西瓜果腐病种子带菌的PCR检测研究[1]
PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用
1、样品采集：选择具有典型症状的病害样本进行采集，并做好记录。
2、DNA提取：将采集的病害样本进行处理，去除蛋白质等杂质，提取出其中 的DNA。
3、引物设计：根据已知的病害基因序列，设计出特异性的引物。
4、PCR扩增：将DNA模板、引物、dNTP等反应液加入PCR反应管中，进行PCR 扩增。
5、产物检测：对PCR扩增后的产物进行电泳分析或荧光检测，观察是否有特 异性条带或荧光信号。
3、植物生物安全监测：qPCR技术可以用于植物生物安全监测，如监测外来 入侵植物的扩散情况和评估植物种质资源的遗传多样性。
然而，qPCR技术在植物检疫中的应用也存在一些不足，如对设备要求较高、 对实验条件和操作技能的要求严格，以及可能出现的假阳性和假阴性结果等问题。 因此，需要进一步改进和完善qPCR技术，以提高其准确性和可靠性。
PCR技术在植物检疫性病害鉴定中 的应用
目录
01
一、PCR技术在植物 检疫性病害鉴定中的 应用前沿研究
03 四、PCR技术在植物 检疫性病害鉴定中的 应用案例及评价
二、PCR技术在植物
02 检疫性病害鉴定中的 原理和流程
04 参考内容
植物检疫性病害是指对农业生产和植物生态环境造成严重危害的植物病害， 其鉴定与防治对保障农业生产和生态安全具有重要意义。近年来，随着分子生物 学技术的迅速发展，聚合酶链式反应（PCR）技术在植物检疫性病害鉴定中得到 了广泛应用。本次演示将从PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用前沿研究、 原理和流程、实验方法和结果分析以及应用案例及评价等方面进物检疫中的应用实践
1、植物病原物检测：qPCR技术可以快速、准确地检测植物病原物，如病毒、 细菌、真菌等。例如，针对水稻矮缩病毒的qPCR检测方法，可以实现对病毒的特 异性识别和定量检测。
西瓜细菌性果实腐斑病的研究进展
实 腐斑 病 的发 病情 况 及 寄 主范 围等 的研 究 ， 对其 国 内外 研究 进 展及 防治 方 法 予 以综 述 ， 以期 为其 有 效地 防治 及免 疫提 供理 论参 考 。 １ ９ ６ ９年 ， 美 国弗罗 里达 州 爆发 了西 瓜 细 菌性 果 实腐 斑病 ， 但 当时 只对其 发病 症状 进行 了描述 ， 并 未对 其病 原菌 进行 鉴 定 ［ １ ］ 。１ ９ ７ ８年 ， 澳 大利 亚 等地 爆发 了西瓜 果斑 病 ， 《 植物病害手册》 描 述 了 其发 病 症 状 ， 并 将 其 病 原 鉴 定 为 假 单 胞 菌 ］ 。 １ ９ ８ ５年 ， 关 岛 等 地 发 生 了此 病 ， 科 研 人 员 首 次 将 其病 原鉴 定 为类 产 碱 假 单胞 菌 。时 隔 ２ ０ ａ ， 弗 罗 里达 州再 次爆 发 此 病 害 ， 经 研究 可知 该 病 不 仅 能
ＧＥ， 结 果表 明 ， 这 些 菌株 的遗 传 表 形 已 经有 了分
１ 西 瓜 果 斑 病 的 发 病 概 述
西 瓜果 斑病 菌 可 以 侵 染 西瓜 幼 苗 及 果 实 ， 主
化， 可 以分 为 ２ ４个单元 型 。这 些 单 元 型 可分 为 ２ 组， 其中 １ 组 中菌株 的寄 主 包 括 多 种瓜 类 作 物 ， ２ 组 中菌 株 的寄 主全部来 自西瓜 。国 内外 的人 工接 种 试 验表 明 ， 除西 瓜 是果 斑 病 菌 的 寄 主外 ， 甜瓜 、
ｎ ａ ｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｐ ． ｃ ｉ ｔ ｒ ｕ ｌ ｌ ｉ ） ［ ３ ３ 。
２ 西瓜 果斑病的寄主范 围和抗病 品种
为 了研 究 燕 麦 嗜 酸 菌 西 瓜 亚 种 Ａａ ｃ的分 化 现象 ， 将世 界各 地 ５ ６个 菌株 通 过 ＤＮＡ 酶 切处 理 获 得 的指 纹 图谱 进 行 了 脉 冲 电 场 凝 胶 电 泳 Ｐ Ｆ —
黑龙江省西瓜细菌性果斑病防治药剂的筛选
黑龙江省西瓜细菌性果斑病防治药剂的筛选作者：贾云鹤王喜庆付永凯尤海波刘思宇赵会娟来源：《中国瓜菜》2015年第03期摘要：为了丰富黑龙江省露地西瓜果斑病的防治药剂和方法，通过平板抑菌试验和种子消毒处理等方法对硫酸链霉素等17种药剂进行筛选。
结果表明，在平板抑菌试验中，有噻霉酮等7种药剂的抑菌圈i>20mm，抑菌效果较好；在种子处理试验中筛选出3%双氧水浸种30min 和2000mg·L-1噻霉酮浸种30min抑菌效果较好；双氧水处理种子的发芽率和发芽势为95.6%和12.7mm，噻霉酮处理种子的发芽率和发芽势为97.8%和14mm；噻霉酮和双氧水处理种子的发芽率分别比对照提高22.6%和20.4%，发芽势分别比对照提高47.4%和33.7%。
试验筛选出一种新型药剂噻霉酮，对黑龙江省露地西瓜果斑病菌的抑菌效果较好。
关键词：西瓜；黑龙江省；果斑病；病原菌；防治药剂西瓜细菌性果实腐斑病，又称西瓜果斑病、果腐病（Baeterial Fmit Blotch，简称BFB），百姓俗称阴皮病、尿炕病，是种传细菌性病害，近年来由国外传人中国。
