HDAC3在H9C2细胞缺血再灌注损伤中的表达及干预机制
丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护机制
丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护机制吴爱萍;张美齐;韩芳;孙仁华【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2014(052)033【摘要】目的观察丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路.方法通过建立H9c2心肌细胞缺血再灌注模型,分别加入不同浓度丹参酮IIA,采用CCK-8检测细胞存活率,通过流式细胞术检测细胞凋亡率;另外分为丹参酮ⅡA 组、AG490组、丹参酮ⅡA及AG490组,通过Western blot方法检测JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达.结果 CCK-8检测显示模型组细胞存活率为78.90％±5.163％,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);丹参酮ⅡA 2.5 μM 组细胞存活率为85.76％±6.101％,与模型组比较,P＞0.05;丹参酮ⅡA 10μM组细胞存活率为90.62％±2.321％,与模型组比较,P＜0.05;丹参酮ⅡA 40 μM组细胞存活率为86.38％±4.712％,与模型组比,P＜0.05;流式细胞术检测显示加入丹参酮IIA缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡数减少;丹参酮ⅡA组P-JAK2、P-STAT3蛋白表达较缺血再灌注组明显上升,而AG490组的P-JAK2蛋白表达明显下调.结论丹参酮ⅡA可改善缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞凋亡,其保护机制可能与JAK2/STAT3信号通路有关.【总页数】4页(P1-3,8)【作者】吴爱萍;张美齐;韩芳;孙仁华【作者单位】浙江省人民医院ICU,浙江杭州 310014;浙江省人民医院EICU,浙江杭州 310014;浙江省人民医院ICU,浙江杭州 310014;浙江省人民医院ICU,浙江杭州 310014【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.当归补血汤水提液预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制研究[J], 周春刚;李卿;汤加;徐辰;张志斌2.奥扎格雷联合丹参酮ⅡA对肢体缺血再灌注损伤的保护机制研究 [J], 吴玉杰;张莹;常占平3.姜黄素对阿霉素诱导H9C2心肌细胞损伤保护机制的研究 [J], 张新慰;李丽;王岩;吴庆景;李雪峰4.地榆皂苷Ⅱ对H2O2诱导H9C2心肌细胞株凋亡的保护机制研究 [J], 茹丹; 苏立杰; 姚轶立; 宋玮; 王肖龙5.活血解毒中药配伍对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞自噬损伤的保护机制 [J], 谭令;付长庚;邓秘;曲华;于子凯;黄明艳;龙霖梓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
心肌缺血／再灌注损伤与心肌细胞凋亡
心肌缺血／再灌注损伤与心肌细胞凋亡【摘要】心肌缺血/再灌注损伤的机制十分复杂。
触发和效应阶段是多种成分参与的综合作用结果,各条信号转导途径并非孤立的,而是交叉联系、立体的、错综复杂的调节网络系统。
多种不同的通路会聚于线粒体信号通路并被其整合。
【关键词】心肌缺血/再灌注损伤；心肌细胞凋亡冠脉供血不能满足心肌对能量的需要时就会发生心肌缺血。
一旦缺血存在，心肌组织不仅缺氧和代谢障碍，同时毒性代谢产物蓄积，引起缺血性损伤，如继续发展，则导致心肌死亡。
长期来人们认为细胞坏死是这种心肌死亡的唯一方式。
近年来，随着检测方法的改进，凋亡研究不断向心血管领域的拓展，目前累积的资料充分表明，心肌细胞同样存在凋亡，细胞凋亡也是缺血性心肌细胞死亡的重要方式之一[1，2]。
当前，细胞凋亡是缺血性心脏病研究的崭新的课题，具有重要的理论和潜在的临床应用价值。
1 心肌缺血/再灌注损伤与心肌细胞凋亡的发生机制1．1 氧自由基氧自由基(oxygen free radical,OFR )，是氧在还原时接受电子不足所产生的一类具有高度化学反应活性的含氧基团，是机体内氧分子的不完全代谢产物。
心肌缺血/再灌注可产生大量的氧自由基。
在生理状态下，机体需要不断地产生自由基参与正常代谢过程，多余的自由基可及时地被清除，其产生与清除处于动态平衡；活性氧有很强的氧化活性，可破坏机体氧化/还原动态平衡，造成生物大分子(核酸、蛋白质、脂质)的氧化损伤；凋亡是机体氧化损伤的后果之一[3~5]。
1．2 线粒体损伤与能量代谢障碍目前研究表明，细胞凋亡的发生与线粒体有关。
凋亡过程中线粒体的早期改变是膜通透性变化和转膜电位降低。
线粒体是细胞有氧呼吸的基地和供能场所，细胞内氧化磷酸化、能量代谢和抗活性氧化，均有赖于线粒体的功能。
细胞发生凋亡时，其线粒体的亚微结构虽基本正常，但其功能已有显著变化，从而造成ATP明显下降。
实验证明ATP明显下降可进一步引起一系列代谢异常和紊乱：①心肌缺血时，随着ATP含量的下降，细胞膜、肌浆网Ca2+-ATP酶活力，以及肌浆网钙摄取能力下降，并且不同阶段心脏依赖能量的Ca2+隔室化机制活性降低使Ca2+内流增加，并激活膜磷酶，使膜磷脂降解为溶血瞵脂，导致缺血性肌挛缩，并在此过程中产生OFR，进一步产生损害作用[6] ；②依赖ATP的细胞膜泵活性降低，膜电位改变，以及心电图ST段改变；③缺血涉及的心肌纤维收缩性降低，部分是由于酸中毒和肌钙蛋白C亲和力降低的缘故，此外，酸中毒又可直接损害细胞的超微结构；④缺血区同非缺血区形成代谢梯度，成为引发恶性心律失常的主要因素之一。
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》一、引言心肌细胞是维持心脏功能的重要组成单元，其在缺氧复氧过程中极易受到损伤。
近年来，随着医学研究的深入，丹皮酚作为一种具有多种生物活性的天然化合物，其在心血管保护方面的作用逐渐受到关注。
本研究旨在探讨丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制，以期为临床治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料实验所用H9c2心肌细胞购自ATCC细胞库，丹皮酚购自Sigma-Aldrich公司。
实验所用药品和试剂均符合实验要求。
2. 方法（1）细胞培养与处理：将H9c2心肌细胞分别进行缺氧复氧处理，同时设置丹皮酚干预组和对照组。
（2）检测指标：采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测相关蛋白表达等。
（3）数据分析：采用SPSS软件进行数据分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
三、实验结果1. 丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞活力的影响实验结果显示，丹皮酚干预组细胞活力明显高于对照组（P<0.05），说明丹皮酚对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用。
2. 丹皮酚对H9c2心肌细胞凋亡的影响流式细胞术检测结果显示，丹皮酚干预组细胞凋亡率明显低于对照组（P<0.05），进一步证实了丹皮酚对心肌细胞的保护作用。
3. 丹皮酚对相关蛋白表达的影响Western blot结果显示，丹皮酚干预组Bcl-2蛋白表达升高，而Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05），表明丹皮酚可能通过调节Bcl-2/Bax比例及Caspase-3活性来发挥其保护作用。
四、讨论本研究结果表明，丹皮酚对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有明显的保护作用。
其可能的作用机制包括以下几个方面：首先，丹皮酚可能通过提高细胞活力，降低细胞凋亡率来保护心肌细胞；其次，丹皮酚可能通过调节Bcl-2/Bax比例及Caspase-3活性来发挥其保护作用。
缺血—再灌注损伤与缺血预处理及缺血后处理的保护作用机制(一)
缺血—再灌注损伤与缺血预处理及缺血后处理的保护作用机制(一)作者：马建伟杜会博温晓竞【关键词】缺血；再灌注损伤；缺血预处理缺血是临床上最常见的症状之一，尤其是心脏缺血损伤一直是众多学者研究和关注的问题。
既往认为短暂的心肌缺血造成的心肌可逆性损伤会使之更难以耐受再次缺血损伤。
因此认为多次短暂缺血必然发生累加而导致心肌坏死。
80年代Murry1]首次在狗的实验中发现短暂的冠脉缺血可以使心脏在经历后续长期缺血时的心梗面积较单纯长期缺血时的面积明显缩小，于是提出缺血预处理的概念。
而在2003年，Zhao等2]在犬心肌缺血后再灌注前进行了3次30s的再灌注，发现冠状动脉的内皮功能较单纯长时间再灌注得到明显改善，而且心肌梗死范围也明显缩小，其保护程度与缺血预处理相似。
因而提出了缺血后处理的概念。
这两方面的发现为缺血心肌的保护开辟了新的研究领域。
1心肌的缺血-再灌注损伤1.1心肌的缺血—再灌注损伤的概念及损伤表现缺血-再灌注(ischemiareperfusion，IR)是指心肌缺血时，心肌的代谢出现障碍，从而出现一系列功能异常；缺血一定时间的心肌再重新恢复血液供应后，心肌不一定都会恢复其正常功能和结构，反而出现心肌细胞损伤加重的表现，即所谓缺血—再灌注损伤，IRI)。
这一损伤是心脏外科、冠脉搭桥术等手术期间心肌损伤的主要因素。
其损伤表现为心肌细胞的坏死、凋亡、线粒体功能障碍、脂质过氧化物增多、自由基大量生成，并导致恶性心率失常发生，左心室收缩力减弱、室内压下降等心肌功能的抑制。
1.2心肌的缺血再灌注损伤的机制尽管几十年来人们一直在进行研究，但至今其详细的机制未被阐明，根据近年来的研究其可能的机制有：1.2.1G蛋白、腺苷酸环化酶的功能异常心肌缺血时，对于G蛋白、腺苷酸环化酶活性的变化各家报道不一，有研究表明在体大鼠缺血区G蛋白含量明显降低3]，有结果表明，离体大鼠缺血区G蛋白含量无明显变化4]，也有结果表明，在体狗心肌缺血时，心肌G蛋白含量出现明显增加5]。
CXCR3在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及对Th细胞亚群的调节 高俊
Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ： ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｓ ，Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３ ；ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ；Ｔ－ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｅ ｔ ｓ ；Ｔ－ ｌ ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ，ｈ ｅ ｌ ｐ ｅ ｒ － ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｒ
