基因工程试卷2
2019届人教版 基因工程 单元测试2
基因工程单元测试学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．如图是抗虫棉的培育过程，有关该过程叙述错误的是（）A. 抗虫棉的抗虫性状不一定能稳定遗传B. 抗虫基因的插入不会改变受体细胞的染色体结构C. 受体细胞除去细胞壁更利于基因的导入D. 通过Ti质粒上的抗性基因筛选试管苗【答案】D【解析】以一个基因整合到染色体上为例，抗虫基因整合在一对同源染色体中的1条，转基因抗虫棉不一定是纯合子，故不一定稳定遗传，A正确；基因工程属于基因重组，基因对于染色体来说就是一个位点，不会影响染色体结构，B正确；植物细胞除去细胞壁后有利于外源基因的导入，C正确；通过Ti质粒上的抗性基因筛选受体细胞中是否含有重组质粒，并不是筛选试管苗，筛选试管苗是做抗虫性检测，故选D。
考点：本题考查基因工程的原理及技术，意在考查能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。
2．有关PCR，下列说法错误的是A．设计的引物要有两种B．设置循环变化的温度并由ATP为反应供能C．将不断消耗引物和原料D．原理是DNA双链复制，遵循碱基互补配对原则【答案】B【解析】PCR设计的引物要有两种, 将不断消耗引物和原料, 原理是DNA双链复制，遵循碱基互补配对原则, A、C、D正确；设置循环变化的温度由机器提供的热能，B错误。
【考点定位】 PCR3．牛奶中一般不含血清蛋白，今年新进的一批奶牛，牛奶中含血清蛋白，这批牛是（）A.转抗凝血酶基因牛B.转生长激素基因牛C.转α抗胰蛋白酶牛D.转血清蛋白基因牛【答案】D【解析】牛奶中本来不含血清蛋白，现在的牛奶中含有了血清蛋白，说明这批奶牛是转血清蛋白基因牛。
4．如下图是DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，下列选项中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是A. ①②③④B. ①③④②C. ①④②③D. ①④③②【答案】B【解析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端，因此作用于①；DNA聚合酶用于DNA分子的复制，能在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来，因此作用于③；DNA连接酶能在具有相同碱基末端的两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，因此作用于④；解旋酶能够将DNA分子的双螺旋解开，故作用于③，故B正确。
高二生物基因工程练习题
高二生物基因工程练习题基因工程是一种通过改变生物体的遗传信息来获得特定目标的技术方法。
它可以被应用于医学、农业、工业等领域，为人类带来巨大的影响和改变。
本文将介绍一些高二生物基因工程练习题，以帮助学生更好地理解和掌握这一知识点。
第一题：请设计一个基因工程实验，将人类胰岛素基因导入大肠杆菌中，并使大肠杆菌能够大量产生胰岛素。
解答：要将人类胰岛素基因导入大肠杆菌中，首先需要获得人类胰岛素基因的DNA序列。
可以通过分离人类胰岛素基因的mRNA，逆转录为cDNA，并进行PCR扩增得到完整的胰岛素基因。
接下来，需要将胰岛素基因与适当的表达载体连接。
选择适宜的限制酶对载体进行线性化，再与胰岛素基因进行连接，利用DNA连接酶使两者连接成一个完整的质粒。
接下来，将质粒导入大肠杆菌中。
可以通过热冲击、电穿孔或者转化等方法将质粒导入大肠杆菌中，并利用选择性培养基筛选出带有胰岛素基因的转化子。
最后，通过培养大肠杆菌，提取并纯化胰岛素。
可以通过机械方法破碎细胞壁，离心去除细胞器和细胞碎片，再利用层析等技术手段纯化出胰岛素。
第二题：基因工程技术在农业领域也有广泛应用。
请设计一个基因工程实验，增加作物的抗虫能力。
解答：要增加作物的抗虫能力，可以选择合适的抗虫基因，并将其导入作物的染色体中。
首先，选择具有抗虫能力的基因，如Bt基因。
Bt基因可以通过特定的细菌株提供，或者利用PCR技术合成。
然后，将抗虫基因与选择性标记基因进行连接，并将其插入适当的表达载体中。
选择性基因可以使转基因植物在筛选培养基上产生抗性，方便筛选。
将载体导入植物体细胞中。
可以利用冷冻法、冲击法或者农杆菌介导转化法等技术将载体导入植物体细胞。
最后，通过筛选培养基培养转基因植株，并进行抗虫性测试。
可以通过饲养害虫或者喷洒虫食物进行实验观察，比较转基因植株与野生型植株之间的虫害程度。
以上是两道高二生物基因工程练习题的解答。
通过这些实验题，学生不仅可以巩固对基因工程技术原理的理解，还能够培养实验设计和实施的能力。
人教版试题试卷基因工程及其应用 练习 2
6 .2 基因工程及其应用【巩固教材——稳扎稳打】1．在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于（）A．目的基因的提取和导入 B．目的基因的导入和检测C．目的基因与运载体结合和导入 D．目的基因的提取和与运载体结合2．下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是（）A．①② B．②③ C．③④ D．②④3．DNA连接酶的主要功能是（）A．DNA复制时母链与子链之间形成的氢键B．粘性末端碱基之间形成的氢键C．将两条DNA末端之间的缝隙连接起来D．将碱基、脱氧核糖、磷酸之间的键连接起来4．下列关于运载体的叙述中，错误的是（）A．与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子B．对某种限制酶而言，最好只有一个切点，但还要有其他多种限制酶的切点C．目前最常用的有质粒、噬菌体和动植物病毒D．具有某些标记基因，便于对其进行切割【重难突破——重拳出击】5．采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导人细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房进入受精卵（）A．①② B．②③C．③④ D．④①6．植物学家在培育抗虫棉时，对目的基因作了适当的修饰，使得目的基因在棉花植株的整个生长发育期都表达，以防止害虫侵害。
这种对目的基因所作的修饰发生在（）A．内含子 B．外显子 C．编码区 D．非编码区7．质粒是基因工程最常用的运载体，下列有关质粒的说法错误的是（）A．质粒不仅存在于细菌中，某些病毒也具有B．根瘤菌、圆褐固氮菌的固氮基因存在于质粒上C．质粒为小型环状DNA分子，存在于核(区)外的细胞质基质中D．质粒能够在宿主细胞中稳定保存，并在宿主细胞内复制8．70年代基因工程技术刚兴起的时候，都是以微生物作为实验材料，且必须在“负压”(低于外界的大气压)的实验室里操作。
复习题 2基因重组与基因工程
复习题 2 基因重组与基因工程一、A型题1.实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是：（ A ）A．DNA连接酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA聚合酶ⅡD．DNA聚合酶ⅢE．反转录酶2.用来鉴定DNA的技术是：（ B ）A．Northern印迹B．Southern印迹C．Western印迹D．亲和层析E．离子交换层析3.下列那项不是重组DNA技术中常用的工具酶：（ D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶C．DNA聚合酶Ⅰ D．RNA聚合酶E．反转录酶4.关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为Ⅱ酶B．限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端C．识别的核苷酸序列个数可以是6个或8个D. 识别的序列一般具有回文结构E．识别的DN A为单链5.关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）A．