hplc法测定吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中主药的含量

DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.010·
论著·HPLC法测定吉西他滨肉豆蔻酸酯
脂质体中主药的含量
罗芳*，李岩*，郭晓茹，汪阿鹏，夏桂民
【摘要】
目的建立吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中主药的含量测定方法。

方法采用HPLC 法测定脂质体中主药的含量并进行系统的方法学验证。

结果色谱分离度R = 2.242，阴性对照无干扰；吉西他滨肉豆蔻酸酯在 5.52 ~ 116 μg/ml 范围内线性关系良好（r= 0.9999）；低、中、高3 种浓度的平均回收率分别为96.8%（RSD = 0.49%，n = 3）、99.7%（RSD = 0.15%，n = 3）和99.8%（RSD = 0.50%，n = 3）；日内精密度RSD = 0.28% （n = 6），日间精密度RSD = 0.55%（n = 6）；流速在0.99 ~ 1.01 ml/min 范围内变化时RSD = 1.19%（n = 9），柱温在28 ~ 32 ℃之间变化时RSD = 0.66%（n = 9）。

结论建立的方法简便易行、稳定、准确、专属性强、耐用性好，可定量检测吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中主药的含量。

【关键词】高效液相色谱；含量测定；分析方法验证；吉西他滨肉豆蔻酸酯；脂质体
中国医药生物技术, 2020, 15(2):144-151
吉西他滨属细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于S 期，是一种人工合成的胞嘧啶核苷衍生物[1]。

作为一线化疗用药，吉西他滨对多种实体瘤治疗效果显著，尤其是对胰腺癌、非小细胞肺癌和乳腺癌，单一用药或联合其他抗癌药物都能取得很好疗效。

临床常用的剂型为注射用盐酸吉西他滨，但是其在体内容易被胞嘧啶核苷脱氨酶等酶迅速降解（半衰期很短，仅为8 ~ 17 min），成为无活性的双氟脱氧尿苷（dFdU），因此，吉西他滨若要维持有效的药物浓度就必须大剂量给药[2-3]。

美国国家癌症综合网络及欧洲肿瘤协会指南推荐的标准剂量1000 ~ 1250 mg/m2，且30 min 内静脉输注完成。

持续大剂量给药导致较强毒副作用，如：呼吸困难、脱发、水肿、骨髓抑制、肾毒性、胃肠道反应、流感样反应、过敏反应等[4-5]。

纳米技术的发展为改善药物体内循环时间，增效减毒带来了新希望。

本课题组对吉西他滨进行结构改造，设计并合成脂水分配系数适宜的改良型新药吉西他滨肉豆蔻酸酯（dimyristoyl-gemcitabine，dmGEM，图1），再利用纳米技术、以磷脂为基础赋形剂构建长循环脂质体，规避体内相关酶的降解，延长半衰期，增强疗效，降低毒性，提高患者依从性，其临床意义重大。

目前，尚未见吉西他滨肉豆蔻酸酯纳米制剂中主药分析方法的相关报道，因此需要建立吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中主药的含量测定法，便于吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体的定量分析。

图 1吉西他滨肉豆蔻酸酯化学结构式（R = C13H17，分子式：C37H63F2N3O6，分子量：683.47）
Figure 1Chemical structure of dimyristoyl-gemcitabine (R = C13H17，molecular formula: C37H63F2N3O6, molecular weight: 683.47)
本研究建立了简便、专属性强的HPLC 法，并对该法进行了系统的方法学验证[6-8]，证明该法适用于吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体的含量测定。

本法
基金项目：国家重点研发计划（2016YFA0201504）；国家自然科学基金（81673383、81603063）；中国医学科学院医学与健康科技创新工程（2016-12M-3-013）
作者单位：100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所制剂研究室
通信作者：夏桂民，Email：xiaguimin@
收稿日期：2019-11-14
*同为第一作者
对其他吉西他滨酯化物纳米制剂的含量测定也具有参考价值。

1 材料与方法
1.1 材料
LC-20A 高效液相色谱仪和Inerstil ODS-SP 色谱柱（5 μm，150 mm × 4.6 mm）购自日本岛津公司；R-300 旋转蒸发仪购自瑞士Buchi 公司；XSE105 分析天平购自瑞士梅特勒公司；KQ-250DB 型数控超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司；低温光照仪购自药物制剂国家研究中心。

吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体自制，批号2019031405、2019032101、2019032102、2019032103、2019032104、2019032105；吉西他滨肉豆蔻酸酯原料及工作对照品，批号20190307，99.0%，本所合成室制备；聚乙二醇二硬脂酸磷脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）和注射级胆固醇购自上海艾韦特医药科技有限公司；色谱纯甲醇购自美国Fisher Scientific 公司；分析纯二水合磷酸二氢钠购自国药集团化学试剂有限公司；其他试剂也均为色谱纯。

