人白细胞硫氧还蛋白还原酶的分子克隆和序列分析
人的类硫氧化还原蛋白基因的克隆和初步的功能研究_袁建刚123
(
) 细 胞 的嵌 合 体 制 备 工 作
:
对 显 微 注 射工作 的
我 们 在 含 C M V 启 动子 的 G F P 表 达
G F P 和 含 双拷 贝 C M V
p d C M丫 一 G F P
,
统 计结 果 显 示
孕率约 为 5 0 % 正 常小 鼠
,
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,
囊胚 腔 注 射方式 中假 孕 母 鼠怀
x
Th i
-
还 在多 种 成人 组 织 和 多 种 白血 病组 织 中广泛 表 达
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,
T RX L
) 全 长 12 3 0 b p
,
。
它含
。
为 了研 究 T RX 工 的功 能
区 段 构建 原 核 表 达 克 隆
,
有 一 个 8 6 7 b p 的开 放 阅 读 框 架
氨 基酸 的 蛋 白 质 全长 现
3 种 载体在
可 在 体 外 培 养传 代
,
,
并 具有 多 向 分 化
。
载 体转染 后 的 细 胞 之 间 无 显 著 差 异
潜能 的 一 种 高 度 未 分 化 状 态 的 细 胞
的 生 物 学 特性
利用其独 特
T 3
和 R l E S 细 胞 中的 表 达 水 平 无 明显差 别 ;
E S 细 胞 已 成 为 目前 制 备 转 基 因 动
、
,
在 非脑 组 织 中
N SPL l eDN A
以具
。
脑 干 的 神 经 核 团 非 胶 质 细 胞 中有 强 信 号
。
,
有 分 泌功 能 的 甲 状腺
硫氧还蛋白还原酶(TR)检测
ｏＶｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄ ｉｓ ｄｅｔｅｃｔ
ｋｅｙ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｄｙｓｐｌａｓｉａ ｅｎｚｙｍｅ．Ⅱｌｉｏｒｅｄｏｘｉｎ
ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＴＲ）ｔｅｓｔ
Ｏｆ
ａｂｎｏ姗ａｌ
ｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｉｎ
ＶｉＶｏ，
ｔ１１ｅｒｅｂｙ
ｃａｎ
ｍＯｎｉｔｏｒｉｎｇ
ｃａｎｃｅｒ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
ⅡｌｉｏｒｅｄｏＸｉｎ
ｒｅｄｕｃｔａｓｅ；ｔｕｍｏｒ；ａｂｎｏｍｌａｌ ｐｒｏｈｆ打ａｔｉｏｎ
癌症的早期发现可以使１／３的癌症得到根治，但早期诊断癌症仍然面临许多问题。迅速 发展的针对肿瘤病因过程的多种基因或蛋白的分子检测，提供了许多肿瘤早期诊断的思路， 但是针对肿瘤最为本质的异常增生的检测标志物还未见报道和使用【１—２】。 硫氧还蛋白还原酶（ＴＲ）是二聚体黄素酶，属于吡啶核苷酸二硫化物还原酶家族的一 员，广泛表达于从原核生物到人类的各级有机体细胞中。硫氧还蛋白还原酶以硫氧还蛋白为 底物和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸磷酸提供还原反应的还原当量，它们共同构成的氧化还原 调控系统，叫做硫氧还蛋白系统。 大量研究表明，硫氧还蛋白还原酶（ＴＲ）在多种人原发性肿瘤中过表达，是肿瘤异常 增生的关键调控酶，该酶活性与体内异常增生状态具有直接相关性。 Ｌｉｎｃｏｌｎ等【３】采用免疫细胞化学法检测ＴＲ在人类乳腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、前 列腺癌及恶性黑色素瘤中的表达，发现ＴＲ表达水平均较正常组织细胞升高。ＦｅｍａＩｌｄｅｓＡＰ 等【４】采用免疫组化法和原位杂交法对４２例肺腺癌进行分析，结果表明ＴＲ ＩＩｌＩ己ＮＡ在肺腺 癌组织中的表达高于癌旁正常肺组织，病理分化程度低的组织中表达高于分化程度高的组 织，直径较大的组织中表达高于直径小的组织，有 淋巴结转移的组织中表达高于无淋巴结转移的表达。由此可见，ＴＲ在恶性肿瘤中过度 表达，其表达水平与肿瘤细胞的恶性程度、增殖力及转移力有着密切的关系。 检测该酶在人体内的活性可以监测体内的异常增生水平，进而监测异常增生的疾病发生 和状态。由于异常增生是肿瘤的共性特征，且相比癌症蛋白表达出现提前，因此异常增生标 志物比现有的临床应用的肿瘤表达类蛋白肿瘤标志物具有广谱性和提前时效性特点，是肿瘤 预警比较理想的标志物类别。 ＴＲ检测系统是以硫氧还蛋白系统功能检测为主导的一整套氧化应激评价相关的指标， 可综合评价受试者患肿瘤的风险性。ＴＲ检测值非正常偏高一定程度提示受试者体内某些部
硫氧还蛋白还原酶研究进展
硫氧还蛋白还原酶研究进展
孙文艳
【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》
【年(卷),期】2012(033)001
【摘要】硒蛋白是人和动物必需微量元素硒的主要功能表现形式,硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是比较重要的硒蛋白之一,本文对硫氧还蛋白还原酶的分子生物学特点、生物功能、其与某些人类疾病发病机制的关系以及其抑制剂的研究进展进行综述,以期为缺硒性地方病的研究开拓新的思路.