基因工程也称基因克隆B．只有质粒DNA可作为载体C．重组体DNA转化或转染宿主细胞D．需获得目的基因E．需对重组DN A进行纯化、筛选6.有关质粒的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．小型环状双链DNA分子B．可小到2～3Kb大到数百个KbC．能在宿主细胞中独立自主地进行复制D．常含有耐药基因E．只有一种限制性核酸内切酶切口7．下列哪项不是重组DN A的连接方式？（C ）A．粘性末端与粘性末端的连接B．平端与平端的连接C. 粘性末端与平端的连接D．人工接头连接E．同聚物加尾连接8．DNA克隆不包括下列哪项步骤？（ E ）A．选择一个适合的载体B．限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因C．用连接酶连接载体DNA和目的DNA，形成重组体D．用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌E．重组体用融合法导入细胞9．基因重组是指DNA分子的：（ A ）A．共价连接B．氢键连接C．离子键连接D．交换E．退火10．在分子生物学中，重组DNA又称为：（ D ）A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.基因工程E.DNA工程11．基因工程中，不常用到的酶是（ E ）A．限制性核酸内切酶 B．DNA聚合酶C．DNA连接酶D．逆转录酶E．DNA解酶12．能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为：（ B ）A. DNA内切酶 B．限制性内切核酸酶C．非限制性内切核酸酶 D．限制性外切核酸酶E．非限制性外切核酸酶13．cDNA是指：（ A ）A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB．在体外经反转录合成的与DNA互补的DNAC．在体外经反转录合成的与RNA互补的RNAD．在体内经反转录合成的与RNA互补的RNAE．在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA14．质粒的分子结构是：（ A ）A．环状双链DNA B．环状单链DNA C．环状单链RNAD．线状双链DNA E．线状单链DNA15．聚合酶链式反应常常缩写为：（ E ）A．PRC B．PER C．PDR D．BCR E．PCR16．用于PCR反应的酶是：（ E ）A．DNA连接酶B．碱性磷酸酶C．逆转录酶D．限制性内切核酸E．Taq DNA聚合酶17．基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是：（ C ）A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶18．α互补筛选属于：（C ）A．抗药性标志筛选B．酶联免疫筛选 C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选19．确切地讲，cDNA文库包含：（ E ）A．一个物种的全部基因信息B．一个物种的全部RNA信息C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息D．一个生物体组织或细胞的全部RNA信息E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息20．下烈描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：（D ）A．小型环状双链DNA分子B．携带有某些耐药基因C．在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞D．具有自我复制能力E．获得目的基因21.基因工程中常用限制性内切酶Ⅱ的识别序列，正确的说法是：（ E ）A.聚胞苷酸B.聚腺苷酸C.6或8个任意核苷酸D.4或6个任意核苷酸E 具有回文结构22．基因工程的基本过程不包含：（ E ）A.DNA重组体的形成及转化B.限制酶的切割C.载体及目的基因的分离D.重组体的筛选与鉴定E.重组体的序列分析23.有关理想质粒载体的特征，正确的是：（ B ）A.其复制受宿主控制B.含有多种限制性内切酶的单一切点C．含有同一限制酶的多个切点D．为线性单链DNAE．不含耐药基因24.下列那个物质一般不用作基因工程的载体：（ C ）A．噬菌体B．质粒C．大肠杆菌基因组D．反转录病毒DNAE．人工酵母染色体25.基因工程的操作程序可简单的概括为：（E ）A．将重组体导入宿主细胞并筛选B．限制酶的应用C．将载体和目的基因接合成重组体D．目的基因和载体的分离提纯与鉴定E．分、切、接、转、筛26.基因表达的多级调控不包括：（ A ）A．DNA复制B．转录起始C．转录后加工D. 翻译起始E. 翻译后加工27.下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是：（ C ）A. 人工合成DNAB．从mRNA合成cDNAC. 从真核生物染色体DNA中直接分离D．从基因文库中获取E．从细菌基因组DNA中直接分离28.Ⅱ型限制性内切酶是：（ B ）A．有内切酶和甲基化酶活性B.仅有内切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C．有外切酶和甲基化酶活性D．限制性识别非甲基化的核苷酸序列E．仅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供29.基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因，这是为了便于：（ D ） A．外源基因插入质粒B.宿主菌的生物繁殖C．质粒的转化D．带有目的基因的宿主菌的筛选E．目的基因的表达30.有关目的基因与载体连接的叙述错误的是：（ E ）A.可以同一限制酶切割产生粘性末端连接B.平末端切口可采用“尾接法”C．平末端切口可直接连接D．均需DNA连接酶参与E．不同限制型内切酶切割不能连接1．基因工程的单元操作顺序是（ A ）Ａ．酶切，连接，转化，筛选，验证Ｂ．酶切，转化，连接，筛选，验证Ｃ．连接，转化，筛选，验证，酶切Ｄ．验证，酶切，连接，筛选，转化Ｅ．酶切，连接，筛选，转化，验证2．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是（D、E ）Ａ．GAAACTGCTTTGAC Ｂ．GAAACTGGAAACTGＣ．GAAACTGGTCAAAG Ｄ．GAAACTGCAGTTTCＥ．GAAACTGCAGAAAG3．T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（ D ）Ａ．2' -OH 和5' -P Ｂ．2' -OH 和3' -PＣ．3' -OH 和2' -P Ｄ．3' -OH 和5' -PＥ．5' -OH 和3' -P4．噬菌体l-DNA 体外包装的上下限是天然l-DNA 长度的（D ）Ａ．25 - 50 % Ｂ．50 - 100 %Ｃ．75 - 100 % Ｄ．75 - 105 %Ｅ．100 - 125 %8．分子杂交的化学原理是形成（E ）Ａ．共价键Ｂ．离子键Ｃ．疏水键Ｄ．配位键Ｅ．氢键9．促红细胞生长素（EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（ E ）Ａ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用Ｂ．人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定Ｃ．大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活Ｄ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感Ｅ．