该病害发病、传播迅速，危害严重，目前国内外尚没有免疫品种，也缺乏特效的防治药剂。
近年来，黑龙江省西瓜主产区果斑病爆发严重。
以黑龙江省西瓜主产区双城市为例，根据作者所在的国家西甜瓜产业技术体系哈尔滨综合试验站（黑龙江省农科院园艺分院西瓜研究室）的调查，双城市2010-2014年果斑病的自然发病率分别为70%、60%、30%、15%、20%。
本试验针对以上情况，对黑龙江地区露地西瓜的果斑病病原菌进行分离、纯化，以分离得到的果斑病病原菌和当地主栽的露地西瓜品种为试材，期待筛选出适合防治黑龙江省西瓜果斑病的有效药剂。
1.材料与方法1.1黑龙江省露地西瓜果斑病病原菌的分离、纯化从黑龙江省露地西瓜主产区哈尔滨、双城等地进行病样采集。
取样部位为病瓜内表皮（西瓜皮白色的部分）。
开封市西瓜细菌性果腐病的发生特点及防治措施
３ 防 治 措 施
ａｄ Ｗｉ ｒ ｔ１又称 西 瓜 果 腐病 、 瓜 水 浸病 、 ａ ） ｌ ｍ ｅａ） ｌ ｅ 西 果实 腐 斑
病 等ｌ 其 病原 菌 为 燕麦 嗜 酸 菌西 瓜 亚 种 ， 】 ｌ 。 为害 西瓜 、 瓜 、 甜
南瓜 、 瓜 、 黄 蜜瓜 、 西葫 芦 等 。 其最 早 于 １６ ９ ９年 在 美 国佛 罗 里达 州 被发 现 ， 是近 年 由国 外传 人 的毁 灭性病 害
１１ 危 害 现 状 ．
丙瓜细 菌性 果腐病 在 开封 市 育苗 棚 的西 瓜苗 上 发病 较
重 ， 要 危 害 瓜 苗 的 嫩 头 及嫁 接 点 ， 主 生产 中后 期 为 零 星 发 生， 在即 将成 熟 的西 瓜 上受害症 状 明显 。 ０ ８年 开封 市个 别 ２０ 育 苗棚 零 星 发 生 ， 呈逐 年 上 升 危 害 的 趋 势 。 并 特别 是 ２ １ ００ 年， 由于 长 期 的低 温 天 气 影 响 ， 瓜 苗 生 长 不 良 ， 成 西 西 造
要 西瓜 种植 区 域进 行 宣传 指导 ， 助瓜 农 科学 选择 瓜 种 ， 帮 最
大 限 度地 减 少 初 侵染 来 源 。 由于 开 封 市 的大 部 分种 植 区 均 为 常年西 瓜种植 区域 ， 茬现 象严重 ， 重 为减 少 田间病菌 含量 ，
株率 达 ５ ％以上 ， ０ 由西 瓜 细菌 性 果 腐病 为 害 而造 成 毁 苗 或
展， 导致 西瓜瓜 皮裂 口 ， 易导致其 他病 菌及微 生物 的侵染 ， 极 经常 可 溢 出黏 稠 、 明 的褐 色 菌脓 ， 瓜很 快 腐 烂 ， 透 两 造成 产
量 损 失 严 重［ ３ １ 。 ２ 发 病 条 件
带菌砧木种子和灌溉方式对西瓜嫁接苗细菌性果斑病(BFB)发生的影响
基 金项 目： 公益性 行业 （ 农业 ） 科研 专项 （ ２ ０ １ ０ ０ ３ ０ ６ ６ ） ， 国 家 西甜 瓜 产 业 技 术 体 系项 目 （ Ｃ Ａ Ｒ Ｓ 一 ２ ６ — １ ６ ） ，
武 汉 市 科技 供 需 对接 计 划 （ ２ Ｏ １ ２ ５ ０ ８ ２ ４ ２ ６ ９
探 明 西瓜 嫁 接 育 苗过 程 中 带茵 砧 木 种 子 和 灌 溉 方 式 对嫁 接 苗 Ｂ Ｆ Ｂ 发 生 的影 响 。 砧 木 种 子人 工接 茵 后 ， 以 带茵 砧 木 幼
苗和健康接穗为材料 ， 采 用 不 同的 方 法 嫁 接 ， 结 果 发 现 ，Ｂ Ｆ Ｂ病 菌 通过 嫁 接 从 砧 木 传 递 到 接 穗 ， 导 致 嫁 接 苗 ＢＦ Ｂ 的
菌砧 木种 子 、 灌 溉 方式对 西瓜 嫁接 苗 Ｂ Ｆ Ｂ发生 的影
。
该病 最早 于 １ ９ ６ ９年 由 Ｃ ｒ ａ ｌ ｌ 和Ｓ ｃ ｈ ｅ ｎ ｃ ｋ Ｉ ］ 在美 国
佛 罗 里达 州 发现 ．我 国 １ ９ ８ ５年 发 现并 开 始报 道 瓜 类 Ｂ Ｆ Ｂ的发 生 和为 害［ ２ － － － ４ ］ 。Ｂ Ｆ Ｂ病 菌 寄 主 主要 有 西
（ Ａｃ ｉ ｄ ｏ ｖ ｏ ｒ ａ ｘ ａ ｖ ｅ ｎ ａ ｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｐ ． ｃ ｉ ｔ ｍｌ ｌ ｉ ） 引 起 的 瓜 类 细 菌
在 西 瓜 嫁 接 育 苗 过 程 中 的 发 生 规 律 对 防 控 西 瓜
Ｂ Ｆ Ｂ的发生 与 流行 具有 重要 意义 。研 究 表 明 ． 在 西
关键 词 ： 带菌 砧 木 种 子 ； 潮 汐灌 溉 ； 上部喷 灌； 细 菌 性 果 斑病 ； 西 瓜嫁 接 苗 中图分类号 ： ￥ ６ ５ １ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ １ — ３ ５ ４ ７ （ ２ ０ １ ３ ） １ ４ — ０ ０ ３ ０ — ０ ５
西瓜杂交制种新技术
西瓜杂交制种新技术一、制种田的挑选挑选多年未种过葫芦科、茄科、烟草等作物的田区，前茬相宜的作物是玉米、苜蓿、小麦、豆类等。
制种田以肥沃、有机质含量高、pH值呈中性的壤土为宜。
制种田应与瓜类作物田相隔500～1000米以上。