（ 南京市高淳区医院，南京 ２ １ １ ３ ０ ０ ）
摘要： 目的㊀研究趋化因子受体 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法 ㊀ 建立小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型， 共计 ４ ８只小鼠， 分为手术处理组及假手术组， 分别按照手术后 ３ 、 ６ 、 １ ２ 、 ２ ４ｈ 取样（ 每组 ６只） ， 利用实时荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎＢ ｌ ｏ ｔ 以及流式细胞仪检测趋化因子 Ｃ Ｘ Ｃ Ｌ ９－ １ １及其受体 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３的表达， 利用 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３的特异性阻断剂 Ｃ ６阻断 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３的作用， 通过组 织形态， 肝酶活性评价肝损伤程度， 通过流式细胞仪检测浸润炎症细胞的亚群分布等， 阐述 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３的作用机制。所有数据均以均 标准差（ ｘ ʃ ｓ ） 为表示， 各组之间比较应用单因素方差分析。结果㊀与假手术组相比较， 趋化因子 Ｃ Ｘ Ｃ Ｌ ９－ １ １及其受体 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３ 数ʃ 在缺血再灌注后各时间点表达显著增高（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 阻断 Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３能够显著保护肝功能及肝脏形态（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。Ｃ Ｘ Ｃ ３ Ｒ特异性抑制 ６能够显著降低 Ｔ ｈ １细胞的浸润（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 同时增强 Ｔ ｒ ｅ ｇ 细胞的浸润（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。 结论 ㊀Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３是一个理想的用于保护肝 剂Ｃ 脏缺血再灌注损伤的治疗靶点， 其机制与免疫调节有关。 关键词： 受体， Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ ３ ； 再灌注损伤； Ｔ淋巴细胞亚群； Ｔ淋巴细胞， 辅助诱导 中图分类号： Ｒ ５ ７ ５ ㊀㊀㊀文献标志码： Ａ ㊀㊀㊀文章编号： １ ０ ０ １－ ５ ２ ５ ６ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ８－ ０ ７ ９ ０－ ０ ５
心肌缺血再灌注 代谢组学
心肌缺血再灌注代谢组学心肌缺血再灌注（myocardial ischemia-reperfusion，I/R）是临床上常见的一种心血管疾病，特指心肌血供暂时中断后再次恢复灌注的过程。
这一过程在心肌梗死后的修复中发挥着重要作用，但同时会导致心肌细胞的代谢紊乱，加剧心肌损伤。
心肌缺血时，由于供血不足，心肌细胞开始消耗其存储的氧和能量。
在缺血状态下，细胞出现酸中毒和Ca2+内流增加等现象，导致线粒体功能异常、ATP生成减少、氧化应激增加等。
这些改变反映了心肌细胞代谢的异常。
当缺血得到及时纠正后，再灌注过程会引发一系列复杂的代谢反应。
这些反应包括糖代谢异常、脂肪酸氧化紊乱、氧化还原平衡失调等。
糖代谢异常表现为糖原降解和乳酸产生的增加，而脂肪酸氧化紊乱则会导致脂酸蓄积和ROS产生增加。
氧化还原平衡失调则主要体现为细胞内外游离氧自由基水平的失调。
在研究心肌缺血再灌注过程中，代谢组学技术被广泛应用。
代谢组学通过对心肌组织或血液中代谢产物的检测和分析，可以全面了解心肌缺血再灌注过程中的代谢变化。
例如，通过检测心肌组织中的氨基酸、有机酸、酮体等代谢产物，可以评估缺血再灌注对心肌能量代谢的影响。
同时，代谢组学也可以揭示心肌细胞中ROS的水平和抗氧化系统的状态，进一步了解缺血再灌注过程中心肌细胞的氧化还原平衡。
通过代谢组学的研究，我们已经取得了一些重要的发现。
例如，研究发现缺血再灌注导致心肌组织中氨基酸代谢的紊乱，这与心肌纤维化和心脏功能恢复的损伤相关。
同时，代谢组学的研究还提示缺血再灌注过程中脂肪酸代谢的紊乱可能与心肌细胞的凋亡和坏死有关。
这些发现为探索心肌缺血再灌注的机制提供了新的线索，为未来的治疗提供了新的靶点。
综上所述，心肌缺血再灌注是一种重要的心血管疾病，代谢组学研究为我们全面了解其代谢变化提供了重要手段。
未来我们应进一步深入研究心肌缺血再灌注过程中的代谢异常，探索新的预防和治疗策略，以减轻心肌损伤，提高患者的预后。
Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究
Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究摘要：缺血再灌注损伤是心肌梗死等心血管疾病常见的临床问题，了解其发生机制对疾病的防治有重要意义。
Sirt3是一种重要的去乙酰化酶，受FoxO1转录因子调控，参与心脏代谢平衡的调节。
本研究通过建立H9C2细胞缺血再灌注模型，探究Sirt3-FoxO1在该过程中的作用。
结果显示，缺血再灌注后，H9C2心肌细胞的Sirt3和FoxO1表达均发生改变，且负相关。
过表达Sirt3或FoxO1前体磷酸化抑制剂能够减轻H9C2心肌细胞的损伤。
进一步实验发现，Sirt3作为FoxO1的底物，参与过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活器1α（PGC-1α）调控的线粒体合成及抗氧化反应的过程。
综合结果表明，Sirt3-FoxO1通路对心肌细胞缺血再灌注损伤的发生具有重要的调节作用，可能成为治疗心血管疾病的新靶点。
关键词：Sirt3-FoxO1，H9C2心肌细胞，缺血再灌注损伤，线粒体合成，抗氧化反应引言：心血管疾病是当前危害人类健康的主要病因之一，其主要表现为冠心病、心肌梗死、高血压和心力衰竭等。
缺血再灌注（I/R）损伤是心肌梗死等心血管疾病常见的临床问题，其发生机制极其复杂，需进一步深入探究。
近年来，研究表明心肌细胞代谢平衡的失衡在I/R损伤中具有重要作用，而Sirt3-FoxO1信号通路作为调控心肌细胞代谢平衡的关键信号通路之一，在心血管疾病中引起了广泛关注。
Sirt3是一种重要的去乙酰化酶，主要分布在线粒体内。
由于其对线粒体功能的调节作用，Sirt3的表达与心肌细胞的代谢调节密切相关。
FoxO1是一种重要的转录因子，参与多种生理过程的调控，其中包括Sirt3的转录调控。
Sirt3和FoxO1在心肌细胞代谢平衡的调节中相互调节作用，具有重要的生理功能。
本研究旨在探究Sirt3-FoxO1信号通路在H9C2心肌细胞I/R损伤中的作用。
黄芪总皂苷对三氧化二砷诱导H9c2_细胞损伤的保护作用
第 42 卷第 6 期2023年 11 月Vol.42 No.6Nov. 2023中南民族大学学报（自然科学版）Journal of South-Central Minzu University（Natural Science Edition）黄芪总皂苷对三氧化二砷诱导H9c2细胞损伤的保护作用杨秀华1, 2，钱新宇3，王玥璇1，智慧2，艾丹2，肖云峰1*（1 内蒙古医科大学药学院，呼和浩特010110；2 呼伦贝尔职业技术学院，呼伦贝尔021000；3 包头市第四医院，包头014030）摘要为探讨黄芪总皂苷（ASTs）对三氧化二砷（ATO）诱导H9c2细胞损伤的保护作用及其机制，采用6 µg·mL-1 ATO孵育12 h建立H9c2细胞损伤模型.实验设空白组、模型组、ASTs低/中/高浓度组，ASTs组预孵育12 h，弃去含药培养基，继续用6 µg·mL-1 ATO孵育12 h，终止实验.通过CCK-8法检测细胞存活率，Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡程度，流式细胞术定量测定细胞凋亡率，RT-qPCR测定Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达水平，Western Blot测其蛋白.结果表明：ATO能够显著降低心肌细胞存活率、增加凋亡率（P<0.05）；与ATO模型组比较，ASTs各组能显著提高细胞存活率，降低细胞凋亡率（P<0.05），降低Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA表达水平，增加Bcl-2 mRNA表达水平（P<0.05），显著降低细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平（P<0.05），升高Bcl-2/Bax比值（P<0.05）.故ASTs对ATO诱导H9c2细胞凋亡具有保护作用，其机理可能与抑制细胞凋亡有关.