【总页数】4页(P60-63)
【作者】孙文艳
【作者单位】西安交通大学医学院地方病研究所,环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安710061
【正文语种】中文
【中图分类】R591
【相关文献】
1.硫氧还蛋白还原酶与肺癌的研究进展 [J], 刘倩倩;张磊;曾慧慧
2.硫氧还蛋白还原酶2在恶性肿瘤中的研究进展 [J], 吴逸飞
3.硫氧还蛋白还原酶的生理学功能研究进展 [J], 周润梅
4.原虫硫氧还蛋白还原酶研究进展 [J], 赵少若;周金林
5.硫氧还蛋白还原酶及其抑制剂的研究进展 [J], 吴石威;张惠;李乾斌;胡高云
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫氧还蛋白的生物学功能及与人类疾病的关系
硫氧还蛋白的生物学功能及与人类疾病的关系高建波【摘要】硫氧还蛋白是一类广泛表达于各种生物组织器官的小分子蛋白质，在调节机体的氧化还原反应和抗氧化损伤中发挥重要作用。
同时，还具有转录调节、抗凋亡等生物学功能，且与肿瘤、类风湿性关节炎、心血管疾病等多种人类疾病密切相关，具有重要的研究价值。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2013(000)018【总页数】3页(P90-92)【关键词】硫氧还蛋白;生物功能;疾病【作者】高建波【作者单位】天津市药品检验所，天津 300070【正文语种】中文【中图分类】Q51硫氧还蛋白（Thioredoxin，Trx）是一类高度保守的低分子量蛋白质，参与氧化还原反应等多种生物功能，已成为国际上医学领域研究的热点[1-3]，现对其近年来的主要生物功能及与人类疾病关系方面的研究综述如下。
Trx是一种紧密结合的蛋白质，疏水核心区域由5股β折叠构成，其末端被4个α螺旋所包绕。
它调节氧化还原活性的二硫键/巯基结构位于氨基酸保守序列-Trp-Cys-Gly-Pro-Cys-。
有活性的还原型Trx（Trx-（SH）2含有巯基，可以与二硫键相互作用，还原被氧化的多种蛋白，转变为无活性的氧化型Trx（Trx-S2）。
其可在Trx还原酶（thioredoxin reductase，TrxR）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）作用下，转变为还原型。
Trx根据末端氨基酸序列的差异，主要分为Trx1和Trx2两种类型。
Trx1位于细胞浆和细胞核，氨基酸序列长105，分子量为12kDa；Trx2位于线粒体，氨基酸序列长166，分子量为18kDa，含有60个氨基酸组成的N末端线粒体定位信号[4-6]。
2.1 抗氧化作用Trx、TrxR、硫氧还蛋白过氧化物酶（thioredoxin peroxidase，TrxP）和NADPH构成了Trx系统，共同调节氧化还原反应。
人硫氧还蛋白基因分子克隆及真核表达载体的构建
［ ］ ｍ ｒａ Ｔ ｏ ｃ ｏｉｙＳ ｎａ ｉ ｔｎｏＳｉｍ ｔ ， ９ ｐ １ Ａ ｅｃｎ ｈｒ ｉＳｃ ｔ ｔ ｄｒｚｉ ｒ ｅｙ１ ４Ｕ ｉ ａ ｃ ｅ ． ａ ｄ ａｏ ｆ ｐｏ ｒ ９
ｄｔ［ ］ Ａ Ｒ ｓｉ Ｃ ｔ ａｅＭｅ １９ １２ ３ ：１７１３ ． ａ Ｊ ． ｍＪ ｅｐｒ ｒ ｒ ｄ，９５， ５ （ ） １０ ・１６ ｅ ｉ Ｃ ［ ］马洪明 ， ２ 朱礼显 ， 赖克方 ， 等．不 明原 因慢性咳嗽的诊断的探讨
患者具有积极 的诊断作用 。 乙酰 甲胆 碱 Ｂ Ｔ具 有 一 定 危 险性 。试 验 时 吸 Ｐ 人激发物浓度应 从小剂 量开始 ， 渐增 加剂 量 ， 逐 应备
有急救器械和药 品 ， 如氧气 、奋剂 、 ： 注射用 肾上腺 素等 ， 以备
的意义［］ 临床医学 ， ０ ，１ ８ ：－ Ｊ． ２ １２ （ ）２３ ０ ．
（ 收稿 日期 ：０ ００ ．２ ２ １ －８１ ）
人硫 氧还 蛋 白基 因分 子克 隆及真 核 表达 载体 的构 建
苏 伟 高 。 枫 龚 少 愚 魏 慧渊 孙茂 民 江家贵 ， ， ， ， （ １南京 中 医药大 学无锡 附属 医院 ， 苏无锡 ２４０ ； 江 １０ １２苏州大学
病进行 气道反 应 性测 定 ， 结果 显 示 １５例 患者 Ｂ Ｔ ５ Ｐ 仅２ ２例 阳性 ， 阳性率 １． ％ 。该 研究 表 明 ， ４３ 乙酰 甲
意义［ ］ 西北 国防医学杂志 ，０６，７ ２ ：１ －１ ． Ｊ． ２０ ２ （ ） １０１ １ ［ ］张铁栓 ， ４ 邵润霞， 徐照珉， 慢性 阻塞性肺疾病气道反应性测定 等．
山东 医药 ２ １ ０ ０年第 ５ ０卷第 ４ ５期
意义 （ ００ ）则 排除支气管 哮喘 。见 表 ｌ Ｐ＞ ．５ ， 。
硫氧还蛋白还原酶在肺癌诊断、治疗及预警中的作用
２ ｏ １ ７ 年 １月 间进 入 我 院呼吸 内科 的肺 癌 患者 中抽 选 ５ ５ 例作 为研 究组 ， 并 于 同期 选取 ５ ５ 例 体 检 者 为对 照 组 ， 对 其硫 氧还 蛋 白还 原酶
指数进行测定， 并观察两组检查情况。结果：５ ５ 例研究组硫氧还蛋 白还原酶指数（ ５ ． ４ Ｏ ±２ ． ７ ７ ） Ｕ， ／ ｍＩ ， 对照组 ５ ５ 例为（ １ ． Ｏ ５ ±ｏ ． ６ ７ ）
表 ２ 肺 癌患 者 中不 同亚 组类 型 间硫 氧还 蛋 白还 原酶 指数 Ｒ Ｏ Ｃ曲线
离血浆组织后 ， 将其放 置于～８ ０ ℃的环境 中， 以待检 测 ； ３ ） 以 酶标仪对标本 中氧还蛋 白还原酶指数 进行测定 ， 操作 过程参
考设备说明 。
Ｉ ． ３ 统计学 分析 对本研究收集的资料建立数据库 ， 并采用 Ｓ Ｐ Ｓ ｓ １ ７ ． ０统计 软件包进行分析 ， 其中， 计数资料用例数 （ ｎ ） 和百分 比（ ） 描述 ， 组间比较采用 Ｙ 检验 ； 计量 资料用均 数 、 标 准差 士 ） 描 述， Ｐ＜ ０ ． ０ ５ 方存在 统计 学意义 。
定， 有助于改善肺癌患者预后［ １ ］ 。为 评 价 硫 氧 还 蛋 白 还 原 酶
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ２ 结 果
２ ． Ｉ 两组患者检查情况 研究组 ５ ５ 例硫氧还蛋 白还原酶指数 为（ ５ ． ４ ０ ￣２ ． ７ ７ ） Ｕ／
ｍｌ ， 对照组 ５ ５ 例为 （ Ｉ ． ０ ５ ±０ ． ６ ７ ） Ｕ／ ｍＬ （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。
ｉ ． ４ 观 察 指 标
对所有患者实施硫 氧还 蛋白还原 酶指数测 定工作后 ， 观 察其测定结果 。
指数检测活 动在肺癌 患者诊断、 肺癌 治疗 以及肺癌 预警 中应
人白细胞硫氧还蛋白还原酶的分子克隆和序列分析
人白细胞硫氧还蛋白还原酶的分子克隆和序列分析
