生物样品的预处理技术研究进展

作者简介：尤斯涵，研究方向：网络药理学；Ｅ ｍａｉｌ：４７８０３２００８＠ｑｑ
．ｃｏｍ通讯作者：郭春燕，教授，硕士生导师；研究方向：体内药物分析和靶向药物分析；Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｏｃｈｙ０３１１＠１６３．ｃｏ
ｍ生物样品的预处理技术研究进展
尤斯涵　殷宏艳　杨宋蕊　刘鑫淼　郭春燕
河北北方学院药学院，河北省神经药理学重点实验室，张家口，０７５０００，
中国【摘要】　基于生物样品具有药物种类繁多、理化性质各异、生物介质组分复杂的特点，生物样品的预处理产生了多种技术和方法。

基于以上背景，该文综述了近年来在体内药物分子中生物样品的预处理方法，以期为不同生物样品的预处理提供参考。

【关键词】　生物样品；
预处理；体内药物分析【中图分类号】　Ｒ９６３ 【文献标识码】　Ａ 犇犗犐：１０．３９６９／ｊ
．ｉｓｓｎ．２０９５ １３９６．２０２３．０５．０１０犃犱狏犪狀犮犲犻狀犘狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋犜犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犅犻狅犾狅犵犻犮犪犾犛犪犿狆
犾犲狊ＹＯＵＳｉ ｈａｎ，ＹＩＮＨｏｎｇ ｙａｎ，ＹＡＮＧＳｏｎｇ ｒｕｉ，ＬＩＵＸｉｎ ｍｉａｏ，ＧＵＯＣｈｕｎ ｙ
ａｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｅｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋ ｏｕ，０７５０００，Ｃｈｉｎａ
【犃犅犛犜犚犃犆犜】　Ｄｕｅｔｏｔｈｅｄｉｖｅｒｓｅｔｙｐｅｓｏｆｄｒｕｇｓ，ｄｉｖｅｒｓｅｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐ
ｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｄｉａｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ，ｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｅｍｅｒｇｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐ
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ｓｉｓ 体内药物分析主要指利用现代分析仪器及方法对
人或动物血样、尿样及组织等生物样品中的药物进行定性、
定量分析。

生物样品主要包括组织、体液和排泄物。

组织包括胃、肠、肝、肾、肺、脑、头发等。

体液包括血液、脑脊液、胆汁等。

排泄物主要包括尿液、粪便和汗液。

由于一些样品中药物或其代谢物在生物介质中浓度很低，样品的介质中内源性物质代谢物复杂，如血
浆、血清和母乳中的蛋白质以及尿液中的无机盐［１］，若
直接进行测定内源物可能产生干扰而介质中的药物、代谢物浓度太低会达不到测定所用仪器的灵敏度要求。

因此，为了排除样品中其他物质的干扰以及提高分析灵敏度，生物样品必须进行预处理，即结合测定的
实际和要求，
采取恰当的分离、纯化、富集等方法和技术，必要时对尚需对待测组分进行化学改性后，再供测定。

样品预处理技术在整个样品的分析系统中起着至
关重要的作用［２］。

样品预处理不仅可以增加样品中痕
量目标的浓度，
还可以有效消除仪器分析中样品基质的干扰［３］。

在为某种生物样品选择预处理方法时，需
要考虑多种因素，如生物样品的类型、药物的理化性质、药物测定的目的、待测物的浓度范围、样品制备与分析技术的关系等。

因此，生物样品的预处理方法也多种多样，如蛋白质沉淀、萃取、衍生化等。

基于此种背景，本文对近年来在体内药物分子中生物样品预处理方法的研究进展展开论述，为今后对
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不同生物样品预处理方的法选择提供参考。