关键词黄芪总皂苷；三氧化二砷；H9c2心肌细胞；细胞凋亡中图分类号R285.5；R967 文献标志码 A 文章编号1672-4321（2023）06-0739-06doi：10.12130/znmdzk.20230603Protective effect of total saponins of astragalus on H9c2 cell damageinduced by arsenic trioxideYANG Xiuhua1, 2，QIAN Xinyu3，WANG Yuexuan1，ZHI Hui2，AI Dan2，XIAO Yunfeng1*（1 College of Pharmacy， Inner Mongolia Medical University， Hohhot 010110， China； 2 Hulunbuir Vocational and Technical College， Hulunbeier 021000， China； 3 Baotou Fourth Hospital， Baotou 014030， China）Abstract To investigate the protective mechanism of total saponins of astragalus（ASTs） on H9c2 cell injury induced by arsenic trioxide （ATO）， the H9c2 cells injury model was established by incubating with 6 µg·mL-1 ATO for 12 hours， and the blank group， model group， ASTs low， medium and high concentration group were set up in the experiment. Each ASTs group was pre-incubated for 12 hours， then the drug-containing medium was discarded， and the experiment was terminated with 6 µg·mL-1ATO for 12 hours. Cell viability was measured by the CCK-8 method，and the degree of apoptosis was observed by the Hoechst 33342 staining method. The quantitative apoptosis rate was determined by flow cytometry， and the expression levels of apoptosis-related genes Bcl-2，Bax，Caspase-3，Caspase-9were examined by RT-qPCR and these proteins were tested by Western Blot. The results indicated that ATO could significantly reduce the survival rate of cardiomyocytes and increase the rate of apoptosis （P<0.05）；compared with ATO group，each ASTs group could significantly enhance the survival rate of cells， reduce the rate of apoptosis （P<0.05）， decrease Caspase-3，Caspase-9，Bax mRNA expression levels， increase Bcl-2 mRNA expression level （P<0.05）， decrease Caspase-3 and Caspase-9 protein levels in cells （P<0.05）， and increase Bcl-2/Bax （P<0.05）. Therefore，ASTs has a protective effect on ATO-induced H9c2 cells apoptosis， and the mechanism may be related to the inhibition of apoptosis.Keywords total saponins of astragalus； arsenic trioxide； H9c2 cardiomyocytes； apoptosis收稿日期2021-08-27* 通信作者肖云峰（1983-），男，副研究员，博士，研究方向：心血管药理学，E-mail：*******************基金项目内蒙古自治区科技计划资助项目（2021GG0185）；内蒙古医科大学科技成果转化资助项目（YKD2019CGZH001）第 42 卷中南民族大学学报（自然科学版）三氧化二砷（ATO）俗称砒霜，最初被用于治疗银屑病或结核病的辅助药物［1-2］.随着医学的发展，发现其可用于治疗急性早幼粒细胞白血病［3］，治愈率高达80%以上［4］.随着对ATO的逐步研究，发现其对肺癌［5］、宫颈癌［6］、肝癌［7-8］等疾病也具有较好的治疗作用，应用前景良好.但在抗肿瘤时它对心、脑、肾等也会产生一定的毒性［9］.研究表明，ATO通过引起氧化应激反应致使细胞损伤，最终导致细胞凋亡［10-11］，故抑制细胞凋亡可能是减轻ATO诱导心脏毒性的合理方法之一.黄芪总皂苷（ASTs）是中药黄芪的成分之一，本课题组前期实验结果发现，ASTs 可以激活PI3K/Akt/Nrf2信号传导途径而发挥抗氧化作用［12］，但是它能否最终抑制细胞凋亡，是本文的研究重点.现有研究显示：ASTs通过明显降低Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达及促进Bcl-2表达来发挥对过氧化物诱导心肌细胞凋亡的作用［13-14］.因此，本文拟通过观察ASTs对ATO诱导的H9c2细胞形态、凋亡率及凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达的影响，探讨ASTs 对ATO所产生的心肌细胞毒性的保护作用，为ASTs 进一步的研究和应用提供实验依据.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂与细胞H9c2心肌细胞（上海富恒细胞库）；黄芪总皂苷（南京狄尔格医药科技）；Bax抗体、Bcl-2抗体、Caspase-9抗体、β-actin抗体（英国abcam）；Caspase-3抗体（美国CST）；合成引物（上海生工）.1.1.2 主要仪器台式高速冷冻离心机（3K15，美国Gene Company Limited）；荧光倒置生物显微镜（DM3000，德国Leica）；CO2培养箱（MCO-15AC，美国Thermo Fisher）；立式高压蒸汽灭菌锅（ES-315，日本TOMY）；电泳仪（Mini Trans-Blot，美国Bio-Rad）；红外荧光扫描成像系统（ODYSSEY CLX，美国LI-COP）.1.2 方法1.2.1 细胞培养将H9c2细胞接种于含10%FBS的DMEM培养基中进行培养.当细胞生长融合至约80%时，用0.25%胰酶消化传代，取对数生长期的细胞用于后续实验.1.2.2 检测ATO对细胞活力的影响将细胞密度调为1 × 104 个/孔，接种于96孔板，孵育36 h.空白组用无血清培基液处理，ATO组分别用含有终浓度为1、2、4、6、8、10 µg·mL-1 ATO 无血清培养12 h. 取10 µL的CCK-8液添加至每孔中，孵育1 h，测定波长为450 nm的吸光度，计算细胞存活率.1.2.3 检测ASTs对细胞活力的影响细胞分组前操作同1.2.2.空白组用无血清培养液处理，ASTs预孵育组将含有终浓度为25、50、100 µg·mL-1 ASTs的无血清培养液作用12 h，换液，继续培养12 h，计算存活率.1.2.4 检测ASTs对ATO致H9c2细胞的损伤的影响细胞分组前操作同1.2.2. 空白组无血清孵育12 h后，换液，继续培养12 h；模型组用培养基孵育12 h后换用6 µg·mL-1ATO的培养基孵育12 h；ASTs （低、中、高）浓度组分别加入25、50、100 µg·mL-1含ASTs的培养基孵育12 h后换用6 µg·mL-1 ATO的培养基孵育12 h. 监测其生长状态，计算各组细胞存活率.1.2.5 Hoechst 33342染色观察H9c2细胞凋亡形态将细胞密度调为1 × 105 个/孔，接种于24孔板，孵育36 h.分组及培养时间同1.2.4.后续实验按说明书进行，观察细胞凋亡形态并进行拍照.1.2.6 流式细胞术检测H9c2细胞凋亡率将细胞密度调为2 × 106 个/孔，接种于6孔板，孵育36 h. 分组及培养时间同1.2.4，0.25%胰酶消化细胞，离心收集，后续实验严格按照说明书进行操作，1 h内用流式细胞仪检测凋亡率.1.2.7 RT-qPCR测定相关mRNA表达水平将细胞以1 × 106个/孔接种于6孔板中，孵育36 h. 分组及培养时间同1.2.4，后续实验严格按照说明书进行操作，用RT-qPCR技术检测相关凋亡因子mRNA的表达.引物序列见表1.1.2.8 Western Blot检测相关蛋白表达将心肌细胞以1 × 106 个/孔接种于6孔孵育板中，孵育36 h. 分组及培养时间同1.2.4，收集细胞，提蛋白，测定蛋白浓度. 后续实验严格按照说明书进行操作，使用红外激光成像系统检测相关凋亡因子蛋白表达水平.1.2.9 统计学方法实验数据以xˉ±s表示，采用Graphpad Prism 8.0 软件统计分析，组间比较用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义.740第 6 期杨秀华，等：黄芪总皂苷对三氧化二砷诱导H9c2细胞损伤的保护作用2 结 果2.1 ATO 对心肌细胞活力的影响用CCK -8法检测并计算不同浓度ATO 对H9c2细胞的存活率，结果见图1.由图1可知：与空白组比较，ATO 1~10 µg ·mL -1组细胞活力显著降低（P <0.01）.2.2 ASTs 对心肌细胞活力的影响用CCK -8法检测并计算不同浓度ASTs 对H9c2细胞的存活率，结果见图2.由图2可知：与空白组比较，ASTs 各浓度组对H9c2细胞存活率无明显影响（P >0.05），不会干扰对ATO 诱导细胞凋亡影响的实验结果.2.3 ASTs 预孵育对ATO 致H9c2细胞活力下降的影响CCK -8法检测并计算各组别细胞的活力，结果见图3.由图3可知：与空白组比较，模型组细胞活力显著降低（P <0.01）.与模型组比较，ASTs 25、50、100 µg ·mL -1预孵育12 h 可显著提高细胞活力（P <0.01），以高浓度组保护作用最佳.2.4 ASTs 预孵育对ATO 致H9c2细胞损伤形态学影响各组细胞处理后，观察其生长状态及形态学变化，结果见图4.由图4可知：空白组H9c2心肌细胞生长状态好、数量多、均呈长梭形；模型组细胞收缩成圆形，伴有大量细胞死亡；ASTs 各浓度组大部分细胞仍保持长梭形形态，以高浓度组细胞形态最佳.2.5 ASTs 对H9c2细胞凋亡形态的影响细胞处理后，观察H9c2细胞凋亡形态，结果见图5.由图5可知：空白组细胞荧光染色均匀，呈低蓝色，形态大小均一，很少见凋亡细胞［图5（a ）］；模型组呈亮蓝色，可见核固缩，凋亡细胞增多［图5（b ）］；与ATO 模型组比较，ASTs 低、中、高浓度组凋亡细胞比例显著减少，正常细胞数目增多［图5（c ）‒图5（e ）］.2.6 流式细胞术检测H9c2细胞凋亡率将各组细胞处理后，流式细胞仪检测凋亡率，结表1 引物序列Tab.1 Primer sequences基因Bax Bcl -2Caspase -3Caspase -9β-actin引物序列（5'⁃3'）F ： 5'-CCAGGACGCATCCACCAAGAAG -3'R ： 5'-GCTGCCACACGGAAGAAGACC -3'F ： 5'-ACGGTGGTGGAGGAACTCTTCAG -3'R ： 5'-GGTGTGCAGATGCCGGTTCAG -3F ： 5'-GTACCGATGTCGATGCAGCTAACC -3'R ： 5'-TCAGGTCCACAGGTCCGTTCG -3F ： 5'-GGTGGACATTGGTTCTGGCAGAG -3'R ： 5'-ACGTTGTTGATGATGAGGCAGTGG -3F ： 5'-TGTCACCAACTGGGACGATA -3'R ： 5'-GGGGTGTTGAAGGTCTCAAA -3'与空白组相比，***P <0.001；****P <0.0001.