大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化10．鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（ A ）Ａ．原核细菌Ｂ．酵母菌Ｃ．丝状真菌Ｄ．植物Ｅ．人类11．cDNA第一链合成所需的引物是（D ）Ａ．Poly A Ｂ．Poly CＣ．Poly G Ｄ．Poly T Ｅ．发夹结构12．cDNA法获得目的基因的优点是（ B ）Ａ．成功率高Ｂ．不含内含子Ｃ．操作简便Ｄ．表达产物可以分泌Ｅ．能纠正密码子的偏爱性13．人工合成DNA 的单元操作包括（ E ）I 去保护II 偶联III 封端IV 氧化Ａ．I + II Ｂ．II + IVＣ．I + II + III Ｄ．II + III + IV Ｅ．I + II + III + IV二、B型题A．抗药性筛选B．分子杂交筛选C．RNA反转录D．免疫学方法 E．体外翻译1．用于鉴定质粒是否转化的一般方法是：（ A ）2．用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是：（ B ）3．利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞价方法是：（D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶 C．反转录酶D. Taq DNA聚合酶E．碱性磷酸酶4.识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：（ A ）5.用于PCR反应的酶是：（ D ）6.将目的基因与载体进行拼接的酶是：（ B ）A．转染B．转化C．感染D．转导E．转位7．以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是：（ B ）8．以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是：（D ）9．以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是：（ C ）A.94℃B.85℃C.50℃D.72℃E.100℃10.PCR变性温度一般为：（ A ）11.PCR退火温度一般为：（C ）12.PCR延伸温度一般为：（ D ）A分 B 切 C接 D 转 E 筛13．获取目的基因属于基因工程中的步骤是（ A ）14.DNA连接酶用于基因工程中的步骤是（ C ）15.DNA重组子转化宿主细胞的步骤是（ D ）16.限制性内切酶切割目的基因和载体的步骤是（ B ）17.对含有DNA重组体的宿主细胞进行筛选的步骤是（ E ）三、C型题A、含有该生物的全部基因B、含有该生物的结构基因C、两者都是D、两者都不是1、基因组文库（ A ）2、cDNA文库（ B ）A、需要逆转录酶B、需要限制性内切酶C、两者都是D、两者都不是3、建立cDNA文库（ C ）4、建立基因组文库（ B ）A、连接酶B、逆转录酶C、两者都是D、两者都不是5、建立cDNA文库需要（C ）6、建立基因组文库需要（ A ）四、X型题1.可用于基因工程载体的DNA分子有：( BDE )A．染色体DNA B．病毒DNA C．细菌DNAD．噬菌体DNA E．质粒DNA2.重组DNA技术的基本过程包括：( ACDE )A．目的基因的获取B．PCR反应C．克隆载体的构建D．目的基因与载体的连接E．重组体分子导入受体菌3.基因克隆又称为：( AC )A．重组DNA B．重组RNA C．DNA克隆D．RNA克隆E．蛋白质复制4.组成PCR反应体系的物质包括：( BD )A．RNA引物B．Taq DNA聚合酶C．RNA聚合酶D．DNA模板E．ddNTP5.对于重组体的筛选，属于直接选择法的是：( BCD )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．抗药性标志筛选6.对于重组体的筛选，属于非直接选择法的是：( AE )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．酶联免疫筛选7.限制性核酸内切酶切割DNA时可产生：( ABCE )A．5’粘性末端B．3’粘性末端C．平末端D．单链缺口 E．粘性末端8.基因工程中目的基因的来源有：( ABCDE )A．化学合成B．PCR合成C．cDNA文库D．基因组文库E．组织细胞中染色体DNA直接提取9.基因工程中外源性基因又称为：( ABD )A．目的基因 B．目的DNA C．目的RNAD．target DNA E．外源RNA10．重组DNA技术中常用的工具酶有：( ABCDE )A．限制性核酸内切酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA连接酶D．反转录酶E．末端转移酶11．作为基因工程的载体必须具备的条件是：( ABCD )A．能独立自主复制B．易转化C．易检测（含有抗药性基因等）D．具有限制性内切核酸酶的位点E．易提取获得五、填空题1．基因工程的一个理想的载体必须具备的条件有__至少有一个复制起点____、___有克隆位点、具备转化的功能、遗传标记基因___、___具有较高的装载能力___。
基因工程试题
基因工程试题基因工程是一门研究如何改变、操控和利用生物体的基因结构和功能的学科。
它可以通过改变生物体的基因组，从而改变其遗传性状，并对其进行精确的调控。
基因工程技术的广泛应用在医学、农业、环境、工业等领域具有重要作用。
下面是一些关于基因工程的试题，供大家参考和学习。
试题一：基因编辑技术基因编辑技术是一种通过直接修改生物体基因组DNA序列来实现精确遗传编辑的技术，请简要介绍CRISPR-Cas9系统及其应用。
试题二：转基因作物安全性评价转基因作物是指通过基因工程技术将外源基因导入植物的基因组中，使其获得一定的优势特性。
请简要介绍转基因作物的安全性评价内容和方法。
试题三：基因药物的开发与应用基因药物是通过基因工程技术制备的一类新型药物，具有针对性强、疗效持久等特点。
请以人类胰岛素为例，简要介绍基因药物的开发和应用。
试题四：基因工程在环境修复中的应用基因工程技术在环境修复中有着重要地位，可以利用生物体修复受到污染的土壤、水体等环境。
请以重金属污染土壤修复为例，简要介绍基因工程在环境修复中的应用。
试题五：基因工程在动物育种中的应用基因工程技术在动物育种中有着广泛的应用，可以加速优良基因的传播和培育出具有特定优势的新品种。
请以瘦肉型猪育种为例，简要介绍基因工程在动物育种中的应用。
试题六：基因工程伦理问题基因工程技术的发展也带来了一系列伦理问题，如基因改造的人类是否具有平等的生存权利等。
请简要讨论基因工程伦理问题，并提出你自己的观点。
试题七：基因工程在抗疾病治疗中的前景基因工程技术在抗疾病治疗中具有广阔的前景，包括基因治疗、基因诊断等。
请简要介绍基因工程在抗疾病治疗中的前景和应用。
试题八：基因工程与传统育种的比较基因工程技术与传统育种方法相比，具有许多优势和特点。
请以粮食作物的改良为例，比较基因工程技术和传统育种方法在作物改良中的差异和优势。
以上是关于基因工程的一些试题，希望能够帮助你了解和学习基因工程技术的相关知识。
某大学《基因工程》课程考试试卷(含答案)
某大学《基因工程》课程考试试卷一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端2、基因工程3、质粒的不相容性4、基因组文库5、克隆(clone)6、电击转化法7、重组PCR8、限制性酶切图谱法9、质粒10、重组率的定义二、填空题（共10小题，每小题1分，共10分）1、在基因克隆中碱性磷酸单酯酶的主要用途有：A、在用P标记DNA 5′端之前；B、在DNA重组技术中，去除DNA片段的，可防止酶切后的载体的与。
2、载体的功能是运送高效转入；为外源基因提供能力或能力；为外源基因的或提供必要的条件。