二、亲本种子的预备西瓜杂交制种亲本种子必需是具备原品种（系）特点特性、纯度不低于99.7%、发芽率不低于90%的国标一级的亲本种子。
亲本种子分父本和母本种子，父母本种子又分大粒种子、中粒种子、小粒种子。
普通母本大粒种子直播每667平方米用量0.3～0.35千克，中粒种子0.2～0.25千克，小粒种子0.1～0.15千克。
父本种子普通每667平方米用量20克左右。
父本和母本种子配备比例为1∶20。
三、播种北疆地区春季土壤5厘米地温稳定在15∶以上时播种，约在4月下旬至5月初。
父本播种要较母本播种提早7～10天，这样既保证父母本花期相遇，也可对父本举行花期的纯度鉴定。
播种株距依品种而定，大果形母本适当稀播，小果形母本适当密播。
父本播种要集中在与母本显然区分的田畦中种植，株距20～30厘米。
播种普通在浇水后铺好地膜的播种带膜上直播，每穴播1～2粒，播深1.5～2厘米。
播种时，要使种子与土壤湿墒充分接触，播种穴口上笼罩细碎的干土。
四、定苗、整枝播种出苗后当瓜苗长到3～4片真叶时举行定苗，每穴留一株，遇缺苗留双苗。
瓜苗长至伸蔓时父本每株留二至三条蔓，其余的侧枝所有抹除整洁，同时将枝蔓上的雄花所有保留，便于采花授粉。
母本每株留一条主蔓，其余侧枝所有去除，同时将枝蔓上的雄花所有抹除整洁，只留雌花举行杂交授粉。
当母本雌花子房经过授粉后，果实长至鸡蛋大小时，停止整枝。
整枝应在晴天举行，阴雨天操作易使植株伤口侵染病菌。
操作时用医用酒精和磷酸三钠将手及用具举行擦洗，可杀灭病菌，防止传扬病毒。
五、人工杂交授粉1.父本纯度鉴定在父本植株开花期间，仔细鉴定父本，将株型不一、叶型不一、子房形态不一的杂株所有拔除，确保父本植株纯正，方可举行杂交授粉。
西瓜果腐病种子带菌的PCR检测研究
细菌 性 果 腐 病 （ ａｔｉｌＦｕ ｌｃ ， 称 Ｂ Ｂ Ｂ ｃ ｒ ｒｉＢｏ ｈ 简 ｅａ ｔ ｔ Ｆ） 是 一 种 严 重 危 害 葫 芦 科 作 物 的 病 害 ， 其 以 危 害 尤 西 ¨ ｊ甜瓜 为重 ， 、 给西 、 瓜生 产 造成 了很 大 的危 害 。 甜 １８ ９ ８年首 次在美 国发现该 病 … ， 目前 已经扩 展 到美 国 东 南部 的 １ 个州 ， ０几 以后在 美 国的商 品瓜生产 上发 生 越来 越 重 ， 害 严 重 的 西 瓜 损 失 可 高 达 ９％ 一 受 ０
摘要 ： 于传统的 Ｐ Ｒ检测技术 ， 究 了西瓜 果腐病种子 带茵的 Ｐ Ｒ检 测方法。结果表明 ， 基 Ｃ 研 Ｃ 磷酸缓冲液更适合于作为带
菌种子的浸提 液，Ｖ Ｐ可去 除种子残 留物 ， 高检测 的灵敏 度。使 用本 检测 方法 ， ＰＰ 提 摇培 时 间在 ２ｈ以上时 ， 其时 间的 长 短不影响 自然感染带菌种子 的检 测； 能检 测到的西瓜种子 最低 带茵率为 １ ， １ ０ ‰ 即 ０粒种子 中存在 １粒 带茵的种子 ； ０ 而 且能对 自然感染的单粒种子进行检测 ， 得到种子样品 带茵率的数据。本研 究所获得 的检 测方法 简便 实用 ， 能有效应用 于
ｃ ｎ ｂ ｅ ｔ ｄ ａ ｄ ｔｅ ｄ ｔ ｆ ｉｆ ｃｅ ｅ ｄ ｅ ｃ ｎ ａ ｅ ｇ ｔ ｗ ｔ ｈ ｓ ｍｅ ｈ ｄ １ ｉ ｄ ｍｏ ｓ ａｅ ｔ ａ ｈ ａ ｅ ｔ ｓ ｎ ｈ ａａ ｏ ｎ ｅ ｔ ｄ ｓ ｅ ｓ ｐ ｒ ｅ ｔ ｃ ｎ ｂ ｏ ｉ ｔ ｉ ｅ ｈ ｔ ０ ． ’ ｓ ｅ ｎ ｔ ｔ ｈ ｔ ｔｅ ｈ ｒ ｍｅ ｈ ｄ ｉ ｈｓ ｓ ｄ Ｓｓｍｐｅ ａ ｄ ｐ ａ ｔ ａ ｌ ｎ ａ ｅ ｕ ｅ ｏ ｄ ｔ ｃｉｎ Ａａ ｎ ｗ ｔｒ ｌ ｎ ｓ ｅ ｓ ｔ ｏ ｎ ｔ ｉ ｔ ｙ ｉ ｉ ｌ ｎ ｒ ｃ ｉ ｂ ｅ ａ ｄ ｃ ｎ ｂ ｓ ｄ ｔ ｅｅ ｔ ｅ ｉ ａ ｅ ｍｅｏ ｅ ｄ ． ｕ ｃ ｏ
西瓜枯萎病抗性鉴定技术方案
西瓜枯萎病抗性鉴定技术方案西瓜枯萎病是一种危害西瓜生产的病害，严重影响西瓜的产量和品质。
为了提高西瓜的抗病能力，许多研究人员致力于西瓜枯萎病抗性鉴定技术的研发。
本文将介绍一种关于西瓜枯萎病抗性鉴定技术方案，以帮助农民和研究人员更好地选择抗病品种，提高西瓜的产量和质量。
一、西瓜枯萎病概述西瓜枯萎病是由真菌引起的病害，主要通过土壤和种子传播。
病原菌侵染植株后，会引起植株的病症，表现为植株生长缓慢，叶片黄化、枯萎，最终导致植株死亡。
严重影响西瓜的生长发育和产量。
目前，西瓜枯萎病对西瓜的危害较大，给西瓜的生产和种植业带来了严重损失。
二、西瓜枯萎病抗性鉴定技术1. 选择病原菌株首先需要从不同的产地和病害严重程度较高的田间土壤中分离出西瓜枯萎病的病原菌株。
通过分离病原菌株，可以获得不同侵染力和毒性的菌株，为后续的鉴定和筛选提供了样品来源。
2. 筛选西瓜材料从不同地区采集不同种类的西瓜样品，针对西瓜的成活率和病害程度进行评估。
筛选出具有不同抗性的西瓜材料作为实验材料，为后续的鉴定提供了试验样品。
3. 菌源接种将所选的不同病原菌株接种到西瓜材料中，观察其叶片的病症表现，包括叶片的黄化、枯萎情况。
通过观察病症的表现，判断不同西瓜材料的抗性情况，筛选出抗病性较强的西瓜品种。
4. 抗性评定根据菌源接种后的实验结果，对西瓜材料的抗性进行评定。