图1 ATO 对心肌细胞存活率的影响（n =6）Fig.1 Effect of ATO on the survival rate of cardiomyocytes （n =6）图2 不同浓度ASTs 对H9c2细胞存活率的影响（n =6）Fig.2 Effects of different concentrations of ASTs on the survivalrate of H9c2 cells （n =6）与空白组相比，**P <0.01；与模型组相比，##P <0.01；各浓度组ASTs 组相比，△△P <0.01，△P <0.05.图3 ASTs 对ATO 诱导心肌损伤的保护作用（n =6）Fig.3 Protective effect of ASTs on ATO -induced myocardial injury （n =6）741第 42 卷中南民族大学学报（自然科学版）果见图6.由图6可知；与空白组相比，模型组细胞凋亡细胞显著升高（P <0.01）；与模型组相比，ASTs 各组凋亡细胞显著减少（P <0.01）.2.7 ASTs 预孵育对相关mRNA 表达水平的影响将各组细胞处理后，用RT -qPCR 技术检测相关mRNA 表达水平，结果见图7.由图7可知：与空白组比较，ATO 降低了Bcl -2 mRNA 水平（P<0.01），升高了Bax 、Caspase -3、Caspase -9 mRNA 水平（P<0.01）；与模型组比较，ASTs 升高了Bcl -2 mRNA 水平（P<0.01），降低了Bax mRNA 水平（P<0.05），ASTs 中、高浓度组降低了Caspase -3、Caspase -9 mRNA 水平（P<0.05）.2.8 ASTs 预孵育对相关蛋白表达的影响将各组细胞处理后，用红外激光成像系统检测各组细胞的相关蛋白的表达，结果见图8.由图8可知：与空白组比较，ATO 降低Bcl -2/Bax 水平（P <0.01），升高Caspase -3、Caspase -9水平（P <0.01）；与模型组比较，ASTs 中、高浓度升高Bcl -2/Bax 水平（P <0.01），降低Caspase -3、Caspase -9水平（P <0.05）.3 讨论ATO 发挥抗恶性肿瘤作用的主要机制是其能够诱导肿瘤细胞凋亡，但同时也是产生毒性反应的主要原因之一［15］.本文发现：ATO 导致H9c2心肌细胞活力下降，心肌细胞凋亡发生率显著升高，心肌细胞凋亡数目增多，这是药物产生心脏毒性的重要病理机制之一，因此抑制心肌细胞凋亡是考察心脏保护药物药效的指标之一.ASTs 预孵育能提高心肌细胞活力，降低细胞凋亡的比例，从而降低 ATO 产生的心脏毒性，发挥心脏保护作用.（a ） 空白组； （b ） 模型组； （c ）‒（e ） 25、50、100 µg ·mL -1ASTs 图4 ASTs 对ATO 诱导的H9c2细胞损伤的形态学影响Fig.4 Morphological effects of ASTs on ATO -induced injury in H9c2 cells（a ） 空白组； （b ） 模型组； （c ）‒（e ） 25、50、100 µg ·mL -1ASTs图5 ASTs 对H9c2细胞凋亡形态的影响（10 × 10）Fig.5 Effects of ASTs on the apoptosis morphology of H9c2 cells （10 × 10）与空白组相比，**P<0.01；与模型组相比，##P<0.01；各浓度组ASTs 组相比，△P<0.05， △△P<0.01.（a ） 空白组； （b ） 模型组； （c ）‒（e ） 25、50、100 µg ·mL -1 ASTs ； （f ） 凋亡率统计图图6 流式细胞术检测H9c2细胞凋亡率（n =3）Fig.6 H9c2 cell apoptosis rate detected by flow cytometry （n =3）742第 6 期杨秀华，等：黄芪总皂苷对三氧化二砷诱导H9c2细胞损伤的保护作用细胞凋亡是维持各器官、组织及细胞等所处内环境稳态的重要方式［16］，是一种复杂的分子调控机制，由Bcl -2家族和Caspase 家族两大家族进行调控. Bcl -2家族是主要的细胞调控基因之一，作用于线粒体，使膜通道开放以及促凋亡物质流动［17］，是调节细胞凋亡过程的一类蛋白质，由抗凋亡因子和凋亡因子组成.其中Bcl -2是抗凋亡因子，保护细胞免于凋亡，Bax 是促凋亡因子，促使细胞凋亡，二者共同决定细胞的存亡 ［18-19］，Bcl -2与Bax 是一对最主要的拮抗基因， Bcl -2与Bax 可形成异二聚体，其比值参与细1.空白组；2.模型组；3. 25 µg ·mL -1 ASTs ；4. 50 µg ·mL -1 ASTs ；5. 100 µg ·mL -1 ASTs ；与空白组相比，**P<0.01；与模型组相比，##P<0.01；各浓度组ASTs 组相比，△△P<0.01，△P<0.05.（a ） Bax ； （b ） Bcl -2； （c ） Caspase -3； （d ） Caspase -9图7 ASTs 对心肌细胞Bax 、Bcl -2、Caspase -3、Caspase -9 mRNA 表达的影响（n =3）Fig.7 Effect of ASTs on the expression of Bax ， Bcl -2， Caspase -3， Caspase -9 mRNA in cardiomyocytes （n =3）1.空白组；2.模型组；3. 25 µg ·mL -1 ASTs ；4. 50 µg ·mL -1 ASTs ；5. 100 µg ·mL -1 ASTs ；与空白组相比，**P <0.01；与模型组相比，##P <0.01；各浓度组ASTs 组相比，△△P <0.01，△P <0.05.（a ） 各蛋白条带图；（b ） Bcl -2/Bax ；（c ） Caspase -3 ；（d ） Caspase -9图8 ASTs 对H9c2细胞Bax 、Bcl -2、Caspase -3和Caspase -9蛋白表达的影响（n =3）Fig.8 Effects of ASTs on the expression of Bax ， Bcl -2， Caspase -3 and Caspase -9 proteins in cardiomyocytes （n =3）743第 42 卷中南民族大学学报（自然科学版）胞凋亡的调控［6］. 李珊珊等［20］研究发现：华蟾素通过上调Bax，下调Bcl-2基因而诱导人胃癌 MKN-45 细胞凋亡. 本文研究发现：ASTs使Bcl-2/Bax明显升高，显示其抗凋亡作用，抑制ATO引起的心肌细胞凋亡. Caspase家族相关因子在细胞凋亡中也发挥了至关重要的作用，主要是诱导细胞程序性死亡而介导细胞凋亡［21］. 其中 Caspase-9、Caspase-3是介导细胞凋亡的关键因子.Caspase-9是内源性凋亡通路的关键酶，Caspase-3是死亡因子，可激活凋亡信号的传递，是最为关键的凋亡执行者，其过表达可加速细胞凋亡进程［22］.当Caspase-9被启动后，Caspase-3表达增加，可通过裂解蛋白激酶及细胞骨架而导致细胞凋亡. 程婷婷等［23］研究发现地参多糖通过下调Caspase-3、Caspase-9基因表达而发挥对非小细胞肺癌 A549 细胞的凋亡作用.本文研究发现：ASTs使Caspase-3、Caspase-9水平显著下降，减少细胞凋亡.综上所述，本文结果提示：ASTs对ATO诱导的H9c2细胞凋亡具有保护作用，可能与调控Bcl-2/ Bax、Caspase-3、Caspase-9凋亡相关因子有关，但其抑制凋亡的更多机制有待于进一步研究.参考文献［1］陈亚娟，卿晨. 三氧化二砷抗肿瘤作用研究进展［J］.昆明医学院学报， 2012，33（S1）：251-254.［2］THOMAS X，TRONCY J. Arsenic：A beneficial therapeutic poisona─a historical overview［J］. Adler MusBull， 2009， 35（1）： 3-13.［3］ZHU J， CHEN Z， LALLEMAND-BREITENBACH V， et al.How acute promyelocytic leukemia revived arsenic［J］.Nat Rev Cancer， 2002， 2（9）：705-713.［4］O'DONNELL M R，APPELBAUM F R，BAER M R，et al. Acute myeloid leukemia clinical practice guidelinesin oncology［J］. J Natl Compr Canc Netw， 2006， 4（1）：16-36.［5］YANG M H， CHANG K J， LI B， et al. Arsenic trioxide suppresses tumor growth through antiangiogenesis via Notchsignalingblockade in small-cell lung cancer［J］. BiomedRes Int， 2019， 2019： 4647252.［6］王其美，王容容，张迪，等. 口服肝喜片配合三氧化二砷行肝动脉灌注化疗栓塞术治疗肝郁脾虚型原发性肝癌的临床研究［J］.中华中医药杂志， 2016， 31（3）：1121-1125.［7］SADAF N，KUMAR N，ALI M，et al. Arsenic trioxide induces apoptosis and inhibits the growth of human livercancer cells ［J］. Life Sci， 2018， 205： 9-17.［8］邓运宗，黄兴，王红玲，等. 三氧化二砷治疗胃癌的作用机制［J］.中医学报， 2018， 33（6）：961-966.［9］YANG Q M，JUAN L I，LUO S K. Clinical study of cardiac side effects of arsenic trioxide in146 courses oftreatment of acute promyelocytic leukemia［J］.Chin J ClinOncol Rehabil， 2009， 16（2）：134-137.［10］JOHN R S. Arsenic-based antineoplastic drugs and their mechanisms of action［J］. Metal-Based Drugs，2008，2008（1）：260146.［11］BESSHO M， AKI T， FUNAKOSHI T， et al. Rho-kinase inhibitor Y-27632 attenuates arsenic trioxide toxicity inH9c2 cardiomyoblastoma cells［J］. 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H9C2细胞培养液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究的开题报告
H9C2细胞培养液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究的开题报告一、研究背景心肌细胞缺血性损伤或缺氧是临床心脏病发生的主要原因之一。
目前，心脏病的治疗方法包括药物治疗、冠状动脉旁路移植和心脏移植等，但这些治疗方法都存在着一定的局限性。
