抗生素类药物的分析
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试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以0.1mol/L枸橼酸溶液-0.2mol/L磷酸氢二 钠溶液-丙酮（60:40:1.5）为展开剂，展开，取出于 105℃加热5分钟后,立即喷以于展开剂配成的0.1%茚三
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
2. 生物学法
对照品法
（二）检查
1. 影响药物纯度的项目：溶液澄清度与颜色、
有关物质、残留溶剂、炽灼残渣、吸光度等。
2. 影响药物稳定性的项目：酸碱度、水分等。 3. 影响药物有效性的项目：结晶性、异构体的
相对含量、多组分抗生素的组分分析。
4. 影响药物安全性的项目：细菌内毒素、无菌
、可见异物、不溶性微粒、β-内酰胺类抗生素中的 高分子聚合物、四环素类抗生素中的降解产物等。
在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间 的比值应在0.93~1.07之间，对照溶液主峰和供试 品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖 2000峰保留时间的比值均应在0.93~1.07之间。称 取头孢尼西钠约0.2g，置10ml量瓶中，用 0.1mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻 度，摇匀。取100~200μl注入液相色谱仪，用流动 相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单 体和高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相 B为流动相，精密量取对照溶液100~200μl，连续 进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。
H+ or醇
T=24℃
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11
0.4 1.4 12 92 336 218 125 31.2 9.3 1.4
pH2，30′
温度℃ ↓% 6
5
26 77
37 97
（一）呈色反应
1. 羟肟酸铁反应 内酰胺
盐酸羟胺 OH - 羟 肟 酸 衍 生 物 头孢菌素类
H+ Fe3+/3
一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法 之间的关系。 二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原 理、测定方法与计算。 四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。
五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。
抗生素的定义（antibiotics）
抗生素是指在低微浓度下即可对
对照品 供试品
比 较 R f 和 斑 点 颜 色
相同条件
2. HPLC法
对照品 供试品
比 较 t R
相同条件
例 头孢拉定
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品与头孢拉定对照品适量,
分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含6mg的溶液.作为
供试品溶液和对照品溶液，照薄层色谱法（附录 Ⅴ B）
缺点
操作繁琐、测定时间长、 测定误差大
2. 理化方法
以理化方法测定抗生素的效价
适用于纯度较高的结构确定的抗生素
优点
1. 准确度高 2. 简单、快速
1. 不一定代表生物效价
缺点
2. 易受杂质干扰
青霉素类
滴定法
UV
HPLC法
微生物检定法 头孢菌素类 HPLC法
3.抗生素活性表示方法
以效价单位表示。
H SO
羰 基 侧 链 含 “ C H ” HC HO
△（分解）
活泼“-CH2-”
变色酸
显色
（二）各种盐的反应 1. K+、Na+的火焰反应 Na+ 焰色→鲜黄色 + 醋酸氧铀锌→↓黄
K+
焰色→紫色 + 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白
（三）光谱法 1. IR法 β-内酰胺环上的羰基伸缩振动
即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的 有效成分的多少。用U或μg表示。
例如 1mg 青霉素钠为 1670 U 1mg 庆大霉素为 590 U 一种抗生素有一个效价基准，其各种盐类 的效价可根据其分子量与标准盐换算。
三、抗生素的分类
