纯化水微生物限度检测
纯化水微生物限度
纯化水微生物限度滤膜法微生物检测：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。
样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。
然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：- 与直接法比较，可以检测大量的样品- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果操作具体一点就是：薄膜过滤法检测，一个样过滤一份，就是200ml的纯化水通过滤膜，将该滤膜浸泡在灭菌好的l生理盐水中，再接种到平皿中，制成10级、100级、1000级稀释倍数的细菌、霉菌和酵母菌稀释培养皿，即可用平皿法检测纯化水的微生物限度摘要：目的探讨平皿法检查纯化水微生物限度的可行性。
方法采用《中华人民共和国药典》2005年版二部附录平皿法和薄膜过滤法同时时纯化水进行微生物限度检壹并作出比较。
结果平皿法操作简便，菌落清晰．准确可靠。
结论平皿法检测纯化水微生物限度是可行的，尤其适用药厂、医院开展此项检验。
关键词；纯化水；微生物限度；平皿法；薄膜过滤法纯化水为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其它适宜的方法制得的供药用的水，不含任何附加剂。
纯化水的优劣，直接关系到药品质量。
《中华人民共和国药典》2005年版规定其微生物限度检查采用薄膜过滤法。
并规定其细菌、霉菌和酵母菌总数每毫升不得过100个。
由于此法操作较繁，滤膜较小(直径只有50mm)，菌落多时清晰度欠佳，影响计数的准确性。
笔者采用平皿法进行比较，该法操作简便，菌落清晰，计数准确，效果较为理想。
1 材料和仪器1．1 样品来源 19批纯化水系辖区内7家制药厂生产的为微生物限度检查验证用送样检品。
其中用盐水瓶盛装的12个批次，三角烧瓶盛装的7个批次。
1．2 培养基和仪器设备1．2．1 培养基：营养琼脂培养基批号050401，玫瑰红钠琼脂培养基批号050202，蛋白胨批号050523均为北京三药科技开发公司生产。
001纯化水微生物限度检查法操作规程
001纯化水微生物限度检查法操作规程操作规程：001纯化水微生物限度检查法一、目的和适用范围本操作规程适用于纯化水微生物限度检查法的操作流程。
检查目的是为了评估纯化水中微生物的数量和种类，确保纯化水的质量符合相关法规和标准。
二、设备和试剂1.无菌工作台2.显微镜3.火焰消毒器4.纯化水样品5.温度控制设备6.无菌试剂瓶7.营养基培养物8.细菌计数板三、操作步骤1.检查前准备1.1确保工作区域干净整洁，并进行必要的消毒。
1.2准备所需的设备和试剂。
1.3校验设备的准确性和完整性。
2.样品取样2.1使用无菌容器取样纯化水样品。
2.2尽量避免样品接触到空气。
2.3快速将样品送至检测实验室。
3.样品处理3.1使用无菌器具将样品分配到多个无菌试剂瓶中。
3.2确保样品的稀释比例符合标准要求。
4.培养试验4.1取一定量的样品，将其滴入细菌计数板的每个孔中。
4.2使用无菌移液器将细菌计数板放入孔内的细菌培养基中。
4.3将细菌计数板密封，并标注好样品信息。
4.4将细菌计数板放置于设定好的温度和湿度下进行培养。
4.5培养时间根据实验要求确定。
5.计数和分析5.1培养结束后，取出细菌计数板，使用显微镜在指定区域进行微生物计数。
5.2统计每个孔中微生物的数量，并记录下来。
5.3分析结果，与相关法规和标准进行比较。
5.4如结果符合要求，则纯化水样品通过检查；如结果不符合要求，则需进行进一步处理。
6.结果记录和报告6.1将检查结果记录在检测报告中，包括样品信息、检测日期、微生物数量等。
6.2将报告存档，并按要求进行归档保存。
四、操作注意事项1.操作过程必须保持无菌状态，避免样品的污染。
2.使用的设备和试剂必须保持干净和完整。
3.细菌计数板的培养条件必须按标准要求进行控制。
4.操作人员应熟悉操作流程和相关法规和标准，严格遵守操作规程。
五、操作记录1.操作人员应按要求记录操作流程、设备校验、样品信息等重要数据。
2.操作记录应包括操作日期、操作人员、操作步骤和结果等信息。
中国药典2020版二部纯化水微生物检查
中国药典2020版二部纯化水微生物检查（原创版）目录1.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的概述2.微生物检查的方法和标准3.微生物检查的重要性和应用正文1.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的概述中国药典是我国药品和医疗器械行业最为重要的法规之一，其中包含了各种药品的质量标准和检测方法。
在 2020 版的中国药典二部中，纯化水的微生物检查是一项重要的内容。