三、简答题（共10小题，每小题4分，共40分）1、载体应具备的条件是什么？2、受体细胞应具备的条件？3、蓝白斑筛选原理是什么？4、PCR克隆目的基因的基本程序是什么？5、酵母菌表达外源基因的优势是什么？6、营养缺陷型的哺乳动物受体细胞的遗传标记是什么？7、λ-DNA作为载体的优点是什么？8、巴斯德毕赤酵母表达系统特征及优势是什么？9、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？10、分泌型目的蛋白表达系统的构建策略是什么？四、论述题（1-2每小题8分，3-4题每小题12分，共40分）1、论述PCR原理及引物设计的基本原则。
2、强化转录终止的必要性是什么？3、请论述λ-DNA载体的构建策略是什么。
4、请论述植物基因工程的共整合转化程序和二元整合转化程序及二元整合转化程序的特征。
某大学《基因工程》课程考试试卷答案一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端因酶切位点在两条DNA单链上不同（对称）酶切后形成的具有互补碱基的单链末端结构，酶切产生的两个粘性末端很容易通过互补碱基的配对而重新连接起来。
2、基因工程指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
高中生物高考考点81 基因工程(二)-备战2022年高考生物考点一遍过
1．基因工程的操作过程与应用（1）基因工程的操作步骤（2）基因工程的应用：培育转基因植物和转基因动物，生产基因工程药物，进行基因治疗。
（3）目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞到受体细胞染色体的DNA上→表达精卵发育→获得具有新性状的动物混合→感受态细胞吸收DNA分子（4）基因治疗与基因诊断的不同点原理操作过程进展基因治疗基因表达利用正常基因导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗(疾病)临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况临床应用2．蛋白质工程（1）流程图写出流程图中字母代表的含义：A．转录，B．翻译，C．分子设计，D．多肽链，E．预期功能。
（2）结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。
（3）应用：主要集中应用于对现有蛋白质进行改造，改良生物性状。
学科&网考向一目的基因的获取及基因表达载体的构建1．利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素，下列相关叙述正确的是A．人和大肠杆菌在合成胰岛素时，转录和翻译的场所都是相同的B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C．通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌D．选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高【参考答案】D【试题解析】人是真核生物，大肠杆菌是原核生物，真核细胞转录在细胞核内，原核细胞在拟核中，A 错误；不同的限制酶识别不同的核苷酸序列，B错误；通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌或虽已导入受体，但没有表达，C错误；D.利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素时，选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高，D正确。
衡水中学2021届高三生物一轮复习-专题37 基因工程(二)
变式训练-5
（2016·江苏高考）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图 2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。 请回答下列问题：
变式训练-5
(1)若 BamHⅠ酶切的DNA末端与 BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部 位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶________(填“都 能”“都不能”或“只有一种能”)切开。 (2)若用 Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片 段。
。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有 和 ，
其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
。
答案
（1）Sau3AⅠ；两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端； （2）甲和丙；甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在 终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录； （3）E·coliDNA连接酶；T4DNA连接酶；T4DNA连接酶。 解析： （1）分析图解可知，限制酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割后形成的黏性末端 相同，因此经BamHⅠ酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被 Sau3AⅠ酶切后的产物连接； （2）在基因表达载体中，启动子位于目的基因的首端，终止子应位于目 的基因的尾端，这样的基因才能表达，图中甲和丙均不符合，所以不能 在宿主细胞中表达目的基因产物； （3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有 E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连接黏性 末端又能连接平末端。
答案
D
解析：
用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因，目的基因的两端将形成不同的粘性末 端，若用BglⅡ和Sau3AⅠ切割图乙所示质粒，质粒的两端也将形成这样 两种相同的粘性末端，它们可构成重组DNA分子，A正确；
宁波大学基因工程考研题库-精
第一章绪论1.分子生物学要研究的主要内容是（）（）（）参考答案是：基因工程；基因表达调控研究；结构分子生物学第二章DNA结构一、填空题(6分)1.天然存在的DNA分子形式为右手（）型螺旋参考答案是：B2.Cot曲线方程为：（）参考答案是：C/C0=1/（1+K2C0t）3.DNA复性必须满足两个条件：（）（）参考答案是：盐浓度必须高；温度必须适当高4.DNA 携带有两类不同的遗传信息，即（）信息和（）信息。
参考答案是：基因编码；基因选择性表达二、判断题(12分)1.拓扑异构酶I解旋需要ATP酶。
参考答案是：不正确2.假基因通常与它们相似的基因位于相同的染色体上。
参考答案是：不正确3.水蜥的基因组比人的基因组大。
参考答案是：正确4.一段长度100bp的DNA，具有4100种可能的序列组合形式。
参考答案是：正确5.单个核苷酸通过磷酸二酯键连接到DNA骨架上。
参考答案是：正确6.在高盐和低温条件下由DNA单链杂交形成的双螺旋表现出几乎完全的互补性，这一过程可看作是一个复性（退火）反应。
参考答案是：不正确7.生物的遗传密码只存在于细胞核中参考答案是：不正确8.Top I解旋需要ATP参考答案是：不正确9.琼脂糖凝胶电泳—EBr电泳法分离纯化超螺旋DNA原理是根据EBr可以较多地插入到超螺旋DNA 中，因而迁移速度较快参考答案是：不正确10.高等真核生物的大部分DNA是不编码蛋白质的参考答案是：正确11.Cot1/2与基因组复杂性有关参考答案是：正确12.Cot1/2与基因组大小有关参考答案是：正确三、单选题(4分)1.DNA变性是由于（D）A 磷酸二酯键断裂；B 多核苷酸解离；C 碱基的甲基化修饰；D 互补碱基之间氢键断裂；E 糖苷键断裂；2.1953年，Watson 和Crick提出（A）A 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋；B DNA的复制是半保留的，常常形成亲本-子代双螺旋杂合链；C 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码；D 遗传物质通常是DNA而非RNA。