1.2 方法
1.2.1配制PBS 缓冲液（pH 2.4 ~ 2.6）参照中国药典（2015），称取NaH2PO4 13.8 g，置于2000 ml 烧杯，加水适量，使之溶解，另量取H3PO4 2.5 ml 滴加至上述溶液，再加水稀释至1000 ml，搅匀。

用H3PO4调节pH 至2.53，得PBS 缓冲液（pH 2.53），0.22 μm 滤膜抽滤，临用前超声脱气15 min，室温放置备用。

1.2.2吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液制备精密称取吉西他滨肉豆蔻酸酯 2.50 mg，置于50 ml 量瓶中，加入适量甲醇，超声使其完全溶解，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得50 μg/ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.3供试品溶液及空白对照溶液制备精密量取0.1 ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体溶液，置于2 ml 量瓶中，用甲醇定容至刻度，充分振荡、摇匀，于 4 ℃ 12 000 × g 离心10 min，上清液即为供试品溶液。

另精密量取0.1 ml 空白脂质体，同法操作，得空白对照溶液。

1.2.4HPLC 法色谱柱：Inerstil ODS-SP（5 μm，150 mm × 4.6 mm）；流动相梯度洗脱详见表1；流速 1.0 ml/min；检测波长254 nm；柱温30 ℃；进样量20 μl。

表 1流动相梯度洗脱
Table 1Mobile phase gradient elution
时间（min）
Time (min)
PBS缓冲液（pH 2.4 ~ 2.6）
PBS buffer (pH 2.4 ~ 2.6)
甲醇
Methanol
0.00 95% 5%
5.00 5% 95%
30.00 5% 95%
30.10 95% 5% 1.2.5系统适用性试验分别取“1.2.2”和“1.2.3”项下吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液、供试品溶液及空白对照溶液适量，照“1.2.4”项下色谱条件操作，记录色谱图。

1.2.6破坏性试验分别取吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体、空白脂质体、吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液各 5 份，进行以下破坏试验，再将各待测溶液注入高效液相色谱仪。

1.2.6.1酸破坏精密量取 2 ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，向其中加入 1 mol/L 盐酸溶液0.5 ml，室温下避光放置0.5 h 后，再按“1.2.3”项下方法操作，得酸破坏供试品溶液。

分别精密量取 2 ml 空白脂质体和吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液，同法操作，得酸破坏空白对照溶液及酸破坏吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.6.2碱破坏精密量取 2 ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，向其中加入 1 mol/L 氢氧化钠溶液0.5 ml，立即按“1.2.3”项下方法操作，得碱破坏供试品溶液。

分别精密量取 2 ml 空白脂质体和吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液，同法操作，得碱破坏空白对照溶液及碱破坏吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.6.3氧破坏精密量取 2 ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，向其中加入3% 过氧化氢溶液0.5 ml，室温下避光放置3 h 后，再按“1.2.3”项下方法操作，得氧破坏供试品溶液。

分别精密量取2 ml 空白脂质体和吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液，同法操作，得氧破坏空白对照溶液及氧破坏吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.6.4光破坏精密量取 2 ml 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml，在低温光照仪[（4500 ± 500）lx]中照射0.5 h 后，再按“1.2.3”项下方法操作，得光破坏供试品溶液。

分别精密量取 2 ml 空白脂质体和吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液，同法操作，得光破坏空白对照溶液及光破坏吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.6.5高温破坏精密量取 2 ml 吉西他滨肉
豆蔻酸酯脂质体，向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml，在65 ℃水浴中避光加热0.5 h 后，再按“1.2.3”项下方法操作，得高温破坏供试品溶液。

分别精密量取 2 ml 空白脂质体和吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液，同法操作，得高温破坏空白对照溶液及高温破坏吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液。

1.2.7 线性与范围分别精密称取吉西他滨肉豆蔻酸酯对照品8 份，用甲醇溶解，得8 种不同浓度的吉西他滨肉豆蔻酸酯溶液（浓度范围为 5.52 ~ 116 μg/ml）。

照“1.2.4”项下条件操作，记录峰面积，以吉西他滨肉豆蔻酸酯峰面积 A 为纵坐标，浓度 C 为横坐标进行线性回归，建立回归方程。

1.2.8 检测限与定量限精密量取吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体适量，用5% 葡萄糖溶液递倍稀释，照“1.2.3”项下方法处理样品，照“1.2.4”项下条件操作，进样，并记录峰面积，分别以信噪比为3:1 和10:1 时相应的吉西他滨肉豆蔻酸酯的量为检测限和定量限。

