龙胆泻肝丸中龙胆苦苷含量测定提取与含量测定

**********毕业设计（论文）龙胆泻肝丸中龙胆苦苷含量测定提取与含量测定学生姓名指导教师专业学院201年05 月10 日Graduation Project (Thesis)***Extraction and Determination of Total Saponins and polysaccharides from Syringa LeavesStudentSupervisorSpecialtySchool2010 -05-10毕业设计（论文）审阅评语一、指导教师评语：指导教师签字：年月日毕业设计（论文）审阅评语二、评阅人评语：评阅人签字：年月日毕业设计（论文）答辩评语三、答辩委员会评语：四、毕业设计（论文）成绩：专业答辩组负责人签字：年月日五、答辩委员会主任单位：（签章）答辩委员会主任职称：答辩委员会主任签字：年月日摘要目的：规范龙胆苦苷质量标准，建立较为准确的龙胆苦苷HPLC含量测定方法。

方法：采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mmX150mm，5μm) ,以甲醇:水( V ∶V =20∶80) 为流动相,流速为0.8 mL·min - 1 ,紫外检测波长为273 nm ,柱温为室温。

结果：龙胆苦苷在0.978μg~4.890μg间质量浓度内线性关系良好( R2= 0.998) ,方法回收率为99.11 % ,RSD 为1.4 %( n = 10) 。

结论：该方法可用于龙胆泻肝丸中龙胆苦苷的含量测定关键词：龙胆泻肝丸；龙胆苦苷；高效液相色谱法；含量测定AbstractTo standardize the quality of Longdan Xiegan Pill,this article established an accurate measurement method for Gentiopicrin.Methods Diamonsil C18 column (4.6 mm ×150mm, 5 μ m), methanol: water (V: V = 20:80) at a flow rate of 0.8 mL·min-1, UV detection at 273 nm, column Wen to room temperature.Results gentiopicroside glycosid es in 0.978μg~4.890μg concentration good linearity (R2 = 0.998), recovery was 99.11%, RSD for 1.4% (n=10). 10 approved in gentian gentiopicroside by HPLC larger difference.Conclusion The method can be used for quality control, and in different areas gentian gentiopicroside by HPLC to provide a basis for comparison.Key words Longdan Xiegan Pill;Gentiopieroside;High efficiency liquid chromatography；Content determination目录摘要 (I)Abstract .................................................................................................................................. I I 1 绪论 (1)1.1 龙胆的研究 (1)1.1.1 龙胆的形态特征 (1)1.1.2 龙胆药用研究概况 (1)1.1.3 龙胆的化学成分与活性 (2)1.1.4 龙胆的传统应用 (4)1.1.5 龙胆的临床应用 (4)1.2 龙胆泻肝丸的应用与研究 (5)1.3 龙胆苦苷的研究与应用 (7)1.3.1 龙胆苦苷的研究 (7)1.3.2 龙胆苦苷的应用 (8)1.3.3 研究的目的意义 (10)2 实验部分 (12)2.1实验仪器 (12)2.2色谱条件 (12)2.3流动相条件选择 (12)2.4检测波长选择 (12)2.5对照品溶液的制备 (13)2.6供试品溶液的制备 (13)2.7 HPLC法测定龙胆苦苷含量 (13)2.7.1线性关系考察 (13)2.7.2 仪器精密度实验 (13)2.7.3方法重复性实验 (13)2.7.4 稳定性试验 (13)2.7.5 加样回收率实验 (13)2.7.6 样品含量测定 (14)3 结果 (15)4 讨论 (16)参考文献 (17)致谢 (19)附录 (20)1 绪论1.1龙胆的研究1.1.1龙胆的形态特征1.龙胆多年生草本，高30-60cm。

根茎短，其上丛生多数细长的根，长可达30cm。

花茎单生，不分枝。

叶对生；无柄；下部叶成鳞片状，基部合生，长5-10mm，中部和上部叶近革质，叶片卵形或卵状披针形，长2.5-7cm，宽0.7-3cm，先端急尖或长渐尖，基部心形或圆形，表面暗绿色，下面色淡，边缘外卷，粗糙；叶脉3-5条。

花多数，簇生枝顶和叶腋，无花梗；每花下具2个披针形或线状披针形苞片，长2-2.5cm；花萼钟形，长2.5-3cm，先端5裂，常外反或开展，不整齐；花冠筒状钟形，蓝紫色，长4-5.5cm，有时喉部具多数黄绿色斑点，花冠先端5裂，裂片卵形，褶三角形；雄蕊5，着生于花筒中部，花丝基部宽；子房狭椭圆形或披外形，长1-1.4cm，子房柄长约1cm，花柱短，柱头2裂。