因此，寻找新的治疗方法变得尤为迫切。
近年来，干细胞治疗成为心脏再生医学的热门研究方向。
骨髓间充质干细胞（BMSCs）作为一种重要的干细胞来源，已被广泛应用于心脏再生医学中。
H9C2细胞则是常用于心肌细胞研究的细胞系，常被用来评价心肌细胞增殖和分化。
二、研究目的本研究旨在探讨H9C2细胞培养液诱导大鼠BMSCs分化为心肌样细胞的可行性，建立一种新的治疗心肌病的方法。
三、研究方法1. BMSCs的培养和鉴定：将大鼠骨髓抽出后，将细胞培养在L-DMEM低糖培养液中，并添加10%的胎牛血清。
经过3代的培养后，通过流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD44、CD90和CD34等，确保其为干细胞。
2. H9C2细胞培养液的制备：将H9C2细胞培养在DMEM高糖培养液中，并添加10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素抗生素。
3. BMSCs的诱导分化：将BMSCs接种在含有H9C2细胞培养液的培养皿内，继续培养3周，并观察BMSCs的形态和功能改变。
采用多聚酰胺凝胶电泳法和RT-PCR检测诱导后细胞的肌钙蛋白T（cTnT）、骨形态发生蛋白（BMP-2）、骨钙素（OCN）等表达情况。
四、研究意义本研究探究了一种新的治疗心脏病的方法，为心肌再生医学的研究提供了借鉴。
此外，通过BMSCs分化成心肌细胞的过程，我们可以更好地了解干细胞分化和再生的机制。
原花青素联合缺血后处理对H9C2心肌细胞的保护作用
原花青素联合缺血后处理对H9C2心肌细胞的保护作用许素铭;宋明;张旻;王耀琴;弓韬;覃秀桃【摘要】目的观察原花青素(procyanidine,PC)与缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)联合干预H9C2心肌细胞,对其凋亡率及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)的作用.方法将培养的H9C2心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、原花青素+缺血后处理组 (PC+IPO组).利用AO-EB染色法检测H9C2心肌细胞的凋亡率;利用Western blotting方法检测H9C2心肌细胞P-p38MAPK蛋白表达情况.结果对细胞凋亡率的影响:IPO单独和联合PC干预H9C2心肌细胞0、12 h、24 h后,各时间点IPO组和PC+IPO组细胞凋亡率均低于I/R组(P<0.01).12 h时,PC+IPO 组细胞凋亡率低于IPO组(P<0.05).对P-p38 MAPK表达的影响:12 h时,I/R组表达高于C组(P<0.01);PC+IPO组和IPO组表达低于I/R组(P<0.01),同时PC+IPO 组低于IPO组(P<0.05).结论 IPO单独和联合PC干预均可通过减少心肌细胞凋亡起到心肌保护作用,并且PC联合IPO更有效.该保护作用机制可能与抑制p38MAPK有关.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2012(010)009【总页数】2页(P1090-1091)【关键词】原花青素;缺血后处理;P-p38MAPK;缺血/再灌注损伤【作者】许素铭;宋明;张旻;王耀琴;弓韬;覃秀桃【作者单位】山西医科大学,030001;山西医科大学,030001;山西医科大学,030001;山西医科大学,030001;山西医科大学,030001;山西医科大学,030001【正文语种】中文【中图分类】R329.2;R285.6近年来，随着溶栓治疗和经皮冠状动脉介入治疗的广泛应用，研究和探讨心脏缺血再灌注损伤的机制和减轻心肌损伤的有效措施已成为众多专家学者研究的热点。
红景天苷对缺血-再灌注H9C2心肌细胞增殖及活性氧的影响
红景天苷对缺血-再灌注H9C2心肌细胞增殖及活性氧的影响占海思;宫剑滨;潘涛【摘要】目的防治血运重建后组织的缺血-再灌注损伤是当前血管微创领域的研究热点,文中在细胞水平进一步探讨红景天苷对心肌细胞缺血-再灌注损伤的保护作用及其部分机制. 方法将H9C2细胞株培养后取对数期细胞,分为4组:①正常对照组:正常培养24h后进行相关指标检测;②缺氧/复氧组:用缺氧培养液培养16h后换为正常培养液培养8h,进行相关指标检测;③缺氧/复氧+红景天苷组:在换缺氧培养液的同时加入20 μL(200 μg/mL)红景天组苷,余步骤同缺氧/复氧组;④缺氧/复氧+红景天苷+ LY294002组:在加入红景天苷前30 min加入磷脂酰肌醇-3-激酶通道阻滞剂LY294002,余步骤同缺氧/复氧组.经上述处理后,用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;检测培养液中活性氧水平. 结果与缺氧/复氧+红景天苷组H9C2细胞抑制率[(27.95±4.41)％]比较,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+红景天苷组+LY294002[(37.40±2.56)％、(35.63±2.16)％]均增加(P＜0.05).而缺氧/复氧组、缺氧/复氧+红景天苷组+LY294002抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组活性氧水平(11.62±0.71)比较,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+红景天苷组、缺氧/复氧+红景天苷组+ LY294002(36.55±2.08、30.44±1.07、36.46 ±2.02)均增加(P＜0.05);与缺氧/复氧组比较,缺氧/复氧+红景天苷组活性氧水平减少(P＜0.05),而缺氧/复氧+红景天苷组+ LY294002差异无统计学意义(P＞0.05). 结论红景天苷可通过抑制细胞凋亡、降低活性氧水平发挥对H9C2细胞缺血-再灌注损伤的保护作用.该作用可以被磷脂酰肌醇-3-激酶通道阻滞剂LY294002抑制,提示红景天苷的抗MIRI作用可能与PI3K信号通路有关.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2016(029)006【总页数】5页(P593-597)【关键词】红景天苷;H9C2细胞;缺血/再灌注损伤;细胞凋亡;活性氧;磷脂酰肌醇-3-激酶【作者】占海思;宫剑滨;潘涛【作者单位】210046南京,南京中医药大学第一临床医学院;210002南京,南京军区南京总医院心内科;210046南京,南京中医药大学第一临床医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5近年来我国每年死于急性心肌梗死的患者人数已超过100万。
苦豆碱对缺血再灌注引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症应答的作用
苦豆碱对缺血再灌注引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症应答的作用张会超;徐里;芮浩淼;曹程浩;杨凤鸣;袁彬【摘要】AIM:To explore the role of aloperine in ischemia-reperfusion(I/R)-induced H9c2 cardiomyocyte injury and inflammation.METHODS: The H9c2 cardiomyocytes were cultured under hypoxia and re-oxygenation condi-tions to simulate ischemia-reperfusion(SI/R)injury.After treatment with aloperine at various doses,the cell viability was measured by MTT assay.The cell apoptosis was analyzed by flowcytometry.Simultaneously,the levels of lactate dehydro-genase(LDH),malonaldehyde(MDA)and caspase-3 activity were detected by the commercial kits.The levels of inflam-matory cytokines were also detected by ELISA.Moreover,the effects of aloperine on the activation of PI 3K/AKT signaling pathway were determined by Western blot.RESULTS:Pre-treatment with aloperine remarkably abated the inhibitory effect of SI/R on H9c2 cell viability,and decreased the elevations of LDH and MDA triggered by SI /R(P<0.05).Pre-treat-ment with aloperine dramatically suppressed the cell apoptosis induced by SI /R treatment(P<0.05), concomitant with the decrease in caspase-3 activity and increase in Bcl-2/Bax ratio(P<0.05).In contrast to SI/R group,aloperine treat-ment notably restrained the concentrations of pro-inflammatory cytokines, including interleukin-6, tumor necrosis factor-α and interleukin-1β(P<0.05).Furthermore, aloperine remarkably increased the protein levels of p-PI3K and p-AKT. Whileblocking the PI3K/AKT pathway with its specific inhibitor LY294002, the viability-promoting, anti-apoptotic and anti-inflammatory effects of aloperine on the H 9c2 cells were obviouslyattenuated(P<0.05).CONCLUSION: Alope-rine protects against cardiomyocytes from I/R injury and inhibits inflammatory responses by activating the PI 3K/AKT signa-ling pathway,implying a potential benefic role of aloperine against myocardial I /R injury.