孙路虹;许琳;徐江英;张锡然
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】2002(018)001
【摘要】目的:克隆人白细胞硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)编码区的cDNA并进行序列分析.方法:采用RT-PCR方法获得TR基因cDNA,选择阳性克隆并测序.结果:通过分子克隆和序列分析,发现TR基因长1554bp,ORF为1 494bp,编码498个氨基酸.结论:确定了中国人白细胞TR的cDNA序列,并据此推导出相应的氨基酸序列.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】孙路虹;许琳;徐江英;张锡然
【作者单位】南京医科大学病原生物学、免疫学系,南京,210029;第二军医大学南京军医学院,南京,210049;第二军医大学南京军医学院,南京,210049;南京师范大学,南京,210024
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.中国人β神经生长因子基因的分子克隆,序列分析及其在哺乳… [J], 王爱坤;刘哲伟
2.猪脑硫氧还蛋白还原酶基因片断的序列分析 [J], 徐江英;许琳;秦艳;高静;李建成
3.西花蓟马FoccOBP3的分子克隆、序列分析及表达特征 [J], 张治科;虎花;马荣
4.西花蓟马FoccOBP3的分子克隆、序列分析及表达特征 [J], 张治科;虎花;马荣
5.中国人丙型肝炎病毒结构基因cDNA分子克隆及序列分析 [J], 王宇;陶其敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
舌鳞状细胞癌组织中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶-1的表达及其意义
舌鳞状细胞癌组织中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶-1的表达及其意义李杨;邢龙;MOHAMMED H;马小龙;谢富强;冯正虎;车银富【摘要】目的:研究硫氧还蛋白(Trx)和硫氧还蛋白还原酶-1(TrxR1)在舌鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法:收集28例舌鳞癌组织和10例癌旁上皮组织,采用免疫组织化学SP三步法检测Trx和TrxR1蛋白在两种组织中的表达水平,并分析其表达与临床病理特征的关系.结果:舌鳞状细胞癌组织中的Trx和TrxR1蛋白表达水平明显高于癌旁正常上皮组织,癌组织和癌旁正常组织的Trx IOD值分别为(2.84±0.34)×108和(3.91±3.00)×107(P＜0.01),TrxR1 IOD分别为(1.88±0.29)×108和(0.69±0.32)×107(P＜0.05);Trx和TrxR1蛋白表达水平在不同肿瘤大小、分化程度组间表达的差异均具有统计学意义(P均＜0.05);Trx和TrxR1表达水平之间呈正相关关系(r=0.504,P＜0.05),且Trx和TrxR1高表达组与低表达组的生存率差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:硫氧还蛋白及其还原酶-1可能为舌鳞状细胞癌的药物治疗靶点和早期诊断、肿瘤筛查的重要临床指标.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2018(030)002【总页数】5页(P87-91)【关键词】舌鳞状细胞癌;硫氧还蛋白;硫氧还蛋白还原酶-1;免疫组织化学【作者】李杨;邢龙;MOHAMMED H;马小龙;谢富强;冯正虎;车银富【作者单位】兰州大学口腔医学院,甘肃兰州730000;兰州大学第二医院,甘肃兰州730000;西北民族大学口腔医学国家民委重点实验室,甘肃兰州730030;西北民族大学甘肃省口腔疾病研究重点实验室/培育基地,甘肃兰州 730030;兰州大学口腔医学院,甘肃兰州730000;兰州大学第二医院,甘肃兰州730000;兰州大学口腔医学院,甘肃兰州730000;兰州大学第二医院,甘肃兰州730000;兰州大学口腔医学院,甘肃兰州730000;兰州大学第二医院,甘肃兰州730000;西北民族大学口腔医学国家民委重点实验室,甘肃兰州730030;西北民族大学甘肃省口腔疾病研究重点实验室/培育基地,甘肃兰州 730030;兰州大学口腔医学院,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R780.2舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma，TSCC)是恶性程度高、预后差的肿瘤之一。
硫氧还蛋白还原酶活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值
硫氧还蛋白还原酶活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值罗钰;马微微;杨晶;吴琳;李月琴;赵友云;曾慧慧【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2012(033)013【摘要】目的探讨硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测试剂盒在恶性肿瘤辅助诊断中的价值.方法检测不同地区、不同检验机构1 122例健康人群TR活性,差异有无统计学意义;检测84例恶性肿瘤患者TR活性,并与健康人群比较,差异有无统计学意义,通过ROC曲线对检测结果进行分析评价.结果北京体检机构的TR活性均值为(2.6±4.1)U/mL,武汉体检机构的TR均值为(2.6±3.7)U/mL,湖北中医药大学附属医院的TR均值为(2.4±3.5)U/mL,各组间TR活性水平差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组TR活性均值为(9.2±6.4)U/mL,健康组TR活性为(2.5±3.7)U/mL,两者间差异有统计学意义(P<0.05).固定健康组和肿瘤组的样本比例为4∶1,不同的样本量间TR活性差异无统计学意义(P>0.05).ROC曲线下面积为0.812±0.029.结论组间均数比较U检验和ROC曲线评价均显示,TR活性检测试剂盒用于与异常增生密切相关的肿瘤生长的临床血样检测具有重要的实用价值.