上海生命科学等级考微生物综合训练

微生物综合训练5．微生物及其培养：重金属嗜好性细菌在饮用水微污染和应急突发事件中能够用于水污染控制处理．获得高纯度、安全、高嗜好重金属的细菌，需要进行系列获取样本及其相关培养的实验．实验室选用铅、汞作为重金属实验剂．（1）为了较快取得高嗜好重金属的细菌样本，一般选择的土壤浸出液．要提纯理想的菌种样本，研究小组将实验分两步，第一步是培养与提纯高嗜好重金属的细菌；由于这种细菌是用于饮用水的抗重金属污染，因此，第二步必须进行抗生素敏感性检测．完成下列有关“培养、获取高纯度、高嗜好重金属细菌”的实验设计思路：Ⅰ配制培养基：（2）分别配制含不同浓度系列的态培养基．Ⅰ灭菌：（3）采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死Ⅰ制备培养平板（培养皿中的培养基）；Ⅰ菌种分离与培养：（4）接种：然后在适宜的环境中培养．Ⅰ菌种选择：（5）选取菌种备用．选取安全性菌种的实验，一般采取抗生素敏感性实验法：（6）对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高，其判断理由是．（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，会由于这些细菌死亡而无法得到，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，必须配制培养基，在实验操作上，可采取先，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群．6．回答下列有关微生物的问题．炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病．对炭疽病疑似患者，可通过甲图所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊．下表是培养炭疽杆菌的某培养基成分，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌．蛋白胨10g牛肉粉3g氯化钠5g50mL脱纤维羊血（含多种生长因子）琼脂15g蒸馏水1000mL（1）据表分析“某培养基”属于．（多选）①固体培养基②液体培养基③通用培养基④选择培养基（2）若要从炭疽病疑似患者体内分离炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮铲涂匀，该接种方法称为．乙图所示的四种菌落分布图，由该接种方法得到的是．（多选）（3）制备甲图中的液体培养基时需采取方法灭菌，目的是．接种可疑菌后，经35Ⅰ培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是．（4）甲图中，对照组试管中应加入后与实验组同时培养．6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组（高/低），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除．此实验依据的原理是．（5）对排除的疑似患者及易感人群，可采取的最有效的预防措施是．7．回答有关微生物的问题．人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值．为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究．请回答下列问题：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是 （填序号）． ①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 ．（3）为达到筛选的目的，应采用选择培养基，本项研究中培养基配置的关键在于 ．（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈的菌落（见图1）．图中降解圈大小与纤维素酶的 有关．图中降解纤维素能力最强的菌株是 （填图中序号）．（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J 1和J 4，在不同温度和pH 条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2．推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 ．8．回答下列有关微生物工程的问题．乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值．乳糖酶的制备及固定化步骤如下：（1）表的培养液pH 均为7.0，若要筛选微生物L ，则不能选择表中的 培养液．（多选）培养液 乳糖 乳糖酶 NaNO 2 牛肉膏 K 2 HP0 KCl MgS 4O•7H 2OFeS04 A25g/L / / / 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/L B / / 3g/L / 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/LC25g/L1ug/L/3g/L1g/L0.5g/L1g/L0.01g/L D25g/L/3g/L/1g/L0.5g/L1g/L0.01g/L （2）为了获得能产乳糖酶的微生物L的单菌落，可采用法将初筛菌液接种在固体培养基上．（3）扩大培养微生物L时，通过增加营养物质的比例（可以/不可以）提高种群密度，分析说明原因．（4）在乳糖酶提取纯化的过程中，应及时检测．将酶固定化后，则有利于酶的．（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图，推测菌株更适合用于发酵，理由是．9．硝化细菌包括亚硝酸菌和硝酸菌，广泛存在于通气性较好的土壤中，在自然界氮循环中具有重要作用．土壤或水体中的有机物（如动物的排泄物或动植物的尸体）在分解过程会产生对动物毒性很强的氨，硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐．具体过程如图1：（1）根据上述材料可知，硝化细菌在生态系统中的营养类型是．A．自养需氧型B．自养厌氧型C．异养需氧型D．异养厌氧型（2）硝化细菌通常以方式增殖，当水体过于纯净时，硝化细菌会形成休眠体，这种休眠体被称为．（3）对于混有硝化细菌、蓝细菌和大肠杆菌的悬浮液，可利用选择培养基进行微生物筛选．在筛选硝化细菌时，其培养基成份包括．（以下材料供选择：H2O、葡萄糖、纤维素、牛肉膏、（NH4）2SO4、KNO3、无机盐、琼脂、伊红﹣美蓝染料），接种后并培养．