纯化水是制药过程中最为常见的一种溶剂，它的质量直接关系到药品的质量和安全性。
因此，对纯化水进行微生物检查是十分必要的。
2.微生物检查的方法和标准微生物检查的方法主要包括细菌总数检查、霉菌和酵母菌检查、细菌内毒素检查等。
其中，细菌总数检查是微生物检查中最为常见的一种方法。
这种方法主要是通过在纯化水中加入一定量的营养琼脂，然后在一定温度下培养一定时间，最后通过计数平板上的菌落数量来确定细菌总数。
霉菌和酵母菌检查则是通过在纯化水中加入一定量的霉菌和酵母菌培养基，然后在一定温度下培养一定时间，最后通过计数培养基上的菌落数量来确定霉菌和酵母菌总数。
细菌内毒素检查则是通过检测纯化水中的内毒素含量来判断微生物污染的程度。
这些检查方法都有相应的标准，比如细菌总数的标准一般不应超过100CFU/ml，霉菌和酵母菌总数的标准一般不应超过 10CFU/ml。
3.微生物检查的重要性和应用微生物检查的重要性不言而喻，它直接关系到药品的质量和安全性。
如果纯化水中的微生物污染严重，那么药品中就有可能出现微生物污染，这对于患者的健康会造成严重的威胁。
微生物检查的应用也十分广泛，它不仅应用于药品的制备过程中，还应用于医疗器械的清洗和消毒过程中，甚至应用于医院的感染防控中。
纯化水设备电导率与微生物检测方法
纯化水设备电导率与微生物检测方法一、纯化水设备的电导率检测纯化水设备电导率的检测时间，主要取决于用户对产水水质的要求是否严格。
可以根据自己的生产状况来制定适用的检测周期。
不同行业对产水水质有着不同的要求。
如洗衣，灌溉之类就可以一个月检测一次。
而饮用则可以一周检测一次。
如果是实验用纯化水设备，或者是医药用纯化水设备，则需要每天对电导率进行检测，以免影响实验效果或污染医用注射药剂，对生命财产安全造成危害。
电导率的检测相对简单，所用时间较少，只需几分钟，即使每天对纯化水设备的电导率进行检测，也不会耽误太多时间。
而更有对水质要求十分严格的用户采用实时检测，通过对电导率的检测排查水质问题。
这样当系统出错时，就可减少排错时间。
二、纯化水设备的微生物检测微生物限度(薄膜过滤法)：取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。
若供试品每1g或1ml 所含的菌数较多时，可取适量稀释剂的供试液1ml过滤。
用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。
冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。
每种培养基至少制备一张滤膜。
阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
培养和计数除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以48小时的菌落数报告，霉菌、酵母菌培养72小时，逐日点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告，必要时，可适当延长培养时间至5~7天进行菌落计数并报告。
菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。
点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
若同稀释级两个平板的菌落平均数不少于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
纯化水设备出水管道使用一段时间会产生一层生物膜，这层生物膜主要是微生物混入一些杂质吸附在内壁上，形成粘性强的膜层，很难去除。
纯化水微生物限度
纯化水微生物限度纯化水微生物限度纯净水一直被认为是一种非常纯洁的水，这种水通常经过多道过滤和杀菌处理后制成，免受细菌、病毒和其他污染物的影响。
然而，即使在这种精心处理下，这种水中仍然可能会存在微生物。
因此，对于纯化水流出的微生物含量，需要进行严格的微生物限度检测。
微生物限度测试是指用于检测一种物质或产品中微生物数量的方法。
无论是工业领域中还是生活中，这种测试都是必须的。
毕竟，微生物极易污染食品、药品等领域的产品，从而对人体健康造成风险。
在纯水的生产中，微生物的检测是非常重要的，以确保该纯净水符合消费者的期望，并不会对人体健康造成任何影响。
纯化水中的微生物通常分为条件致病菌和微生物总数两类，严格来说，测试方法也有区别。
一般情况下，微生物限度测试对微生物的检测方法通常分为两类：定量测试和定性测试。
其中，定量测试主要是通过某些方法来确定在一个单位体积的样品中存在的微生物数量。
而定性测试则用于鉴定样品中存在的微生物种类。
在测试中，微生物限度是指许可的最大微生物污染限度。
这个标准是通过广泛的分析研究得出的，考虑到人体健康，通常确保水中微生物的数量达到或低于限度标准。
微生物限制测试方法微生物数量测试是通过微孔过滤或膜过滤的方法实现的。