【总页数】3页(P1580-1581,1583)【作者】罗钰;马微微;杨晶;吴琳;李月琴;赵友云;曾慧慧【作者单位】北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京,100191;天津国际生物医药联合研究院,天津,300457;北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京,100191;北京大学药学院,北京,100191;武汉凯熙医学检验所,武汉,430000;武汉凯熙医学检验所,武汉,430000;武汉凯熙医学检验所,武汉,430000;湖北中医药大学附属医院检验科,武汉,430000;北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京,100191;北京大学药学院,北京,100191【正文语种】中文【相关文献】1.胆汁脱落细胞端粒酶活性检测在胆道恶性肿瘤诊断中的价值 [J], 俞世安;彭承宏;吴荣进;郑樟栋;陈凯;付祝能2.恶性肿瘤相关物质群在大肠癌辅助诊断中的临床价值 [J], 杨菁;王东3.T细胞亚群检测在恶性肿瘤患者辅助诊断中的价值研究 [J], 钱晓琴;林建潮;王社梁4.蛋白C和蛋白S抗凝活性检测在恶性肿瘤诊治中应用价值的探讨 [J], 方国安5.端粒酶活性检测在消化道恶性肿瘤诊断中的应用价值研究 [J], 赵跃亭;陈书恩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫氧还蛋白及其还原酶与肿瘤的关系
硫氧还蛋白及其还原酶与肿瘤的关系黄从发;张文峰【摘要】硫氧还蛋白系统是新的肿瘤相关性蛋白,其在肿瘤细胞的增殖和分化中起着重要的作用,可能成为抗癌治疗的药物靶标之一.下面就硫氧还蛋白系统的结构特点、功能,硫氧还蛋白系统与肿瘤的关系等研究进展作一综述.【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(037)001【总页数】4页(P59-61,64)【关键词】肿瘤;硫氧还蛋白;硫氧还蛋白还原酶【作者】黄从发;张文峰【作者单位】武汉大学口腔医院口腔颌面外科,湖北,武汉,430079;武汉大学口腔医院口腔颌面外科,湖北,武汉,430079【正文语种】中文【中图分类】Q51硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）系统包括Trx、硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR或TR）、烟酰腺嘌呤二核苷磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH），是一个广泛分布的NADPH依赖性二硫化物还原酶系统[1]。
Trx可在多种肿瘤细胞中表达，由肿瘤细胞分泌并刺激肿瘤细胞生长，同时阻止其程序性细胞死亡。
用药物抑制TrxR的活性，可为癌症、获得性免疫缺陷综合征和患者自身免疫性疾病的治疗开辟新的途径。
Trx主要分为Trx-1和Trx-2两型，Trx-1位于细胞质和细胞核中，而Trx-2仅位于线粒体中。
Trx为104个氨基酸组成的相对分子质量（Mr）为1.2×104的多肽，其活性位点组成为-半胱氨酸-甘氨酸-脯氨酸-（-Cys-Gly-Pro-Cys-）保守的形式[2]。
氧化型Trx（Trx-S2）含有二硫键，还原型Trx[Trx-（SH）2]含有巯基。
Trx 的还原机制在于其与底物X-S2结合后，在复合物的疏水环境中，Cys32的巯基作为亲核物质与蛋白底物结合形成共价键的二硫化物，最后去质子的Cys35作用于此二硫化物的二硫键，释放出被还原的蛋白底物。
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达徐江英;许琳;戴荣;华超;卢是月;彭光勇【期刊名称】《南京医科大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2003(023)002【摘要】目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白.方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c 原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白.结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99%;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55 ku.TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF2080 1 8.结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础.【总页数】3页(P109-111)【作者】徐江英;许琳;戴荣;华超;卢是月;彭光勇【作者单位】南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京医科大学微生物与免疫学教研室,江苏,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.人线粒体核糖体蛋白S17 cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化 [J], 杨斌;郝飞;杨卫兵;杨希川;钟白玉2.人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 宋庆贺;柴玉波;陈苏民;陈南春;黄勇;代忠明3.人骨形成蛋白4成熟肽cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 秦云;陈苏民;关路媛;陈南春;张立藩4.人PPARγ-LBD cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化 [J], 曹廷兵;叶治家;巩燕;彭家和;江渝5.人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化 [J], 曹廷兵;叶治家;彭家和;巩燕;黄刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫氧还蛋白还原酶
硫氧还蛋白还原酶
硫氧还原蛋白酶是一种新型肿瘤标志物，主要用于查乳腺癌，胰腺癌等肿瘤疾病，但有时会出现一过性的增高，这与机体炎症或代谢等相关。
硫氧还蛋白还原酶是二聚体黄素酶，属于吡啶核苷酸二硫化物还原酶的一种，常表达于各级有机体细胞中。
硫氧还蛋白还原酶可以比常规肿瘤标志物更早的提示机体异常病变。
常适用于肿瘤的早期筛查、药物耐药性的评估以及抗癌预后。
患者不可以一项指标的异常诊断某一种疾病，还需配合医生根据病史、症状及其他相关检查综合判断，明确疾病，制定治疗方案。
