应是可逆的。

解析：空
4. 反义RNA
答案：反义RNA是一种与mRNA互补的RNA分子，它是反义基因或基因的反义链转录产物，与mRNA结合后，可阻断mRNA的翻译，这是在翻译水平调控基因表达的一种方式。

原核生物中普遍存在反义RNA的调节系统。

解析：空
5. 辅酶A（coenzyme A）
答案：辅酶A是泛酸的主要活性形式，是由3′,5′ADP以磷酸苷键连
接4磷酸泛酰巯基乙胺而成，主要起传递酰基的作用。

主要由泛酸、
腺嘌呤、核糖核酸、磷酸等组成的大分子，与醋酸盐结合为乙酰辅酶A，从而进入氧化过程。

解析：空
6. 别构调节[厦门大学2007研]
答案：别构调节是指别构调节酶分子的非催化部位与某些化合物可逆
地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶活性状态的现象。

解析：空
7. 酮体
答案：酮体是指饥饿或糖尿病时肝中脂肪酸大量氧化而产生乙酰辅酶A后缩合生成的产物。

包括乙酰乙酸、β羟丁酸及丙酮三类物质。

在肝中合成转运出肝外氧化分解。

酮体有毒，在血液中积累过多将会引起酸中毒，严重时可导致死亡。

饥饿期间酮体是包括脑组织在内的多种组织的能源物质，肝脏有较强的合成酮体的酶系，但缺乏利用酮体的酶系。

解析：空
8. 核苷酸的“从头合成”途径
答案：核苷酸的从头合成途径是指利用磷酸核糖、一些氨基酸、一碳单位及CO2等简单物质为原料，经过一系列酶促反应，合成核苷酸的过程。

解析：空
9. 生物膜（biomembrane）
答案：生物膜是围绕细胞或细胞器的脂双层膜。

由磷脂双层结合蛋白质和胆固醇、糖脂构成，起渗透屏障、物质转运和信号转导的作用，是细胞内的膜系统与质膜的统称。

解析：空
10. nucleosome
答案：nucleosome即核小体，是指真核生物DNA的高级结构，DNA双螺旋以左手螺旋缠绕在H2A、H2B、H3、H4八聚体组蛋白
核心上，构成核心颗粒，H1组蛋白位于核心颗粒之间，这种核小体结构是染色体的基本结构。

解析：空
11. 细胞质膜（cell membrane）
答案：细胞质膜（cell membrane）是指围绕在细胞最外层，由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的富有弹性的半透性膜，又称细胞膜，厚
约5～10nm。

细胞质膜不仅是细胞结构的边界，使细胞具有一个相对稳定的内环境，同时在细胞与环境之间进行物质、能量的交换，在信
息传递过程中也起着决定性的作用。

解析：空
12. 同工酶[厦门大学2014研]
答案：同工酶是存在于同一种属生物或同一个体中能催化同一种化学
反应，但酶蛋白分子的结构及理化性质和生化特性（Km、电泳行为等）存在明显差异的一组酶。

它们是由不同位点的基因或等位基因编码的
多肽链组成。

解析：空
13. 降解物基因活化蛋白
答案：降解物基因活化蛋白是由调节基因产生的一种cAMP受体蛋白，当它与cAMP结合时被激活，并结合到启动子上促进转录进行，是一种正调节作用。

解析：空
3、填空题（150分，每题5分）
1. 氢键有两个主要特征和。

答案：方向性|饱和性
解析：
2. 氯霉素能与核蛋白体亚基结合，抑制酶活性，从而抑制蛋白质合成。

答案：50S|肽基转移
解析：
3. 纤维素是由组成，它们之间通过糖苷键相连。

答案：D葡萄糖|β1,4
解析：
4. 原核生物的呼吸链位于。

答案：细胞质膜上
解析：
5. 基因表达包括和。

答案：转录|翻译
解析：
6. 典型的呼吸链包括和两种，这是根据接受代谢物脱下的氢的不同而区别的。

答案：NADH|FADH2|初始受体
解析：
7. RNA聚合酶Ⅱ识别的核心启动子元件包括：、、、和。

答案：TATA box|起始子|TF Ⅱ B识别元件（BRE）|下游启动子元件（DPE）|GC box
解析：
8. 维生素D在体内的最高活性形式是，它是由维生素D3分别在和二次而来的。