将试验材料分为不同的抗性等级，包括高抗、中抗和易感等级，为后续的选育和推广提供了科学依据。
5. 田间验证在病害发生较为严重的西瓜种植区进行田间验证试验，验证不同抗病品种的抗性情况。
通过田间验证，可以评估不同品种的抗病能力，为农民和种植户选择抗病品种提供依据。
三、技术方案的应用价值西瓜枯萎病抗性鉴定技术方案的应用价值主要体现在以下几个方面：1. 提高西瓜的抗病能力，减少病害发生对西瓜产量和品质的影响。
2. 为农民和种植户选择抗病品种提供了科学依据，提高了西瓜的种植效益和经济效益。
3. 为西瓜新品种的选育和推广提供了技术支撑，促进了西瓜产业的健康发展。
西瓜抗病毒病研究进展
中国瓜菜2022，35（2）：1-6收稿日期：2021-03-29；修回日期：2021-12-12基金项目：河南省科技攻关计划项目（202102110185）作者简介：任艺慈，女，研究实习员，主要从事西甜瓜育种工作。
E-mail ：***************通信作者：刘喜存，男，副研究员，主要从事西甜瓜育种及病虫害防治工作。
E-mail ：******************西瓜[Citrullus lanatus （Thunb.）Matsum.]属葫芦科一年生蔓生藤本植物，口感甘甜，备受人们喜爱，是夏季降温消暑的首选水果。
西瓜也是农民增收的重要经济作物之一。
FAOSTAT 统计数据显示，2020年世界西瓜栽培面积为305.33万hm 2，产量为10162.04万t ，中国的西瓜栽培面积为140.59万hm 2，产量为6024.69万t [1]，均居于世界前列。
因此，大力发展和引导西瓜产业对于提高农民收入、增加农业效益方面起着重要的作用。
病毒病作为西瓜主要病害之一，在世界范围内均有发生，可造成西瓜大面积减产，带来严重的经济损失。
因此，进一步了解病毒病的传播与进化，逐步改进提高防治效率，挖掘抗病毒病西瓜种质资源、从分子层面探索抗病毒病机制，成为亟待解决的问题。
笔者对近年来国内外西瓜抗病毒病研究现状和成果进行了综述。
1西瓜抗病毒病育种进展1.1传统育种方面目前，西瓜抗性种质资源种类和数量相对比较丰富，PI 595203属于黏籽西瓜（C.mucosospermus ）亚种，其抗病性强，对小西葫芦病毒（Zucchini yel-low mosaic virus ，ZYMV ）、西瓜花叶病毒（Watermel-on mosaic virus ，WMV ）、番木瓜环斑病毒西瓜株系（Papaya ring spot virus-watermelon strain ，PRSV-W ）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus ，CGMMV ）都具有抗性[2-5]。
浅谈无籽西瓜细菌性果腐病的防控
苗床 在 合适 时 问注 意放 风 。 降低 棚 内湿 度有 利 于 减
少 病 害 的发 生 。
性果 腐病 菌 的 比率 纳入 应有 的规定 中 ， 成一 些 带 造
菌率 高 的种 子 进 入 到生 产 中 ．造 成 极 为 严 重 的损
失。
为 了减少 该病 害 的发生 ， 须从 种 子生 产 源 头 必 抓起 ， 切实 降低带 菌种 子 的 比例 。一是 合 理轮 作 ， 用 与非瓜 类作 物轮 作 ３ａ以上 的地 块 繁 育种 子 ：二是 生 长期施 用 铜制 剂 ， 可杀 得 、 如 加瑞农 等 。国外 试验 表 明 ， 制 剂混 用 代森 锰 锌 可 以增 强铜 制 剂 的 杀菌 铜 效 果 ： 是 可 以考 虑 果 实 套 袋 隔 离病 菌 ： 三 四是 病 害 检 查 ． 种 时要 辨 别 病 瓜 ， 把 病 瓜 挑 出来 集 中处 采 先 理， 避免从病瓜 中采种 。由于无籽西瓜 采种时不 能发
生 产健 康 种子 ， 已形成 共识 。但是 许 多制 种单 位 这
并 没有 足够 重 视 ， 没有 采 取有 效 的监 控措 施 。其 他 措施 有 一定 效果 ， 不 是根 本 的 措施 。由于 我 国并 但
没 有 在 种 子 管 理 或 种 子 质 量 标 准 中 把 种 子 带 细 菌
浅谈无籽 西瓜 细菌性果腐病的防控
古 勤 生
（ 中国农业 科 学院 郑州 果树 研究 所 ， 河南 郑州 ，５ ０ ９ ４０ ０ ）
细 菌 性 果腐 病 是 无 籽 西瓜 育 苗 中最严 重 的 病
害 ， 在 不 同 地 区 如 海 南 和 河 南 的 嫁 接 苗 床 上 造 成 曾
苗有 多少 ， 可 以结 合 检测试 纸条 或 Ｐ Ｒ方 法 加 以 也 Ｃ
西瓜果腐病
西瓜果腐病
发病症状：西瓜果腐病又叫果斑病、腐斑病、水渍病等。
该病主要引起西瓜果实表面产生水浸状的不定形病斑，严重时引起果皮龟裂腐烂，降低西瓜商品价值。
发病病因：病菌主要在种子和土壤表面的病残体上越冬。
在温暖地区，田间自生瓜苗也可成为病菌的宿主。
带菌种子是病害远距离传播的主要途径，带菌种子萌发后，病菌侵染幼苗的子叶及真叶，完成初侵染。
病叶上产生的菌脓，借风雨、昆虫和农事操作传播，引起再侵染。
田间病残体翻入深土壤中分解腐烂以后，病菌随之死亡。
