中国药科大学药物分析课件第六章

四、紫外分光光度法
（一）直接紫外分光光度法
丙磺舒片的测定：Ch.P(2000) 在HCl中，采用百分吸收系数法。 BP(1998)再盐酸-乙醇,采用百分吸收系数法. USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。
（二）离子交换-紫外分光光度法
氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当 含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂 吸附酸性杂质后， 在甲醇溶液中，226nm波长处，采用对照品比较法。 具体计算：W×1000 × 1/100 ×1/100 = Cu (μg/ml)
例如：对氨基水杨酸钠10μg/ml;
A265/A299 = 1.56~1.56 再例如：甲芬那酸14μg/ml; A278~280/A348~352 = 1.15~1.30
七、红外吸收光谱法
C=O
3700~2900cm-1
1660cm1
N-H、 O-H
1610,1570 1480,1440
775cm-1
酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。
双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g
样品用乙醚提取0.02mol/LHCl 测定方法 滴定V＜0.3ml。
HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）
三、羟苯乙酯中有关物质的检查
BP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLC法中的
供试品自身对照法： 反相TLC法 展开剂：甲醇-水-冰醋酸 固定相：GF254C18化学键合硅胶
2
Fe
Fe 3
+ 12HCl
苯甲酸（中性或碱性水溶液） + FeCl3
赭色
2. 水解或分解后与三氯化铁反应
ASA水解成SA后与FeCl3 反应，成紫堇色 丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH 5.0~6.0中与FeCl3生成米黄色
布洛芬与高氯酸羟胺，N，N’-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，
即显紫色[JP（14）方法]。基于分子中-COOH的结构。
（二）丙磺舒原料的含量测定
色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO3 0.1% HAC液0.1% HAC乙腈液(50:50);检测波长254nm。
系统适用性试验： n ＞3900; T ＞ 2.3; 重复性 RSD＜1.5%
Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl Ar-N2Cl + NaCl + 2H2O
因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此 法在下章重点讨论。
三、双相滴定法
是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠 的含量测定：
COONa COOH
+
HCl
+
NaCl
生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。 苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生 的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明 显。
四、甲芬那酸中特殊杂质的检查
甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。
分光光度法：利用Cu 2+与Na-DDC呈色后测定A
1. 铜盐检查法 原子吸收分光光度法：BP（2000）
2. 有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲
2. 氯贝丁酯含量测定
第一步：中和酸性杂质 第二步：水解与测定
CH Cl O C CH
3 3

COOC
2H 5
+ N aO H
CH Cl O C CH
3
COONa
3
+ C 2H 5O H
NaO H + HCl
NaCl + H 2 O
二、亚硝酸钠滴定法
对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与 NaNO2发生重氮化反应
2. ASA的含量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备； 供试品溶液的制备。
五、HPLC法
Ch.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。
USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、 布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。
（一）ASA栓剂的含量测定
色谱条件：色谱柱ODSC18；流动相为甲醇：0.1%二乙胺：HAC (40:60:4);检测波长280nm；内标物为咖啡因。 系统适用性试验： n ＞2000; ASA与SA与内标物的R ＞ 1.5 具体计算： Cx = Rx/RR×CR W(g) ×1/50 ×2/50 = Cx W测 = 1250 ×Cx 标示量% = W测/W ×W平/标示量×100% = Cx ×1250 ×W平/W ×标示量×100%
第六章 芳酸及其酯类药物的分析
典型药物 基本要求
鉴别试验
杂质检查
含量测定
体内药分
练习与思考
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基本要求
一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和 含量测定的基本原理与方法。 二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的 基本原理与方法。。 三、了解本类药物的体内分析方法。
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第一节 典型药物分类与理化性质
1. 苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。 2. 丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3, 经硝酸氧化成 Na2SO4。 3. 丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味
六、紫外吸收光谱法
1. 测定λmax
；λmin。
例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；
λmax
；
265nm, 273nm; λmin。245nm, 271nm。
1. 直接反应
2. 水解后反应
对氨基水杨酸钠
贝诺酯具有潜在芳伯氨基
3. 甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产
生橙红色。
N COOH NH CH 3 CH 3 + NO 2 N+ NaOH COOH NH CH 3 CH 3 N N
NO 2
三、氧化反应
+ K2Cr2O7 深蓝色 棕绿色
苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶 液应澄清。
2. 游离水杨酸检查 利用SA 可与FeCl3呈色，用比色法检查。
3. 易炭化物检查 主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分 子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。
二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查
主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。氨基

