响应面法优化羌活-独活药对提取工艺-卢雪花

注：A，B. 对照品；C. 供试品；1. 蛇床子素；2. 异欧前胡 素。
图 1 羌活 - 独活混合提取液 HPLC 组 2.4 标准曲线的绘制
分 别 精 密 称 取 蛇 床 子 素、异 欧 前 胡 素 对 照 品 母 液 适 量，加 甲 醇 逐 步 稀 释，得 到 系 列 对 照 品 溶 液。用 0.45 μm 微孔滤膜过滤后，按“2.3 项”下色 谱条件测定，进样每个质量浓度重复 3 次，得到蛇 床子素回归方程：Y=43975X - 4605.2（R=0.9998）， 在 32.52~203.25 mg 范 围 内 与 峰 面 积 呈 良 好 线 性 相 关；异 欧 前 胡 素 回 归 方 程：Y=28804X+46964
1.1.1 药材 羌活、独活均购自福建中医药大学国医堂，由
福建中医药大学药学院杨成梓教授鉴定分别为伞形 科植物羌活的干燥根茎，伞形科植物重齿毛当归的
收稿日期：2016-10-13 基金项目：国家自然科学基金资助项目（81173573） 作者简介：卢雪花（1990-），女，福建莆田人，硕士研究生，研究方向：新药开发与药性研究。 通讯作者：邱颂平（1956-），男，福建莆田人，教授，硕士研究生导师，研究方向：中药药性理论研究。
脉，治各类风寒湿痹皆可”。现代药理学研究表明羌 活与独活均具有抗炎镇痛作用 [2-4]，主要活性成分为 香豆素类化合物 [5-6]，其中以蛇床子素和异欧前胡素 含量最高 [7-8]。因此，本实验以蛇床子素和异欧前胡 素提取量为考察指标，采用响应面法通过单因素试 验优选羌活独活药对合提的工艺条件。 1 材料与仪器 1.1 材料
Keywords：Notopterygii Rhizoma et Radix；Angelicae Pubescentis Radix；response surface methodology；ultrasonic extraction
羌活（Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang） 是 伞 形 科 植 物 羌 活（背 翅 芹） 或 宽 叶 羌 活 （Notopterygium forbesii Boiss.）的 干 燥 根 茎 及 根， 独 活（Angelica pubescens Maxim. f. biserrata Shan et Yuan）是伞形科植物重齿毛当归的干燥根 [1]。两者 是临床上常用的有效药对，其药性相同，为辛、苦、 温，归肾、膀胱经，均有祛风胜湿、通利关节的功效， 但又各有所长。前者作用强烈，主治上半身风寒感 冒头痛、风湿湿痹及肩背酸痛；后者药力缓和，主治 腰以下风寒湿痹、腰膝疼痛及少阴伏风头痛 [1]。二 者配伍使用最早见于《外台秘要》“二药伍用，羌活 走上，独活走下，直通上下，横行肢臂、腰膝，宣通络
LC-20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司）， KQ-500E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公 司），DV215CD 型十万分之一分析天平（美国奥豪斯 公司） 2 实验方法 2.1 对照品溶液的制备
称取蛇床子素、异欧前胡素对照品适量，加甲 醇分别配成 0.2710、0.2336 mg/mL 的母液。 2.2 供试品溶液的制备
分别精密称取羌活、独活各 5 g，加入体积分数 为 75% 的甲醇 150 mL，浸泡 30 min 后，60 ℃超声提 取 40 min，放冷，滤过，滤液补足至 150 mL，取续滤液 经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。 2.3 色谱条件 [9]
依利特色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动 相乙腈 - 水（44∶56），柱温 30 ℃，检测波长 316 nm， 流速 1.0 mL·min-1，进样量 10 μL，结果见图 1。
卢雪花，黄美霞，邱颂平
（福建中医药大学，福建 福州 350122）
摘 要：目的：采用响应曲面法对羌活 - 独活药对的超声辅助提取工艺进行优化。方法：在单因素试验基础上，
采用 HPLC 法测定蛇床子素、异欧前胡素含量，并以蛇床子素、异欧前胡素得率的综合评分为指标，通过响应面法考
察超声时间、甲醇体积分数、料液比、提取次数对羌活 - 独活混合提取工艺的影响。结果：响应面法超声提取羌活 -
提取。
关键词：羌活；独活；响应面法；超声提取
中图分类号：R284
文献标志码：A 文章编号：1673-842X ( 2017) 05- 0060- 0 5
Optimization of Ultrasonic-assisted Extraction of Notopterygii Rhizoma et Radix and Angelicae Pubescentis Radix Using Response Surface Methodology
LU Xuehua，HUANG Meixia，QIU Songping （Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，Fujian，China）
Abstract：Objective：Response surface methodology was used to optimize the extraction conditions of Notopterygii Rhizoma et Radix and Angelicae Pubescentis Radix. Methods：Based on one factor test，with composite score of extract amounts of osthole and isoimperatorin as index，response surface methodology was adopted to investigate effects of ultrasonic time，methanol volume fraction，material /liquid ratio and extraction times on extraction process. Results：The optimal extracting parameters of osthole and isoimperatorin from Notopterygii Rhizoma et Radix and Angelicae Pubescentis Radix by response surface methodology were as follows：ultrasonic time 40 min，methanol volume fraction 95%，material /liquid ratio 1∶15 and extraction twice. Under this condition，osthole and isoimperatorin were（2.113±0.096）mg·g-1 and（1.884±0.082）mg·g-1，respectively，which are in agreement with the theoretical predictions. Conclusion：This optimized extraction process was stable and feasible，it could be used to extract osthole and isoimperatorin.