测试前，先将其他可能影响测试结果的物质从样品中清除，如有机物、重金属等。
同时，也需要确保测试环境无菌，以防止来自其他来源的污染。
有许多方法可以用来测试水中微生物的数量，包括经典培养方法、膜滤法、逆渗透法、带电滤膜法等。
其中，经典培养法基于样品中微生物的数量可以在营养琼脂平板上形成的生长菌的数量来计算微生物的数量。
另外，PCR和荧光定量PCR也是常用的微生物测试方法。
PCR是利用酶处理编码基因组重复的DNA片段，这些片段往往存在于微生物基因组中，从而得出微生物数量。
荧光定量PCR可以通过将DNA序列标记成不同的颜色来来区分不同微生物的种类。
需要注意的是，由于不同的测试方法可能具有不同的检测灵敏度以及检测对象的差异，因此微生物限度的标准也可能会不同，这需要在测试前进行明确定义。
纯化水微生物限度检测
纯化水微生物限度检测纯化水微生物限度检测包括了对水中微生物污染程度的评估与监测，其重要性在于确保水的纯度达到合适的标准。
该检测是环境监测中的重要部分，相对于检测其他物质，水质检测需要对多种微生物进行监测。
本文将从纯化水微生物限度检测的必要性、检测方法、影响因素等方面展开分析。
一、纯化水微生物限度检测的必要性纯化水微生物限度检测是确保现代社会得到健康饮用水供应的必要手段。
水是支撑人类生产和生活不可缺少的资源，为了保障水的安全，国际水研究会提出了对水安全的三条标准：化学安全、生物学安全和物理学安全。
其中生物学安全主要是指检测水体中的细菌、病毒、藻类、真菌等微生物是否达到了国家卫生标准水净化处理后的标准要求。
通常情况下，对于自然水源或市政供水，人们都会采用纯水处理技术，除去其中存在的大部分异质物、有机物、无机物和微生物，但这并不意味着此时的水已经完全可供直接饮用或是直接应用于生产和科研实验等领域。
因此，水质检测是必要的，并且其微生物检测部分尤为重要。
二、纯化水微生物限度检测的方法微生物检测主要包括菌落计数法和涂布法等。
菌落计数法是确定水中菌落总数的标准方法，其主要包括直接计数法和滤膜计数法。
直接计数法是指直接将样品涂在平板上，然后通过计算实现细菌数目的统计。
滤膜计数法与直接计数法类似，我们可以先将样品过滤然后直接将过滤膜放在培养基上，然后进行培养，统计出菌落数。
涂布法是将样品涂在培养基上，通过培养时间、培养温度等环境条件来判断样品中有无微生物存在。
当然根据实验需要，也可对微生物进行分离鉴定。
三、影响纯化水微生物限度检测的因素微生物检测在水质检测中占有重要的位置，但同时在微生物检测过程中也有一些因素可能引起检测结果的偏差，例如缺氧、污染源、物种种类等因素将影响样品的真实性。
使用的培养基和培养条件也会影响到微生物的生长情况。
当检测样品来源于管道、水井等地下水源时，还需注意该地区自然生存的微生物种类、菌株以及排放规模等因素。
纯化水微生物限度检查法验证方案
纯化水微生物限度检查法验证方案1. 验证目的：纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。
确认该方法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。
2.职责2.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。
2.2.验证组长2.2.1.负责验证方案的起草2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。
2.2.3.负责验证报告的审批。
2.2.4.负责发放验证证书。
2.2.5.负责再验证周期的确认。
2．3. 质保部2．3.1.负责验证方案审核2．3.2.负责取样及对样品的检验2．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。
2．3.4.负责验证数据及结果的审核3. 参照标准：2005版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
4. 验证项目：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。
5. 合格标准：试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。
6. 试验材料：6.1. 被验证产品：品名纯化水取样点总出水口洗瓶用水洗涤消毒检验量 5ml6.2. 仪器设备：6.2.1. SYQ/ZDX-35B1型自动座式压力蒸汽灭菌器6.2.2. YOKO-ZX紫外分析暗箱6.2.3. SW-EJ-2FB双人净化工作台6.2.4. 101-2A电热鼓风干燥箱6.2.5.SPX-250B型生化培养箱 (23～28℃)6.2.6.PHW-200S恒温培养箱(35～37℃)6.2.7.CR-50×50×65数显隔水式恒温培养箱(30～35℃) 6.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液6.4. 验证用培养基6.5. 验证用菌株：(第3代)7. 菌液制备7.1. 取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