１　蛋白质沉淀
１．１　蛋白质沉淀技术
蛋白质沉淀技术是比较传统的蛋白分离纯化方法，具有成本低、操作简单、提取效率高等优点［４］。

在测定血浆、血清及组织匀浆等生物样品药物时，一般需要先对样品进行去除蛋白的处理，以便测定药物浓度或得到较为“干净”的提取液，方便成分提取的进行。

生物基质中的蛋白质可以通过不同的物理或化学方法去除［５］。

这种过程叫做脱蛋白，其主要是基于蛋白质四级结构修饰的变性，即蛋白质三级和四级结构中的氢键被破坏，而达到去蛋白的目的［６］。

蛋白质通常通过有机溶剂沉淀、ｐＨ变化、添加盐和超滤从样品中去除。

有机溶剂、盐的使用和ｐＨ值的变化能够引起蛋白质溶解度的改变，从而使蛋白质从溶液中沉淀出来。

常使用乙腈、乙醇、甲醇和丙酮等有机溶剂来清除血浆蛋白质。

常见的蛋白沉淀法有溶剂沉淀法、中性盐析法、强酸沉淀法、热凝固法，详细情况见表１。

表１　蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀法原理常用的试剂注意事项
溶剂沉淀法加入与水混溶的有机溶剂，蛋白析
出，并使结合的药物释放。

常用的有机溶剂有乙腈、甲醇、丙
酮、四氢呋喃等
血浆或血清与有机溶剂的体积比
最好控制在１∶２到１∶３之间）。

中性盐析法在含蛋白质的溶液中加入大量的
中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定
性而使其析出。

常用的中性盐有饱和硫酸铵、硫酸
钠、硫酸镁、氯化钠等
血清与饱和硫酸铵溶液的比一般
控制在１∶２。

强酸沉淀法蛋白质与某些酸结合成不溶性的
盐沉淀。

１０％
三氯醋酸、６％高氯酸溶液
血清与强酸的比１∶０．６；上清液呈
强酸性（ｐＨ≤４）；酸性分解的药物
不宜用本法。

热凝固法使蛋白发生变性凝固而沉淀无通常可加热到９０℃；方法简单；只能除去热变性蛋白；要求待测物热稳定性好。

１．２　蛋白质沉淀方法的应用
多年来，在药物代谢动力学研究中，蛋白质沉淀法已被广泛用于从生物基质中提取分析物。

药物代谢动力学主要定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，并通过运用数学原理和方法来阐述血药浓度随时间变化的规律。

如Ｙｅ等［７］通过ＵＨＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ开发验证了一种高效灵敏测定大鼠血浆中的山姜素（一种生物活性类黄酮）的超高效液相色谱 串联质谱方法。

其主要使用有机溶剂乙腈是血浆中蛋白质沉淀及使用乙腈和水（５０∶５０，ｖ／ｖ）稀释的方法来消除基质成分。

此方法应用于药代动力学研究发现，山姜素在口服给药后迅速吸收，且给药后广泛分布。

Ｐａｒｋ等［８］通过使用乙腈有机溶剂沉淀蛋白质对小鼠血浆进行样品制备、用Ｃ１８色谱柱分离预处理样品，成功开发了液相色谱 四极杆飞行时间质谱测定法，用于评估小鼠血浆中达珀利奈的药物代谢和药代动力学特性。

蛋白质沉淀还应用于建立生物分析方法。

生物分析方法指通过使用几种含有各种缓冲液和有机溶剂的溶剂来开发一种合适的色谱方法，该方法生成的色谱图需要具有良好的峰形、足够的分辨率和最佳的选择性［９］。

目前，已有半数以上的建立靶向共价激酶抑制剂（ｔａｒｇｅｔｅｄｃｏｖａｌｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＴＣＫＩｓ）样品生物学分析方法中使用了蛋白质沉淀和乙腈［１０］。

如
Ｇｕｏ等［１１］开发并验证了一种即可缩短制备时间又能够使用０．２ｍＬ血浆对浓度范围为０．００５至１．２５ｍｇ·ｍＬ １的血浆中的替诺福韦进行定量的方法。

该方法只需简单的蛋白质沉淀程序，即使用０．５ｍＬ甲醇沉淀猴血浆蛋白得到无蛋白提取物，通过电喷雾电离 ＭＳ／ＭＳ实现替诺福韦和阿德福韦（内标）的检测。

此外，蛋白质沉淀还可以用于样品提取等方面。

如Ｓｕｎ等［１２］使用浓度为６０％（ＮＨ４）２ＳＯ４从红藻Ｅｕ ｃｈｅｕｍａｃｏｔｔｏｎｉｉ中提取海藻蛋白ＺＤ６０，经木瓜蛋白酶水解、超滤、色谱法分离后，发现产物抗氧化肽（ＥＰ４和ＥＰ５）可作为天然抗氧化剂应用于医药产品中，能够治疗由氧化损伤引起的慢性心血管疾病。