高温、高湿有利于发病，特别在炎热季节，又伴有暴风雨时，病害的发生随之加重。
农业防治：1、加强植物检疫，防止带菌种子传入非疫区。
2、发病地块，与禾本科作物进行轮作，不能连续种植西瓜。
3、播种前用新高脂膜拌种，可保温、保湿、吸胀，提高种子发芽率，使幼苗健壮。
驱避地下虫害，隔离病毒感染。
药剂防治：未发病前噴施新高脂膜600倍夜，能自动形成一层肉眼看不见的高分子保护膜，优化植物吸水、透气、透光质量。
屏蔽病虫扑食信号和削弱传播媒介，抵抗和防御自然环境灾害。
发病初期必须及时使用农药防治，配置农药时必须配合新高脂膜一起使用，提高农药有效成分利用率，减少农药用量。
1。
通过种子处理防治西甜瓜细菌性果腐病
上海蔬 菜
Ｓ ＮＧ ＨＡ ＨＡＩ ＶＥ Ｅ Ａ Ｌ Ｓ Ｇ Ｔ Ｂ Ｅ
２０ （ ： ０ ６５ ９ ）３
整 枝打权 用 的剪刀 等工具 要经 常用酒 精或福 尔
马林 消毒 ，对 疑似 细菌性 果腐 病 的植 株要 用专用 剪
的 ， 般按 照药剂 的有效 成分 含量 计算 。 要 把握好 一 还
细菌性果腐病 （ ａ ｔ ／ Ｆｕｔ ｌｔ ， Ｂ ｃ ｒ ／ ｒｉＢｏ ｈ简称 Ｂ Ｂ ， ｅａ ｃ Ｆ）
是 西 、 瓜 的一 种危 险性 新细菌病 害 ， 国际规定 的 甜 是 检 疫性有 害生物 之一 。 １ 分布现 状 从 １８ ９ ９年美 国首 次报 道 以来 ， 已经 给 西 、 甜瓜
放 风 ， 持保 护地 内空气 比较 干燥 。 保
３３ 田 问 作 业 ．
区的重大 隐患 ， 为我 国瓜类 出 口的障碍 。 成 如不积极
显著 ， 中单 蔓方 式各处 理 间差 异显 著 ， 双蔓各处 其 而
理 间差异 不显著 。结果见 表 ２ 。
３ 小 结
表 ２ 各 处理 小 区产 量
引起 重视 。 １ ９ ９ ６年 在 内蒙 古 巴盟 哈蜜 瓜 上发 生 ；
见 有抗 病品种 报道 。 因此 ， 统栽 培生 产上 只是用 全 传
面综合 防治 的方法来 解决 这个 问题 ，就是从 切 断发
１９ ９ ９年 此病 在 新 疆北 部 瓜 区普遍 发 生 ，损 失 高 达
８ ％以上 。２ ０ ０ ０ ２年冬 在 海南 又一 次 流行 ， 导致 所有
时 间与浓度 的关 系 。（ ） ３ 掌握 浸种 时问 ： 药剂浸种 有
一
刀， 并做 到 随用随 消毒 。 采用激 素保 果和促 使果 实膨 大时要 用喷果 的方 式 ， 要醮果 。 不
新疆瓜类细菌性果腐病的发生与病原鉴定
选取具然 后将种 子在 无菌水中浸泡 ３ ０ ｍｉ ｎ ，用 灭 菌的接 种环 蘸取浸 泡液 在 ＫＢ培 养基 平板表 面划
国在新 疆 的瓜类 制种业 务 十分频 繁 ，每 年从 美国进 该 病 的发 生 和 传 播 创 造了条 件 。２ ０ １ ０ ２ ０ １ １ 年， 笔者 对 北疆 地 区 昌吉 市、奇 台县 、五 家渠 市、阜 康 市、吉木 萨尔县 等 主要 西甜瓜 种 植 区进行 了病 害普 查 ，发现该病 的发生率达 到 ６ ０ ％ 以上 ，有 的地块 甚 至１ ０ ０ ％，毁 田绝收 。发现该病 在作物 幼苗期 就可发
１ ． １ ． ３ 所 用培 养基
病 ，首先在西 瓜、甜瓜 真叶 叶面上 出现 直径 １ ． ２ ｍｍ 水渍 状 小斑 点 ，扩 展形 成 呈多角形、 圆形、条 形或
不规 则形 暗绿 色大病 斑 ，叶边 缘 为 “ Ｖ”字 型病 斑 ，
ＫＢ培 养基 ，按 方 中达 植 病研 究 方法 口 中提
Ｉ ｌ ｒ 试验 研究
Ｖ ｅ ｇ ｅ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｓ ２ ０ １ ３ ． ３
新疆瓜类细菌性果腐病 的发生 与病原鉴定
周 黎 ，张炳 坤 ，冶海林 ，周 志成
（ １ ． 新疆农业职业技术学院 ，８ ３ １ １ ０ ０； ２ ． 新疆农业厅哈密植物检疫站 ，８ ３ ９ ０ ０ ０； ３ ． 新 疆 祥 丰 生 物 科 技 有 限 公 司 ，８ ３ １ １ ０ ０ ）
线 ，翻转 培养皿 ，放在 ２ ８℃恒温 箱中培 养。
种内分离时将种子在 ５ ％ 次氯酸 钠中浸 泡 ３ ａｉ ｒ ｎ ， 然后用无菌水冲洗 ３次 ， 用灭菌的手术刀将种子剪开，
弃去种壳 ，将种仁研碎加入 适量无菌水静置 ３ ０ ｍｉ ｎ ，
利用多重PCR鉴定西瓜杂交种纯度
利用多重PCR鉴定西瓜杂交种纯度
多重PCR技术是一种利用多种DNA引物对目标DNA进行扩增和检测的方法，其具有快速、高效、准确的特点。
多重PCR技术在农业育种领域的应用也日益广泛，特别是在杂交种纯度鉴定方面发挥了巨大的作用。
多重PCR技术可以针对不同的基因位点进行扩增和检测。
对于西瓜杂交种来说，我们可以选择一些特定的基因位点作为检测目标，通过设计合适的引物对这些位点进行扩增和检测。
这样一来，不仅可以在分子水平上对杂交种进行鉴定，而且还可以确保鉴定结果的准确性和可靠性。
多重PCR技术可以同时对多个目标进行扩增和检测，这样可以大大提高鉴定的效率和速度。
在西瓜杂交种纯度鉴定过程中，由于杂交种的基因型比较复杂，需要对多个基因位点进行鉴定，传统的PCR技术往往需要反复操作，耗时耗力。