2022版高考生物一轮复习第十单元现代生物科技专题专题二十五基因工程2试题含解析
专题二十五基因工程考点1 基因工程的基本工具与操作程序1.[2021某某某某阶段训练,12分]超氧化物歧化酶(SOD)具有抗衰老作用。
研究人员培育了能合成SOD的转基因酵母菌。
结合下图回答下列问题。
注:Hin d Ⅲ和Apa LⅠ是两种限制酶,箭头表示酶的切割位置。
(1)将图中的重组DNA分子用Hin d Ⅲ和Apa L Ⅰ完全酶切后,可得到种DNA片段。
(2)作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因,必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活,为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌,所使用的培养基(填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶,理由是。
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为。
为了确定受体细胞中SOD基因是否转录,可用标记的作探针与从受体细胞中提取的RNA进行分子杂交检测,分子杂交的原理是。
(4)利用蛋白质工程获得活性更高的SOD时,需根据所设计蛋白质的结构推测其氨基酸序列,最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经获得所需的基因。
2.[2020某某示X高中联考,15分]南极某种鱼含有抗冻基因,如图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图。
请回答下列相关问题:(1)利用①过程的方法获取目的基因需要用到酶。
②过程中常需要用到的工具酶是。
(2)通过①、②过程成功构建的重组质粒,除目的基因外,还应该具备等。
(3)将目的基因导入番茄体细胞的方法是利用农杆菌的作用,其原理是。
(4)要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中表达出相应的蛋白质,可以采用方法,除进行分子检测外,有时还需要进行的鉴定。
考点2 基因工程的应用与蛋白质工程3.[2021某某某某质量检测,12分]植物基因工程技术的发展为人类更好地利用盐碱地提供了可能。
请回答下列问题:(1)欲培育转基因耐盐水稻,需要完成的基因工程的核心步骤是,一个基因表达载体的组成,除了目的基因和复制原点外,还必须有、以及标记基因。
(2)用PCR技术扩增耐盐基因的原理是,目前将耐盐基因导入双子叶植物最常用的方法是。
基因工程试题库讲解
《基因工程》试题库（一）一、选择题（单选或多选）（每题2分，共计20分）1.下面哪一种特性不是密码所具有的? ( )(a)偏爱性(b)简并性(c)重叠性(d)连续性2. 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达3. 用菌落杂交法筛选重组体时，( )(a)需要外源基因的表达(b)不需要外源基因的表达(c)要根据克隆基因同探针的同源性(d)上述说法都正确4. DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍?( )(a)6倍(b)10倍(c)40倍(d)240倍(c)1000倍10000倍5. 对于一个特定的起点，引发体的组成包括：( )(a)在起始位点与DnaG引发酶相互作用的一个寡聚酶(b)一个防止DNA降解的单链结合蛋白(c)DnaB解旋酶和附加的DnaC，DnaT，PriA等蛋白(d)DnaB，单链结合蛋白，DnaC，DnaT，PriA蛋白和DnaG引发酶(e)DnaB解旋酶，DnaG引发酶和DNA聚合酶Ⅲ6. 下面哪些是在反转录病毒中发现的基因?( )(a)gag(b)pol(c)env(d)OnC7. 下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组?( )(a)球蛋白基因(b)组蛋白基因(c)rRNA基因(d)肌动蛋白基因8. 以下关于抗体类型转变的叙述哪些是正确的?( )(a)每种重链具有不同的功能(b)类型转变的次序按染色体上重链排列顺序进行(c)一旦一种类型转换发生，其他的转换将不再进行(d)也可通过可变剪接改变重链9. 下列哪些转录因子含有TBP?( )(a)TFⅡB (b)TFⅢA (c)SLl (d)TFⅡD (e)TFⅢB (f)UBFl 10．剪接小体的组装( )(a)按有序的途径一步步完成(b)涉及snRNP与水溶性蛋白(即不是任何snRNP组分的蛋白)(c)不需要ATP(d)伴随着多次snRNP的重组合(e)以上都正确二、判断题（每题1分，共计10分）1．一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
大肠杆菌基因工程 (2)
大肠杆菌基因工程引言大肠杆菌(Escherichia coli)是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性菌，它可以在动植物肠道中找到。
由于其生长快速、易于培养和转化，大肠杆菌成为了基因工程研究中最重要的模式生物之一。
大肠杆菌基因工程是通过改变大肠杆菌的遗传特征，实现对其功能的改造和优化，从而达到生产特定产物或解决特定问题的目的。
大肠杆菌基因工程的原理基因传递与插入大肠杆菌基因工程的核心在于将目标基因导入到大肠杆菌中。
目前常用的方法有以下几种：1.转化(transformation)：通过将外源DNA直接导入大肠杆菌细胞内，使其在细胞内复制和表达。
2.电转化(electroporation)：利用强电场将质粒DNA引入细胞内，使其与大肠杆菌细胞内的DNA重组。
3.病毒介导的转染(viral-mediated transduction)：使用病毒载体将目标基因导入大肠杆菌细胞内。
4.转座子介导的DNA转移(transposon-mediated DNAtransfer)：利用转座子将目标基因插入到大肠杆菌染色体的特定位点上。
基因表达与调控在大肠杆菌基因工程中，外源基因导入之后需要进行表达和调控，以产生所需的受体蛋白或产物。
常用的表达系统包括启动子-启动子区域-编码序列-终止子的结构。
其中，启动子可以选择适当的促进剂或抑制剂进行调节，以控制基因的表达水平和时机。
应用案例生物医药领域在生物医药领域，大肠杆菌基因工程被广泛应用于生产重组蛋白药物。
通过引入外源基因，大肠杆菌可以高效地合成重组蛋白，并通过分离和纯化得到高纯度的药物。
例如，利用大肠杆菌表达系统，可以生产出重组人胰岛素、生长激素等重要药物。
环境治理领域大肠杆菌基因工程还可以应用于环境治理领域。
例如，通过改造大肠杆菌的基因组，使其具有降解有机污染物的能力，可以用于处理工业废水和土壤污染。
此外，大肠杆菌的工程还可以用于制造生物能源，例如利用大肠杆菌产生生物柴油或生物氢。
基因工程习题及答案.doc
基因工程习题及答案.doc1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（B ） A ? I 类限制酶 B. II 类限制酶111类限制酶 D.核酸内切酶2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是（BA.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B. 它们的识别序列完全相同。