此外，有研究开发了使用乙腈沉淀蛋白的预处理方法，去除了酶联免疫吸附测定之前从等离子体中引起干扰的成分［１３］。

经检验此方法与血浆样品的固相提取相比，方法可靠、步骤简单，能够用于测定血浆中游离的催产素。

２　液相萃取法
２．１　液相萃取技术
液相萃取法也称液 液提取法（ｌｉｑｕｉｄ ｌｉｑｕｉｄｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ，ＬＬＥ），是指用溶剂分离和提取液体混合物中的组分的过程。

ＬＬＥ具有高回收率和再现性，可将大部分内源性杂质去除、分离选择性高、易连续操作、成
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本低等多个优点；但同时也存在容易造成乳化、污染环境、灵敏度低等缺点［１４］。

液 液萃取基于分析物在两个不互溶相中的相对溶解度，并由平衡分布分系数或分配系数决定；分析物的提取是通过两个不互溶液相的溶解力（极性）的差异来实现的［１５］。

多数药物是亲脂性的，而大多数内源性干扰物质是强极性的水溶性物质。

因此，ＬＬＥ使用的两种不互溶溶剂一般选用水性溶剂和有机溶剂。

这也表明在ＬＬＥ中，有机溶剂的选择在成功制备样品中起着重要作用［１６］。

萃取溶剂的一般选取原则是：对药物分子未电离形式可溶，对电离形式不溶；沸点低，易挥发；与水不相混溶；无毒，不易燃烧；具有化学稳定和惰性；不影响紫外检测。

常用的萃取有机溶剂有乙酸乙酯、叔丁基甲基醚、二氯甲烷、正己烷和二氯甲烷。

２．２　液相萃取技术的应用
由于液相萃取技术具有操作简单、成本低等特点，ＬＬＥ目前已应用于医药、有机化学、食品、环境等方面。

ＬＬＥ常在建立方法和药代动力学等方面中作为样品预处理方法。

Ｌｉｕ等［１７］通过使用ＬＬＥ法预处理患者中的血浆样品（叔丁基甲醚为萃取溶剂）以及采用场增强样品堆积（ｆｉｅｌｄ ｅｎｈａｎｃｅｄｓａｍｐｌｅｓｔａｃｋｉｎｇ，ＦＥＳＳ）在线预富集技术建立了一种分析血浆中喹硫平及其代谢物的方法。

经实验验证发现这种新的方法快速，且灵敏度优于传统的毛细管电泳法。

在Ｌｉｕ等的研究中，ＬＬＥ用于提取分析物并去除血浆中的干扰；采用在线预浓缩法ＦＥＳＳ提高了该方法的灵敏度。

ＬＴｖａｎｄｅｒＨｅｉｊｄｅｎ等［１８］使用液相色谱 串联质谱（ＬＣ ＭＳ／ＭＳ）开发建立了一种具有高灵敏度定量人血浆中长春花碱，长春新碱，长春瑞滨及其活性代谢物４ Ｏ 脱乙酰长春瑞滨的生物分析方法。

该方法主要以氘代同位素为内标，采用叔丁基甲醚ＬＬＥ进行样品预处理，使用Ｃ１８反相色谱和正离子模式的三重四极杆ＭＳ进行分离定量检测。

目前此方法已成功应用于使用体内小鼠模型研究长春新碱在儿科和长春瑞滨和４ Ｏ 脱乙酰乙烯瑞滨中的药代动力学中。

Ｐｏｏｒｎａ等［１９］开发并验证了一种简单、特异性、高通量、准确且灵敏的超高效液相色谱 串联质谱（ＵＨ ＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ）方法，用于人血浆中米诺地尔的定量。

该方法中使用乙酸乙酯通过ＬＬＥ从血浆中提取分析物和内标。

该方法根据ＵＳＦＤＡ指南进行全面验证在监管范围内。

３　固相萃取法
３．１　固相萃取法
固相萃取法（ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＰＥ）由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，其萃取相为固体吸附剂［１５］，要用于样品的分离、纯化和浓缩。