7.2.取经24～25℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。
纯化水微生物限度检查分析方法确认方案
纯化水微生物限度检查分析方法确认方案目录1. 介绍 (4)2. 目的 (4)3. 适用范围 (4)4. 职责 (4)4.1验证小组职责 (4)4.2工程部职责 (4)4.3质量中心职责 (4)4.4验证办公室职责 (4)4.5质量管理负责人职责 (4)5. 缩略语 (4)6. 法规指南 (6)6.1法规 (6)6.2指南 (6)7. 参考文件 (6)8. 方法描述 (7)8.1测定方法描述 (7)8.2规程 (7)8.3可接受标准 (7)9. 验证设计 (8)9.1验证不确定性控制措施 (8)9.2潜在风险清单 (8)9.3试验设计 (9)10. 文件管理规范 (10)11. 测试项目列表 (12)12. 测试描述和可接受标准 (13)12.1人员确认 (13)12.2仪器/设备确认和校准确认 (13)12.3文件确认 (13)12.4培养基/试剂确认 (14)12.5样品确认 (14)12.6薄膜过滤法计数方法验证 (15)13. 偏差处理 (16)14. 变更控制 (16)15. 验证报告 (16)16. 附件清单 (16)17. 支持性附件清单 (16)18. 测试报告 (17)1.介绍微生物限度检查方法用于纯化水微生物限度测定，方法来源中国药典2010版，二部，附录ⅪJ “微生物限度检查法”。
本方案的目的是建立文件记录证明纯化水微生物限度测定方法在本公司质量控制实验室的适用性和可重现性，方法能够提供一致、可信和准确的微生物限度检测数据。
2.目的对《纯化水微生物限度测定标准操作规程》（SOP/A0/QC03/038）进行方法确认。
证明该方法适用于纯化水微生物限度检查，具有准确性和可靠性，可达到控制产品质量的目的。
3.适用范围本验证方案适用于纯化水的微生物限度检查放行测定。
4.职责4.1验证小组职责✓对照品/试剂/物料/样品确认✓方案的实施，数据的收集✓最终报告的编写✓偏差报告的编写4.2工程部职责✓提供在方案执行中所需仪器的校准证书✓执行前审核本方案✓报告审核4.3质量中心职责✓执行前审核本方案✓报告审核4.4验证办公室职责✓执行前审核本方案✓报告审核4.5质量管理负责人职责✓批准本方案5.缩略语6.法规指南为了编写本方案，参考了以下文件：6.1法规✓中国GMP（2010年修订）中国食品药品监督管理局（CFDA）✓中国药典（ChP）二部2010版6.2指南✓GMP指南中国食品药品监督管理总局（CFDA）20107.参考文件8.方法描述8.1测定方法描述8.1.1实验准备8.1.1.1核对待检供试品信息是否正确。
纯化水微生物限度检查标准操作规程
纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。
2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。
3职责微生物限度检查操作人员。
4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。
滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。
5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。
5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。
5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。
玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。
吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。
玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。
5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。
纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。
也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。
5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。