1. 按抗生素来源分类 2. 按抗菌谱分类 3. 按作用机制分类 4. 按化学结构和性质分类 β-内酰胺类 多烯大环类 细菌 枯草菌 广谱 青霉素、头孢类 氨基糖苷类 多肽类 真菌 青霉素类、头孢类、 G+ 红霉素（金葡菌） 四环素类 苯烃胺类 灰黄霉素 G卡那霉素、庆大霉素 大环内酯类 蒽环类等 放线菌 绿脓杆菌链霉素 阿莫西林
Cu 、Pb 、Hg 、Ag （青霉素钠水溶液30℃24h失活56%）
酸、碱、青霉素酶
酸、碱、胺类 头 孢 菌 素 类 降 解 、 失 效 内酰胺酶
（头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%）
OHˉ
pH2 H+ or HgCl2
pH4
△ H+ -CO2
HgCl2 △
△ HgCl2 H+
例
青霉素钠
Ch.P.（2010）
【检查】青霉素聚合物 照分子排阻色谱法（附录 Ⅴ H）测定。 填充剂 葡聚糖凝胶G-10（40~120µ m） 流动相A 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） [0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)] 流动相B 水
流速
检测波长
青霉素类
Fe3+/3
H+
（红、棕、褐）
例 磺苄西林钠
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品约20mg，加水15ml溶 解后，加盐酸羟胺试液与氢氧化钠试液各2ml， 放置5分钟后，加盐酸溶液（1→100）3ml与三氯 化铁试液1ml，随即振摇，即显赤褐色。
例 头孢哌酮
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品约10mg，加水2ml与盐 酸羟胺溶液[取34.8%盐酸羟胺1份，醋酸钠-氢氧 化钠溶液（取醋酸钠10.3g与氢氧化钠86.5g，加水 溶解使成1000ml）1份，乙醇4份，混匀]3ml，振 摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml, 摇匀，显红棕色。
2. UV-Vis法
光谱图 max min
1% E1cm
样品或 分解产物
A/ A
m ax
青霉素V钾 头孢氨苄 268、274 262
A/A
1% E1cm
1.20~1.25 220~245
头孢唑林钠 头孢噻肟钠
272 262
264~292 400~440
（四）色谱法 1. TLC法
对照品对照法
5. 其他检查项目：悬浮时间、抽针试验
青霉素钠 结晶性
Ch.P.（2010） 酸碱度
溶液的澄清度与颜色
吸光度 青霉素聚合物 有关物质 干燥失重
可见异物
细菌内毒素
不溶性微粒
无菌
（三）含量测定方法
1. 抗生素微生物检定法 药典附录
测定抗生素抑菌或杀菌的能力
优点 与临床要求一致 灵敏度高、用量少 适用范围广，可用于未知药物
（一）结构
RCO NH O N
S CH2R1 COOH
penicillins
* * *
VC=O
1815~1740cm-1
（青霉素G）
Benzylpenicillin Sodium
Phenoxymethylpenicillin Potassium
Ampicillin
amoxicillin
* *
2. 类似肽键的反应 茚三酮反应
类 似 氨 基 酸 结 构 茚三酮 内 酰 胺 类 △ 蓝紫色
CO C C N C OC OC
Ch.P.(2010)用TLC法鉴别头孢拉啶、氨苄西林、 头孢克洛等，以印三酮为显色剂
3. 其他呈色反应 *与重氮苯磺酸盐反应 *与变色酸-硫酸反应
颜色与位置相同。
例 头孢拉定
Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）在含量测定项下记录的色谱图
中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液
主峰的保留时间一致。
例
头孢氨苄
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图
中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液 主峰的保留时间一致。 （2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 （光谱集1090图）一致。
某些生物的生命活动有特异抑制作
用的化学物质的总称。
（一）抗生素的来源 1. 微生物发酵 （主要） 2. 化学合成或半合成
（二）抗生素类药物的特点
1. 多组分及活性组分易发生变异 2. 稳定性差 3. 化学纯度较低
二、抗生素类药物分析的特点
（一）鉴别试验 1. 理化法
（1）化学法
（2）仪器分析法
5. -内酰胺环的不稳定性
-内酰胺环不稳定，与酸、碱、
青霉素酶、羟胺及某些金属离子等作 用，易发生水解和分子重排，导致失
去抗菌活性
干燥纯净 较稳定 水溶液
不稳定 性因素
不稳定、易开环失效
四元环张力大
酰胺键易水解
氧化剂
温度↑
青霉素类 降 解 、 失 效 2+ 2+ 2+ +
VC=O
1815~1740cm-1
cefadroxil
cefadroxil
cefradine