固相萃取法基于当含药物体内样品通过小柱时，药物及内源性物质因为理化性质的差异，与固定相之间的亲和力不同而实现分离。

ＳＰＥ具有操作简单、缩短分析时间、可避免乳化现象、富集因子高及便于自动化操作等优点［２０ ２１］；但其成本高于液相萃取法。

ＳＰＥ的主要步骤包括：吸附剂相的活化、样品基质（液体溶液）中的分析物渗透或被吸附到吸附剂中、消除基质干扰以及使用适当的技术洗脱和浓缩分析物［２２］。

洗脱方式有两种，一种是使用冲洗溶剂洗去干扰物，再使用对药物亲和力更强的溶剂洗脱药物；另一种方式是是药物直接被洗脱，干扰物保留在萃取柱上。

ＳＰＥ的填料有亲脂型和亲水型两种，其中亲脂型常使用十八烷基硅烷键合硅胶（简称Ｃ１８）做为填料，并用于疏水性药物。

常使用的溶剂有甲醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚［２３］。

近年来，在ＳＰＥ基础上，已发展了一些改进型的ＳＰＥ技术，如分散微固相萃取、磁性固相萃取等是传统ＳＰＥ的一种替代方法。

３．２　固相萃取技术的应用
与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。

这些ＳＰＥ的优点使其在不同的生物或分析研究领域，如环境、临床、生物和食品研究中成为一种非常有吸引力的技术［１６］。

Ｌｉａｏ等［２４］建立开发了一种采用固相萃取和液相色谱 质谱的方法来检测和定量酿造饮料中的疏水酚类化合物红陪酚。

Ｊｉａｎｇ等［２５］建立了具有高通量和高灵敏度的线固相萃取与高效液相色谱 串联质谱联用方法。

同时Ｊｉａｎｇ等也通过该方法可同时定量大鼠血浆中的四种钴胺素（ＯＨＣｂｌ、ＣＮＣｂｌ、ＡｄｏＣｂｌ和ＭｅＣｂｌ）。

全氟和多氟烷基物质（ｐｅｒｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ＰＦＡＳ）是一种环境持久性和高生物累积性的有害污染物，在复杂样品中它的含量极低，因此检测时需要进行样品预处理。

Ｔａｎ等［２６］采用阳离子分级多孔共价有机骨架（ｃａｔｉｏｎｉｃｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌｐｏｒｏｕｓｃｏｖａｌｅｎｔｏｒｇａｎ ｉｃｆｒａｍｅｗｏｒｋ，Ｃ Ｈ ＣＯＦ）作为分散固相萃取的吸附剂，结合超高效液相色谱 串联质谱，建立了一种灵敏检测５个ＰＦＡＳ的分析方法，检测限为０．０１１～０．２９ｎｇ·Ｌ １。

Ｚｈａｎｇ等［２７］成功制备了用于磁性金属有机框架（ｍａｇｎｅｔｉｃｍｅｔａｌｏｒｇａｎｉｃｆｒａｍｅｗｏｒｋ，ＭＭＯＦ）制备的分子印迹聚合物纳米粒子（ＭＭＯＦｓ＠ＭＩＰｓ），其除具
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有磁性良好、传质速率高优点外，还对目标分子双酚Ａ（ｂｉｓｐｈｅｎｏｌＡ，ＢＰＡ）有着优异的吸附选择性和吸附容量。

此外，Ｚｈａｎｇ等以ＭＭＯＦｓ＠ＭＩＰｓ作为磁性固相萃取中的吸附剂，开发了一种新的磁性固相萃取 高效液相色谱方法。

此方法能够在０．５～５０００μｇ·Ｌ １的宽线性范围内对ＢＰＡ进行高选择性和高灵敏度检测，检测下限为０．１μｇ·Ｌ １。

研究表明金属有机框架（ｍｅｔａｌ ｏｒｇａｎｉｃｆｒａｍｅｗｏｒｋ，ＭＯＦ）在更多领域中具有着很大的应用潜力。

这些结果不但证实了ＳＰＥ的广泛应用，也表明了可以通过选择或制备不同的ＳＰＥ吸附剂来测定不同的目标分析物或者是提高不同样品预处理方法的灵敏度。

４　其他方法
４．１　超滤法及其应用
超滤法是一种膜分离技术；按照截留分子量的大小，选择半透膜，可分离３０～１０００ｋＤ的可溶性生物大分子；可将血浆或血清中游离型药物与大分子血浆蛋白、及结合了药物的血浆蛋白分离。