而多重PCR技术可以一次性对多个目标进行扩增和检测，不仅缩短了鉴定时间，而且还提高了鉴定的准确性和可靠性。
多重PCR技术还可以通过对扩增产物的长度和序列进行分析，从而进一步提高鉴定的准确性和可靠性。
西瓜杂交种的纯度鉴定往往需要对扩增产物进行测序分析，确定其长度和序列。
通过多重PCR技术，可以快速获取扩增产物的长度和序列信息，从而为进一步的鉴定和分析提供了重要的数据支持。
利用多重PCR技术对西瓜杂交种的纯度进行鉴定具有重要的意义和价值。
通过多重PCR技术，可以快速、高效、准确地对西瓜杂交种的纯度进行鉴定，为西瓜杂交种的种植和推广提供了有力的支持。
随着多重PCR技术的不断发展和完善，相信在未来的研究中，其在西瓜杂交种纯度鉴定方面的应用将会更加广泛和深入，为西瓜生产和种植业的发展做出更大的贡献。
瓜类细菌性果斑病研究进展
瓜类果斑病（Acidovorax avenae subsp.citrulli ），又称细菌性果腐病，是典型的由种子带菌引起的一种严重的细菌性病害[1-3]。
果斑病具有发病迅速、爆发性强、传播速度快等特点，感染会给瓜类产量带来巨大的损失，高温多雨潮湿年份发病较重，一般田块发病率45%~75%，严重时高达100%，该病的发生严重危害了瓜类产业的健康可持续发展，已成为影响我国瓜类生产的主要病害之一[4-5]。
2000年瓜类果斑病被列入《中华人民共和国进境植物有害性生物名录》中，西瓜、甜瓜、以及其种子均列为应检疫植物[6]。
本文就瓜类果斑病的发病症状与分布、病原与寄主、传播途径发生规律、致病性与遗传多样性及防法措施几个方面进行综述，指出当前存在的问题，并对今后的研究进行展望。
1发病症状瓜类细菌性果斑病，可侵染瓜类作物的叶、茎和果实，其中以侵染果实造成的损失最大。
病原菌感染西瓜子叶，造成水渍状小斑点，常伴有黄色晕圈，逐渐扩展成为条形或不规则形黑褐色坏死斑。
真叶感染，形成不明显的褐色小斑，周围有黄色晕圈。
瓜苗染病沿中脉出现不规则褐色病变，有的扩展到时叶缘，从背面看呈水渍状，严重时出现受叶脉限制的水浸状病斑。
病斑沿叶脉蔓延，植株生长中期叶片上病斑很少，通常不明显，略呈多角形，在高湿环境下病斑处分泌菌脓，是感染果实的重要病菌来源。
果实染病，初期在果实上部表面出现数个几毫米大小灰绿色至暗绿色水渍斑点，后迅速扩展成大型不规则的水浸状斑，病斑老化后表皮龟裂，内部组织具浓烈臭味[7-10]。
2病害发生与分布该病最早于1969年由Crall 和Schenck 年于美国佛罗里达州发现。
该病在20世纪80年代后期在美国爆发而受到广泛关注，自此，在世界范围内开始传播[11]。
自报道以来已在美国、澳大利亚、马利亚纳群岛、印度尼西亚、巴西、土耳其、日本、泰国、以色列、伊朗、匈牙利、希腊等国发生[6，16]。
1987年我国学者李明远首先报道了该病在我国北京地区发生[17]。
瓜类细菌性果斑病的发生规律及防治
瓜类细菌性果斑病的发生规律及防治瓜类细菌性果斑病（Bacterial fruit blotch of melon，简称BFB）是一种国际性的检疫性病害，主要为害西瓜、甜瓜、南瓜、西葫芦等葫芦科作物，此外，该病原菌还可侵染番茄、胡椒和茄子等作物。
近年来，随着瓜类作物种植面积的增加，瓜类细菌性果斑病发病日趋严重，在美国、澳大利亚、中国、哥斯达黎加、巴西、印度尼西亚、土耳其等国均大面积暴发，给这些地区的瓜类生产造成了毁灭性的影响。
瓜类细菌性果斑病主要为害瓜类作物的幼苗和果实，高温多雨潮湿的年份发病较重，一般田块发病率在45%～75%，严重时高达100%，该病的发生严重危害了瓜类产业的健康发展。
细菌性果斑病于1965年首次在美国佛罗里达州的西瓜上发现。
随后迅速扩展，2000年，细菌性果斑病在美国东南部西瓜主产区严重发生，引起西瓜果实腐烂，甚至绝产，给当地的经济造成严重损失。
我国自1986年开始，陕西、河北、山西、海南、吉林、新疆、内蒙古、福建、台湾等地相继报道了该病的发生。
2000年内蒙古巴彦淖尔盟厚皮甜瓜细菌性果斑病大规模发生，平均减产46%，商品瓜率仅有1/3；2002年冬季海南省西瓜育苗场中由BFB造成的毁苗率也高达30％～80％，给瓜农造成严重的经济损失。
由于瓜类细菌性果斑病具有发病迅速、传播速度快、暴发性强等特点，使得该病害已成为影响我国瓜类生产的主要病害之一。
因此，掌握瓜类细菌性果斑病的发生规律和防治技术对于控制该病的大规模发生，具有十分重要的意义。
1 发病症状瓜类细菌性果斑病从苗期至成株期均可发病，病菌可为害叶片、茎及果实。
1.1 幼苗症状瓜类幼苗感病，子叶的叶尖和叶缘先发病，出现水浸状小斑点（彩色图版1），并逐渐向子叶基部扩展形成条形或不规则形暗绿色水浸状病斑（彩色图版2）。
随后感染真叶，真叶受害初期出现水浸状小斑点，病斑扩大时受叶脉的限制呈多角形、条形或不规则形暗绿色病斑（彩色图版3），后期转为褐色，下陷干枯，形成不明显的褐色小斑，周围有黄色晕圈，病斑通常沿叶脉发展，对植株的直接影响不大，但却是果实感病的重要病菌来源。
西瓜噬酸菌调控因子aryR 的基因功能分析