3
OH
+
CH 3 COONa
2NaO H + H 2 SO 4
Na 2 SO 4 + 2H 2 O
条件： 水溶液
具体试验：
I 份NaOH VO I 份NaOH V Vo-V相当于ASA消耗 硫酸的ml数
ASA% = (Vo – V)×F×T/W ×100%
2. 羟苯乙酯的含量测定
HO COOC
二、重氮化-偶合反应
凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。
SO 3 H -OH Ar-N=NpH=7 NaNO Ar-NH
2 2
ˉ
-OH
SO 3 H OH 7 Ar-N=Nˉ
+ HCl Ar-N
2 Cl
pH
H 2O Ar-NH-COCH
3
pH
7 Ar-N=Nˉ
NHCH
2 CH 2 NH 2
Au/As = Cu/C Cu = C(Au/As)
W(mg) = 10 ×Cu = 10 × C(Au/As)
（三）柱分配色谱-紫外分光光度法
USP(24)采用此法同时测定ASA胶囊中 ASA和SA。 1. SA的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试
品溶液的制备。
供试品液：CHCl3液 洗脱液1：CHCl3
特征基团。
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第二节 鉴别试验
一、与三氯化铁反应
含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应不 一定含酚羟基.
OH
Ar-OH + FeCl3
pH4~6 紫堇色铁配位化合物
R
1. 直接反应
SA在中性或弱酸性条件下，与FeCl3生成紫堇色配
位化合物
COOH 6 OH + 4FeCl
3
COO ( O )
（二）主要理化性质
1. 溶解性:
均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。
2. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。 3. 具有酚羟基特性：
4.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2
5. 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基 ，可用
NaOH直接滴定测定其含量。
COOH OCOCH + NaOH COONa
3
OCOCH
3
+
H 2O
2. 条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。 3. 应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测 定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。
（二）水解后剩余滴定法 1. ASA含量测定
原理：
COOH OCOCH + 2NaOH COONa
三、其他芳酸类
(一)典型药物结构
CH Cl O C CH
3 3
COOC
2H 5
氯贝丁酯（clofibrate）
CH
3
CHCH CH
3
2
CH CH
3
COOH
布洛芬（ibuprofen）
(二)主要理化性质
1.溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液
体；布洛芬为固体，有一定熔点。
2.UV和IR特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和
C=C
Ar-H
水杨酸的红外吸收图谱
对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱
C=C
1580cm-1 1500cm-1
C-O
1188cm-1
1640cm-1
3700~2900c m-1
1300cm-1
N-H
N-H、 O-H
C-N
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第三节 特殊杂质检查
一、ASA中特殊杂质的检查
1.溶液的澄清度 主要检查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸
2. 在λmax 处测定一定浓度供试液的吸收度A。 例如：羟苯乙酯，5μg/ml λmax =295nm; A = 0.48
3. 在λmax 处测定供试液的百分吸收系数。
例如：贝诺酯在λmax =240nm; E1%1cm = 730~760
4. 在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度 比值法）
硅藻土，Na2CO3 硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉
供试品液：CHCl3-HCl液 洗脱液1：HAC-CHCl3
洗脱液2：HAC乙醚
(1:10) 10ml
洗脱液2：HAC- CHCl3 (1:100) 85ml
1-杂质先洗脱
2-SA后洗脱 max=306nm Au＜As
1-杂质先洗脱
2-ASA后洗脱 max=280nm ASA(mg)=C(Au/As)
2H 5
+ N aO H
HO
COONa
+ C 2H 5O H
2NaO H + H 2 SO 4
Na 2 SO 4 + 2H 2 O
（三）两步滴定法
1. ASA片的含量测定 ASA + NaOH ASA-Na + H2O
第一步为中和
水解产物SA + NaOH
SA-Na + H2O
中性盐
酸性稳定剂+ NaOH 第二步为水 解与测定
酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。
五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性
杂质
1. 对氯酚检查
GC-FID法 HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正 相HPLC
2. 挥发性杂质的检查方法
GC法
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第四节 含量测定
一、酸碱滴定法
（一）直接滴定法 基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如 ASA的含量测定，其原理如下： 1. 原理：
一、水扬酸类
（一）典型药物结构
COOH OH
水杨酸（salycylic acid）
COOH OCOCH
3
阿司匹林（aspirin)
COONa OH
NH
2
对氨基水杨酸钠
（sodium aminosalicylate)
COO H
O
O C
OH
双水杨酯（salsalate)
OCOCH
3
COO
NHCOCH
甲芬那酸 + H2SO4
黄色 △ 绿色荧光[JP(14)
四、水解反应
1. ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156℃～
161 ℃。
2. 双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158℃。
3. 氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，
在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异
羟肟酸铁。
五、分解产物反应
二、苯甲酸类
（一）典型药物结构
COOH(Na)
苯甲酸及其钠盐 (benzoic acid ）
COOC
2H 5
OH
羟苯乙酯(ethylparoben)
COOH
SO
2
N(CH
2 CH 2 CH 3 ) 2
丙磺舒(probenecid)
COOH NH
CH
3
CH
3
甲芬那酸(mefenamic acid)
3
贝诺酯（benorilate)
（二）主要理化性质
1.酸性 SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。 2. 溶解性: 均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。
3. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。 4. 芳伯氨基和酚羟基特性： 5. 水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水 杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。