此方法具有简便快捷，结果可靠稳定等优点，是游离药物分析的首选
方法，尤其适合治疗药物监测的血样分析。

如，Ｄｏｎｇ等［２８］开发了一种用于样品制备的中空纤维离心超滤（ｈｏｌｌｏｗｆｉｂｅｒｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ＨＦＣＦ ＵＦ）方法，通过结合高效液相色谱 串联质谱（ＨＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ），首次用于测定人体血液中四种还原氨基硫醇（高半胱氨酸、半胱氨酸、半胱酰甘氨酸和谷胱甘肽）。

所开发的ＨＦＣＦ ＵＦ方法简单准确，其可以应用于临床研究，以评估进一步研究中的氧化应激。

４．２　缀合物水解
缀合物指药物或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物名称。

由于药物Ⅱ相代谢缀合物具有成分复杂、极性大不易被有机溶剂提取等特点，因此需要对这些缀合物进行水解预处理，以便药物释放出来，从而进行目标分析物的处理与分析［２９］。

缀合物水解方法有三种，分别是酸水解法、酶水解法和溶剂解法，详细信息见表２。

如刘小雨等［３０］通过在大鼠中进行实验，对血浆中柚皮素、橙皮素缀合物的酸水解条件进行了优化，即在含药大鼠血浆加入等体积盐酸（４ｍｏｌ·Ｌ １）并在７０℃下水浴加热１ｈ时对两种目标产物的破坏较小。

表２　缀合物水解方法
水解缀合物的方法内容
酸水解法条件：强酸，加热
优点：简便，快速
不足：有些药物在水解过程中会发生分解、专一性较差
酶水解法酶的种类：葡萄糖醛酸苷酶或／和硫酸酯酶优点：条件温和、专属性强
不足：水解时间较长、可能引入黏蛋白
溶剂解法溶剂萃取过程中缀合物（尤其硫酸酯）直接分解
４．３　衍生化法及其应用
通过化学试剂和／或物理因素（即辐照、电场和温度）对目标分析物进行化学修饰被称为衍生化［６］。

衍生化可以定量地将目标化合物转化为另一种易于使用具有特殊官能团的衍生化试剂进行分析和检测的化合物，并且可以明显提高分析物的检测和分离的灵敏度。

在痕量分析过程中，一些分析物不能或难以直接分离和检测［３１］。

例如，待测组分在紫外 可见光区域无吸收或吸收较弱时，需要采用衍生化［３１］。

可以通过硅烷化（如三甲基氯硅烷）、酰化（如三氟乙酸酐）、烷基化（如碘庚烷）或不对称衍生化（如（Ｓ） Ｎ 三氟乙酰脯氨酰氯）等方式对样品中中的目标分析物进行衍生化。

崔婉莹团队成功建立了使用气相色谱 负化学电离源 质谱衍生化法同时测定全血中的亚硝酸根和硝酸根的定量分析方法。

方法中选择异辛烷作为衍生物提取溶剂，并以直接减压浓缩的方式将衍生化与浓缩过程一步进行。

经检验，该方法结果准确、特异性强、灵敏度高，满足亚硝酸盐中毒案件的检验鉴定需求［３２］。

此外，为测定不同化疗周期肿瘤患者的顺铂血药浓度，张靖悦等建立了柱前衍生化超高效液相色谱 串联质谱（ＵＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ）的方法。

将血浆样品的顺铂与二乙基二硫代氨基甲酸钠（ＤＤＴＣ）络合生成Ｐｔ（ＤＤＴＣ）衍生化产物并沉淀蛋白后，再使用ＵＰＬＣ ＭＳ／ＭＳ继续定量分析。

该方法稳定性好、专属性高，能够用于肿瘤患者血浆中顺铂浓度的检测［３３］。

上述均表明，通过不同的衍生化方法，我们可以测定一些原本不容易被检测的物质，可以在简化样品预
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处理方法的同时提高样品检测的灵敏度，也能够改善样品混合物的分离度等。

衍生化方法也具有十分广泛的应用。

５　现代新的样品预处理技术
５．１　固相微萃取
５．１．１　固相微萃取技术
固相微萃取（ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＰＭＥ）是一种无溶剂、经济高效、坚固耐用、用途广泛且高通量的样品制备技术，它将提取的所有步骤（如采样、分离和分析）集成到一个步骤中［３４］。