5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。
5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。
5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。
5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。
包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。
5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。
5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。
已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。
262 纯化水微生物限度检查记录
文件编号：REC-ZL-26200 页码：第1页共1页
湖南千金协力药业有限公司·GMP 文件 质量管理记录 纯化水微生物限度检查记录
标准号： 操作规程号： 检验号： 品名 纯化水 取样点 编号 检验日期 年 月 日 报告日期 年 月 日 检验依据 中国药典2010年二部 紫外消毒时间 时 分至 时 分
检验标准：细菌、霉菌及酵母菌总数≤80cfu/ml
检验结果：细菌总数+霉菌总数+酵母菌总数=
结论：本品经按中国药典2010版二部检验，结果 检验人： 日期： 复核人： 日期： 检验方法：取充分混匀的纯化水样1ml 注入滤器，每次用100ml 的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，使总冲洗量为300ml ，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于培养基平板上培养。
每种培养基制备一张滤膜。
细菌总数
培养基
名称 营养琼脂培养基 培养温度 30～35℃ 培养箱型号 批号 培养时间 72h ±2h 培养箱编号
样品 阴性对照 结果 平皿
霉菌总数
培养基
名称 玫瑰红钠琼脂 培养基 培养温度 23～28℃ 培养箱型号 批号 培养时间 120h ±2h 培养箱编号
样品 阴性对照 结果 平皿
酵母菌总数
培养基
名称 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 培养温度 23～28℃ 培养箱型号 批号 培养时间 120h ±2h 培养箱编号
样品 阴性对照 结果 平皿。
纯化水微生物限度检查法操作规程
SOP/QC(09)001－01 纯化水微生物限度检查法操作规程文件类别：标准操作规程江西中兴汉方药业有限公司1.目的规范纯化水微生物检查的操作方法，确保药品检验的准确性。
2.适用范围适用于纯化水的微生物检查。
3.责任人QC：负责按此规程执行。
4.程序4.1概述本规程是以营养琼脂培养基作为细菌培养基，采用平板表面涂布法测定纯化水菌落总数。
其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
4.2仪器与用具电热恒温培养箱（30～35℃）霉菌培养箱（23～28℃）超净工作台无菌双碟移液管0.45μm微孔滤膜过滤器抽滤泵4.3试药与试剂营养琼脂培养基玫瑰红钠培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液4.4纯化水的取样4.4.1取样时，须先开启取样阀门，用工艺用水本身冲冼取样口，约冲水1升以上，而后以无菌具塞10ml试管取水，取水量约为试管高度的1/2～2/3。
4.4.2检测周期：见“工艺用水监测规程（SMP-ZL-016-）”规定。
4.4.3取样后的水样应立即检验。
4.5检查方法量取9ml纯化水置盛有90mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的锥形瓶中混匀，作为供试液；量取供试液10供试液置安装好的无菌抽滤装置，进行过滤。
用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板上，盖好，倒置培养皿，分别将营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板置电热恒温培养箱（30～35℃）及霉菌培养箱（23～28℃）中培养。
细菌培养3天后进行菌落计数，霉菌培养5天后进行菌落计数。
计数结果即为每ml水中含细菌及霉菌的菌落数。
4.6结果判定每1ml纯化水中的细菌数及霉菌数之和应不得过100个。
5相关记录6变更履历表。
中国药典2020版二部纯化水微生物检查