制备培养基时，灭菌与调pH 值的先后顺序是．如利用上述培养基筛选大肠杆菌菌落，则应另外添加的成份是，菌落特征为．（4）将采集自养殖池中的水样1ml稀释100倍，然选取稀释后的水样1ml，接种于上述硝化细菌选择培养基上培养．该实验接种所使用的工具是．一段时间后观察菌落并计数，实验重复三次结果如图2，则该养殖池每毫升水含有硝化细菌个．10．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解．刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈．为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“﹣”表示无．酵母膏无机盐纤维素粉琼脂CR溶液水培养基+++﹣++（1）据表判断，培养基（“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是；配制培养基时，在各种成分都熔化后灭菌前，要进行的是．实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是．（2）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是（多选）．A．酒精灯B．培养皿C．显微镜D．无菌水E．无菌滴管F．接种环G．玻璃刮铲（3）有同学在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落如图1．图中降解纤维素能力最强的菌株是．（4）教师用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度条件进行纤维素分解发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，推测菌株更适合夏季分解植物桔杆，理由是．11．分析有关微生物的资料，回答问题．烧伤病人容易感染绿脓杆菌，引起化脓性感染．比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素都是非常经典的抗绿脓杆菌的药物．临床使用时，有时需要做细菌耐药实验．实验时，从病人身上获取少量样本，按下列一定的实验步骤操作，以确定病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性．获取绿脓杆菌单菌落（1）配制培养基．主要步骤是计算→称量→溶化→→分装→倒平板．可用牛肉膏蛋白胨培养基培养绿脓杆菌，其培养基中的是否还需加入生长因子？理由是．固体培养基中常用琼脂作凝固剂，理想的凝固剂应具有的特点是．（多选）A．含有某些特殊的营养物质B．消毒灭菌不会改变其特性C．能被微生物分解和利用D．微生物生长温度范围内保持固体状态E．配制方便且有良好的透明性（2）图2所示接种方法为法，这种方法的主要目的是使接种物．在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是．检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感度（3）分析图3中的实验结果，说明绿脓杆菌对类抗生素敏感，判断的理由是．如果你是医生，建议患者最好选用抗生素．12．如图1为某细菌结构的示意图，请据图回答：（1）该菌对青霉素高度敏感，说明其属（真/古）细菌．与噬菌体比较，其最显著的特点是．图中“6”含有的化合物是．（2）该菌含有的细胞器是．通常作为基因工程中目的基因运载体的是结构[ ] ．表4是该菌培养基的配方，其中蛋白胨用35S标记．成分蛋白胨酵母膏NaCl蒸馏水pH含量10g5g10g1000ml7.0（3）从同化作用类型看，该细菌属于．在酵母膏中可能含有的生长因子有（多选）．A．某些维生素B．某些氨基酸C．酶D．微量元素（4）将经上述培养基培养的该细菌与噬菌体（亲代）充分混合．子一代噬菌体体内能检测到放射性，解释其原因．图2示经紫外线照射后，诱导产生对T2噬菌体有抗性菌种的过程．（5）若要将抗T2噬菌体的细菌菌落从混合菌落中筛选出来，操作方法是：．13．已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅰ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅰ能分解有机物B而不能分解有机物A．现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如图．（1）步骤一使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，其中含有细菌生长所需的水、等营养物质（至少写出3种）；该培养基是[ ]（多选）．A．固体培养基B．液体培养基C．通用培养基D．选择培养基（2）步骤一采用接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的，最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是．（3）无论是培养基（液），接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是．（4）步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，预测可能的结果并推测结论：①A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅰ，两者未分离．②．③．（5）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量测定结果都如55题中①的情况，则应，再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．14．【研究背景】在畜禽饲料中添加适量的抗生素可减少畜禽机体对抗有害微生物的消耗，降低畜禽机体感染疾病概率，故而被养殖场广泛使用．但是饲料中添加使用抗生素不当会直接危害人体和畜禽的健康．我国科学家耗费多年心血研发的专利“无抗生素微生物发酵饲料技术”，实现了生鸡的全程无抗生素饲养．这项技术被誉为“饲料工业的一场革命”，用这种发酵饲料喂养的鸡被称为“无抗鸡”．【实验原理】据研究表明，饲料中使用某种特定的芽孢杆菌能促使酵母菌和乳酸菌大量繁殖，占数量优势，同时有效杀死大肠杆菌和沙门氏杆菌等有害菌．随着酵母菌、乳酸菌生长代谢，饲料中一些大分子物质不断被降解，一些小肽、游离氨基酸和维生素数量在不断增加，因而饲料营养价值得到提升．