%目的:明确苦豆碱对缺血再灌注(I/R)引起的大鼠心肌H9c2细胞损伤和炎症应答的作用及其机制.方法:采用缺氧/复氧的方法体外模拟缺血再灌注(SI/R)心肌损伤,用不同浓度苦豆碱处理,MTT实验分析苦豆碱对H9c2细胞存活率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的水平及caspase-3的活性;ELISA分析多种炎性因子水平;同时用Western blot法分析苦豆碱对PI3K/AKT信号通路的影响.结果:苦豆碱可对抗SI/R抑制的H9c2细胞存活率,同时明显降低SI/R引起的LDH及MDA浓度的增加(P<0.05).此外,苦豆碱能够显著抑制SI/R触发的细胞凋亡(P<0.05),同时降低SI/R处理后引起的caspase-3活性的增加,并上调Bcl-2/Bax 比值(P<0.05).与SI/R组相比,苦豆碱处理可显著性降低H9c2心肌细胞炎性因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的浓度(P<0.05).此外,与SI/R组相比,苦豆碱处理后可显著增加p-PI3K和p-AKT的蛋白水平(P<0.05);当用LY294002抑制PI3K/AKT通路后,苦豆碱促心肌细胞存活、抗凋亡及抗炎症的作用明显减弱(P<0.05).结论:苦豆碱可通过激活PI3K/AKT信号通路对抗心肌细胞缺血再灌注引起的损伤及炎症应答,提示其对心肌缺血再灌注损伤的防治具有潜在应用价值.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)002【总页数】6页(P281-286)【关键词】苦豆碱;心肌细胞;缺血再灌注损伤;炎症;PI3K/AKT信号通路【作者】张会超;徐里;芮浩淼;曹程浩;杨凤鸣;袁彬【作者单位】河南省中医院,河南郑州450002;河南中医药大学,河南郑州450008;河南省中医院,河南郑州450002;河南省中医院,河南郑州450002;河南省中医院,河南郑州450002;河南中医药大学,河南郑州450008【正文语种】中文【中图分类】R542.2;R285.5心肌梗死是常见的缺血性心脏病之一，具有较高的发病率和致死率，已成为影响人类健康的重要杀手。
高脂通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞损伤
高脂通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞损伤刘涛;李晶;鲍翠玉【摘要】目的探讨高脂通过线粒体凋亡通路对H9 c2心肌细胞的损伤作用.方法棕榈酸(0～0.4 mmol·L-1)刺激H9c2心肌细胞24 h和0.2 mmol·L-1棕榈酸刺激H9c2心肌细胞(0～48 h);MTT法评估细胞生长状态;活性氧试剂盒检测细胞内活性氧水平;凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;线粒体膜电位试剂盒检测线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测细胞内线粒体凋亡相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax、Bcl-2表达水平.结果棕榈酸刺激H9c2心肌细胞24 h,棕榈酸0.2、0.4 mmol·L-1组细胞增殖率均出现明显下降;细胞内活性氧水平逐渐升高,线粒体膜电位下降,细胞凋亡增加.棕榈酸(0.2 mmol·L-1)刺激H9c2心肌细胞24、36、48 h均引起细胞增殖率明显下降.棕榈酸(0.4 mmol·L-1)刺激H9c2心肌24 h,线粒体相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax表达均明显增高(P<0.05),而Bcl-2明显降低(P<0.05).结论线粒体凋亡信号通路可能对高脂所致H9c2心肌细胞损伤起重要作用.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2019(035)004【总页数】6页(P494-499)【关键词】线粒体凋亡;高脂;棕榈酸;心肌损伤;细胞增殖;凋亡【作者】刘涛;李晶;鲍翠玉【作者单位】湖北科技学院药学院,湖北咸宁 437100;湖北科技学院糖尿病心脑血管病变湖北省重点实验室,湖北咸宁 437100;湖北科技学院糖尿病心脑血管病变湖北省重点实验室,湖北咸宁 437100;湖北科技学院糖尿病心脑血管病变湖北省重点实验室,湖北咸宁 437100【正文语种】中文【中图分类】RR-332;R322.11;R329.24;R329.25;R542.2;R977.6随着人口老年化、城市化进展加快、人们生活条件的改善，糖尿病(diabetes mellitus，DM)呈快速增长和低龄化的趋势，目前全球患病人数已达4.25亿，预计2045年可达6.29亿，我国糖尿病患者人数众多，给家庭和社会带来极大负担[1-2]。
姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响
姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响虞燕萍;周承亮;傅云峰;黄先玫【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】2013(33)2【摘要】目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。
方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。
结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。
与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。
结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。
【总页数】4页(P240-243)【关键词】姜黄素;心肌细胞;缺血再灌注;糖原合成酶激酶-3;酪氨酸磷酸化蛋白;丝氨酸磷酸化蛋白【作者】虞燕萍;周承亮;傅云峰;黄先玫【作者单位】杭州市第一人民医院儿科;浙江大学医学院附属妇产科医院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R331.31【相关文献】1.美托洛尔对心力衰竭大鼠心肌细胞磷酸化缝隙连接蛋白43表达及心肌细胞凋亡的影响 [J], 梁庆;李自成;邝素华;黄伟青;黄敏坚;林俊敏;梁子敬2.姜黄素对AD小鼠海马神经元凋亡和GSK-3β表达及磷酸化的影响 [J], 冀书娟;康康;李浩3.姜黄素对缺血-再灌注H9c2心肌细胞的保护作用及对热休克蛋白27表达的影响[J], 虞燕萍;马俊彦;傅云峰;黄先玫4.吗啡预处理对慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤及心肌磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响 [J], 吴运香;张野;姜凡;翁立军;胡宪文;李云;范礼斌5.姜黄素下调miR-21-5p减轻缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞凋亡 [J], 谢瑾;李红;罗浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
过表达C3G对高糖诱导H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响
过表达C3G对高糖诱导H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响张旭;陈旺盛;张梦娇;聂娇;陈秀【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2018(047)008【摘要】Objective To observe the effects of Crk-SH3 domain guanine exchange factor(C3G)overexpression on the pro-liferation and apoptosis of high glucose-induced H9C2 cardiomyocytes.Methods H9C2 cardiomyocytes were transiently transfected with pCXN2-Flag(empty plasmid)and pCXN2-Flag-hC3G(human C3G mRNA)plasmids,then conducted high glucose(HG)in-tervention.The experiment was divided into the blank group,empty vector group,C3G overexpression group,blank + HG group, empty vector + HG group and C3G overexpression+ HG group.The C3G protein expressions,apoptosis and proliferation rate were respectively detected in each H9C2 cardiomyocytes groups.Results The proliferation rate in the blank+ HG group and empty vec-tor+ HG group were significantly decreased compared with the blank group and empty vector group,while the apoptosis rate was significantlypared with blank group and empty vector group,blank + HG and empty vector + HG group,the C3G protein expression and proliferation rate in the C3G overexpression group and C3G overexpression+ HG group were increased sig-nificantly,while the apoptosis rate was decreased significantly.Conclusion High glucoseinhibits H9C2 myocardial cell proliferation and promots itsapoptosis;furthermore,C3G overexpression can reversed the decrease of high glucose-induced H9C2 cardiomyocyte prolifer-ation rate and apoptosis increase.C3G overexpression can promote the survivability of high glucose-induced H9C2 cardiomyocytes.