细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤

细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤
细胞爬片：
1.埋板准备：准备含有合适培养基的细胞培养板或培养皿。

将培养基
预热至适宜的温度。

2.细胞处理：将需要爬片的细胞株从库存中取出，用PBS（磷酸盐缓
冲液）或无酶胰蛋白酶溶解细胞外基质粘附，用培养基洗涤细胞。

3.细胞计数：用血细胞计数板或细胞计数仪计数细胞浓度，然后根据
需要调整到合适的细胞密度。

4.接种细胞：将适量的细胞接种到埋板中，根据实验要求可以采用单
细胞克隆或稀释传代法。

5.培养细胞：将埋板放入细胞培养箱的适当环境中，通常为37°C、5%CO2的培养箱。

根据实验需要，培养时间可以从几小时到几天不等。

固定：
1.筛选固定剂：选择适合的固定剂，常用的固定剂包括乙醛和甲醛等。

2.固定细胞：使用适当的浓度的固定剂，将培养的细胞浸泡在固定剂中，通常需要15-30分钟的固定时间。

3.洗涤细胞：使用PBS等缓冲溶液洗涤固定的细胞，去除多余的固定剂。

免疫荧光：
1.孔板准备：将需要进行免疫荧光染色的细胞或组织培养在培养皿或
孔板中。

2.阻断非特异性结合：用0.1-5%BSA或牛血清等蛋白质溶液阻断非特异性结合位点，减少假阳性信号。

3.一抗染色：加入适当浓度的一抗（具体浓度由厂家确定）到需要染色的细胞上，对于细胞表面的抗原，可以直接在细胞外孔板中加入一抗。

4.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤一抗残余的溶液。

5.二抗染色：加入与一抗同种小鼠或兔子抗体的特异性抗体（如荧光素、奥林染色试剂等）到孔板中，适当的浓度需根据实验所需，与一抗使用的缓冲液一致。

6.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤二抗残余的溶液。

7.成图：用荧光显微镜观察样品，利用相应的激发波长和荧光滤镜观察和拍摄免疫染色的图像。

细胞爬片、固定和免疫荧光技术的步骤可以根据具体实验的要求进行调整和优化。

这些操作步骤在细胞和分子生物学研究中非常重要，可以用于检测和观察各种细胞结构和分子的表达和分布。

整个过程需要细心和耐心，并且需要严格控制各个步骤的条件以确保实验结果的准确性和可重复性。