【实验设计】实验组别（X）添加的成分实验变量（Y）Y0Y1 Y2Y3对照组（X1）饲料无菌水生产用菌粉实验组（X2）饲料外源芽孢杆菌生产用菌粉【实验结果】（1）在包装好的饲料包中，用酵母菌和乳酸菌混合制成的生产用菌粉中首先增殖的微生物、pH的变化趋势是．A．酵母菌上升B．酵母菌下降C．乳酸菌上升D．乳酸菌下降（2）在本实验中，若Y0为实验前各菌种的数量，那么Y1、Y2、Y3表示．（3）根据实验数据分析，本实验证明了．【实验扩展】（4）若想进一步了解饲喂该发酵饲料与原添加抗生素的饲料对鸡的生长速度的影响，需进一步设计实验验证．请从下列选项中选择合适的项目并按实验的先后排序（可重复）．①生长状况相似的小鸡若干，分组②生长状况相似的母鸡若干，分组③测量各组鸡的平均体重④分别饲喂普通饲料和发酵饲料⑤分别饲喂抗生素饲料和发酵饲料⑥分别饲喂普通饲料、抗生素饲料和发酵饲料⑦在适宜的环境条件下喂养一段时间（5）青霉素能杀灭细菌的原理是．长期使用抗生素会使细菌产生抗药性，原因是．15．Ⅰ．细菌常被应用于生产生活中，如有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的细菌．（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上．为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围清晰区域的大小．一般情况下，如图中清晰区域越大说明．Ⅰ．另一同学将第一步筛选得到的甲、乙、丙三种细菌分别接种到A、B、C三种培养液中，经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：培养液成分繁殖一代所需的时间（分钟）甲乙丙43100﹣A．葡萄糖、NaCl、PO43﹣、MgSO42840﹣B．葡萄糖、NaCl、PO43﹣、MgSO4、8种氨基酸252580 C．葡萄糖、NaCl、PO43﹣、MgSO4、19种氨基酸注：“﹣”表示细菌没有生长．（2）在A培养基中增殖较快的细菌是．丙细菌可以在C培养液中繁殖却无法在B培养液中繁殖，原因是．（3）由于微生物的营养类型复杂，不同的微生物对营养物质的需求是不同的．如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的营养物质是（多选题），A．碳源B．氮源C．生长因子D．无机盐E．水Ⅰ．下面是有关某细菌G的四项实验：实验1：将G接种于一般培养基上，结果出现菌落．实验2：用一定剂量的紫外线处理G，产生突变种g1．将g1接种于一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现菌落．实验3：用另一剂量的紫外线处理G，得突变种g2，将g2接种于一般培养基后，也不出现菌落；但在培养基内添加营养物质乙后，就出现菌落．实验4：将g1和g2一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落．（4）细菌g1和g2分别接种于一般培养基，均不能生长．其原因是用紫外线处理导致细菌G发生了，从而缺乏合成营养物质甲或乙的酶．A．基因突变B．基因重组C．染色体畸变D．不可遗传变异（5）实验1至3表明，物质甲和乙均是细菌G在代谢过程中产生的代谢产物．在实验2和3 中，它们是作为加入一般培养基的．A．碳源B．氮源C．生长因子D．无机盐（6）实验4中出现菌落的原因可能是．微生物综合训练5．微生物及其培养：重金属嗜好性细菌在饮用水微污染和应急突发事件中能够用于水污染控制处理．获得高纯度、安全、高嗜好重金属的细菌，需要进行系列获取样本及其相关培养的实验．实验室选用铅、汞作为重金属实验剂．（1）为了较快取得高嗜好重金属的细菌样本，一般选择受金属污染或重金属含量高的土壤浸出液．要提纯理想的菌种样本，研究小组将实验分两步，第一步是培养与提纯高嗜好重金属的细菌；由于这种细菌是用于饮用水的抗重金属污染，因此，第二步必须进行抗生素敏感性检测．完成下列有关“培养、获取高纯度、高嗜好重金属细菌”的实验设计思路：Ⅰ配制培养基：（2）分别配制含汞、铅不同浓度系列的固态培养基．Ⅰ灭菌：（3）采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死细菌与芽孢Ⅰ制备培养平板（培养皿中的培养基）；Ⅰ菌种分离与培养：（4）接种：用接种针取一定量的菌样，采取分区划线法接种在培养基上然后在适宜的环境中培养．Ⅰ菌种选择：（5）选取高浓度重金属培养基中的大菌落菌种备用．选取安全性菌种的实验，一般采取抗生素敏感性实验法：（6）对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高，其判断理由是对抗生素敏感度越高，细菌越容易被抗生素灭活，有利于保护人体健康．．（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，会由于这些细菌死亡而无法得到，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，必须配制不含抗生素的对照培养基，在实验操作上，可采取先在对照培养基中进行接种、培养，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群．【解答】解：（1）为了得到重金属嗜好性细菌，一般选择受金属污染或重金属含量高的土壤浸出液．（2）应选用选择培养基分离、提纯理想的菌种样本．需要分别配制含汞、铅不同浓度系列的固态培养基．（3）在此实验中要注意无菌操作，避免杂菌的污染，采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死细菌与芽孢．（4）可采用平板划线法接种：用接种针取一定量的菌样，采取分区划线法接种在培养基上然后在适宜的环境中培养．（5）选择培养基分离并选取高浓度重金属培养基中的大菌落菌种备用．（6）由于对抗生素敏感度越高，细菌越容易被抗生素灭活，有利于保护人体健康，因此对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高．（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，需要配制不含抗生素的对照培养基，在实验操作上，可采取先在对照培养基中进行接种、培，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群．6．回答下列有关微生物的问题．炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病．对炭疽病疑似患者，可通过甲图所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊．