阳和汤对小鼠肝癌HepA抑制作用及对荷艾氏腹水癌小鼠生存期的影响

阳和汤对小鼠肝癌HepA抑制作用及对荷艾氏腹水癌小鼠生存期的影响摘要】目的：观察阳和汤的抗肿瘤作用。

方法：选用小鼠肝癌HepA瘤株，移植于昆明种小鼠左后肢外侧皮下，随机分为阳和汤小、中、大剂量组、化疗组和模型对照组，末次给药次日处死动物，剥离瘤块，称重，计算抑瘤率。

选用小鼠艾氏腹水癌（EAC）瘤株，接种于昆明种小鼠腹腔，分组同前，给药9天，观察记录每组小鼠生存期，计算生命延长率。

结果：阳和汤小、中、大剂量对HepA的抑制率分别为2.72%、19.05%、34.69%，大剂量组瘤重与模型对照组瘤重比较差异有统计学意义（P<0.01）。

阳和汤小、中、大剂量组荷瘤小鼠的生命延长率分别为26.56%、48.44%、36.72%，中、大剂量组生存期与模型对照组生存期比较差异均有统计学意义（P<0.01），小剂量组生存期与模型对照组生存期比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。

结论：阳和汤大剂量对移植性HepA瘤株有一定抑制作用。

阳和汤三个剂量均能延长荷EAC小鼠生存期。

【关键词】阳和汤肿瘤温法阳和汤出自清王洪绪《外科证治全生集》，为中医治疗阴疽名方，也是温阳散结的代表方。

近年来，有报道阳和汤治疗恶性肿瘤取得了一定疗效[1-4]，且研究表明能明显诱导机体产生干扰素[6]。

研究表明，阳和汤中许多单味药都具有抗肿瘤作用[6-8]。

本实验观察了阳和汤对多种动物肿瘤的抗肿瘤作用，为临床应用阳和汤治疗恶性肿瘤提供进一步研究依据。

1 材料与方法1.1实验药物：阳和汤：清?王洪绪《外科证治全生集》所载，熟地30g（一两）、肉桂3g（一钱）、麻黄2g（五分）、鹿角胶9g（三钱）、白芥子6g（二钱）、姜炭2g（五分）、生甘草3g（一钱），按原处方比例称取药材，经水煎取汁醇沉，鹿角胶烊化，混合并浓缩而成，实验用药生药含量为1.5g/ml。

环磷酰胺（CTX）：江苏恒瑞医药股份有限公司生产；5-氟尿嘧啶（5-Fu）：江苏南通制药总厂生产。

1.2实验动物：昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18～22g，由湖南中医药大学实验动物中心提供。

1.3瘤株：小鼠HepA瘤株、小鼠艾氏腹水癌瘤株由中山医科大学肿瘤研究所提供。

1.4实验方法1.4.1阳和汤对小鼠肝癌HepA抑制作用取荷瘤7天生长良好的昆明种小白鼠，无菌条件下抽取HepA瘤液，以生理盐水1:2稀释，取0.2ml（约含瘤细胞1×106）瘤液，无菌操作，注射于小鼠×后肢外侧皮下，接种次日称重，随机分为五组：阳和汤小、中、大剂量组，5-Fu组，模型对照组，每组10只动物，雌雄各半。

阳和汤组药量按14.3/kg、28.6g/kg、42.9g/kg，模型对照组按20ml/kg给予等体积蒸馏水。

当日灌胃给药，每日一次，连续10日，5-Fu组给予5-Fu 20mg/kg，皮下注射，次日给药，隔日一次，共5次，末次给药的次日处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。

肿瘤抑制率公式为：（模型对照组瘤重-给药组瘤重）/ 模型对照组瘤重×100%。

1.4.2阳和汤对荷艾氏腹水癌小鼠生存期的影响取荷瘤7天生长良好的昆明种小白鼠，无菌条件下抽取癌性腹水，加生理盐水，按1:3稀释，昆明种小鼠50只，每只腹腔接种瘤液0.3ml，接种次日称重随机分为五组：阳和汤小、中、大剂量组，CTX组，模型对照组，每组10只动物，雌雄各半。

另取10只小鼠作为空白对照，同日接种等量生理盐水。

阳和汤药量按14.3g/kg、28.6g/kg、42.9g/kg，模型对照组、空白对照组按20ml/kg给予等体积蒸馏水。

当日灌胃给药，每日一次，连续9天，CTX组腹腔注射CTX 75mg/kg，从接种瘤株后第3天开始，隔日1次，共4次。

每日观察并记录小鼠死亡情况，至21天止，超过21天按21天计算。

计算各组小鼠平均生存天数及生命延长率。

生命延长率计算公式为：生命延长率=（观察组平均生长天数/模型对照组平均生长天数-1）×100%。

1.5统计方法：测得指标均用均数±标准差(x-±s)表示，采用SPSS软件包进行统计分析，多组比较采用F检验方差分析，两两比较用q检验，多组与一组比较采用Dunnett-T检验。

2 实验结果2.1阳和汤对小鼠肝癌HepA抑制作用阳和汤小、中、大剂量组瘤重均低于模型对照组。

其中，大剂量组瘤重与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01），中、小剂量组瘤重与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

阳和汤小、中、大剂量抑瘤率分别为2.72%、19.05%、34.69%，5-Fu 抑瘤率为42.18%。

提示阳和汤大剂量对移植性小鼠肝癌HepA有一定抑制作用，抑制率为34.69%，但其抑制作用不如5-Fu，中剂量作用不明显，而小剂量则无抑瘤作用，呈剂量-效应关系。

