医学生毕业答辩幻灯片样板

图13. ING4基因在消化道肿瘤患者外周血单个盒细胞中的表达
注：a、b、c为癌组织阳性的胃癌患者，d、e、f为 癌组织阳性的结肠癌患者，g、h为癌组织阳性的直肠 癌患者，M为 DNA marker (DL2000)。 图14. nested RT-PCR检测消化道肿瘤患者外周血单个核细胞中FP 248的表达
表6.手术前后外周血单个核细胞中FP 248 mRNA阳性率
与健康对照组相比， P﹤0.05，χ2检验
与手术一周后为阴性的 表7. 外周血单个核细胞中FP 248 mRNA阳性率与预后的关系 患者相比，P﹤0.05，χ2 检验
七.结论
ING4基因表达下调和FP248基因与胃癌等消化道肿瘤和白血病的发生 发展可能存在相关性，检测这两个基因的表达有助于消化道肿瘤的诊 断和预后。 采用nested RT-PCR检测外周血单个核细胞中FP248基因是筛选消化道 肿瘤的好方法。
e：食道癌； 1表示癌旁组织，2表示癌组织。 D.免疫组化技术检测 ING 4在胃癌组织中的表 达

表4.消化道肿瘤分期※及组织分化程度
※分期方法：Robson
分期法
高分化 中分化 中低分化 低分化 未复发 复发
注：A.胃癌结肠癌直肠癌中各分期中ING 4 基因表达
未见显著性差异(P<0.05)。 B和C. ING4表达水
标，也为这些疾病的基因治疗提供了两个靶基因。
三 方法建立
1.成功建立了采用real-time RT-PCR检测ING 4和FP 248基因表达的方法
注： A ：FP 248 标准品扩增曲线； 注： A： GAPDH 标准品扩增产物融解曲线； B：FP 248 标准品扩增产物融解曲线 B：GAPDH 标准品扩增曲线； C：GAPDH C：FP 标准曲线。 248标准曲线. 2. FP 248 标准品 图3. 图 GAPDH 标准品 注:A：ING 4 标准品扩增曲线；B：ING 4标准品扩增产物融解曲线，C：ING 4标准曲线 . 图1. ING 4 标准品
基因表达水平与患者预后的关系
分化程度越低，FP 248 mRNA表达水平越高(P<0.05)。D. FP 248
2年内复发的患者FP 248基因表达水平显著于未复发者(P<0.05)。
图12.消化道肿瘤组织中FP 248 基因表达水平与消化道肿瘤分期、组织分化程度以及患者预后的关系
注：A. RT-PCR。B. nested RT-PCR。blank：空白对照。a、b和c：胃癌; d和e：结肠癌；f和g：直肠癌；h： marker，DL2000；i：健康体检。1为手术前，2为手术后。
III
注. I.部分消化道组织中FP248基因扩增曲线 II..real-time定量PCR结果 a. 胃癌 ，b. 结肠癌，c. 直肠 癌 。1：癌旁组织； 2：癌组织；3：癌旁淋巴结；III.RTPCR结果 1：结肠癌；2：直肠癌； 3～8：胃癌；9：食道癌；N：癌旁组织；C：癌组织；L：淋巴结转移灶；B：blank；S：标准 品； M：DNA marker (100bps DNA Ladder)。 图11. real-time定量PCR检测FP 248 在 消化道肿瘤中的表达
平与组织分化程度的关系
患者预后的关系
组织分化水平越低，ING 4表达越低（ P<0.05) . D. ING 4表达水平与
2年内复发或转移的患者表达水平显著低于未 复发的患者（ P<0.05) 。
图10. 消化道肿瘤组织中ING 4基因表达水平与消化道肿瘤分期、组织分化程度以及患者预后的关系
I
II
部分图谱
I
II
P<0.05
表2.白血病标本中FP 248 mRNA阳性率
III
注：I.部分白血病标本及对照组标本中FP 248定量扩增曲线. II. real-time RT- PCR测定结果
1：缺铁性贫血和健 康人骨髓；
2：CML患者骨髓；3.两例女性CML患者急性变后骨髓；4：两例女性CML患者急性变骨髓，HA 和DAT化 疗2周后； 5：ALL患者骨髓； 6： M2患者骨髓；7：M3患者骨髓；8：5例M2外周血；9：健康体检者外周血。 III.RT-PCR测定结果 A.白血病患者骨髓和外周血中FP 248 mRNA 表达 1：健康体检者外周血；2：M2外周血； 3：CML患者骨髓；4：CML急性变患者骨髓；5：ALL患者骨髓；6：M2患者骨髓；7：M3患者骨髓；8-12： 缺铁性贫血患者骨髓；13：blank；M：DNA marker（DL2000）。 B. ALL患者外周血中FP 248 mRNA表达 1：健康体检 者外周血；2～4：ALL患者外周血；M：DNA marker（DL2000）。C. ALL患者骨髓中FP 248 mRNA表达 1:blank； 2：ALL骨髓；3：缺铁性贫血患者骨髓；M：DNA marker（DL2000）。 图8. 白血病骨髓或外周血中FP 248 mRNA的表达
消化道肿瘤 白血病
肺癌
ING 4
神经胶质瘤
头颈部鳞状细胞癌
2.原癌基因FP 248
8q24.3，FP248， 3个外显子
FP 248蛋白质， 208aa
8
与肝癌有关
其他肿瘤 ？？？
二 研究内容和研究意义
1.研究目的
建立检测ING 4和FP 248基因的real time RT-PCR和nested RT-PCR方法， 并分析ING 4和FP 248基因对白血病和消化道肿瘤的诊断意义。
肺癌细胞株
乳腺癌细胞株
神经母细胞瘤细胞株
ING 4 变异
结直肠癌细胞株
白血病？
ING4-V1:30%－35% ING4-V2:42%－50%
健康人心、脑、肝、肺、肾组织 成人及胎儿心、脑、肝、肺、肾 肿瘤组织
本研究检测白血病患者骨髓 中主要剪接方式
白血病？？？ 消化道肿瘤？？？
(3) ING 4 在多种肿瘤组织中表达下调
2 3
108copies/μl.
图4. FP248 在肿瘤细胞中的表达
A
B
C
注： A.real-time RT-PCR 扩增曲线。B. real-time RT-PCR 检测FP248 mRNA
实验重复3次。 1：
U937；2：SGC； 3：hBM-MSC；4：PLA801-95D；5：A549。C. RT-PCR检测 FP 248 mRNA
3. 徐 静，许文荣，钱 晖，朱 伟，李继刚，周洪兴, 周忠海，阴
表5. 癌组织和淋巴结组织中FP 248 mRNA阳性率