中国药典2020版二部纯化水微生物检查【原创实用版】目录1.概述2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准3.微生物检查的方法4.微生物检查的注意事项5.结论正文1.概述纯化水是制药工业中常用的一种水质，其微生物质量对于药品的质量和安全性至关重要。
为了保证纯化水的微生物质量，我国制定了一系列的标准和方法。
本文将介绍中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的相关内容。
2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准中国药典 2020 版二部对于纯化水的微生物检查有严格的标准。
其中，纯化水的微生物限度要求如下：- 细菌总数：≤10cfu/ml- 霉菌和酵母菌：≤1cfu/ml- 细菌内毒素：≤0.25EU/ml3.微生物检查的方法微生物检查通常包括以下几个步骤：- 采样：在纯化水的生产过程中随机采样，保证样品具有代表性。
- 培养：将样品在适当的培养基中进行培养，以便微生物生长和繁殖。
- 计数：在适当的时间点对培养基中的微生物进行计数，以了解样品中微生物的数量。
- 鉴定：通过显微镜观察和生化试验等方法，对微生物进行鉴定，以确定其种类。
4.微生物检查的注意事项在进行纯化水微生物检查时，应注意以下几点：- 采样时应保证样品的无菌性，避免样品被污染。
- 选择适当的培养基和培养条件，以保证微生物的生长和繁殖。
- 在进行微生物计数时，要保证计数方法的准确性和精度。
- 定期对纯化水微生物检查的设备和方法进行验证，以确保检查结果的可靠性。
5.结论通过对中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的研究，我们可以了解到，我国对于纯化水的微生物质量有着严格的要求。
微生物检查的方法和注意事项也需要我们在实际操作中严格遵守，以保证药品的质量和安全性。
纯化水微生物限度检查方法
纯化水微生物限度检查方法1. 纯化水微生物限度检查方法纯化水是指经过特殊处理后去除了多种杂质和微生物的水，主要用于实验室、制药、电子工业等领域。
为确保纯化水的质量，需要进行微生物限度检查。
以下为纯化水微生物限度检查方法及其详细描述。
2. 样品采集要选择好样品采集点。
在采集前要将取样的操作员的手洗净，然后用70%的酒精或其他消毒剂在取样点上喷洒并擦拭，等待其干燥。
样品可以用无菌的容器，如无菌烧杯或无菌注射器采集。
3. 检查项目常规情况下，对于纯化水的微生物限度检查主要包括大肠杆菌、菌落总数和霉菌的检测。
4. 大肠杆菌检测大肠杆菌是一种重要的致病菌，其检测可以反映样品是否受到粪便污染。
根据GMP规定，1毫升纯化水中的大肠杆菌不应超过10个。
5. 菌落总数检测菌落总数是指在一定条件下，菌落形成的总数。
对纯化水进行菌落总数检测，可以评估其细菌含量及其污染情况。
普遍认为，1毫升纯化水中的细菌菌落总数不应超过100CFU （菌落形成单位）。
6. 霉菌检测霉菌是一种常见的微生物，常常伴随着水污染。
过多的霉菌会对人体健康造成危害。
对于纯化水，检测霉菌可以评估其存在程度和可能的污染源。
GMP规定，1毫升纯化水中的霉菌不应超过10CFU。
7. 检测方法目前，常用的检测方法有培养法、分子生物学方法和流式细胞仪法。
培养法是一种较为传统的方法，通常通过在培养基上进行菌落总数检测，可以获得较为准确的结果。
分子生物学方法则是一种新兴的技术，可以通过检测DNA、RNA或蛋白质，进行微生物的检测。
流式细胞仪则是一种高通量的技术，可以进行密集的细胞计数和分类。
8. 注意事项在进行微生物限度检查时，要特别注意以下几点。
所有的操作应当严格按照GMP要求进行，确保检测的结果准确可靠。
其次要加强检测设备的维护及保养，确保设备的准确性和稳定性。
最后需要注意的是，纯化水的质量与检测方法密切相关，应根据不同领域的需求，选择相应的检测方法和标准。
纯化水微生物限度检测
1. 目的
本规程旨在为微生物限度检查提供一个标准化方法。
2. 适用范围
微生物限度实验室
3. 责任者
QC主管生测员
4. 安全注意事项
严格无菌操作，防止微生物污染。
5. 规程
5.1 取样
a．在车间、实验室所有用水点按序取样，标明日期和取样点位置，一个监测点取水3次，一次250mL，送检验室按中国药典2010年版二部标准进行全检。
b．取样前将直接接触样品的容器用75%酒精棉球进行擦拭，采用灭菌后瓶收集样品。
c．取样时，取样人洗手并消毒，取样前用纯化水淋洗检验用取样瓶和瓶塞3次。
灭菌瓶至少取200mL用于微生物检验用水，微生物检验应在取样后的1小时内进行，或将样品冷藏并在4小时内进行检验。
5.2 微生物限度检查
纯化水检验标准微生物限度检查采用平皿法和薄膜过滤法。
5.3 微生物培养
（1）除另有规定，本检查法中细菌培养温度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23-28℃.