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【摘要】目的：探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶( TR)活性及化疗前后的变化。
方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。
结果49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/mL,化疗后为3.93±6.30 U/mL,健康查体人员为－5.61±7.39 U/mL,数据均采用LOG(X＋4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。
化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。
结论肺癌病人的TR活性高；肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。
%Objective To investigate the activity of thioredoxin reductase ( TR ) in lung cancer patients and the change before and after chemotherapy. Methods 49 patients with lung cancer were enrolled in the study,49 healthy sub￣jects served as control.The activity of TR in plasma was assayed. Results TR activity in the plasma of 49 patients with lung cancer before and aftrer chemotherapy is 4. 34 ± 6. 52U/mL, and 3. 93 ± 6. 30U/mL, respectively. While the healthy subjects is -5.61±7.39U/e LOG(X+4IQR) transform and by group t test,result showed the activity of TR between before chemotherapy and healthy group ( control group) ,and between after chemotherapy and healthy group were significant difference,( P<0. 05 ) . By paired t test, the change of the TR activity before and after chemotherapy was significant difference( P<0.05) . Conclusion Lung cancer patients have high TR activity,the plasma TRactivity decreased with the improvement of the disease in the lung cancer patients before and after chemotherapy.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2016(044)004【总页数】3页(P425-427)【关键词】肺癌;硫氧还蛋白还原酶;化疗;活性【作者】彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【作者单位】青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;邵阳医学高等专科学校生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R734.2在恶性肿瘤中，肺癌的发病率及死亡率居首位[1]。
硫氧化还原蛋白还原酶抑制剂Auranofin的抗肿瘤血管与放射增敏的基础研究
硫氧化还原蛋白还原酶抑制剂Auranofin的抗肿瘤血管与放射增敏的基础研究第一部分Auranofin对X线照射NSCLC细胞放射增敏的实验研究目的：体外观察Auranofin对肺腺癌细胞系A549的X线放射增敏效应。
方法：采用MTT法检测Auranofin对人肺腺癌细胞A549和人肺大细胞癌细胞H460活性的影响,克隆形成法进行放射增敏实验,了解0、0.25μM、0.5μM和1.0μM的Auranofin 预处理12h对A549细胞X线照射后存活分数的影响,通过多靶单击模型拟合成细胞存活曲线,了解各组细胞的放射敏感性参数。
结果:Auranofin对A549和H460细胞活性的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性。
1.0μMAuranofin对A549有放射增敏的作用最为显著。
克隆形成实验分析auranfin预处理的A549细胞照射后的存活分数,经多靶单击模型拟合成细胞存活曲线,结果0、0.25μM、0.5μM和1.0μM Auranofin 预处理组放射抗拒参数SF2分别为0.827、0.718、0.653和0.393,1.0μM Auranofin对A549细胞的放射增敏比为3.0(DO值比)。
结论：Auranofin可以增强NSCLC细胞的放射增敏性第二部分Auranofin对x线照射NSCLC细胞放射增敏的机制目的：研究Auranofin增加X线照射NSCLC细胞放射敏感性的机制。
方法：分光光度计法和Western Bloting法分别检测终浓度为0、0.5和2.0μM的Auranofin对A549细胞TrxRl活性和HO-1的影响。
Western Bloting法检测2.0μM的Auranofin预处理对x线照射4Gy后凋亡下游信号JNK/P38磷酸化、凋亡抑制家族IAP、BCL2、TRAF表达,Bax转位,PARP活化的影响。
JC-1法检测2.0μM Auranofin对X线照射4Gy后A549细胞线粒体膜电位的变化。
人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析