独活药对中蛇床子素和异欧前胡素的最佳工艺参数：超声时间 40 min，甲醇体积分数 95%，料液比 1∶15，提取次数 为 2 次。在此条件下，蛇床子素和异欧前胡素的得率分别为（2.113±0.096）mg·g-1、（1.884±0.082）mg·g-1，均与
理论预测值吻合。结论：该响应面法优选的提取工艺稳定可行，可用于药对羌活、独活中蛇床子素和异欧前胡素的
（R=0.9993），在 37.38~140.16 mg 范围内与峰面积呈 良好线性相关。 3 结果与讨论 3.1 单因素试验结果 3.1.1 提取时间对羌独活药对中蛇床子素、异欧前 胡素提取率的影响 称 取 羌 活 独 活 粉 末 各 5 份，每 份 5.0 g，按“2.2 项”下分别超声提取 20 min、30 min、40 min、50 min、 60 min，按“2.3 项”色谱条件下考察提取时间对蛇 床子素、异欧前胡素提取率的影响，结果如图 2（a）。 在 30 min 时，蛇床子素和异欧前胡素的提取率均达 到最高。超过 30 min 后，提取率趋于平缓。因此提 取时间以 30 min 为宜。 3.1.2 甲醇体积分数对羌独活药对中蛇床子素、异 欧前胡素提取率的影响 称 取 羌 活 独 活 粉 末 各 5 份，每 份 5.0 g，按“2.2 项”下 分 别 加 入 55%、65%、75%、85%、95% 甲 醇 提 取，按“2.3 项”色谱条件下考察甲醇体积分数对蛇 床子素、异欧前胡素提取率的影响，结果如图 2（b）。 随着甲醇体积分数的增大，提取率先增大后减少。 这是因为蛇床子素和异欧前胡素在甲醇中的溶解度 比水大，甲醇对细胞的破坏作用比水强。因此甲醇 体积分数以 85% 为宜。 3.1.3 料液比对羌独活药对中蛇床子素、异欧前胡 素提取率的影响 称取羌活独活粉末各 5 份，每份 5.0 g，按“2.2 项”下分别加入 5、10、15、20、25 倍量的 75% 甲醇， 按“2.3 项”色谱条件下考察料液比对蛇床子素、异 欧前胡素提取率的影响，结果如图 2（c）。随着溶 剂的增加，提取率先增加后降低。溶剂量增加，蛇 床子素和异欧前胡素更容易向溶剂扩散，因此提 取率增大；但当料液比高于 15 倍时，提取率下降 并趋于平缓，而且成本增加，因此料液比以 1∶15 为宜。 3.1.4 提取次数对羌独活药对中蛇床子素、异欧前 胡素提取率的影响 称 取 羌 活 独 活 粉 末 各 5 份，每 份 5.0 g，按“2.2 项”下分别超声提取 1、2、3、4 次，按“2.3 项”色谱条 件下考察提取次数对蛇床子素、异欧前胡素提取率 的影响，结果如图 2（d）。随着提取次数的增加，提 取率逐渐增大；在提取 3 次后，提取率趋于平缓，因 此提取次数以 3 次为宜。