答案：1,25二羟胆钙化醇|肝脏|肾脏|羟化
解析：
9. 限制性内切酶特异识别和切割DNA分子中的回文结构，形成的末端有黏性末端和末端。

答案：平
解析：
10. 催化IMP转变为AMP的酶有和。

答案：腺苷酸代琥珀酸合成酶|腺苷酸代琥珀酸裂解酶
解析：
11. DNA双螺旋结构中A、T之间有个键，而G、C之间有个键。

答案：二|氢|三|氢
解析：
12. 由磷酸蔗糖合成酶催化蔗糖合成时，其葡萄糖供体是，葡萄糖
受体是，其直接产物是。

答案：UDPG|6磷酸果糖|磷酸蔗糖
解析：
13. 维生素B12俗称，人体缺乏时会患病。

答案：钴铵素|恶性贫血
解析：
14. 将乙酰CoA的两个C原子用同位素标记后，经一轮TCA循环后，这两个同位素C原子的去向是，两轮循环后这两个同位素C原子的去
向是。

答案：OAA（草酰乙酸）|CO2和OAA（草酰乙酸）
解析：
15. 胰蛋白酶水解多肽链得到的肽段是以Arg和Lys为末端残基的
肽段。

[中山大学2018研]
答案：C
解析：
16. 酶的磷酸化和脱磷酸化作用是共价修饰调节酶活性的一种重要方式。

答案：可逆
解析：
17. 对人类而言，嘧啶代谢的终产物为。

葡萄糖和甘油进行分解代谢的活化形式分别是和。

[四川大学2008研]
答案：β氨基异丁酸|6磷酸葡萄糖|α磷酸甘油
解析：
18. 在真核细胞中，由前体mRNA加工为成熟mRNA，主要包括、和等过程。

[南京大学2003研]
答案：5′端加帽、3′末端多聚腺苷酸化|mRNA的内部甲基化|mRNA 的拼接
解析：
19. 动物体内高能磷酸化合物的生成方式有和两种。

答案：氧化磷酸化|底物水平磷酸化
解析：
20. 氨酰tRNA合成酶既能识别，又能识别。

答案：氨基酸|tRNA
解析：
21. 一个碳原子数为n（n为偶数）的脂肪酸在β氧化中需经次β氧化循环，生成个乙酰CoA，个FADH2和个NADH＋H＋。

答案：0.5n1|0.5n|0.5n1|0.5n1
解析：
22. 雄性激素和雌性激素均由转化而成，可以相互转变。

在雄体中排出较多的。

答案：胆固醇|雌酮
解析：
23. 动脉粥样硬化可能与代谢紊乱有密切关系。

答案：胆固醇
解析：
24. 常见的环化核苷酸有和，其作用是，它们核糖上的位与位磷酸OH环化。

答案：cAMP|cGMP|第二信使|3′|5′
解析：
25. 真核生物mRNA的3′端含有尾巴，合成cDNA时可用作引物，在作用下利用dNTP合成第一条互补链。

答案：polyA|Oligo|反转录酶
解析：
26. 与阻遏蛋白结合的DNA序列通常被称为。

答案：操纵基因
解析：
27. 化学渗透学说主要论点认为：呼吸链组定位于内膜上。

其递氢体有作用，因而造成内膜两侧的差，同时被膜上合成酶所利用，促使ADP＋Pi→ATP。

答案：线粒体|质子泵|氧化还原电位|ATP
解析：
28. 乳糜微粒在小肠黏膜合成，它主要运输；极低密度脂蛋白在合成，它主要运输；低密度脂蛋白在生成，其主要功用为；高密度脂蛋白在生成，其主要功用为。

答案：外源性脂肪|肝脏|内源性脂肪|肝中|将胆固醇由肝内向肝外转运|肝脏|将胆固醇由肝外向肝内转运
解析：
29. 新合成的多肽链的加工修饰包括、等。

答案：末端加工|氨基酸残基的修饰
解析：
30. 糖皮质激素的主要生理功能是影响糖和蛋白质的代谢，可促使转化为。

答案：蛋白质|糖
解析：
4、简答题（50分，每题5分）
1. 维生素B6是哪些化合物？有何生理功能？
答案：（1）维生素B6包括吡哆醇、吡哆胺、吡哆醛三种物质，它们都是吡啶的衍生物。