1.2.9 重复性试验取同一吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体 6 份，照“1.2.3”项下方法处理样品，照“1.2.4”项下条件进样，并记录峰面积。

1.2.10 精密度试验取同一吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，照“1.2.3”项下方法处理样品，照“1.2.4”项下条件，同1 天内连续进样 6 次，记录吉西他滨肉豆蔻酸酯峰面积，计算日内精密度RSD。

另取同一份吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，连续 6 d，每天同法处理并平行连续进样 3 次，计算吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的日间精密度RSD。

1.2.11回收率试验精密称取吉西他滨肉豆蔻酸酯 5.5、5.0、4.5 mg 各3 份，分别置于50 ml 量瓶中，加甲醇适量并超声使吉西他滨肉豆蔻酸酯完全溶解，再加空白脂质体溶液 2.5 ml，用甲醇定量至刻度，摇匀，于 4 ℃、12 000 × g 离心10 min，得高、中、低 3 个浓度的供试品溶液。

照“1.2.4”项下条件，分别进样，记录峰面积，按外标法求得吉西他滨肉豆蔻酸酯实测值与理论值之比，每个浓度平行测定3 次，求得平均回收率。

1.2.12耐用性试验
1.2.12.1流速变化的影响将流速分别设置为0.99、1.00、1.01 ml/min，取同一份供试品溶液，照“1.2.4”项下条件，记录吉西他滨肉豆蔻酸酯保留时间与峰面积并依据外标法求得吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度。

1.2.12.2柱温对系统的影响将柱温分别设置为28、30、32 ℃，取同一份供试品溶液，照“1.2.4”项下条件，记录吉西他滨肉豆蔻酸酯保留时间与峰面积并依据外标法求得吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度。

1.2.13含量测定取 5 批不同批次的吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体，分别照“1.2.3”和“1.2.4”项下的条件和操作，吸取供试液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并按照外标法计算主药的含量（浓度）。

2 结果
2.1 系统适用性试验
在吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液及供试品溶液中，吉西他滨肉豆蔻酸酯的保留时间均约15.9 min，分离度为2.242。

同时，空白脂质体对应色谱图中相应保留时间处未见吸收峰（图2）。

上述结果表明在已建立的色谱条件下，吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体的辅料对吉西他滨肉豆蔻酸酯的测定无干扰。

1：吉西他滨肉豆蔻酸酯；a：吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体；b：空白脂质体；c：溶媒；d：吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液
1: Dimyristoyl-gemcitabine; a: Dimyristoyl-gemcitabine liposomes; b: Blank liposomes; c: Solvent; d: Dimyristoyl-gemcitabine reference substance 图 2系统适用性色谱图
Figure 2Chromatograms of system suitability
A B C
D E F 1：吉西他滨肉豆蔻酸酯；a：空白脂质体；b：吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体；c：吉西他滨肉豆蔻酸酯对照溶液
1: Dimyristoyl-gemcitabine; a:Blank liposomes; b: Dimyristoyl-gemcitabine liposomes; c: Dimyristoyl-gemcitabine reference substance
图 3破坏性试验色谱图（A：酸破坏；B：碱破坏；C：氧破坏；D：光破坏；E：高温破坏；F：未破坏）
Figure 3Typical chromatograms of destructive test [Destruction by acid (A); by base (B); by oxidation(C); by illumination (D); by high temperature (E); nondestruction (F)]
2.2 破坏性试验
分别取各待测溶液，照“1.2.4”项下操作，记录色谱图（图3）。

结果表明，吉西他滨肉豆蔻酸酯色谱峰遇酸、氧、光、高温破坏产生的降解产物色谱峰均能有效分离，说明本方法专属性良好。

碱破坏试验组均未检测出吉西他滨肉豆蔻酸酯色谱峰，加入碱后均出现大量气泡，表明其对碱极不稳定。

2.3 线性与范围
以吉西他滨肉豆蔻酸酯峰面积 A 为纵坐标，浓度 C 为横坐标进行线性回归，得回归方程：A = 14721C– 11435，r= 0.9999，结果见表2 和图4。

2.4 检测限与定量限
经检测，吉西他滨肉豆蔻酸酯的检测限为2.0 ng（S/N = 3），定量限为8.4 ng（S/N = 10）。

结果见图 5 和图6。

2.5 重复性试验
取同一吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体 6 份，经统计，吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的RSD = 0.74% （n = 6）（表3）。