人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析陈淑芹;徐宜兰;白宁宁;张菁;方启晨;贾伟平【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)009【摘要】目的克隆DsbA-L基因启动子,并对其活性进行初步分析.方法以人基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增DsbA-L基因5 '端2115bp片段(从翻译起始点ATG上游-2128 ～-14区域).将PCR产物插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic.随后,构建5'端系列缺失的报告基因质粒.将构建的一系列质粒转染3T3-L1和HEK 293细胞,检测荧光素酶活性.利用在线软件MAPPER预测转录调控关键序列潜在的转录因子结合位点.通过Real-time PCR比较这些转录因子在肥胖和正常人脂肪组织中的表达.结果成功构建人DsbA-L启动子报告基因质粒.系列缺失分析表明-2128 ～-1302区域是影响转录活性的关键序列.MAPPER软件预测此区域可能与一些转录因子结合.比较这些转录因子在肥胖患者和正常人脂肪组织中的表达情况,发现其中NF-κB和FOXO1在肥胖患者中表达显著增加,进一步推测NF-κB 和FOXO1可能是人DsbA-L基因启动子上游的调控抑制因子.结论成功构建人DsbA-L基因启动子系列缺失质粒,初步分析了其上游可能存在的关键调控元件,为进一步的转录调控研究奠定了基础.【总页数】6页(P76-81)【作者】陈淑芹;徐宜兰;白宁宁;张菁;方启晨;贾伟平【作者单位】200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;200233 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶cDNA的克隆表达与序列分析 [J], 杨歌德;周宏博;刘长振;王爱民2.hKv4.3最小功能启动子区与上游抑制元件分析 [J], 李皓;姜春来;于湘晖;吴永革;李惟;孔维3.人ID4基因启动子及上游顺式表达调控元件的克隆及特征分析 [J], 黄玉;李薇;迟小华;刘丽宏;张峰;党艳辉;杨波;卢学春4.人类原钙粘蛋白基因簇调控元件的克隆及对其启动子活性的影响 [J], 吴海洋;郭亚;李伟;吴强5.白藜芦醇在调控二硫键氧化还原酶类似蛋白基因表达中的作用 [J], 杨文静;方启晨;张菁;任伟;宋倩倩;贾伟平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫氧还蛋白相互作用蛋白和硫氧还蛋白还原酶1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义
硫氧还蛋白相互作用蛋白和硫氧还蛋白还原酶1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义李晓敏;路桂杰;槐梅;刘燕;解晓蓉【期刊名称】《中国医刊》【年(卷),期】2017(52)10【摘要】目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)和硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及其意义.方法选取华北油田公司总医院经病理证实的乳腺浸润性导管癌标本50例及其邻近癌旁乳腺组织20例.采用免疫组化染色SP法检测乳腺癌组织和癌旁组织中TXNIP、TrxR1的表达;比较不同病理特征的乳腺癌患者癌组织中TXNIP、TrxR1阳性表达率的差异;分析癌组织中TXNIP与TrxR1表达的相关性.结果乳腺癌组织中TXNIP的阳性表达率[30.0%(15/50)]明显低于癌旁组织[80.0%(16/20)],而TrxR1的阳性表达率[86.0%(43/50)]明显高于癌旁组织[10.0%(2/20)],差异均有显著性(P<0.05).乳腺癌组织中TXNIP的阳性表达率在不同组织学分级、不同TNM分期患者中比较,差异均有显著性(P<0.05),而TrxR1阳性表达率在不同年龄、不同肿瘤直径、不同组织学分级、有无淋巴结转移、不同TNM分期患者中比较,差异均无显著性(P>0.05).Spearman相关分析表明,乳腺癌组织中TrxR1与TXNIP的表达呈显著负相关(r=-0.239,P<0.05).结论乳腺癌组织中TXNIP的表达减少,TrxR1的表达升高,且二者表达呈负相关.推测TXNIP低表达和TrxR1高表达共同作用参与了乳腺癌的发生及发展过程.【总页数】4页(P99-102)【作者】李晓敏;路桂杰;槐梅;刘燕;解晓蓉【作者单位】华北石油管理局总医院病理科,河北任丘 062552;华北石油管理局总医院井下医院检验科,河北任丘 062552;华北石油管理局总医院心胸科,河北任丘062552;华北石油管理局总医院营养科,河北任丘 062552;华北石油管理局总医院呼吸科,河北任丘 062552【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.舌鳞状细胞癌组织中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶-1的表达及其意义 [J], 李杨;邢龙;MOHAMMED H;马小龙;谢富强;冯正虎;车银富2.硫氧还蛋白还原酶1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况分析 [J], 李晓敏;槐梅;曹珊珊;苏娟娟;弓淑娟;郝彤3.硒蛋白硫氧还蛋白还原酶的生物信息学分析及其在骨性关节炎患者中的表达研究[J], 张荣强; 杨晓莉; 刘阳; 史传道; 张蓓; 孙娜; 刘启玲; 李向文; 李星慧4.硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长的影响 [J], 范有寿;邱志胜;赵亚萍5.硫氧还蛋白及硫氧还蛋白相互作用蛋白在结肠息肉癌变中的表达及意义 [J], 杨婕琳;翟明慧;张凡;赵东强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人血清白蛋白基因的序列特征分析
人血清白蛋白基因的序列特征分析
王峰;黄璐圆
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2006(46)35
【摘要】目的克隆人血清白蛋白(HSA)基因并对其序列进行分析.方法利用PCR 方法从人胎肝cDNA中克隆HSA基因片段,用DNASIS(2.5)软件分析核苷酸及其推导的氨基酸序列,用SignalP 3.0 Server预测N末端氨基酸信号肽,用Clustal X(1.81)和GeneDoc对蛋白序列进行多重序列联配分析.结果成功克隆HSA基因,有15个外显子和14个内含子,与猴、猫、牛、兔和老鼠的蛋白氨基酸相似率分别为93%、82%、76%、75%、73%;含有3个保守的白蛋白结构域.结论本研究为开发长效蛋白药物奠定了良好的基础.