cefalotin
一、结构与性质
（一）结构
1. 青霉素类
RCO HN O S
6 7 5 1 2 3
CH3 CH3 COOH
N4
（1）侧链（RCO-）+母核（6-APA）
（2）分子中含三个手性碳原子（C3、 C5、C6）
（一）聚合物
分子排阻色谱法
头孢尼西钠
Ch.P.（2010）
头孢尼西聚合物
照分子排阻色谱
法（附录Ⅴ H）测定。
1.头孢尼西聚合物的测定 照分子排阻色谱法(附录VH)测定
固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40~120µ m）
流动相A： pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：水
色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G10（40~120μm）为填充剂；玻璃柱内径为 1.0~1.4cm，柱长为30~40cm，流动相A为pH7.0 的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠 溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61∶39）]，流 动相B为水，流速约为每分钟1.2ml，检测波长 为254nm。取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液 100~200μl注入液相色谱仪，分别以流动相A、B 进行测定，记录色谱图。理论板数以蓝色葡聚 糖2000峰计算均不低于500，拖尾因子均应小于 2.0。
*高分子聚合物 *异构体 *有关物质 *吸光度杂质
（青霉噻唑蛋白 + 青霉素、青霉噻唑多肽类） 例 青霉素钠 例 青霉素钾 例 阿莫西林 例 头孢他啶 【检查】青霉素聚合物 【检查】青霉素聚合物 【检查】阿莫西林聚合物 【检查】头孢他啶聚合物
例 头孢曲松钠 【检查】头孢曲松聚合物 例 头孢哌酮钠 【检查】头孢哌酮聚合物
与碱金属(Na+、K+)成盐，易溶于水
Na
与有机碱(普鲁卡因)成盐
难溶于水
2. 溶解性
游离的β-内酰胺类抗生素不溶于水， 其碱金属盐易溶于水，遇酸析出白色
沉淀；而有机碱盐难溶于水，易溶于 有机溶剂。
3. 旋光性
4. 紫外吸收光谱特征
（ 1 ）青霉素分子的母核无吸收，侧 链有吸收 （2）头孢菌素分子的母核有吸收
* H2SO4-HNO3反应
与重氮苯磺酸反应 头孢哌酮 酚羟基
重氮苯磺酸
- C6 H5 - OH
（偶合）
与H2SO4 - HNO3反应
头孢菌素类
头孢氨苄 黄色 H SO HNO 头孢噻吩钠 红棕 头孢噻肟钠 亮黄
与变色酸-硫酸反应
青霉素 阿莫西林 氨苄西林
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
2. 生物学法
对照品法
（二）检查
1. 影响药物纯度的项目：溶液澄清度与颜色、
有关物质、残留溶剂、炽灼残渣、吸光度等。
2. 影响药物稳定性的项目：酸碱度、水分等。 3. 影响药物有效性的项目：结晶性、异构体的
相对含量、多组分抗生素的组分分析。
4. 影响药物安全性的项目：细菌内毒素、无菌
、可见异物、不溶性微粒、β-内酰胺类抗生素中的 高分子聚合物、四环素类抗生素中的降解产物等。
在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间 的比值应在0.93~1.07之间，对照溶液主峰和供试 品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖 2000峰保留时间的比值均应在0.93~1.07之间。称 取头孢尼西钠约0.2g，置10ml量瓶中，用 0.1mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻 度，摇匀。取100~200μl注入液相色谱仪，用流动 相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单 体和高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相 B为流动相，精密量取对照溶液100~200μl，连续 进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。
H+ or醇
T=24℃
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11
0.4 1.4 12 92 336 218 125 31.2 9.3 1.4
pH2，30′
温度℃ ↓% 6
5
26 77
37 97
（一）呈色反应
1. 羟肟酸铁反应 内酰胺
盐酸羟胺 OH - 羟 肟 酸 衍 生 物 头孢菌素类
H+ Fe3+/3