表4.消化道肿瘤分期及组织分化程度
※分期方法：Robson
分期法
高分化 中分化 中低分化 低分化 未复发 复发
注：A.胃癌、结肠癌和直肠癌中FP 248表达与病理分期之间的关系
未见显著性差异(P<0.05). B和C：FP 248
mRNA表达水平与组织分化程度的关系
表1.real-time RT-PCR关键参数
2.成功建立了采用Western 印迹技术检测ING 4蛋白质表达的方法； 3.成功建立了采用免疫组织化学技术检测组织中ING 4蛋白质表达的 方法。
四、肿瘤细胞株中ING4 和FP 248基因 表达检测
1.实验设计
肿瘤细胞
抽提总RNA
检测ING 4 mRNA 检测FP248 mRNA
b：blank；1： U937；2：SGC；3：hBM-MSC；4：PLA801-95D；5：A549；6：PC3；7： SW480；M：DNA marker (100bps DNA Ladder)。 图5. FP248 在肿瘤细胞中的表达
五、 ING 4和FP 248基因检测在白血 病中的表达及临床意义
致谢
特别感谢许文荣教授的悉心指导！
衷心感谢钱晖老师和朱伟老师的关心和帮助！ 感谢各位专家的百忙之中指导本人答辩！
感谢我的同学和师弟师妹们的帮助和支持！
发表文章
1. 李继刚， 许文荣， 钱 晖，朱 伟 ，王 胜，步雪峰，张 蕾
蕾，徐 静， 司煜安，陈 忠，周忠海，周洪兴，施晓凤. fp 248 mRNA在白血病和肿瘤中的诊断意义. 临床检验杂志，
注：I.部分骨髓及外周血标本中ING4基因扩增曲线
2：缺铁性贫血患者骨髓；3：免疫性血小板减少患者骨髓；4：ALL患者骨髓；5：CLL患者骨髓； 6：CML患者骨髓；7：CML急性变患者骨髓；8：M2骨髓；9： MDS骨髓。III：白血患者外 周血ING 4 1：健康对照；2：M2； 3：AML；4：CML；5：ALL。IV： Western 印迹检测结果 A1：缺铁性贫血； A2：AML；B1：缺铁性贫血；B2：CML；C1：缺铁性贫血；C2：ALL。 图6. ING 4基因在白血病患者骨髓及外周血中的表达水平
3. 研究内容
建立采用RT-PCR和real-time RT-PCR检 测ING 4和FP 248 mRNA表达的方法
研究ING 4 和FP 248在多种肿 瘤细胞株中的表达水平
ING 4 和FP 248基因在消化道 肿瘤中的临床意义
ING 4和FP 248基因在 白血病中的临床意义
3.研究意义
为白血病和消化道肿瘤的诊断和预后提供新的更为便捷的方 法和指
2.研究结果
AB
C
注： A.细胞株中ING 4基因及部分标准品扩增曲线 标准品浓度：10 copies/μl和10 copies/μl及 B.C. real-time RT-PCR测定结果 1： SW480 ； 2 ： SGC 3hBM-MSC. ：U937；4：hBM-MSC. RT-PCR测定结果 1：SW480； 2： SGC； 3： U937 ；； 4：
外周血
检测ING4 mRNA