（2）维生素B6在体内以磷酸酯形式存在，参与代谢反应的主要是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺，二者在体内可以相互转化。

它们在氨基
酸代谢中作为转氨酶、脱羧酶、消旋酶的辅酶起作用。

解析：空
2. 如果某种密码子5′端的核苷酸发生突变，可能对蛋白质合成发
生什么样的影响？如果该种tRNA反密码子的5′端的核苷酸发生突变，又会对蛋白质的合成有什么样的影响？
答案：（1）如果某种密码子5′端的核苷酸发生突变，则蛋白质合成无法进行或蛋白质合成错误。

若该密码子为起始密码子，则合成无
法开始；若为非起始密码子，可能与该密码子结合的氨酰tRNA不是
原来的氨酰tRNA，因此会在蛋白质中加入错误的氨基酸。

（2）如果该种tRNA的反密码子5′端的核苷酸发生突变，则蛋
白质可能正常合成也可能合成错误。

因为密码的变偶性，反密码子的
第一位碱基和密码子第三位碱基的配对可以在一定范围内变动，这就
使得反密码子的5′端的核苷酸突变有时对蛋白质的合成没有影响。

解析：空
3. 2,3二磷酸甘油酸（BPG）是如何调节血红蛋白运氧功能的？[华
中农业大学2017研]
答案：2,3二磷酸甘油酸（BPG）是血红蛋白的一个重要的别构
效应物。

在BPG存在下，血红蛋白的氧合作用可用下面的方程式表示：HbBPG＋4O2→HbBP（O2）4＋BPG
红细胞中的2,3DPG与脱氧血红蛋白结合，使脱氧血红蛋白的空
间构象稳定，从而降低血红蛋白对O2的亲和力，促使O2和血红蛋
白解离。

尤其当血液通过组织时，红细胞中2,3DPG的存在就能显著
促进O2的释放以供组织需要。

解析：空
4. 糖原合成时为什么利用UDP葡萄糖，而不是直接利用葡萄糖？
[中国科学技术大学2016研]
答案：糖原合成时利用UDP葡萄糖，而不是直接利用葡萄糖的原因如下：
（1）游离的葡萄糖分子不能直接作为糖原合酶的底物，需要在细胞内首先被激活为6磷酸葡糖，再经磷酸葡糖变位酶催化异构化为1
磷酸葡糖。

（2）在动物和酵母体内，1磷酸葡糖经UDP葡萄糖焦磷酸化酶
催化转变为UDP葡萄糖；UDP葡萄糖是糖原合成的活性前体，因为
糖原合酶不能催化糖原的从头合成，只能将葡萄糖单位从活化形式UDP葡萄糖中转移到事先合成好的引物分子上。

解析：空
5. 什么是蛋白质变性？哪些环境因素可以造成蛋白质变性？[浙江
大学2017研]
答案：（1）蛋白质变性是指蛋白质在某些强烈的物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被改变，但一级结构保持完整，从而导致其理化性质改变和生物活性丧失的现象。

（2）蛋白质变性的环境因素
①化学因素
强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮、去污剂等。

②物理因素
高温、紫外线或X光照射、超声波、剧烈震荡或搅拌等。

解析：空
6. 用稀酸或高盐溶液处理染色质，可以使组蛋白与DNA解离，请解释。

答案：稀酸或高盐溶液处理染色质，可以使组蛋白与DNA解离的原因是：
组蛋白与DNA之间的结合依靠的是组蛋白带正电的碱性基团与DNA带负电荷的磷酸基团之间的静电引力，如果用稀酸处理复合物，则磷酸基团质子化而失去所带的负电荷，复合物解离。

如果用高盐溶液处理复合物，则阳离子与磷酸基团结合而取代了组蛋白，导致组蛋白与DNA解离。

解析：空
7. 膜脂分子的共同特征是它们具有两亲性质，试指出下列膜脂的亲水部分和疏水部分：（1）磷脂酰胆碱（2）磷脂酰乙醇胺（3）鞘磷脂（4）脑苷脂（5）神经节苷脂（6）胆固醇。

答案：膜脂的亲水部分和疏水部分如下表所示：
解析：空
8. 为什么DNA聚合酶有核酸酶活性而RNA聚合酶无核酸酶活性？
答案：DNA聚合酶有核酸酶活性而RNA聚合酶无核酸酶活性的原因：
（1）DNA聚合酶负责染色体DNA的复制，通过复制把亲代所携带的遗传信息准确地传递给子代。

