一种nk细胞的制备方法

一种nk细胞的制备方法
NK细胞是一类特殊的免疫细胞，能够判别体内异常细胞并进行杀伤，对于肿瘤治疗、移植免疫和自身免疫疾病治疗等领域具有广泛的应用前景。

然而，NK细胞来源较为有限，制备方法也比较复杂。

本文将介绍一种简单易行的NK细胞制备方法，供读者参考。

1. 材料和试剂
1.1. 白细胞分离管（Vacutainer® CPT™ Cell Preparation Tube，BD公司）
1.2. PBS（phosphate-buffered saline）缓冲液
1.3. Lympholyte®-H细胞密度梯度离心液
1.4. 重组人IL-2（recombinant human IL-2，PeproTech）
1.5. NK细胞培养基（NK Cell Culture Medium）：RPMI-1640培养基，添加10% FBS （fetal bovine serum，Gibco），10 ng/mL IL-2，50 μM 2-mercaptoethanol
1.7. 5% CO2培养箱
1.8. 细胞计数板或自动化细胞计数仪
1.9. 细胞培养器、离心管和显微镜
2. 制备NK细胞
2.1. 采集外周血
使用白细胞分离管采集10-20 mL外周血，在采集前确保受试者是在空腹状态下的。

将管子按照说明书进行操作，离心10-20分钟（1,800 × g，20°C），取出白细胞分离
管上层细胞悬液。

2.2. 分离淋巴细胞
将上层细胞悬液转移到离心管中，用PBS洗涤细胞（1,200 × g，10分钟，室温），用Lympholyte®-H细胞密度梯度离心液隔离淋巴细胞（1,000 × g，25分钟，室温）。

以PBS洗涤淋巴细胞，将细胞计数至1 × 106/mL。

将淋巴细胞使用STEMCELL Technologies提供的阴性选择NK细胞试剂盒进行负选择，去除CD3+、CD19+、CD14+等非NK细胞。

使用磁珠离心柱进行操作，按照说明书进行操作。

将选后细胞重悬于NK细胞培养基中，继续培养。

将选后NK细胞重悬于NK细胞培养基中，细胞浓度为1 × 106/mL，含5% CO2，在37°C培养箱内培养，第二天进行细胞计数。

将培养基更换为含IL-2的新培养基，浓度为10 ng/mL，继续培养。

每3天更换一次培养基，每次加入10 ng/mL IL-2，进行培养。

培养7-10天后，NK 细胞的数量可扩增10-20倍。

经过扩增后，检测细胞表面的CD56和CD16等NK细胞标志物，确保细胞为NK细胞。

3. 讨论
本文介绍了一种简单易行的NK细胞制备方法。

该方法使用商业化的试剂盒进行NK细胞的分离，无需繁琐的操作，不仅具有高质量的细胞产量，而且还能够获得纯净的NK细胞。

在培养期间，IL-2的加入可以有效地促进NK细胞的生长和扩增，进一步提高细胞产量和质量。

此外，在NK细胞的扩增过程中还要注意对培养基的更换和细胞培养条件的控制，以确保NK细胞的正常生长和扩张。

总之，本文所提供的NK细胞制备方法可为肿瘤治疗、移植免疫和自身免疫疾病的治疗提供一种便捷的细胞来源，对于相关领域的研究和应用具有积极的促进作用。