一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法 之间的关系。 二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原 理、测定方法与计算。 四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。
五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。
抗生素的定义（antibiotics）
抗生素是指在低微浓度下即可对
对照品 供试品
比 较 R f 和 斑 点 颜 色
相同条件
2. HPLC法
对照品 供试品
比 较 t R
相同条件
例 头孢拉定
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品与头孢拉定对照品适量,
分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含6mg的溶液.作为
供试品溶液和对照品溶液，照薄层色谱法（附录 Ⅴ B）
缺点
操作繁琐、测定时间长、 测定误差大
2. 理化方法
以理化方法测定抗生素的效价
适用于纯度较高的结构确定的抗生素
优点
1. 准确度高 2. 简单、快速
1. 不一定代表生物效价
缺点
2. 易受杂质干扰
青霉素类
滴定法
UV
HPLC法
微生物检定法 头孢菌素类 HPLC法
3.抗生素活性表示方法
以效价单位表示。
H SO
羰 基 侧 链 含 “ C H ” HC HO
△（分解）
活泼“-CH2-”
变色酸
显色
（二）各种盐的反应 1. K+、Na+的火焰反应 Na+ 焰色→鲜黄色 + 醋酸氧铀锌→↓黄
K+
焰色→紫色 + 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白
（三）光谱法 1. IR法 β-内酰胺环上的羰基伸缩振动
即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的 有效成分的多少。用U或μg表示。
例如 1mg 青霉素钠为 1670 U 1mg 庆大霉素为 590 U 一种抗生素有一个效价基准，其各种盐类 的效价可根据其分子量与标准盐换算。
三、抗生素的分类
1. 按抗生素来源分类 2. 按抗菌谱分类 3. 按作用机制分类 4. 按化学结构和性质分类 β-内酰胺类 多烯大环类 细菌 枯草菌 广谱 青霉素、头孢类 氨基糖苷类 多肽类 真菌 青霉素类、头孢类、 G+ 红霉素（金葡菌） 四环素类 苯烃胺类 灰黄霉素 G卡那霉素、庆大霉素 大环内酯类 蒽环类等 放线菌 绿脓杆菌链霉素 阿莫西林
Cu 、Pb 、Hg 、Ag （青霉素钠水溶液30℃24h失活56%）
酸、碱、青霉素酶
酸、碱、胺类 头 孢 菌 素 类 降 解 、 失 效 内酰胺酶
（头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%）
OHˉ
pH2 H+ or HgCl2
pH4
△ H+ -CO2
HgCl2 △
△ HgCl2 H+
例
青霉素钠
Ch.P.（2010）
【检查】青霉素聚合物 照分子排阻色谱法（附录 Ⅴ H）测定。 填充剂 葡聚糖凝胶G-10（40~120µ m） 流动相A 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） [0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39)] 流动相B 水
流速
检测波长
青霉素类
Fe3+/3
H+
（红、棕、褐）
例 磺苄西林钠
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品约20mg，加水15ml溶 解后，加盐酸羟胺试液与氢氧化钠试液各2ml， 放置5分钟后，加盐酸溶液（1→100）3ml与三氯 化铁试液1ml，随即振摇，即显赤褐色。
例 头孢哌酮
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）取本品约10mg，加水2ml与盐 酸羟胺溶液[取34.8%盐酸羟胺1份，醋酸钠-氢氧 化钠溶液（取醋酸钠10.3g与氢氧化钠86.5g，加水 溶解使成1000ml）1份，乙醇4份，混匀]3ml，振 摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml, 摇匀，显红棕色。
2. UV-Vis法
光谱图 max min
1% E1cm
样品或 分解产物
A/ A
m ax
青霉素V钾 头孢氨苄 268、274 262
A/A
1% E1cm
1.20~1.25 220~245
头孢唑林钠 头孢噻肟钠
272 262
264~292 400~440
（四）色谱法 1. TLC法
对照品对照法
5. 其他检查项目：悬浮时间、抽针试验
青霉素钠 结晶性
Ch.P.（2010） 酸碱度
溶液的澄清度与颜色
吸光度 青霉素聚合物 有关物质 干燥失重
可见异物
细菌内毒素
不溶性微粒
无菌
（三）含量测定方法
1. 抗生素微生物检定法 药典附录
测定抗生素抑菌或杀菌的能力
优点 与临床要求一致 灵敏度高、用量少 适用范围广，可用于未知药物