蒴果内藏，长圆形，有柄。

种子多数，褐色，有光泽，具网纹，两端具宽翅。

花期8-9月，果期9-10月。

2.条叶龙胆本种与龙胆不同点在于：叶厚，近革质，无柄，上部叶线状披针形至线形，基部钝，边缘微外卷。

花1-2朵；花萼裂片线状披针形，长于或等长于萼筒；花冠裂片先端渐尖。

3.三花龙胆本种与上2种不同点在于：中上部叶近革质，线状披针形至线形，基部圆形。

花3朵，稀5朵；花萼裂片狭三角形，短于萼筒；花冠裂片先端钝圆。

4.滇龙胆（坚龙胆）与前3种不同点在干：无莲座叶丛，茎生叶多对，二型，下部叶2-4对，鳞片状，中上部叶片卵状长圆形、倒卵形或卵形，基部楔形，边缘略外卷。

花多数，簇生枝顶呈头状，稀腋生，被包围于最上部苞叶状的叶丛中；萼裂片不整齐，2枚大，倒卵状长圆形，基部狭缩成爪；雄蕊着生于冠筒下部。

种子黄褐色。

龙胆花最高不过四、五十厘米，大部份是矮小贴地丛生。

一株上有许多分枝，花生于枝上顶端，成古钟形或漏斗形，有4～5个裂瓣，全缘的，也有细裂的成流海似的须。

花的颜色大部份是青绿色、蓝色或淡青色，一般多为秋冬季开。

龙胆花在秋冬季一片枯黄的草丛中临风开放，显得分外朴实和幽静，龙胆开花一片片一簇簇，临风摇曳，显出一种淡雅、素静的美，因而成为著名的花卉。

丽江一种深蓝色的龙胆被引种到英国皇家植物园时，轰动一时，被誉为19世纪引种最有价值的观赏植物之一。

1.1.2龙胆药用研究概况中药龙胆为龙胆科植物条叶龙胆、龙胆、三花龙胆或坚龙胆的干燥根及根茎。

化学研究表明，龙胆属化学成分主要包括裂环环烯醚菇和环烯醚菇类、黄酮类、三菇类、生物碱、挥发油等成分。

龙胆属清热燥湿热，具有清湿热、泻肝火等功效，主治高血压、头晕、耳鸣、小儿高热抽搐、乙型脑炎、目赤肿痛、胸肋痛、胆囊炎、湿热黄疽、急性传染性肝炎、尿路感染、阴部痰痒、小便淋痛、胃炎等症。

现代药理研究表明，龙胆具有保肝、利胆、健胃、降压、抗炎、抗过敏、抗病原体、增强免疫功能等多种药理活性，广泛地应用于临床[1]。

1.龙胆根含裂环烯醚萜苷类苦味成分：龙胆苦甙（gentiopicroside），当药苦甙（swertiamarin），当药甙（sweroside），苦龙胆酯甙（amarogentin），痕量苦当药酯甙（amaroswerin）；苦甙总含量可高达7.33％，而龙胆苦甙含量可达6.34％。

生物碱：龙胆碱即秦艽碱甲（gentianine0.05％，龙胆黄碱（gentioflavine）。

2.条叶龙胆根含裂环烯醚萜甙类苦味成分：龙胆苦甙，当药苦甙，当药甙，苦龙胆酯甙，痕量苦当药酯甙；苦甙总含量可达4.35％，而龙胆苦甙含量为4.15％。

3.三花龙胆根含裂环烯酸萜类成分：龙胆苦甙，当药苦甙，当药甙，痕量苦当药酯甙；苦甙总含量为 3.95％，而龙胆苦甙含量为 3.66％。

还含三花龙胆甙（TCMLIBifloroside）。

4.滇龙胆根含裂环烯醚萜甙类苦味成分：龙服苦甙，当药苦甙，当药甙，痕量苦龙胆酯甙，痕量苦当药酯甙；苦甙总含量5.10％，龙胆苦甙含量5.01％。

地上部分含龙胆碱，秦艽碱乙（gentianidine），秦艽碱丙（gentianal），β-谷甾醇（β-sitosterol)。

1.1.3龙胆的化学成分与活性迄今为止,国内外学者已从龙胆中分离得到多种裂环烯醚萜苷类成分；生物碱类成分,如龙胆黄碱和龙胆碱。

其中,苦苷类有龙胆苦苷、当药苦苷、当药苷；酯苷类有苦龙胆酯苷、苦当药酯苷、三花苷、粗糙苷、苦潘宁；苷元有当药苷元等,为水解处理产物[2]。

酯苷类具更强的苦味活性,但未见从国产龙胆中分离到[3]。

龙胆苦苷则在龙胆属植物中广泛分布。

当药苷与当药苦苷含量较少、分布较窄。

龙胆、三花龙胆、条叶龙胆及坚龙胆中均含有龙胆苦苷、獐芽菜苦苷及獐芽菜苷等裂环烯醚萜苷类化合物。

龙胆中主要的化学成分是裂环烯醚萜苷类化合物。

杨绍云[4]等从粗糙龙胆、坚龙胆和头花龙胆中分离得到龙胆苦苷,从佳木斯产的粗糙龙胆中还分离得到獐牙菜苷;罗集鹏[5]等应用聚酰胺色谱法满意地分离三种苦苷成分(龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷),并应用此法从东北龙胆地下部分分离得到龙胆苦苷和獐牙菜苦苷,从粗糙龙胆的地下部分得到龙胆苦苷、獐牙菜苷和獐牙菜苦苷,獐牙菜苦苷为首次从国产龙胆中分离得到;张建生[6]等建立了应用高效液相色谱法对龙胆生药中苦苷类成分同时进行定量分析的方法。

由于龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷均为结构相似的水溶性苦苷,而且性质不稳定,遇热易破坏,所以它们的分离比较困难[7]。

前人应用硅胶薄层色谱法和硅胶柱色谱法均未能将獐牙菜苷与龙胆苦苷分离。

近年,有人应用高效液相色谱和硅烷化硅胶预制薄板分析了百金花属和当药属植物中的上述3种成分,但未见用于制备分离。

井上博之等曾采用将苦苷的混合物制备成乙酰化物的方法,从日本三花龙胆中分离得到龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的四乙酰化物。

迄今,对于上述苦苷类成分的提取、分离,国内外工作者多采用井上氏的方法[5]。