（2）一般营养琼脂培养基用于细菌计数，培养18-24h；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数，培养3-5天。
6．结果判断
以1mL供试品的菌落数报告菌数。
供试品细菌数每1ml不得过100cfu；霉菌与酵母菌总数每1ml不得过100cfu。
阴性对照不得有菌落生长。
7. 附表及附录
附录1：纯化水微生物限度检测报告
8. 制定依据
参照《中华人民共和国药典》2010版第二部微生物限度检查及（附录XI J）微生物限度标准，和GB/T14233.2医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分生物学试验方法。
附录一
纯化水微生物限度检测报告。
纯化水微生物限度检验记录
生产单位：水系统编号：
取样日期：检验日期：
「微生物限度」（需氧菌总数）：
1.1培养基和设备室温：℃；相对湿度：%RH
A.R2A培养基供应商：配制批号：有效期至：
B.生化培养箱型号：编号：有效期至：
C.立式蒸汽灭菌器型号：编号：有效期至：
D.净化工作台型号：编号：
E.集菌仪型号：编号：
F.滤膜孔径：直径：
1.2供试液的制备
取纯化水10ml，加至50ml已灭菌的纯化水中，混匀，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。
1.3需氧菌总数检查
1.3.1需氧菌总数：取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养5天，计数。
1.3.3阴性对照
1.3.3.1需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。
1.4结果记录
1.4.1需氧菌培养
检验者/日期：校对者/日期：
审核结论：该检验记录原始、真实，内容完整、齐全，书写清晰，所有检测项目全部符合规定。
□是□否审核者/日期：。
纯化水微生物限度检测
如果取10ml，两片膜共长1000个菌以下并不定是不合格的。
因为取水10ml，只能每次取5ml，各用于两片膜的过滤，每张膜只能培养出细菌或霉菌，不能同时出细菌和霉菌，所以结果计算时体积只能算5ml，按5ml计，两片膜有1000个，则每1ml有200个了所以应判为不合格，只有在500个以下才能算合格的。
应该说05年版药典的标准比00年更为合理，因为采用薄膜过滤法，取样量可以加大(平板法时只取1ml)，更能培养微生物，对于检验更有代表性。
一般不可能平板计数法不合格，而采用过滤法确能合格，取样量加大后，培养出微生物的机率更大。
若相反，要查一下原因，是不是检测有问题。
采用薄膜过滤法可以通过验证来确定取样量，也并不一定取5-10ml，若纯化水中含微生物量较少，则取样量可加大，但不能培养出太多菌落导致无法点计，影响计数结果。
若含微生物较多，则取用量可减少，总之，在不影响计数的前提下，尽可能加大取样量。
我们公司是取水25-50ml。
供参考，我们是采用平板法时，一般都没有培养出菌落。
另采用薄膜过滤法可以不必加无菌水稀释，直接滤过即可。
纯化水微生物限度检查法验证
目录A、验证方案1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.验证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.验证方案批准B、验证报告1.概述2.适用范围3.验证目的4.验证小组及职责分工4.1 验证小组4.2 职责分工5.确证内容6.漏项与偏差及采取的纠偏措施.7.验证结论8.最终批准9. 再验证周期与年度回顾性验证1 概述由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
2 适用范围纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法的验证。
3 验证目的验证纯化水微生物限度检查——薄膜过滤法符合《中国药典》2005年版二部的规定要求。
4 验证小组及职责分工5 验证内容5.1 品种：纯化水5.2 验证方法：《中国药典》2005年版二部微生物限度检查——薄膜过滤法5.3 计数方法的验证5.3.1 验证试验用菌种验证试验用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26 003〕枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC(B) 63 501〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕5.3.2 菌液制备取经32.5℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。
纯化水、注射用水微生物检验方法确认
纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案（VP）文件编号：VP—JY-0026—01项目名称：纯化水、注射用水微生物检验方法学验证目录1 引言 (4)1.1 验证实施进度计划 (4)1.2 概述 (4)2 验证所需设备清单 (4)3 验证人员、职责 (4)3.1 项目验证小组成员 (4)3。
2 验证变更 (4)3。
3 验证培训 (4)4 验证目的 (5)5 验证内容 (5)5。
1 培养基配制 (5)5.2 菌种 (5)5。
3 菌液的制备 (5)5。
4 薄膜过滤法检测微生物 (6)5。
5 结果评价 (7)6 验证过程中的偏差及处理 (7)7 验证结果的评定与结论 (7)8 附件 (8)1 引言1。