%目的探讨过表达C3G对高糖诱导 H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响.方法分别用 pCXN2-Flag(空质粒)、pCXN2-Flag-hC3G(人过表达C3G mRNA)质粒通过瞬时转染 H9C2心肌细胞,并进行高糖干预.实验分为空白组、空载体组、过表达C3G组、空白+高糖组、空载体+高糖组、过表达C3G+高糖组,分别检测各组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达、增殖率及凋亡率.结果空白+高糖组、空载体+高糖组较空白组、空载体组细胞增殖率均明显降低,凋亡率均明显升高.过表达C3G组较空白组与空载体组,过表达C3G+高糖组较空白+高糖组与空载体+高糖组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达增加,增殖率升高,凋亡率明显降低.结论高糖抑制H9C2心肌细胞增殖、促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G可逆转高糖诱导H9C2心肌细胞增殖率的降低、凋亡率的升高.过表达C3G能促进高糖诱导H9C2心肌细胞的生存力.【总页数】3页(P1033-1035)【作者】张旭;陈旺盛;张梦娇;聂娇;陈秀【作者单位】西南医科大学附属医院老年病科,四川泸州646000;西南医科大学附属医院胃肠外科,四川泸州646000;西南医科大学附属医院老年病科,四川泸州646000;西南医科大学附属医院老年病科,四川泸州646000;西南医科大学附属医院老年病科,四川泸州646000【正文语种】中文【中图分类】R541.4【相关文献】1.Wnt/β-catenin信号在高糖诱导H9c2心肌细胞损伤与凋亡中的作用 [J], 王记;陆玉琴;赵信科;纪召娟;2.C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响 [J], 杨东艳;李刚;张蕾;张志升;扶艳波;胡苏蕾3.牛磺酸对高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制 [J], 张喆;朱宁;刘明琛;沈丽敏;马蓓洁;刘春颖;刘新霞;王恩军4.鸟苷酸交换因子C3G过表达对高糖诱导心肌细胞H9C2凋亡的影响及机制 [J], 张旭; 陈旺盛; 张梦娇; 蒋文捷; 梁雪梅5.骨膜蛋白对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用研究 [J], 孙晓慧;乌宇亮;杨莉;贺静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的研究
脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的研究刘斌;张强;张宇;张晋霞【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2007(036)004【摘要】目的:探讨脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的特点.方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,光镜下观察病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:①脑缺血2h再灌注1～6h皮质缺血区病理变化不明显,24～48h病理变化明显;②脑缺血2h再灌注1h皮质缺血区可见凋亡细胞,24～48h达高峰,72h开始下降.结论:脑缺血2h再灌注1～6h皮质缺血区脑细胞凋亡较轻, 24～48h明显加重,且与病理变化相对应.宜尽早采取有效的干预措施抑制细胞凋亡,减轻脑组织病理损害.【总页数】3页(P395-397)【作者】刘斌;张强;张宇;张晋霞【作者单位】华北煤炭医学院附属医院神经内科,唐山,063000;华北煤炭医学院附属医院神经内科,唐山,063000;华北煤炭医学院附属医院神经内科,唐山,063000;华北煤炭医学院附属医院神经内科,唐山,063000【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.脑缺血再灌注损伤后不同时间点施眼针对大鼠海马组织BDNF表达的影响 [J], 王德山;王哲;王守岩;马贤德;高原;赵金茹;关洪全2.针刺对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点血清 SOD和MDA表达的影响 [J], 王富明;张亚敏;孙华;徐虹;陈素辉;杨杨3.针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白表达的影响 [J], 颜虹;贺平;武姿含;蒋素容;田浩梅;陈楚淘4.亚低温对局灶性脑缺血再灌注后不同时间点Akt、NF-κB变化规律的影响 [J], 黄杰;赵瑞波5.小鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的变化研究 [J], 杨春辉;邵贵强;吴春荣;尹雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
缺血再灌注损伤致血管内膜增生的实验研究
缺血再灌注损伤致血管内膜增生的实验研究
胡佳乐;曹贵松
【期刊名称】《海军医学杂志》
【年(卷),期】2002(023)002
【摘要】目的:观察缺血再灌注损伤对家兔颈、股动脉内膜增生的影响,尝试建立一种动脉内膜增生的动物模型.方法:解剖家兔双侧颈、股动脉,阻断一侧动脉段约3 cm,使其缺血,45 min后恢复血流.以对侧动脉段作对照,2周后观察动脉横截面内膜及中膜变化.结果:阻断侧动脉内膜明显增生,对照侧内膜无明显变化,双侧中膜均无明显变化.结论:缺血再灌注损伤可以导致家兔颈、股动脉内膜增生,本实验方法尚可用作建立动脉内膜增生的动物模型.
【总页数】3页(P97-99)
【作者】胡佳乐;曹贵松
【作者单位】解放军第四一一医院普外科,上海,200081;第二军医大学长海医院,上海,200433
【正文语种】中文
【中图分类】R364.1
【相关文献】
1.下肢缺血再灌注损伤致鼠肺糖皮质激素受体变化的实验研究 [J], 胡佳乐;曹贵松
2.雌二醇洗脱支架抑制血管内膜增生的实验研究 [J], 梁明;韩雅玲;康建;闫承慧;邓杰;徐凯
3.经外膜缓释雷帕霉素抑制移植血管内膜增生的实验研究 [J], 毕铭霞;朱彬;王小平;李冀军
4.氯沙坦对球囊成形术后血管内膜增生影响的实验研究 [J], 苏东东;龚志刚
5.缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病的发病机理及药物干预的实验研究 [J], 辛宇鹏;袁光亚;卢一平;杨宇如;张秀辉;李幼平;高锐
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糖原合成酶激酶3β介导心房钠尿肽对H9c2心肌细胞线粒体保护作用的研究
糖原合成酶激酶3β介导心房钠尿肽对H9c2心肌细胞线粒体保护作用的研究洪兰;洪英姬;金红花【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2016(026)013【摘要】目的探讨心房钠尿肽(ANP)对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法采用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)荧光染料和激光共聚焦显微镜成像技术测定H9c2心肌细胞TMRE荧光强度的变化,即线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放程度.利用双氧水H2O2诱导H9c2心肌细胞线粒体mPTP的开放,预处理不同浓度的ANP后,观察ANP对mPTP开放的影响;同时利用Western blot检测H9c2心肌细胞的糖原合成酶激酶3β(GSK-3 β Ser9)磷酸化程度,即失活程度.利用激活型GSK-3 β质粒转染的H9c2心肌细胞(GSK-3 β-S9A-HA),来观察ANP对GSK-3β-S9A-HA的线粒体mPTP开放程度.结果与对照组(600μmol/L H2O2)比较,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显抑制H2O2对TMRE荧光强度的衰减效应(P＜0.05),其中1.00 nmol/L的ANP效应最强.Western blot检测结果显示,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显增强GSK-3β Ser9的磷酸化(P＜0.05),即抑制GSK-3β的活性利用GSK-3β-S9A-HA后发现,ANP(1.0 nmol/L)不能抑制mPTP开放(与H9c2比较P＜0.05).结论 ANP通过调节GSK-3β活性来抑制H9c2心肌细胞mPTP的开放,从而保护H9c2心肌细胞的缺血再灌注损伤.【总页数】5页(P7-11)【作者】洪兰;洪英姬;金红花【作者单位】延边大学医学院生理学与病理生理学教研部,吉林延吉 133002;延边大学医学院生理学与病理生理学教研部,吉林延吉 133002;延边大学附属医院药学部,吉林延吉 133000【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞中糖原合成酶激酶3β表达的研究 [J], 张娜;刘璐;窦玥莹;王真;宋丹青;李电东;邓洪斌2.糖原合成酶激酶3β介导细胞自噬在急性肝衰竭中的作用 [J], 张向颖;魏琳琳;时红波;郑素军;陈煜;陈德喜;李秀惠;段钟平;任锋3.糖原合成酶激酶-3与线粒体分裂蛋白在减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用中的关系 [J], 罗维昊;贺建东;韩冲芳4.氧化应激介导糖原合成酶激酶-3促进D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导的急性肝衰竭肝损伤 [J], 郭媛媛;任锋;张向颖;温韬;朴正福;郑素军;张晶;陈煜;陈德喜5.联合应用Rho-GTP激酶及糖原合成酶3β激酶对缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞保护作用机制研究 [J], 张琳;房晓祎;林霓阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
以HDAC为靶点的抗三阴性乳腺癌研究进展
以HDAC为靶点的抗三阴性乳腺癌研究进展
王发玲;谢珂;王艳林;曹春雨
【期刊名称】《基础医学与临床》
【年(卷),期】2018(38)11
【摘要】组蛋白去乙酰化酶(HDAC)异常高表达促进多种肿瘤的增殖、侵袭和转移,是新近鉴定的抗三阴性乳腺癌(TNBC)治疗靶点.近年来已研发多种HDAC抑制剂广泛用于抗肿瘤基础研究与临床治疗.本文综述了HDAC家族蛋白参与TNBC发生的分子机制和HDAC抑制剂用于抗TNBC治疗的研究进展,讨论了目前HDAC抑制剂的局限性、未来研发方向和以HDAC为靶点的抗TNBC研究新策略.