表 2 线性与范围 Table 2 Linear and range
样品浓度（μg/ml ） Sample concentration (μg/ml)
平均峰面积（n = 3） Mean peak area (n = 3)
5.52 76250 22.10 306505 34.80 501260 50.00 728390 6
6.00 950863 84.00 1221877 9
7.00 1431213 116.00
1690905
峰面积（m U A ·m i n ） P e a k a r e a (m U A ·m i n )
18 × 10516 × 105
14 × 10512 × 10510 × 1058 × 1056 × 1054 × 1052 × 105
0 20 40 60 80 100 120
浓度（μg/ml ） Concentration (μg/ml)
图 4 线性与范围 Figure 4
Linear and range
图 5 检测限色谱图
Figure 5 Limit of detection chromatogram
图 6 定量限色谱图
Figure 6 Limit of quantification chromatogram
表 3 重复性试验 Table 3 Reproducible test
样品序号 Sample No.
平均浓度（μg/ml ）（n = 3） Mean concentration (μg/ml) (n = 3)
RSD （%） （n = 6） 1 1573.85 0.74 2 1549.91 3 1549.46 4 1540.16 5 1553.38 6
1545.84
2.6 精密度试验
统计得吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的日内精密度 RSD 为 0.28%（n = 6），吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的日间精密度 RSD 为 0.55%（n = 6）（表4 和表 5）。

2.7 回收率试验
统计求得高、中、低 3 个加样平均回收率为 96.8%（RSD = 0.49%，n = 3）、99.7%（RSD = 0.15%，n = 3）和 99.8%（RSD = 0.50%，n = 3）（表 6）。

表 4日内精密度Table 4Intra-day precision
脂质体批号Lot number
峰面积
Peak area
浓度（μg/ml）
Concentration (μg/ml)
平均浓度（μg/ml）（n = 6）
Mean concentration (μg/ml) (n = 6)
RSD（%）
(n = 6)
2019031405 1124042 1573.85 1552.10 0.28 1106949 1549.91
1106625 1549.46
1099981 1540.16
1109428 1553.38
1104043 1545.84
表 5日间精密度
Table 5Inter-day precision
天数（d）Days (d)
测得浓度（μg/ml）
Calculated concentration (μg/ml)
平均测得浓度（μg/ml）（n = 3）
Mean calculated concentration (μg/ml) (n = 3)
RSD（%）
(n = 6)
1 1542.78 1546.56 0.55
1546.99
1549.91
2 1543.4
3 1546.04
1541.32
1553.38
3 1553.2
4 1553.31
1554.47
1552.22
4 1539.12 1538.89
1539.70
1537.85
5 1524.41 1531.09
1526.94
1541.91
6 1529.08 1534.16
1541.90
1531.49
表 6回收率试验结果统计
Table 6Summary of recovery results
理论浓度（μg/ml）Theoretical concentration (μg/ml)
实测浓度（μg/ml）
Calculated concentration (μg/ml)
平均回收率（%）（s
x±，n = 3）
Mean recovery (%) (s
x±, n = 3)
RSD（%）
(n = 3)
90.2 86.9 96.8 ± 0.48 0.49
91.2 88.1
91.0 88.6
100.6 99.6 99.7 ± 0.15 0.15 101.0 99.8
102.8 99.8
111.4 111.2 99.8 ± 0.50 0.50 111.6 112.0
110.6 109.9
2.8 耐用性试验
流速在0.99 ~ 1.01 ml/min 范围内变化时，吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的RSD 为1.19%（n = 9）（表7），说明该方法的耐用性良好。

柱温在28 ~ 32 ℃之间变化时吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度的RSD 为0.66%（n = 9）（表7），说明柱温在28 ~ 32 ℃之间变化时对吉西他滨肉豆蔻酸酯含量测定结果的影响在可接受范围内。