DNA复制时出现错误影响到遗传信息的准确传递，造成突变和大部分子代细胞死亡。

因此DNA聚合酶应具有3′→5′外切核酸酶活性以随时修正复制过程中出现的错配核苷酸，保证遗传信息传递的稳定性。

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的5′→3′外切酶活性是用于切除冈崎片段的RNA引物及切除受损伤的DNA片段，以便合成正确的DNA链替换，因此，这些外切酶活性是DNA复制、修复、重组所必需的。

（2）RNA聚合酶可催化大量mRNA的合成，且合成的mRNA 的半衰期很短。

转录时个别错配碱基的出现，也会导致合成的蛋白质的个别氨基酸与正常的不同，但细胞可以容忍这些小的错误发生。

解析：空
9. 在生物膜中脂类的作用是什么？
答案：在生物膜中脂类的作用分别是：
（1）构成膜的主体——磷脂双分子层；
（2）决定了膜的选择透过性；
（3）其运动决定膜的流动性；
（4）提供稳定膜蛋白的疏水环境；
（5）生物膜中的某些脂质在信号传递过程中有重要的意义，如糖脂在免疫应中，DGIP3作为第二信使也产生于膜脂质。

解析：空
10. 有一寡聚核苷酸经3种RNA酶降解，其产物分别为：
（a）2pG，2pA，pG，pU；（b）pGpCp，ApGpApU；（c）pGp，CpApGp，ApU试写出这种寡核苷酸的序列，并指出这3种酶的作用位点。

答案：（a）是一种外切核酸酶，作用于3′OH端。

（b）是一种内切核酸酶，作用于嘧啶核苷酸残基3′磷酸基与其后残基5′羟基之间，如像RNase A。

（c）是一种内切核酸酶，作用于鸟苷酸残基3′磷酸与其后残基5′羟基之间，如像RNase T1。

该寡核苷酸的顺序为：pGpCpApGpApU。

解析：空
5、计算题（5分，每题5分）
1. 对一双链DNA而言
若一条链中（A＋G）（T＋C）＝0.7，则（1）互补链中（A＋G）
（T＋C）＝？（2）在整个DNA分子中（A＋G）（T＋C）＝？
若一条链中（A＋T）（G＋C）＝0.7，则（3）互补链中（A＋T）（G＋C）＝？（4）在整个DNA分子中（A＋T）（G＋C）＝？
答案：（1）设DNA的两条链分别为α和β，那么Aα＝Tβ，
Tα＝Aβ，Gα＝Cβ，Cα＝Gβ
根据题意（Aα＋Gα）（Tα＋Cα）＝0.7
则互补链（Tβ＋Cβ）（Aβ＋Gβ）＝0.7
所以（Aβ＋Gβ）（Tβ＋Cβ）＝10.7≈1.43
（2）在整个分子中A＝T，G＝C
则A＋G＝T＋C，（A＋G）（T＋C）＝1
（3）假设同（1），则有Aα＝Tβ，Tα＝Aβ，Gα＝Cβ，Cα＝
Gβ，Aα＋Tα＝Tβ＋Aβ，Gα＋Cα＝Cβ＋Gβ
所以（Aα＋Tα）（Gα＋Cα）＝（Tβ＋Aβ）（Cβ＋Gβ）＝0.7 （4）在整个DNA分子中
（A＋T）（G＋C）＝（Aα＋Tα＋Tβ＋Aβ）（Gα＋Cα＋Cβ＋
Gβ）＝2（Aα＋Tα）2（Gα＋Cα）＝0.7
解析：空
6、论述题（25分，每题5分）
1. 蛋白质分离纯化的方法有哪些？简单说明其原理。

答案：对蛋白质分离纯化的方法，是根据蛋白质在溶液中的性质、分子大小、溶解度、电荷、吸附性质和对配体分子的生物学亲和力等
确定分离纯化蛋白质的方法。

（1）根据溶解度不同的分离方法
①盐析：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体
性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。