下表是培养炭疽杆菌的某培养基成分，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌．蛋白胨10g牛肉粉3g氯化钠5g脱纤维羊血50mL（含多种生长因子）琼脂15g蒸馏水1000mL（1）据表分析“某培养基”属于①③．（多选）①固体培养基②液体培养基③通用培养基④选择培养基（2）若要从炭疽病疑似患者体内分离炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮铲涂匀，该接种方法称为稀释涂布平板法．乙图所示的四种菌落分布图，由该接种方法得到的是ABC．（多选）（3）制备甲图中的液体培养基时需采取高压蒸汽灭菌方法灭菌，目的是杀死微生物及芽孢．接种可疑菌后，经35Ⅰ培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是细菌大量繁殖．（4）甲图中，对照组试管中应加入等量生理盐水后与实验组同时培养．6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低（高/低），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除．此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清．．（5）对排除的疑似患者及易感人群，可采取的最有效的预防措施是接种炭疽疫苗．【解答】解：（1）根据表格分析，该培养基含有牛肉膏、蛋白胨，是细菌的通用培养基，又因为含有琼脂，为固体培养基．故选：①③．（2）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分布涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．由图中四种菌落分布情况可知，A、B和C是采用稀释涂布平板法得到的，而D是采用平板划线法得到的．（3）制备图1中的液体培养基时应该用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，以杀死微生物及芽孢．接种可疑菌后，35Ⅰ培养24小时，细菌大量繁殖，液体培养基变浑浊．（4）对照组试管中应加入等量生理盐水，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除．此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清．（5）对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体和记忆细胞而获得没免疫能力．7．回答有关微生物的问题．人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值．为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究．请回答下列问题：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是③（填序号）．①酒精灯②培养皿③显微镜④无菌水（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果．（3）为达到筛选的目的，应采用选择培养基，本项研究中培养基配置的关键在于以纤维素为唯一碳源．（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈的菌落（见图1）．图中降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关．图中降解纤维素能力最强的菌株是①（填图中序号）．（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2．推测菌株J4更适合用于人工瘤胃发酵，理由是发酵过程会产热和产酸，J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高．【解答】解：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，需要使用酒精灯对接种环进行灭菌，对培养皿进行灭菌，用无菌水稀释菌液，故选③．（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量过多会在培养基表面出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，所以不能过多．（3）该研究的目的是筛选分解纤维素的微生物，配置培养基关键在于以纤维素为唯一碳源的选择培养基．（4）在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落，降解圈大小与纤维素酶的多少和活性有关．纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强的菌株是①．（5）由于胃部PH 值较低，根据题意和图示分析可知，发酵过程会产热和产酸，J 4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，所以推测菌株J4更适合用于人工瘤胃发酵．8．回答下列有关微生物工程的问题．乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值．乳糖酶的制备及固定化步骤如下：（1）表的培养液pH 均为7.0，若要筛选微生物L ，则不能选择表中的 ABC 培养液．（多选）培养液 乳糖 乳糖酶 NaNO 2 牛肉膏 K 2 HP0 KCl MgS 4O•7H 2OFeS04A25g/L / / / 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/L B/ / 3g/L / 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/L C25g/L 1ug/L / 3g/L 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/L D 25g/L / 3g/L / 1g/L 0.5g/L 1g/L 0.01g/L （2）为了获得能产乳糖酶的微生物L 的单菌落，可采用 划线法或稀释涂布法 法将初筛菌液接种在固体培养基上．（3）扩大培养微生物L 时，通过增加营养物质的比例 不可以 （可以/不可以）提高种群密度，分析说明原因 扩大培养的液体培养基由于营养物质浓度增高，渗透压也增高，不利于细菌生长 ．（4）在乳糖酶提取纯化的过程中，应及时检测 酶活力或酶活性．将酶固定。