2.9 含量测定
5 批脂质体含量测定结果见表8。

表 7耐用性试验结果统计
Table 7Robustness results under slightly changes of flow rate and column temperature
保留时间Retention time 吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中吉西他滨肉豆蔻酸酯浓度Calculated concentration of dimyristoyl-gemcitabine
项目Item
平均值（min）（n = 3）Mean (min)
(n = 3) 整体平均值（min）
（s
x±，n = 9）
Overall mean (min)
(s
x±, n = 9)
RSD
（n = 9）
平均值（μg/ml）
（n = 3）
Mean (μg/ml)
(n = 3)
整体平均值（μg/ml）
(s
x±，n = 9）
Overall mean (μg/ml)
(s
x±, n = 9)
RSD%
(n = 9)
流速（ml/min）
Flow rate (ml/min)
0.99 15.525 15.370 ± 0.16 1.01 1615.9 1597.9 ± 19.02 1.19
1.00 15.369 1599.9
1.01 15.215 1578.0
柱温（℃）
Column temperature (℃)
28 15.596 15.368 ± 0.23 1.49 1579.1 1590.6 ± 10.53 0.66 30 15.369 1599.9
32 15.139 1592.7
表 8五批吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体含量测定结果
Table 8Content determination for five batches of dimyristoyl-gemcitabine liposomes
批号Batches
测得浓度（μg/ml）
Calculated concentration (μg/ml)
平均测得浓度（μg/ml）（n = 3）
Mean calculated concentration (μg/ml) (n = 3)
2019032101 1467.57 1473.51
1479.52
1473.44
2019032102 1416.32 1414.80
1414.25
1413.84
2019032103 1472.06 1464.63
1461.69
1460.13
2019032104 1406.45 1411.67
1419.10
1409.47
2019032105 1418.18 1420.52
1422.18
1421.21
3 讨论
3.1 样品提取方法及脂质体破乳剂用量倍数的 选择
脂质体中主药的含量需采用适当的方法破坏脂质体双分子层，使药物释放出来，再用HPLC 法测定其含量。

用有机溶剂破乳是目前常用的破坏脂质体双分子层的方法。

吉西他滨肉豆蔻酸酯在非极性溶剂（如甲醇）中具有较好的溶解性，同时甲醇也为HPLC 法中常用的有机相，因此本实验选择甲醇作为溶剂，破乳的同时，也能将主药充分溶解提取，便于后续的含量测定。

脂质体破乳完全与否对准确测定脂质体中主药的含量至关重要。

破乳时有机溶剂加入倍数太低可能导致脂质体破坏不完全，药物提取不充分，测得含量偏低；有机溶剂加入倍数太高可能会导致主药被过量稀释，测得含量不准确，因此需要选择合适的破乳剂用量（倍数）。

在实验中我们设计了5、10、20、30、40、50和60 倍的破乳倍数，当破乳20 倍时，继续增加破乳倍数，测得含量不再增加且药物收率大于99%，表明破乳剂用量20 倍时，能破乳完全且能将主药充分溶解并提取，且又能准确定量检测。

因此，我们将最佳破乳剂用量倍数确定为20。

3.2 药物稳定性的影响因素
在本文的专属性实验过程中发现，吉西他滨肉豆蔻酸酯在酸、光和高温下不稳定，而吉西他滨肉
豆蔻酸酯脂质体在酸、光和高温下较稳定，表明脂质体对药物的包封包载能够保护药物免于某些条件的降解破坏，体现了脂质体具有稳定药物的优点。

同时，在建立的色谱条件下，主药色谱峰与破坏产生的降解产物色谱峰均能有效分离，说明本方法专属性良好。

本研究建立HPLC 法用于吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中吉西他滨肉豆蔻酸酯含量的测定，通过系统的方法学研究与验证，认为本方法操作简便、专属性好、准确度高，适合于吉西他滨肉豆蔻酸酯脂质体中主药的含量测定。

本方法对其他吉西他滨酯化物纳米制剂的含量测定具有参考价值。

参考文献
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Determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes by HPLC
LUO Fang, LI Yan, GUO Xiao-ru, WANG A-peng, XIA Gui-min
【Abstract】
Objective To establish an HPLC method for the quantification of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes. Methods HPLC method was used to determine the content of the principal agent in liposomes and systematic methodological verification was performed.
Results The method was validated: with a resolution of 2.242; linear, in the range of 5.52 - 116 μg/ml (r = 0.9999) and accurate, with the average recovery rate of 96.8% (RSD = 0.49%, n = 3), 99.7% (RSD = 0.15%, n = 3) and 99.8% (RSD = 0.50%, n = 3) at low, medium and high concentrations; precision, intra-day and inter-day precision reflected by the relative standard deviation (RSD) values of 0.28% (n = 6) and 0.55% (n = 6) respectively, robust under slight changes of flow rate (0.99 - 1.01 ml/min) and column temperature (28 - 32 ℃) with RSD of 1.19% (n = 9) and 0.66% (n = 9), respectively.
Conclusion A simple, selective, sensitive and robust HPLC method has been established for the determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes.
【Key words】HPLC; Determination; Validation; Dimyristoyl-gemcitabine; Liposome
Author Affiliations: Pharmaceutics Department, Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China
Corresponding Author: XIA Gui-min, Email: xiaguimin@
Chin Med Biotechnol, 2020, 15(2):144-151。