见表1。

表1 阳和汤对小鼠肝癌HepA的抑制作用 (x-±s,n=10)注：F=4.402，P<0.01。

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2阳和汤对荷艾氏腹水癌小鼠生存期的影响阳和汤小、中、大剂量组生存期明显延长，其中中剂量组生存期最长，中、大剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01），小剂量组与模型对照组比较，差异亦有统计学意义（P<0.05），而CTX组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

提示阳和汤能显著延长荷艾氏腹水癌小鼠的生存期，以中剂量作用最强，大剂量次之，小剂量作用较弱。

见表2。

表2 阳和汤对荷艾氏腹水癌小鼠生存期的影响 (x-±s,n=10)注：F=5.178，P<0.01。

与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

本实验通过对给药后荷瘤小鼠瘤块称重，计算抑瘤率，以及记录荷瘤小鼠生存时间，计算生命延长率，观察了阳和汤的抗肿瘤作用。

结果表明阳和汤大剂量对移植性小鼠HepA均有抑制作用，阳和汤小、中、大剂量均能显著延长荷瘤小鼠生存时间。

3 讨论我们也对阳和汤抗肿瘤作用作了前期观察，研究发现阳和汤对小鼠肉瘤S180（A）有明显抑制作用，并能明显诱导小鼠脾细胞产生干扰素[5]。

我们还采用扭体法和热板法观察了阳和汤的镇痛效果，采用小鼠二甲苯致炎法观察了阳和汤的抗炎效果。

结果显示阳和汤中、大剂量均能抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，表明该药有较好的镇痛效果，热板法结果显示阳和汤大、中剂量组在给药30min后，小剂量组在60min时出现明显镇痛作用，持续60min以上，有随剂量增大而痛觉反应时间延长的趋势。

致炎结果显示阳和汤小、中、大剂量对二甲苯所致鼠耳肿胀均有明显抑制作用[9]。

当前肿瘤中医药治疗中，一些医家认为肿瘤就是“热毒”，认为温热药物会促进肿瘤生长，常常使用大堆清热解毒药，而长期使用苦寒药反伤阳气，损伤胃气，使病情加重。

事实上，中医理论认为肿瘤的形成与阳气不足，寒凝淤滞有关，《素问?生气通天论》云：“阳气者，若天与日，失其所则折寿而不彰”，《素问?调经论》云：“血气者，喜温而恶寒，寒则泣而不能流，温则消而去之”，如《素问?百病始生篇》云：“积之始生，得寒乃生，厥乃成积矣。

”《灵枢?水胀篇》云：“寒气客于肠外，与卫气相搏，气不得营，因有所余，癖而内著，恶气乃生，息肉乃生。

”孙秉严通过对1000个各肿瘤患者进行总结分析得出，不论长江以北还是长江以南，也不论是沿海还是内地，寒型和偏寒证候最多，约占80%，他还发现体质属寒的人得肿瘤者居多[10]。

既然寒邪是肿瘤发生的病理因素之一，温法也应是肿瘤治疗的重要治法之一。

恶性肿瘤的疗效评定主要有两方面：一是瘤体变化，二是生存率。

为此，本实验从动物实体瘤客观疗效与延长荷瘤动物生存期疗效角度进行设计。

实验证明，阳和汤大剂量组对移植性HepA体内抑制作用明显，抑瘤率为34.69%，但其抑瘤作用均不及5-FU，中剂量抑瘤作用不明显，小剂量则未表现出抑瘤作用。

提示本药抑瘤作用有限，阳和汤小、中、大剂量组抑瘤率依次增加，呈剂量-效应关系，但仅大剂量表现出了明显的抑瘤作用，说明大剂量是抑瘤作用的有效剂量，但是否是最佳剂量将在今后的研究中进一步证实。

实验证明，阳和汤小、中、大三个剂量组均能显著延长荷艾氏腹水癌小鼠的生存时间，生命延长率分别为26.56%、48.44%、36.72%，其中中剂量作用最明显，可能与扶正与抗邪达到某种平衡有关。

而CTX并没表现出明显延长荷EAC小鼠生存时间的作用。

就本实验结果来看，化疗组抑瘤率均较阳和汤大剂量组高，但对荷瘤动物生存时间并无明显改善。

这也是中晚期化疗常遇到的问题。

因此，在中晚期恶性肿瘤治疗中，既能一定程度抑制或稳定瘤块，又有可能延长生存期的中药受到亲睐。

阳和汤对多种移植性动物肿瘤有一定抑制作用，还能显著延长荷瘤动物生存期，体现出一定的优势。

参考文献[1]郑翠娥，王晓红.阳和汤加减治疗骨肿瘤[J]山东中医杂志，1998，17（2）：62[2]黄立中，蒋益兰,曾松林,等.阳和汤加味治疗骨转移癌疼痛63例[J][3]程广里，王志文.阳和汤临床应用举隅[J]时珍国医国药，2000，11（6）：553[4]陆玉华.阳和汤的临床运用[J]山东中医，2001，22（5）：35[5]黄立中，肖雅，王大安，等.阳和汤对移植S180A小鼠抑瘤及体内诱生干扰素作用的实验研究[J]中国中医药信息杂志，2003，10（5）：22-23[6]季宇彬.抗癌中药药理与应用[M]黑龙江科技出版社，1999.2[7]陈富军，白克杰，方玉先，等.略述鹿角胶的临床应用及现代研究[J]光明中医，2002，17（5）：50-51[8]肖庆慈，秦兴卫.肉桂赤石脂配伍的研究[J]云南中医学院学报，1996，19（4）：1[9]黄立中，徐琳本，张晓明，等.阳和汤镇痛抗炎作用的实验研究[J]湖南中医杂志，2002，18（5）：49[10]孙秉严，孙丽嬴.孙秉严治癌40例经验集[M]北京：华龄出版社，1997.11。