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取人工感染 Aac的西瓜种子 ,分别加入到健康西 瓜种子中 ,使种子总数为 100粒 ,获得带菌率为 1% ～ 10%的带菌西瓜种子样本 ,使种子总数为 1 000粒 ,获 得带菌率为 0. 3‰～8‰的带菌西瓜种子样本 ,在 100 粒和 1 000粒种子中分别加入 5 m l和 50 m l PB ST提取 液 。另外取田间感染西瓜果腐病的抗病新先锋西瓜种 子 60粒进行单粒种子带菌情况检测 ,将每粒种子分别 放入 0. 5 m l的离心管中 ,每离心管中加入 200μl PB ST
处理 A:取 5 g西瓜病种子 2份 ,放入灭菌试管中 , 加入 10 m l灭菌双蒸水 ,在 30 ℃下 220 r/m in摇培 4 h, 用双层灭菌纱布过滤入灭菌试管中 ,一份作为 PCR 模 板。
处理 B:将处理 A 的另一份样品 5 000 r/m in离心 10 m in,倒掉上清液 , 往试管 中加 入 1 m l PBS Buffer
图 3 不同带菌率对检测的影响 注 : A 为带菌率为 1% ～10% , B 为带菌率 为 0. 3‰～8‰, ck为阳性对照 ,M 为标准分子量 。
DNA 片段 (360 bp ) ,结果为阴性 ,说明这些种子不带 目标病原菌 Aac或其菌原量太小 。而在其它种子中都 扩增出了特异的 DNA片段 ,结果为阳性。因此 ,试验所 获得的检测方法能对自然感染的单粒种子进行检测 。
提取液 ,按处理 C 的浸提方法洗涤种子 ,对提取液进 行 PCR检测 。
2 结果与分析
2. 1 不同浸提方法对检测结果的影响 应用 4种不同的浸提方法处理自然感病的抗病新
先锋西瓜种子 ,其检测结果不同 (图 1) 。其中以灭菌 双蒸水浸提液直接作 PCR 模板的方法 ,没有扩增出与 对照相同的特异性 DNA 条带 (360 bp ) ,使用磷酸缓冲 液浸提带菌种子 ,不管是否用 PVPP去除浸提液中的 种子残留物 ,均可扩增出特异性的 DNA 片段 ,提高了 PCR检测种子带菌的灵敏度 。
图 1 A、B、C、D四种带菌种子浸提方法对检测的影响 注 : ck为阳性对照 ,M 为标准分子量 。
2. 2 不同浸提时间对检测结果的影响 应用处理 C 的浸提方法处理自然感病的抗病新
先锋西瓜种子 ,分别摇培不同的时间 ,结果表明 ,摇培 时间在 2 h以上时 ,其时间的长短不影响自然感染带菌 种子的检测 ,应用 PCR 方法均可以扩增出与对照相同 的特异性 DNA片段 ,能检测出种子样本的带菌情况 (图 2) 。这也说明西瓜种子的种皮上附着大量的病原菌 。
(140 mM NaCl, 2. 7 mM KC l, 10 mM NaHPO4 , 1. 8 mM KH2 PO2 ) ,在涡旋机上振动 ,悬浮沉淀 。加入 0. 1 g的 PVPP,室温下放置 30 m in,将液体过滤 。再往原离心 管中加入 3 m l PBS 缓冲液 ,过滤 ,将这些液体收集到 干净离心管中 , 7 000 r/m in离心 15 m in,去掉上清液 , 加入 0. 26 m l PB S Buffer悬浮沉淀 ,作为 PCR模板 。
挑取保存的供试菌株在 YDC 斜面培养基上活化 培养 24 h,用无菌水配成菌悬液 ,利用紫外分光光度计 在波长 600 nm 测量菌悬液的 OD 值 ,用无菌水调整 OD 值在 0. 1左右 。取 0. 1 OD 值的菌悬液浸泡灭菌干 燥后的西瓜种子 ,将其在真空泵内抽真空 10 m in,取出 自然干燥 ,备用 。 1. 4 带菌西瓜种子的浸提方法
Detection of A cidovorax avenae subsp . citru lli in W atermelon Seed U sing Ploymerase Chain Reaction
SO NG Shun 2hua, ZHENG X iao2y ing, L I L i (B eijing Vegetable Research Center, B eijing 100089, China)
细菌性果腐病 (B acteiral Fruit B lotch,简称 BFB ) 是一种严重危害葫芦科作物的病害 ,尤其以危害 西 [ 1, 2 ] 、甜瓜为重 ,给西 、甜瓜生产造成了很大的危害 。 1988年首次在美国发现该病 [ 1 ] ,目前已经扩展到美国 东南部的 10几个州 ,以后在美国的商品瓜生产上发生 越来 越 重 , 受 害 严 重 的 西 瓜 损 失 可 高 达 90% ～ 100% [ 3 ] 。我国最早报道西瓜细菌性果腐病是在 1990 年 ,至今相继报道该病在新疆 、海南 、内蒙古 、北京等地 的西 瓜 、甜 瓜 制 种 地 和 商 品 瓜 生 产 上 的 发 生 和 危 害 [ 3 - 6 ] 。该 病 主 要 通 过 种 子 带 菌 而 进 行 远 距 离 传 播 [ 7 ] ,因此使用健康无菌的种子是防止细菌性果腐病 发生和传播的关键 。为了保证种子的健康 ,迫切需要 一套简便易行的检测技术 。近年来 ,随着 PCR 技术的