1 验证实施进度计划实施时间计划安排在年月日至年月日。
1。
2 概述通过验证以确认R2A适用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。
根据培养基及验证菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，则R2A可用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。
2 验证所需设备清单2。
1。
XG1。
D脉动真空灭菌器2。
2. MJ—250—I型霉菌培养箱 (20～25℃）2.3. LPH—250生化培养箱 (30～35℃)2.4. WG11-230BE电热鼓风干燥箱2。
5. 微波炉3 验证人员、变更及培训3。
1 项目验证小组成员项目验证小组由中心化验室微生物检验员、质检员、化验室主任、质量管理部经理等组成，由化验室主任任项目验证组组长，验证小组成员见附表1，具体分工、职责如下：3。
2 验证变更验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写《验证方案变更申请及批准书》(附件2），报验证领导小组批准后执行。
3.3 验证培训验证过程中，确认方案以及验证中应该掌握的技能应该进行培训，培训应遵循《员工培训管理规程》.培训情况记录于附件3。
4 验证目的与适用范围4.1 验证目的根据《中国药典》2015版四部1105项下微生物检查法的规定，验证纯化水、注射用水微生物检查方法的适用性,即确认检品、所设定的检验条件及检验程序对供试品中可能存在的各类微生物无抑制作用,其方法可行有效。
纯化水和注射用水微生物限度试验
纯化水和注射用水微生物限度试验1目的测试纯化水和注射用水中的细菌、霉菌和酵母菌的数量。
2测试依据2005版药典。
3测试要求纯化水：细菌、霉菌和酵母菌总数不得超过100cfu/ml。
注射用水；细菌、霉菌和酵母菌总数不得超过10cfu/100ml4工作环境100级洁净条件下局部100级单向流空气区域内，按无菌操作要求进行。
5器具和试剂取水容器、平皿、薄膜过滤器、滤纸、手提消毒锅、镊子。
营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基氯化钠蛋白胨缓冲液。
6取水样在制水装置的储水桶的出水口、回水口和用水终端处分别取样，纯化水各点取100ml，注射用水也分别各取100ml.7过滤、接种和培养用氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，取纯化水1 ml加氯化钠蛋白胨缓冲液到100ml，混匀后过滤，用镊子取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基面上，用同法制备滤膜二张，分别贴于玫瑰红钠琼脂培养基和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基上，细菌培养30℃，48小时，霉菌和酝母菌25℃培养72小时。
注射用水：将三个采样点采取的水样各100ml，分别过滤制备滤膜，菌面朝上分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基上，细菌在30℃培养48小时，霉菌和酵母菌在25℃培养72小时。
8计数和报告用放大镜观察逐片计数，纯化水以每1ml供试品的菌落数为报告数，注射用水以100ml供试品的菌落数为报告数。
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的配制1用途稀释液,冲洗液.2配方蛋白胨1.0g/l ,氯化钠4.3 g/l ,磷酸二氢钾3.5 g/l,磷酸氢二钠7.23 g/l。
3用法取本品质16.2xx,加蒸馏水(PH为6.6)1000ml,加热完全溶解后,校正PH值7.02,滤清、分装、灭菌。
倘若PH值偏差，用,磷酸二氢钾或磷酸氢二钠调节至7.02(灭菌后会降低0.02)。
联系电话。
纯化水微生物限度标准操作规程
1.目的：建立一个纯化水微生物限度检测方法的标准操作规程。
2. 适用范围：适用于纯化水的微生物限度检测。
3. 责任者：微生物限度检测人员。
4. 操作规程：
本操作过程应在无菌环境下进行，操作前用紫外光灯照射30分钟以上进行灭菌。
将待测纯化水样品、培养基及其他所需用具放入无菌室中。
纯化水稀释：
取6支已灭菌的试管，分别加入9ml无菌水，并按10-1～10-6的顺序编号。
用移液枪吸取1ml纯化水样品，注入10-1倍稀释的试管中。
用移液枪吹吸三次，使纯化水样品与无菌水水充分混匀。
?
从10-1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10-2倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。
依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。
涂布平板操作：
将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
取100μl稀释液，滴加到培养基表面；
将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s；
用涂布器将稀释液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
按上述方法依次将10-1～10-6的稀释液涂布于平板上，每个稀释度的样品涂布两个平板。
将涂布好的培养基置于36±℃培养箱中培养，连续培养3～5天。
培养3～5天后对所有培养基进行菌落计数。