ＳＰＭＥ是Ｐａｗｌ ｉｓｚｙｎ于１９９０年提出的样品预处理方法［３５］。

具有操作简单，样本量小，无溶剂提取，易于实现自动化等特点［３１］。

ＳＰＭＥ装置由手柄和萃取头或纤维头两部分构成。

萃取头是一根附着有适当固相涂层的熔融石英纤维，对有机物具有吸附、富集作用。

其原理是建立在待测物在固定相和水相之间达成的平衡分配基础上。

固相微萃取分为萃取过程和解吸两个过程。

ＳＰＭＥ的方法可分为直接固相微萃取法和顶空固相微萃取法（ＨＳ ＳＰＭＥ）两种。

５．１．２　固相微萃取技术的应用
ＳＰＭＥ在药物分析和药物检测上发展迅速，正逐渐成为生理、病理、毒理学上不可缺少的一个检测手段。

如血液和尿液中杜冷丁含量的检测，尿液中一些生物碱检测，血清中甾类、酚嗪类和苯酚类化合物的检测，体液中有机磷农药以及苯类化合物的检测，唾液中大麻酚和皮质甾类以及人呼吸系统中丙酮成分的检测等。

Ｋａｈｒｅｍａｎｏｇｌｕ等［３６］开发了一种ＳＰＭＥ方法，并结合ＬＣ ＭＳ／ＭＳ分析唾液和尿液基质中的８ 羟基脱氧鸟苷和８ 氧代脱氧腺苷。

ＳＰＭＥ的萃取相由亲水 亲油平衡的聚合物颗粒组成。

该方法中，唾液和尿液基质中的两种生物标记物的定量限水平分别了５．０和１０．０ｎｇ·ｍＬ １。

Ａｂｄｏｌｈｏｓｓｅｉｎｉ等［３７］开发了一种ＨＳ ＳＰＭＥ方法，使用气相 火焰离子化检测（ＧＣ ＦＩＤ）直接提取的生物样品（尿液和血浆）中的尼古丁。

在这项研究中，ＨＳ ＳＰＭＥ ＧＣ ＦＩＤ方法使用了一种涂有纳米结构聚吡咯的高比面积、坚固、坚固的镀铂不锈钢纤维涂层。

在最佳实验条件下，校准曲线在０．１～２０μｇ·ｍＬ １范围内呈线性，检测限２０ｎｇ·ｍＬ １。

Ａｂｂａｓｉａｎ等［３８］开发了一种采用溶胶 凝胶技术合成的基于多壁碳纳米管和离子液体的新型ＳＰＭＥ纤维，使用新型纤维分离测定人尿液中的甲基苯丙胺和３，４ 亚甲基二氧基甲基苯丙胺。

结果显示高灵敏度（０．０９７～０．３９０ｎｇ·ｍＬ １）和日间重复性合适（≤７．０％）。

Ｒａｈｍａｎｉ等［３９］提出了一种新型的生物相容性９６单片无机中空纤维阵列（９６ ＭＩＨＦ），作为９６孔板系统上高通量ＳＰＭＥ的新配置。

将高度有序的９６根二氧化钛／羟基磷灰石纳米复合中空纤维和相应的不锈钢针头排列在聚四氟乙烯板架上，作为萃取模块。

该方法已成功应用于从尿液和水介质中提取和富集阿霉素，且无需样品制备并无明显基质效应，提出的分析用采用ＬＣ ＭＳ／ＭＳ进行分析，其检出限０．１ｎｇ·ｍＬ １。

５．２　液相微萃取及其应用
５．２．１　液相微萃取技术
液相微萃取（ｌｉｑｕｉｄｐｈａｓｅｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＬＰＭＥ）是生物分析领域中一种新的样品制备方法，这项技术是ＬＬＥ的小型化，使用少量溶剂作为萃取剂［４０］。

ＬＰＭＥ主要是基于分析物在样品及小体积有机溶剂之间分配平衡过程为原理。

ＬＰＭＥ具有灵敏度高、富集倍数大；操作简单、快捷；使用溶剂少，属于环境友好型技术；材料易得，无需反复使用，相比于固相微萃取降低了实验成本等优点。

ＬＰＭＥ装置简单———微量进样器或聚丙烯中空纤维。

ＬＰＭＥ主要是用一根聚丙烯中空纤维来负载有机溶剂。

通过中空纤维壁孔的固定，有机溶剂不仅可以直接接触给出相（样品溶液），还增大了有机溶剂与样品溶液的接触面积，有利于物质的传递和扩散。

ＬＰＭＥ可应用于单滴液相微萃取（ｓｉｎｇｌｅｄｒｏｐｌｉｑｕｉｄｐｈａｓｅｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＤ ＬＰＭＥ）、中空纤维液相微萃取（ｈｏｌｌｏｗｆｉｂｅｒｌｉｑｕｉｄｐｈａｓｅｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＨＦ ＬＰＭＥ）和分散液液微萃取技术（ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅｌｉｑｕｉｄｌｉｑ ｕｉｄｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＤＬＬＭＥ）这三种模式。