【总页数】2页(P3-4)
【作者】王峰;黄璐圆
【作者单位】暨南大学基因组药物研究所,广东,广州,510632;中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
1.人血清白蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 李虎;贺小英;杨瑞峰;李向臣;华松;张涌
2.口蹄疫病毒Hankou/99株基因组全序列测定与基因特征分析 [J], 曾江勇
3.蓖麻基因组Mlo基因家族成员的鉴定及其序列特征分析 [J], 覃碧;王萌;刘巧玲;张宇
4.东北马鹿肌肉生长抑制素基因序列的克隆、编码氨基酸序列及结构特征分析 [J], 巴恒星;邢秀梅;杨福合
5.黄瓜全基因组SnRK2基因的鉴定和序列特征分析 [J], 李利斌;曹齐卫;张允楠;孙小镭
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Bikunin的分子克隆及真核分泌型表达载体的构建和表达
Bikunin的分子克隆及真核分泌型表达载体的构建和表达刘毕欧;孙国勋;赵明明;施鹜丹;康鹏云;洪珞珈;张辰宇【期刊名称】《哈尔滨医科大学学报》【年(卷),期】2011(45)3【摘要】目的构建含有Bikunin的哺乳类细胞表达载体pSecTag2B-Bikunin,应用哺乳类细胞表达系统,表达分泌型Bikunin融合蛋白。
方法用RT-PCR方法,从人肝细胞系L02扩增Bikunin编码区序列,将其克隆于pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T-Bikunin,经酶切、PCR及测序鉴定后,将Bikunin亚克隆至哺乳类细胞表达载体pSecTag2B中。
用磷酸钙法转染NIH3T3细胞,24 h后,Western blot检测浓缩25倍的细胞培养上清中融合蛋白的表达。
结果成功构建含有Bikunin的哺乳类细胞表达载体pSecTag2B-Bikunin。
用磷酸钙法转染NIH3T3细胞,24 h后,Western blot检测浓缩25倍的细胞培养上清,有融合蛋白的表达。
结论本实验成功克隆并在真核表达系统表达了分泌型Bikunin。
【总页数】4页(P210-213)【关键词】Bikunin;分子克隆;表达载体;构建【作者】刘毕欧;孙国勋;赵明明;施鹜丹;康鹏云;洪珞珈;张辰宇【作者单位】哈尔滨医科大学附属第一医院;哈尔滨医科大学附属第四医院血液科;南京大学生命科学院【正文语种】中文【中图分类】R78【相关文献】1.鸡MHC Ⅰ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达 [J], 戴银;单文杰;胡晓苗;赵瑞宏;侯宏艳;沈学怀;潘孝成;周学利;张丹俊2.与基底细胞癌细胞凋亡相关的分子生物学研究--促凋亡分子Bad的克隆及其pEGFP-C3真核表达载体的构建 [J], 胡彬;封兴华;刘芳3.SATB1基因克隆及pEGFP-SATB1真核表达载体的构建和鉴定 [J],4.人硫氧还蛋白基因分子克隆及真核表达载体的构建 [J], 苏伟;高枫;龚少愚;魏慧渊;孙茂民;江家贵5.小鼠共刺激分子B7-1的分子克隆、测序与真核表达载体的构建 [J], 周保国;乔海泉;代文杰;潘尚哈;姜洪池因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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１１ 材 料 ． 新鲜 脐 血 ， 自南 京 市 妇 幼 保 健 医院健 取