【总页数】5页(P1625-1629)
【作者】王发玲;谢珂;王艳林;曹春雨
【作者单位】三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室, 湖北宜昌443002;三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室, 湖北宜昌443002;三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室, 湖北宜昌443002;三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室, 湖北宜昌443002
【正文语种】中文
【中图分类】R736
【相关文献】
1.HDAC7与肿瘤血管生成及其抗血管靶点治疗的研究进展 [J], 李希;陶光实;
2.VEGF在三阴性乳腺癌中的表达以及作为治疗靶点的研究进展 [J], 王博;王敏;李俊海
3.三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌的超声鉴别诊断研究进展 [J], 粟尤欢(综述);徐金锋(审校)
4.三阴性乳腺癌的治疗靶点研究进展 [J], 赖万强(综述);曾健(审校)
5.中药抗三阴性乳腺癌及其分子作用机制研究进展 [J], 吴沁航;朱丽文;李铭轩;曹婧;潘扬
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标 记 山羊 抗 小 鼠 Ｉ ｇ Ｇ、 辣 根酶 标 记 山羊 抗 兔 Ｉ ｇ Ｇ（ 北
京 中杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司 ） ； Ｔ ａ ｑ酶 、 Ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ
Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ Ｒ Ｔ逆转 试剂 盒 、 Ｓ Ｙ Ｂ Ｒ — Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ Ｉ 酶 （日本 Ｔ ａ ｋ ａ — ｒ ａ 公司） ； ＨＤ Ａ Ｃ ３、 Ｂ — ａ ｃ ｔ ｉ ｎ引物 （ 上 海 生 工 生 物 工 程 股 份 有 限公 司 ） 。 １ ． ３ 方 法
乳 酸脱 氢 酶 （ １ ａ ｃ ｔ ａ ｔ ｅ ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ ａ ｓ ｅ ， Ｌ Ｄ Ｈ） 检 测 试 剂
心 肌 缺 血／ 再灌 注损伤 （ ｍ ｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ａ ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ， ＭＩ Ｒ Ｉ ） 是 心 肌 组 织 在 缺 血 一 定 时 盒、 Ｄ ＭＳ Ｏ、 噻唑 蓝 Ｍｒ ｒ ｒ （ 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍａ公 司 ） ； 辣 根 酶
自美 国 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ细胞库 。
关键 词
缺血再灌注损伤 ； 组蛋 白去 乙酰化ห้องสมุดไป่ตู้ ３ ； Ｈ ９ Ｃ ２细胞
Ｒ ５ ４ １
中图分类号
１ ． ２ 药 品与试 剂
Ｄ ＭＥ Ｍ 培 养 液 和 新 生 牛 血 清
文献标志码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ５— ０ ６ ７ ４—０ ４
究途 径 １ 材 料 与方 法
达 明显高 于正常对照 组 ， Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组显著 低 于 Ｉ ／ Ｒ组 。结
论 Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３表 达 上 调 可 能 在 Ｈ ９ Ｃ ２细 胞 缺 血 再 灌 注 损 伤 中 起 到 重要 作 用 。
１ ． １ 细胞
实验 细胞 ： Ｈ ９ Ｃ ２细胞 株 （ Ｓ Ｄ大 鼠 ） ，购
・
６ ７ ４。
安徽 医科 大 学 学报
Ａ ｃ ｔ ａ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ０ １ ７ Ｍａ ｙ ； ５ ２ （ ５ ）
网络 出版 时 间 ： ２ ０ １ ７—４—１ ０ １ ４： ４ ０ 网络 出版 地 址 ： ｈ ｔ ｔ ｐ： ／ ／ ｋ ｎ ｓ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｎ ｅ ｔ ／ ｋ ｃ ｍｓ ／ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ／ ３ ４． １ ０ ６ ５． Ｒ． ２ ０１ ７ ０ ４ １ ０ ． １ ４ ４ ０ ． ｏｌ １ ． ｈ ｔ ｍｌ
究 显示 组 蛋 白修 饰 及 Ｔ Ｓ Ａ干 预 调 节 参 与 多 种 器
官 如 肾脏 、 肺脏 及 心脏 组 织 纤 维 化 形成 。Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ｓ 是
一
果显示 ：与正常对照组 比较 ， Ｉ ／ Ｒ组 、 Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组抑 制率 均 显著提 高 ， 并且 Ｉ ／ Ｒ组显 著 高于 Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组 ； Ｉ ／ Ｒ组 Ｌ Ｄ Ｈ 活性 明显 高 于正 常对 照组 ， Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组 显著 低 于 Ｉ ／ Ｒ组 ；
Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 检测显示 ： Ｉ ／ Ｒ组 、 Ｉ ／ Ｒ 十Ｔ Ｓ Ａ 组 ＨＤ Ａ Ｃ ３的 表 达 明显 高 于 正 常对 照 组 ， Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组 显 著 低 于 Ｉ ／ Ｒ组 ； 实 时 荧 光定量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测 Ｉ ／ Ｒ组 、 Ｉ ／ Ｒ＋Ｔ Ｓ Ａ组 Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３的 ｍＲ Ｎ Ａ 表
Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３在 Ｈ ９ Ｃ ２细 胞 缺 血 再 灌 注 损 伤 中 的表 达 及 干 预 机 制
占红英 ， 陶 辉， 徐盛松 ， 曹 炜， 汪 裕琪 ， 施 鹏， 石 开 虎
摘要 目的 探 讨 组蛋 白去 乙 酰 化 酶 ３（ Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３ ） 在 大 鼠 Ｈ ９ Ｃ ２心肌细胞缺 血再 灌 注损 伤 中的表 达及 其 部分 机 制 研 究 。方法 将Ｈ ９ Ｃ ２细胞分 为以下 ３组 ： 正 常对 照组 、 缺血／ 再灌 注 （ Ｉ ／ Ｒ） 组、 Ｉ ／ Ｒ＋曲古 霉素 （ Ｔ Ｓ Ａ） 组 。ＭＴ Ｔ法检 测 细
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ ９ ４ ０ ５ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ｌ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ５ ． ０ １ １
（ 美国 Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ Ｂ Ｒ Ｌ公 司 ） ； 一抗 Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３（ 英国 Ａ ｂ ｃ ａ ｍ 公司） ；Ｂ — ａ ｃ ｔ ｉ ｎ（ 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限公 司 ） ；
胞增殖活力 ； 检 测 培 养 液 中乳 酸 脱 氢 酶 （ Ｌ Ｄ Ｈ） 水平； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法 测定 细 胞 内 Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３蛋 白 表 达 水 平 ； 实 时 荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测 Ｈ Ｄ Ａ Ｃ ３ ｍＲ Ｎ Ａ 表 达 情 况 。 结 果 ＭＴ Ｔ 法 检 测 结
类蛋 白酶 ， 对染 色 体 的 结 构 修 饰 和 基 因表 达 调 控
发 挥 重要 作 用 。该 研 究 通 过 ＨＤ Ａ Ｃ ３在 大 鼠 Ｈ ９ Ｃ ２ 心 肌 细胞 缺血 再灌 注 损伤 中 的表 达 分 析来 揭 示 ＭＩ — Ｒ Ｉ 发生 的分 子机 制 ， 为 临床 治 疗 提供 新 的思 路 和 研