Abstract:Based on the classical PCR technique, the testing m ethod for detection ofA cidovorax avenae subsp. citru lli in waterm elon seed has been reported here. It was shown that PBS was more suitable to extract bacteri2 al from waterm elon seeds and PVPP could dispose of seed residue and imp rove the testing sensitivity. The time did not influence results of testing for watermelon seeds infected by nature when it is over 2 hours. The testing sensitivity can reach 1‰ of infected seeds, namely there was 1 infected seed in 1 000 seeds. 1 infected seed can be tested and the data of infected seeds percent can be got w ith this m ethod. This demonstrate that the method in this study is simp le and p racticable and can be used to detection Aac in watermelon seeds. Key words: A cidovorax avenae subsp. citru lli ; bacterial seed; PCR detection
瓜种子中 ,使种子总数为 100粒 ,获得带菌率为 1% ～ 10%的带菌西瓜种子样本 ,使种子总数为 1 000粒 ,获 得带菌率为 0. 3‰～8‰的带菌西瓜种子样本 ,应用处 理 C的方法处理带菌的西瓜种子 ,摇培 4 h,对其悬浮 液进行 PCR 检测 (图 3 ) 。带菌率在 1‰以上时 , PCR 能扩增出与阳性对照相同的特异性 DNA 片段 。目前 所能检测到的西瓜种子最低带菌率为 1‰,比普通种 子洗涤方法的检测灵敏度提高了 10倍 。
图 2 带菌种子不同摇培时间对检测的影响 注 : ck为阳性对照 ,M 为标准分子量 。
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第 26卷 第 12期 2007年 12月 种 子 ( Seed) Vol. 26 No. 12 Dec. 2007
2. 3 不同带菌种子数量与检测的关系 取人工感染 Aac的西瓜种子 ,分别加入到健康西
1. 2 仪器及试剂 PCR 仪 为 MJ PCT 200 (产 于 美 国 ) , 引 物 WB F1
(5′2GAC CAG CCA CACG TAC TCC AGC GAT23′)由上海生工公司合 成 , PCR反应体系中的其它试剂购于北京天为时代公 司。 1. 3 菌悬液的配制
处理 C:取 5 g西瓜病种子 2份 ,放入灭菌试管中 , 加入 10 m l PB ST缓冲液 ( PBS缓冲液中加入 1% (V / V ) Tween 20) ,其它同处理 A。一份作为 PCR 模板 。
处理 D:处理 C的另一份样品接下来进行的步骤 与处理 B 相同 ,悬浮液作为 PCR模板 。 1. 5 不同浸提时间对检测的影响
1 材料与方法
1. 1 供试材料 供试菌株为 FC2 YF,由中国农业大学植物病理学
系提供 ;感染西瓜果腐病菌的种子为抗病新先锋 6号 , 由北京市蔬菜研究中心许勇研究员提供 ;健康种子由 北京京研益农种苗中心提供 ,为确保种子不携带西瓜 果腐病菌 ,在应用之前 ,对其进行高压灭菌 。
研究报告 宋顺华 等 :西瓜果腐病种子带菌的 PCR检测研究
第 26卷 第 12期 2007年 12月 种 子 ( Seed) Vol. 26 No. 12 Dec. 2007
西瓜果腐病种子带菌的 PCR检测研究
宋顺华 , 郑晓鹰 , 李 丽 (北京市蔬菜研究中心 , 北京 100089)
摘要 :基于传统的 PCR检测技术 ,研究了西瓜果腐病种子带菌的 PCR检测方法 。结果表明 ,磷酸缓冲液更适合于作为带 菌种子的浸提液 , PVPP可去除种子残留物 ,提高检测的灵敏度 。使用本检测方法 ,摇培时间在 2 h以上时 ,其时间的长 短不影响自然感染带菌种子的检测 ;能检测到的西瓜种子最低带菌率为 1‰,即 1 000粒种子中存在 1粒带菌的种子 ;而 且能对自然感染的单粒种子进行检测 ,得到种子样品带菌率的数据 。本研究所获得的检测方法简便实用 ,能有效应用于 西瓜商品种子西瓜果腐病菌的检测 。 关键词 : 西瓜果腐病 ; 种子带菌 ; PCR检测 中图分类号 : S651 文献标志吗 : A 文章编号 : 100124705 (2007) 1220024204