这三种ＬＰＭＥ的方法均经济、快速、有效和环保的（有机溶剂的使用量少），并且没有ＳＰＭＥ的样品携带问题［４１］。

５．２．２　液相微萃取技术的应用
基于ＬＰＭＥ的多个优点特性，ＬＰＭＥ的技术已应用于医学、代谢组学、生物化学、食品化学、环境科学等多个领域中。

Ｅｌｅｎｃｏｖａｎ等［４２］基于非离子有机硅表面活性剂，建立了涡旋辅助表面活性剂增强乳化液 液微萃取与气相色谱 质谱法联合，测定食品有机磷农药的方法。

采用聚硅氧烷链组成的新型非离子型有机硅表面活性剂作为绿色乳化剂，促进萃取溶剂乳化到样品基质中，从而加强目标分析物向有机相的传质。

将该方法应用于实际样品中，结果显示目标分析物的回收率良好（８０％～１１８％）。

此方法方便、快速且环境友好。

第１３卷第５期２０２３年１０月
神经药理学报
ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ
Ｖｏｌ．１３Ｎｏ．５
Ｏｃｔ．２０２３
Ｆａｔｔａｈｉ等［４３］建立了ｐＨ可调的疏水性深共晶溶剂的液相微萃取（ｄｅｅｐｅｕｔｅｃｔｉｃｓｏｌｖｅｎｔ ｂａｓｅｄｌｉｑｕｉｄｐｈａｓｅｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＤＥＳ ＬＰＭＥ）技术，并结合气相色谱 质谱法测定环境水和废水样品中的雌激素类化合物。

ＤＥＳ是以ｌ 薄荷醇为ＨＢＡ，以（１Ｓ） （＋） 樟脑 １０ 磺酸（ＣＳＡ）为ＨＢＤ合成的，将合成ＤＥＳ作为ＤＥＳ ＬＰＭＥ中的绿色萃取溶剂。

目前，高血压和血脂异常是心血管疾病发展的主要危险因素之一。

基于此种背景，Ｓｏｕｚａ等［４４］开发了一种结合液相色谱 串联质谱（ＬＣ ＭＳ／ＭＳ）的涡旋辅助液 液微萃取（ＶＡＬＬＭＥ）方法，用于同时测定人血浆中的八种心血管药物。

经验证该方法简单、快速且环保，同时该方法具有选择性，精确度和准确度。

５．３　微透析及其应用
微透析（ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ，ＭＤ）技术是以透析原理为基础的在体取样技术，其能对存在于活体组织液中的内源性或外源性物质进行连续取样。

ＭＤ具有在体外和体内监测动态过程的能力［４５］。

ＭＤ具有活体连续取样、采样量小、定量分析、组织损伤轻等优点［４６］。

微透析系统装置微量灌流泵、微透析探针、样品收集器、连接管及配套设备组成。

目前，微透析技术已广泛应用在神经科学（脑科学）、神经生物学、药物研究与评价和基础与转化医学研究等领域中。

Ｓｕ等［４７］建立了一种新的活体大鼠脑细胞外ｐＨ值测定方法来监测活体大鼠脑细胞外基础ｐＨ值及其动态变化。

该方法涉及应用金属离子作为酸／碱指示剂，ｐＨ依赖性固相萃取进行样品预处理方案与微透析采样并结合电感耦合等离子体质谱进行分析。

Ｔ ｕｍａ等［４８］开发了一种使用微透析、毛细管电泳和非接触式电导率检测监测脂肪组织代谢的方法。

该方法能够用于在急性体育锻炼期间对从腹部脂肪组织提取的微透析液中乳酸，甘油和支链氨基酸的水平进行测序监测。

综上所述，生物样品的预处理因其多样、复杂而成为整个检测过程中的关键环节。

所述各处理方法众多且各有特点，需要根据化合物的物理化学性质选择合适的预处理方法，从而达到满意检测结果。

参考文献
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