C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D. E. 两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3.多数限制酶消化DNA 的最佳温度是37 °C B. 30 °C C. 25 °C D. 16 °C E. 33 °C4. 下列关于限制酶的叙述错误的是（5.A. B.C.D.E. ［类限制酶反应需要Mg2+、 II 类限制酶反应需要Mg2+、111类限制酶反应需要Mg2+、 ATP 和S-腺昔蛋氨酸。
ATP oATP ， S-腺昔蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
I 、III 类限制酶对DNA 有切割和甲基化活性，II 类限制酶对DNA 只有切割活性而无甲基化活性。
TT 类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA 上识别6bp 的切割概率为（D ）A. 1/44C. 1/64D. 1/46E. 1/1066.多数II 类限制酶反应最适PH 是（C ）A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4T07.下列关于限制酶反应的说法错误的是（D ）A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嗜嚏、腺噂吟或尿嗜嚏被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性DNA 和超螺旋DXA 底物的切割活性是有明显差异的。
8. C. D. E.有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
BSA 对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA oII 类限制酶反应中必须的阳离子是（C ）单选题E. RNAase有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
基因工程-基因表达载体构建(2)
（4）、检测目的基因是否进入受体细胞可以用 DNA分子杂交 方法，用 DNA与RNA杂交 方法检测目的基因是否转录，用 免疫（ 抗原抗体反应 ）法检测目的基因是否表达。另外也 让虫子啃食棉叶，观察虫子的存活状态。 可进行个体水平检测。如 4、基因拼接成功的原因 DNA都是双螺旋结构，基本组成单位都是脱 ；
（3）将目的基因导入受体细胞：基因工程中常用的受体细胞 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞 受精卵 等。动物常把 细胞作为受体细胞。导入植物细胞的 方法有 等；农杆菌转化 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 染色体DNA 法可以将目的基因导入细胞并把其整合到受体细胞的 显微注射法 上，导入动物细胞的方法有 ；如果运载体是质 CaCl2 处理，以增大细菌 细胞壁 粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用 的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的 基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制， 由于 细菌繁殖的速度非常 ，在很短的时间内就能够获 快 得大量的目的基因。
途径 方法
供体细胞中的DNA 中直接分离基因 鸟枪法
供体细胞中的DNA ↓限制酶 许多DNA片段 ↓载入 运载体 ↓导入 受体细胞 ↓ 外源DNA扩增, 产生特定性状 ↓分离 目的基因
人工合成基因（真核细胞） 反转录法
目的基因mRNA ↓反转录 单链DNA ↓合成 双链DNA(即目的基因)
根据已知氨基酸 序列合成DNA
氧核苷酸且遵循碱基互不配对原则
转基因表达成功的原因是生物 共用一套遗传密码 。 基因工程的意义： 。 目的性强；克服远源杂交不亲和的障碍。
实例：利用大肠杆菌生产人的胰岛素简要过程：
胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺 中提取，1000Kg胰腺只能提取40-50g的胰岛素，其产量之低和价格之高可 想而知。能否用大肠杆菌生产人的胰岛素？如果能，如何实现？
高中生物 阶段质量检测(六)从杂交育种到基因工程 生物进化理论2高一2生物试题
化钝市安居阳光实验学校从杂交育种到基因工程现代生物进化理论(时间：60分钟；满分：100分)一、选择题(每小题2.5分，共50分)1．下列哪项不属于拉马克的进化观点( )A．用进废退 B．获得性遗传C．环境改变引起生物变异 D．自然选择决定进化方向2．下列说法符合达尔文自然选择学说的是( )A．生存斗争仅指种内斗争B．不遗传的变异在进化上是有意义的C．生存斗争是生物进化的动力D．生物的变异决定生物进化的方向3．育种专家用高秆抗锈病水稻与矮秆不抗锈病水稻杂交，培育出了矮秆抗锈病水稻，这种水稻出现的原因是( )A．基因突变 B．基因重组C．染色体变异 D．环境条件的改变4．基因工程育种和诱变育种的原理分别是( )A．基因突变B．基因重组和基因突变C．染色体变异D．基因突变和染色体变异5．育种专家采用诱变育种的方法改良某些农作物的原有性状，其原因是诱变育种( )A．提高了后代的出苗率B．提高了后代的遗传稳定性C．产生的突变大多是有利的D．能提高突变率以供育种选择6．(北京高考)安第斯山区有数十种蝙蝠以花蜜为食。
其中，长舌蝠的舌长为体长的1.5倍。
只有这种蝙蝠能从长筒花狭长的花冠筒底部取食花蜜，且为该植物的唯一传粉者。
由此无法推断出( )A．长舌有助于长舌蝠避开与其他蝙蝠的竞争B．长筒花可以在没有长舌蝠的地方繁衍后代C．长筒花狭长的花冠筒是自然选择的结果D．长舌蝠和长筒花相互适应，共同(协同)进化7．下列关于生物多样性的叙述不正确的是( )A．生物界的丰富多彩，起控制作用的是DNA的多样性B．DNA分子结构的多样性主要表现为4种碱基配对方式的多样性C．生物界的多样性是由蛋白质的多样性体现的D．生物多样性包括基因多样性、物种多样性和生态系统多样性8．下列符合现代生物进化理论的叙述是( )A．物种的形成可以不经过隔离B．生物进化过程的实质在于有利变异的保存C．基因突变产生的有利变异决定生物进化的方向D．自然选择通过作用于个体而影响种群的基因频率9．(海南高考)关于现代生物进化理论的叙述，错误的是( )A．基因的自发突变率虽然很低，但对进化非常重要B．不同基因型的个体对环境的适应性可相同，也可不同C．环境发生变化时，种群的基因频率可能改变，也可能不变D．同一群落中的种群相互影响，因此进化的基本单位是群落10．(北京高考)为控制野兔种群数量，澳洲引入一种主要由蚊子传播的兔病毒。
基因工程2
PC R 的基本反应过程包括：变性、退火、延伸三个阶段。（5分）
需要具备的反应条件包括：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的
D NA 引物（约20 个碱基左右）。b、具有热稳定性的酶如：T a g DN A 聚合酶。c、
6、RT -PC R :先用逆转录酶作用于m RN A ，以寡聚dT 为引物合成c D NA 第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PC R
7、I n s e r t i na c t i on :即插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源D NA 片段插入该位点，则插入的外源D NA 片段将破坏原有基因的读码框，往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达，形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。
27 .基因敲除：基因敲除是向正常生物个体内引入某个突变的基因位点而选择性地使某特定基因功能失活的技术.