康产妇 。Ｒ Ａ提取 Ｋｔ Ｄ Ａ Ｍ ｒ ｒ Ｉ 琼脂 糖 Ｎ ｉ 、 Ｎ ａ ｅ Ｘ ＶＩ ｋ 、 Ｐ Ｒ回收 Ｋｔ Ｃ ｉ、 限制性 内切酶 、 质粒提取 Ｋｔ 自 Ｂｅ ｉ 购 ｏ— ｈｉ Ｍ ｎｈｉ 司 ； ｘｌ ｌ ￣ｒ ａｎｅ ｍ公 逆转 录酶 （ ｒ Ｋｔ 自 ＧＢ Ａ Ｍ） 购 ｉ Ｉ—
维普资讯
中国免疫挚杂志 ２Ｏ 第 ｌ ０２年 ８卷
人 白 细 胞 硫 氧 还 蛋 白还 原 酶 的 分 子 克 隆 和 序 列 分 析
孙路虹 许 琳。 徐江英。 张锡然。 （ 南京 医科 大学病原生物学、 免疫学系 ， 南京 ２ｏ２ ） １ｏ９
Ｒ ９ ３２ 文献 标识码 Ａ 文章编 号 １ －ｓｘ｛ 咖２ ０ －０２０ 帅０４４ ｌｌ０４ －３
Ａｂｔａｔ Ｏ ｊｃｉｅＴ ｏｅａｄ ｑ ｓ ｃ ｂｅｔ ：ｏｄ ｎ ｔ ｒ ｖ ｎ
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胞生长 、 分化及信号传 导过程 ， Ｊ并维持细胞 内外氧
化 还 原平 衡 ， 细 胞 的许 多 生理 过 程 密 切 相关 。最 与
近研究表 明， 该系统不 仅能促进 免疫 细胞 产生细胞
因子 ， Ｊ而且 与 某 些 免 疫 性 疾 病 如 类 风 湿 性 关 节 炎 （ ｅｍ ｔｄ￣ｈ ｔ ， Ａ 等 密 切 相 关 。Ｇ ｎ ａｋ中 ｉ ｕ ａｏ ｈ ｉ ｉｓ ｆｉ Ｒ ） Ｊ ｅＢ ｎ 已发表 了美 国人胎 盘 Ｔ Ｒ基 因 、 国人 脑 Ｔ 中 Ｒ基 因等 序 列 Ｊ为 了探 讨 人 白 细 胞 中 Ｔ ， Ｒ基 因 与其 它 组 织
菌 Ｄｔ￣由中山大学生命科学 院赠送 。 ｔ ￣ ５
１ ２ 方 法 ．
细胞 Ｔ Ｒ基因有何差异 ， 以及人 白细胞 Ｔ Ｒ在正常生 理状态和病理状态 下对免疫 细胞产生细胞因子 的影 响， 本文设计 从人 白细胞 中克 隆 Ｔ Ｒ基 因并 进行 序 列测定 ， 为进 一步研究 Ｔ Ｒ与免疫 细胞 间关 系尤 其
Ｃ Ｂ ＯＲ Ｌ公 司 ； 酶 、Ｅ （ 口分 装 ）购 自 ＰＧ 进 公 司 ；Ｇ Ｍ— 体 购 自 ｈⅫ ｅ 公 司 ；４连 接 酶购 ｐ Ｅ Ｔ载 Ｔ 自 Ｎ ｗＥ 如 ｄＢｏ ｂ 公 司 ； Ｅ Ｃ、ｄ Ｔ 、 一 购 ｅ ｎ ｉａｓ ｌ ＤＰ Ｎ Ｐ Ｘ脚 自华 美生 物 工 程公 司 ；ｆ ｉ 公 司产 品 ； 肠 杆 Ｉｍ Ｓ ｍａ ， ｇ 大
中国 国书 分类号
摘
要
目的 ： 克隆人 白细胞 硫氧还 蛋 白还 原 酶 （Ｉ ｄ ｎｒｄ ｃ ， Ｒ 编 码 区 的 ｅ Ｎ 并进 行序 列 分 析。方 法 ： 用 ｔｉ 商 ｕｔ Ｔ ） ｌ 哦 ｅ ￣ｅ ＤＡ 采
Ｒ ．ＯＩ ＴＰ 方法 获得 Ｔ Ｒ基 因 ｃ Ｎ 选 择 阳性 克 隆并 测 序 。结 果 ： 过 分 子 克隆 和 序列 分 析 ， 现 Ｔ Ｄ Ａ， 通 发 Ｒ基 因长 １５４ ｂ ， Ｒ ５ ｐ Ｏ Ｆ为 １４４ｂ ， ９ Ｐ编码 ４ ８ 氨基 酸。结论 ： ９个 确定 了中国人 白细胞 Ｔ Ｒ的 ｅ Ｎ Ｄ Ａ序列 ， 并据 此推 导出相应 的氨 基酸序列 ｃ 关键词 人 白细 胞 硫 氧还蛋 白还 原酶 基因克隆 序列 分析
ｈＩ 】 ｅ ｎｗ ｔ ９ ｍｉｏ ａ ｉｓ ０ｍ ｄｌ ｉ ｈ ４ ８ ｓ ｎ ｃｄ 加 ： ｈ ＮＡ 删舶 曲 ｈ ｍａ ｅ ｅ￣ｙ ｈｏ Ｍ ｎ ｒｄ ｃ ｓ ａ ｅ ｎ ｄ ｔｌ 删 Ｔ ｅＤ ｕ ｎｌ ｕ ｔ ｔ ｉ￣ ｅｔ ｅ ｕ ｔ ｅ ｈ ｓ ｂ ｅ ｅｅ ａ 功 ｈ ｓ ｂ ｅ ｒ ｄ￣ｅ ａ ｅ ｎ ｐ ｅ ｉ ｄ． ｌｕ ｏ ｙ ｅ Ｔｆ ｒｄ ｘｎ ｒｄ ｅ ｔ Ｃ ｎ ｅ ｃ ｃ ｔ ｌｏｅ ｏ ｉ ｅ ｕ ｔｓ ｉ ￣ｅ ， ｅｄｏｆ ｅ ｒ￣ ｉ ｓ ｑ 啊 ｅｕ ｍ ａ ｄ ｔｅ ａ ｎ ｎ ｈ ｍｉｏ ａ ｉ ｑ ｃｄ ｔ