（一）结构
RCO NH O N
S CH2R1 COOH
penicillins
* * *
VC=O
1815~1740cm-1
（青霉素G）
Benzylpenicillin Sodium
Phenoxymethylpenicillin Potassium
Ampicillin
amoxicillin
* *
2. 类似肽键的反应 茚三酮反应
类 似 氨 基 酸 结 构 茚三酮 内 酰 胺 类 △ 蓝紫色
CO C C N C OC OC
Ch.P.(2010)用TLC法鉴别头孢拉啶、氨苄西林、 头孢克洛等，以印三酮为显色剂
3. 其他呈色反应 *与重氮苯磺酸盐反应 *与变色酸-硫酸反应
颜色与位置相同。
例 头孢拉定
Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）在含量测定项下记录的色谱图
中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液
主峰的保留时间一致。
例
头孢氨苄
Ch.P.（2010）
【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图
中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液 主峰的保留时间一致。 （2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 （光谱集1090图）一致。
某些生物的生命活动有特异抑制作
用的化学物质的总称。
（一）抗生素的来源 1. 微生物发酵 （主要） 2. 化学合成或半合成
（二）抗生素类药物的特点
1. 多组分及活性组分易发生变异 2. 稳定性差 3. 化学纯度较低
二、抗生素类药物分析的特点
（一）鉴别试验 1. 理化法
（1）化学法
（2）仪器分析法
5. -内酰胺环的不稳定性
-内酰胺环不稳定，与酸、碱、
青霉素酶、羟胺及某些金属离子等作 用，易发生水解和分子重排，导致失
去抗菌活性
干燥纯净 较稳定 水溶液
不稳定 性因素
不稳定、易开环失效
四元环张力大
酰胺键易水解
氧化剂
温度↑
青霉素类 降 解 、 失 效 2+ 2+ 2+ +
VC=O
1815~1740cm-1
cefadroxil
cefadroxil
cefradine
cefalotin
一、结构与性质
（一）结构
1. 青霉素类
RCO HN O S
6 7 5 1 2 3
CH3 CH3 COOH
N4
（1）侧链（RCO-）+母核（6-APA）
（2）分子中含三个手性碳原子（C3、 C5、C6）
（一）聚合物
分子排阻色谱法
头孢尼西钠
Ch.P.（2010）
头孢尼西聚合物
照分子排阻色谱
法（附录Ⅴ H）测定。
1.头孢尼西聚合物的测定 照分子排阻色谱法(附录VH)测定
固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40~120µ m）
流动相A： pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：水
色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G10（40~120μm）为填充剂；玻璃柱内径为 1.0~1.4cm，柱长为30~40cm，流动相A为pH7.0 的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠 溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61∶39）]，流 动相B为水，流速约为每分钟1.2ml，检测波长 为254nm。取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液 100~200μl注入液相色谱仪，分别以流动相A、B 进行测定，记录色谱图。理论板数以蓝色葡聚 糖2000峰计算均不低于500，拖尾因子均应小于 2.0。
*高分子聚合物 *异构体 *有关物质 *吸光度杂质
（青霉噻唑蛋白 + 青霉素、青霉噻唑多肽类） 例 青霉素钠 例 青霉素钾 例 阿莫西林 例 头孢他啶 【检查】青霉素聚合物 【检查】青霉素聚合物 【检查】阿莫西林聚合物 【检查】头孢他啶聚合物
例 头孢曲松钠 【检查】头孢曲松聚合物 例 头孢哌酮钠 【检查】头孢哌酮聚合物
与碱金属(Na+、K+)成盐，易溶于水
Na
与有机碱(普鲁卡因)成盐
难溶于水
2. 溶解性
游离的β-内酰胺类抗生素不溶于水， 其碱金属盐易溶于水，遇酸析出白色
沉淀；而有机碱盐难溶于水，易溶于 有机溶剂。
3. 旋光性
4. 紫外吸收光谱特征
（ 1 ）青霉素分子的母核无吸收，侧 链有吸收 （2）头孢菌素分子的母核有吸收
* H2SO4-HNO3反应
与重氮苯磺酸反应 头孢哌酮 酚羟基
重氮苯磺酸
- C6 H5 - OH
（偶合）
与H2SO4 - HNO3反应
头孢菌素类
头孢氨苄 黄色 H SO HNO 头孢噻吩钠 红棕 头孢噻肟钠 亮黄
与变色酸-硫酸反应
青霉素 阿莫西林 氨苄西林