28 ．载体：v e c to r ，能在连接酶的作用下和外源D NA 片段连接并运送D NA 分子进入受体细胞的D NA 分子。
29 ．不相容性：i nc om pa t i bi l it y ，是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒不能共存于同一宿主细胞内。
⑶D NA 的甲基化程度。
⑷酶切反应的温度与时间。
⑸D NA 分子的构型。
⑹限制性核酸内切酶的反应缓冲液。
四、问答题
1试述5′R AC E 技术原理和方法
PC R 用于扩增代表mR NA 转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域的部
分子生物学与基因工程试卷库(2)
分子生物学与基因工程试题库（2）一、选择题(单选或多选)（每题2分，共计20分）1.锌指蛋白与锌的结合( )(a)是共价的(b)必须有DNA的存在(c)通过保守的胱氨酸和组氨酸残基间协调进行(d)位于蛋白质的α-螺旋区域2. 剪接小体是( )(a)由多种snRNP组成的结构(b)大小为40S一60S(c)一种在拼接中起作用的结构(d)以上都不正确(e)RNA加工的一种形式3. 氨酰tRNA分子同核糖体结合需要下列哪些蛋白因子参与?( )(a)EF-G (b)EF-Tu (c)EF-Ts (d)eIF-2 (e)EF-14. 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( 。
)(a)A．Komberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock5. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )是不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制—修饰系统6. T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E．coli中分离的，这种连接酶( )(a)催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源(b)既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接(c)是一种单肽酶，分子量为74kDa(d)既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接7. 线性质粒复制的引物来自于( )(a)细胞中合成的小分子RNA(b)自身末端的端粒序列(c)外加的寡聚DNA(d)自身断裂的小分子DNA8. 限制性内切核酸酶EcoRI在野生型的丸噬菌体DNA中有5个切点、HindⅢ有7个切点，BamHI也有5个切点。
调整这些酶切位点的数量，主要通过( )(a)体内突变 (b)完全酶切后连接(c)部分酶切 (d)先用甲基化酶修饰后再酶切9. 从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是：( )(a)抑制核酸酶的活性(b)保护DNA，防止断裂(c)加速蛋白质变性(d)有利于细胞破碎10. 重叠群(contig)是一群克隆，在这个克隆群体中各个体( )(a)相互之间重叠(b)都是来自不同生物的克隆(c)插入片段位于不同染色体的不同区段(d)位于同一染色体的不同区段二、判断题（每题1分，共计10分）1．T4DNA连接酶和E．coli连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。
基因工程2简答题
一、名词解释：载体：在基因工程操作中，把能携带外源DNA进入受体细胞的DNA分子。
多克隆位点（MCS）：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制性核酸内切酶酶切位点的ＤＮＡ片段。
COS位点：当λDNA进入细菌细胞后，便迅速通过黏性末端配对形成双链环状的DNA分子，这种由黏性末端结合形成的双链区段称为cos位点。
PCR技术：是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。
是利用两种寡核苷酸引物，分别与双链DNA片段的两端互补，形成DNA聚合酶反应中的模板和引物的关系，这是PCR技术的核心。
PCR聚合酶反应体系的一些重要条件包括：模板、一对寡核苷酸引物、4种底物dNTP和Tap DNA 聚合酶。
反应分为3步：双链模板DNA变性、退火和链的延伸。
1 U 核酸内切酶的酶活性：在最佳反应条件下反应1 小时，完全水解1 mg 标准DNA所需的酶量。
同S-D序列：含有一个启始密码子和一段同核糖体16SRNA3’末端碱基互补的序列。
原噬菌体：整合到细菌染色体的噬菌体DNA称为原噬菌体，随细菌的染色体复制而复制。
粘性末端：当一种限制性内切酶在一个特异性的碱基序列处切断DNA时，就可在切口处留下几个未配对的核苷酸片断，即5’突出。
这些片断可以通过重叠的5‘末端形成的氢键相连，或者通过分子内反应环化。
因此称这些片断具有粘性，叫做粘性末端。
平头末端：当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口是平整的，这样的切口叫平末端。
同位酶：指来源于不同微生物的酶，能识别相同的序列，切割方式不同或相同，这些酶称为~。
同裂酶：指能识别位点与切割位点均相同的不同来源的酶称为~。
同尾酶：指来源和识别序列均各不相同，但切割后产生相同的粘性末端的酶，称为~。
启动子：指一段可以被RNA聚合酶识别，并使基因进行转录的DNA序列。
终止子：指给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列。
信号肽：质粒（plasmid）：指独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。
基因工程 考试 重点 噬菌体载体
第二章 DNA重组克隆的单元操作练习题噬菌体载体(练习题)一、填空题1．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。
2．第一个报道的全测序的单链DNA 噬菌体是φX174，DNA 长5386 个碱基对，共个基因，为一环状DNA 分子，基因组的最大特点是。
3．λ噬菌体的基因组DNA 为kb，有多个基因。
在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按复制，成熟包装(晚期复制)则是按复制。
它有一个复制起点，进行向复制。
λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。
其原因主要是在λ噬菌体线性DNA 分子的两端各有一个个碱基组成的天然黏性末端。
这种黏性末端可以自然成环。
成环后的黏性末端部位就叫做位点。
4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为kb，插入的外源片段最大不超过kb。
5．野生型的M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是和。
6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS 位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。
7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。
从酶切点看，插入型为个，取代型为个。
8．野生型的丸噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。
9．M13 单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1) (2) (3) 。
10．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。
11 ．M13 单链噬菌体基因2 和基因4 之间的IG 区有三个最重要的功能，即(1)(2) (3) 。
12．野生型的M13 有10 个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：和。
13．以λ噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA 的长度是不同的，前者为kb，后者为kb。
14．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的范围内。
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华中农业大学本科课程考试评分标准考试课程与试卷类型：基因操作原理姓名：学年学期：学号：考试时间：班级：一、填空题（每小题2分，共30分）1.PCR技术应用广泛，以下不属于PCR应用的为 ___D_____：(A) 随机扩增多态性DNA(RAPD)； (B) 扩增片段长度多态性(AFLP)； (C) RACE； (D) S1 酶作图。
2.λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个____12_____个碱基组成的天然黏性末端。
3.PCR扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是___B______：(A) 退火温度过低； (B) 退火温度过高； (C) dNTP 浓度过高； (D) 循环次数过多。
4.下列哪一种酶作用时需要引物____B_____：(A) 末端转移酶； (B) 反转录酶；(C) DNA连接酶； (D) 限制酶。