常用的中性盐有：硫
酸铵、氯化钠、硫酸钠等。

盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处
效果最好。

②等电点沉淀：沉淀出来的蛋白质保持天然构象，能重新溶解于
适当的pH和一定浓度的盐溶液中。

③有机溶剂分级分离：凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如
乙醇、甲醇、丙酮等，均可引起蛋白质沉淀。

④温度影响蛋白质溶解。

（2）根据电荷不同的分离方法
①电泳：蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷，因此在电场中可以移动。

电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分
子所带电荷量以及分子大小。

②离子交换层析：一种用离子交换树脂作支持剂的层析法。

（3）根据相对分子质量不同的分析方法
①透析和超滤：透析是利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合
物分开的方法；超滤法是应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定
截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。

②密度梯度（区带）离心：利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而分离。

超速离心也可用来测定蛋白质的分子量，
蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比。

③凝胶过滤，又称分子筛层析，是一种柱层析。

（4）根据对配体的特异生物学亲和力不同的分离方法：亲和层析。

亲和层析是根据蛋白质能与特异的配体相结合而设计的方法，例
如抗原与抗体、激素和受体、酶与底物、酶与抑制剂等都能特异结合，
这种特异结合是非共价可逆结合，首先形成蛋白质配体复合物，然后
通过改变溶液的pH、离子强度等使复合物解离，将被分离的物质洗脱下来，从而达到纯化的目的。

解析：空
2. 催化二磷酸果糖（F2,6BP）合成和分解的酶位于一条单一的多肽
链上，请解释这个多功能蛋白质在糖酵解调控中的意义。

[中国科学技
术大学2016研]
答案：催化二磷酸果糖合成与分解的酶是磷酸果糖激酶，该酶是
糖酵解过程中最重要的限速酶，其中起决定作用的是催化效率最低的
酶PFK1；其分子是一个四聚体形式，不仅具有对反应底物6磷酸果
糖和ATP的结合部位，而且尚有几个与别构激活剂和抑制剂结合的部位，6磷酸果糖、1,6二磷酸果糖、ADP和AMP是其激活剂，而ATP、柠檬酸等是其抑制剂，ATP既可作为反应底物又可作为抑制剂，其原因在于：此酶一个是与作为反应底物的ATP结合位点，另一个是与作为抑制剂的ATP结合位点，两个位点对ATP的亲和力不同，与
底物的结合位点亲和力高，抑制剂作用的位点亲和力低。

这样，ATP
就有两种结合位点，当细胞内ATP不足时，ATP主要作为反应底物，保证酶促反应进行；而当细胞内ATP增多时，ATP作为抑制剂，降低了酶对6磷酸果糖的亲和力。

在糖酵解调控中的意义：
2,6二磷酸果糖可被二磷酸果糖磷酸酶2去磷酸而生成6磷酸果糖，失去其调节作用，2,6二磷酸果糖的作用在于增强磷酸果糖激酶1对6磷酸果糖的亲和力和取消ATP的抑制作用，以保证糖酵解正向反
应的正常进行，当生成ATP的含量过高时，ATP的抑制作用又会出现，使糖酵解正向反应的速度减慢，因此这个多功能蛋白质能够调节糖酵
解的速度，从而能够调节整个糖的有氧氧化反应的速度，使能量的产
生和消耗处于一种平衡。

解析：空
3. 什么叫呼吸链？有哪些方法可用来确定电子传递顺序？[南京师
范大学研]
答案：（1）线粒体内膜的最基本功能是将代谢物脱下的成对氢原子或电子通过多种酶和辅酶所组成的连锁反应的逐步传递，使之最终
与氧结合生成水。

这种由递氢体和递电子体按一定顺序排列构成的传
递体系称为呼吸链或电子传递链。

（2）确定呼吸链中各递氢体或递电子体的排列顺序的试验方法有多种。

如：
①测定各种电子传递体的标准氧化还原电位时发现，从NAD＋到分子氧，每一电子传递体的氧化还原电势逐步增加。

实验测得呼吸链
中的氧化还原电势变化如下（数字代表氧化还原电势值）：
氧化还原电势（E0′）的数值愈低，即负值越大，或正值愈小，则该物质丢失电子的倾向愈大，愈易成为还原剂而处于呼吸链的前面。

呼吸链中NAD＋NADH的E0′最小，而O2H2O的E0′为最大，恰好表明电子的传递方向是从NAD＋到分子氧。

②用分离出的电子传递体进行重组实验表明，NADH可使。