5.Cosmid 实际上是由_λ噬菌体__和__质粒_____构成的杂合载体，也可以说是带有__cos__序列的质粒。
6.限制性内切酶的命名主要根据__来源菌株属名第一个字母，种名头两个字母以及菌株号、序号_____来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确的____AC____：(A) Pst I;(B) KpnI； (C) Hin dIII; (D) Hind III; (E) T th111I; (F) Bsp1286I； (G) XbaI7.在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA的特定位点作甲基化修饰。
而许多限制性内切酶对甲基化是敏感的，一旦所识别的酶切位点被甲基化就不能切割该位点，如Cla I (AT/CGAT)。
请问Cla I不能切割以下哪个或哪些来自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列____C_____。
(A) ATCGATA； (B) ATCGATG；(C) ATCGATC； (D) ATCGATT。
8.限制性内切酶有其特定的识别位点，如Eco RI 的识别位点为 ___GAATTC___；有些限制性内切酶切割DNA后可产生带有相同末端的DNA产物，这些酶称为同尾酶，例如__Bam HI__限制性内切酶与___Sau3AI_________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。
（任举一例都可以）9.在基因操作过程中会使用一些多对人体有害的物质, 操作时应小心谨慎, 常用的有害物质有UV light、DEPC、____EB___和____苯酚____等。
（任举一例都可以）10.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中_C_是cDNA文库。
(A) YAC文库； (B) PAC文库； (C) 扣减文库； (D) BAC文库。
11.M13KO7是一种辅助噬菌体，可用它帮助噬菌粒制备单链DNA，这是因为以下原因_B_：(A) M13KO7能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA； (B) M13KO7能够提供成熟包装的蛋白； (C) M13KO7提供了成熟包装所需的信号； (D) M13KO7的10个基因都是正常的。
12.在制作DNA嵌套缺失突变体时主要有3种方法，其核心技术都使用了一种核酸酶，它们分别是__外切核酸酶III__、__BAL31__和___DNaseI___。
13.在核酸杂交过程中，一般都要先做预杂交，这是为了__B__：(A) 做预备试验，寻找最佳反应条件； (B) 封闭背景； (C) 使杂交信号更强； (D) 减少非特异性杂交信号。
14.在许多克隆载体中都使用了 -互补机制来做筛选标记，也就是俗称的“蓝白菌落”筛选，在应用过程中使用了两种引起颜色变化的试剂，它们是___x-gal__和____IPTG__。
15.在基因操作中有些不同的名称具有相同的缩写，例如RT-PCR, 可以是___实时定量PCR__或___反转录PCR___的缩写。
二、名词解释（每小题3分，共21分）1．Star Activity (in restriction enzymes)星星活性，（1’）极端非标准条件下，限制性内切酶切割与识别序列相似的序列，这个改变的俄特殊性称星星活性。
（2’）2．Northern blottingNorthern 杂交，（1’）即DNA与RNA的杂交，与Northern杂交的不同之处在于转移的是RNA而不是DNA。
（1’）Northern 杂交是转录水平的检测，用于检测样品中是否有与探针同源的mRNA分子。
（1’）3．Shuttle vector穿梭载体，（1’）能够在两类不同的宿主中复制、选择和增殖的载体。
（2’）4．Chromosome Walking染色体步查，（1’）采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针，以鉴定含有相邻序列的重组克隆的方法称染色体步查。
（2’）5．Klenow fragmentKlenow片段，（1’）大肠杆菌DNA聚合酶经枯草杆菌蛋白酶水解的大片段。
（1’）具有5’—3’聚合和3’—5’外切活性。
（1’）6．Universal primer通用引物，（1’）参照载体上多克隆位点两侧的一段固定DNA序列设计的引物，（1’）用于分析插入片段的序列。
（1’）7．Competent cells感受态细胞，（1’）能够吸收外源DNA的细胞称作感受态细胞。
（2’）三、分析简答题（每小题5分，共25分）1. 人类基因组的大小约为3000Mb，测序方法有两种，即图谱测序法和全基因组鸟枪法。
这两种测序结果和分析于2001年分别发表在《Nature》和《Science》杂志上。
在第一种方法中，首先将靶基因组部分酶切产生大分子DNA片段，经电泳分离纯化克隆到BAC载体中。
根据分子标记和指纹图谱构建BAC克隆重叠群，挑选单个克隆采取鸟枪法测序。
在每个BAC克隆内根据测序结果进行顺序拼接，并与BAC克隆重叠群物理图谱对比，完成全部主体顺序的组装(The International Human Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature, 2001, 409: 860~921)。
假如你是测序工作组中的一员，由你负责某个BAC克隆子中约100kb的序列测定，该如何实施？①分离纯化该质粒，构建外源DNA片段大小2-5kb的亚文库。
（1’）②用构建亚文库的载体上的通用引物作大规模末端测序。
（1’）③测序的各reads 拼接，得到contig。
（1’）④借助PCR等手段，填补contig中的gap。
（1’）⑤通过酶切图谱验证测序结果。
（1’）体是常用的一种。
A/T载体也有多种工作方式，下图是pCR2.1-TOPO 载体的核心工作原理示意图。
请说出A/T载体克隆PCR产物的一般原理，以及pCR2.1-TOPO 载体所拥有的特殊工作方式。
①用不具有3’-5’外切活性的高温DNA polymerase（如Taq）作PCR扩增时，其产物3’多一个碱基A。
（1’）②在A/T载体的3’未端各有一个突出的碱基T，用于和A配对，从而克隆Taq polymerase的PCR产物。
（2’）③Topoisomerase第274位的酪氨酸与DNA 5’端磷酸之间形成的磷酸二酯键是不稳定的，容易受到DNA 3’羟基的攻击。
TOPO 载体利用其末端自身携带的Topoisomerase形成磷脂键，不需要外加连接酶。
（2’）3. 从苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种YBT-1765中克隆得到一个质粒pBMB175，选用限制性内切酶Cla I和Xba I对该质粒进行酶切分析，得到以下如表所示的结果。
请根据所得的酶切片段大小，标出Cla I酶切位点在质粒pBMB175上的位置。
Xba限制片段的大小（kb）片段序号ClaⅠ XbaⅠ Cla I+Xba I1 11.0 8.8 7.62 4.2 5.4 3.03 1.0 2.44 1.25 1.0总计15.2 15.2 15.23.0kb 和14.0 kb ，答对一处给2分4．许多限制性内切酶切割DNA 后可产生相同的突出末端，这些产物彼此之间可进行粘端连接。
但在连接产物中相应位置的酶切位点就不存在了。
例如某DNA 片段用Cla I (AT/CGAT)酶切后，可与Acc I (GT/CGAC)切割的载体连接，但在连接点处的Cla I 和Acc I 位点都消失了，相应的序列变成了ATCGAC 。
下图最上面的序列为Cla I/ Acc I 连接处的DNA 序列。
通过这些步骤可在连接点处恢复Cla I 位点，请指出每一步所用的关键酶和底物。
1.Sph I2.Klenow （或T 4 T 7 polymerase ）3.过量dATP4.S1酶（或绿豆核酸酶）5.ligase 每空一分Recovering Cla I--ATCGACAAGCTT----TAGCTGGCC AA----ATCGA TT-- --TAGCT AA----ATCGATT-- --TAGCTAA----ATCGA CCGGCATGCAAGCTT----TAGCT GGCCGTACGTTCGAA----ATCGACCGGCATG CAAGCTT----TAGCTGGCC GTACGTTCGAA--D ( 5 )C ( 4 )B ( 2 ， 3 )A( 1 )5. 用于cDNA 克隆的方法很多,下图是 SMART 技术构建全长cDNA 文库的基本原理流程图。
请叙述其核心步骤。
①polyT 引物合成cDNA 第一链，反转录酶具有末端转移酶活性，自动在产物末端加上几个d （C ）。
（2’）②反转录过程中同时添加了带有3个d （G ）的引物，以该引物合成第一链的互补链，锚定全长cDNA 。
（2’）③引物延伸或长距离PCR 得到双链cDNA 。
（1’）四、问答题 （每小题8分，共24分）1. 通过生物测定，发现一种真菌具有抗某种细菌的抗菌活性。
通过生物化学的方法从该真菌中分离到一个具有抗细菌活性的蛋白质，该蛋白表现出良好的开发成蛋白药物的潜力。
若要在E.coli 或酵母菌中大量表达并制备该抗菌蛋白质，试问如何分离得到该蛋白的编码基因。
①测定该蛋白质的N 未端氨基酸序列（1’）②根据氨基酸序列设计简并引物，用作基因克隆的探针（2’） ③构建真菌的cDNA 文库（2’）④用探针作Southern 杂交，从文库中筛选含该基因的重组子（2’） ⑤重组子的纯化、验证测序（1’）①中如果是制备该蛋白的抗体③构建表达文库，从中筛选则该题亦可给分。
2. 魔芋 (Amorphophallus ) 是单子叶植物纲 (Monocotyledoeae )、泽泻目 (Alismatales )、天南星科 (Areaceae ) 的多年生草本块茎植物。