IP检测过程中的重、轻链干扰如何避免？

合集下载

ICP-MS_干扰消除技术的选择及其应用

（1）稀释样品总溶解固体量（TDS)（含盐量对接口锥和透镜系统的影响）。通常将待测溶液的TDS限制在<2000 µg/mL。 (溶液固溶物<0.2%)
（2）内标法使用样品中不含有的元素Use element not in samples 所有溶液中加入统一的量add precisely to all solutions 以分析元素与内标元素的比值做标准曲线calibration is on internal standard to analyte ratio as function of analyte concentration
12
ICP-MS干扰——如何消除质谱干扰
（1）最佳化仪器以减少干扰：控制氧化物、双电荷离子（2）选择无干扰同位素（3）数学公式干扰校正（4）冷等离子体技术
能有效地消除与Ar有关的干扰，只对有些元素适用，会遇到严重的基体抑制效应，不适用于基体复杂的样品，同时分析不稳定
（5）碰撞/反应池技术（6）消除基体
• 质谱干扰
• 同量异位素重叠； • 多原子或加合物离子； • 难熔氧化物离子； • 双电荷离子。
• 非质谱干扰—基体效应
• 空间电荷效应 • 信号的抑制或增强效应； • 由高含量总溶解固体引起的物理效应。
5
ICP-MS非质谱干扰——基体效应
空间电荷效应
物理效应
6
ICP-MS非质谱干扰的消除方法ຫໍສະໝຸດ 80012001600
RF Power [Watts]
M+ Intensity
800
1200
1600
RF Power [Watts]
15
Intensity
雾化气流量对离子强度的影响

免疫沉淀

一、IP前的准备工作：coIP：分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用（后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白）。

非内源性蛋白的相互作用，主要是通过过表达来实现，通常为简化实验、提高IP 效率会让外源蛋白带上标签（tagged；这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案），因此就tag的使用而言存在很多小技巧。

1. His-tagged主要用于纯化蛋白。

有些人喜欢用His-tagged蛋白然后进行coIP，实际上它存在潜在的隐患。

当初鄙人用Sigma a-His（鼠单抗；免费广告）WB外源蛋白发现CE里面一塌糊涂（带型漂亮就是非常多的带），那时候还抱怨这个抗体特异性不好。

后来，当了解到很多蛋白会有富含histidine的domain 以后，恍然大悟，恰恰是因为效价非常好，所以很多内源性的蛋白都被该抗体识别。

同理，如果用Ni-NTA beads去PD His-tagged的蛋白，完全有可能PD那些内源性的富含histidine domain的蛋白，造成coIP的假象，而这样的蛋白还非常多。

2. tandem-tagged不能用于分析钙调信号通路。

tandem tag实际上从成本角度和His tag差不多，洗脱试剂价格低廉，因此可用于大规模PD之后的质谱分析，能获取最全面的相互作用的信息。

然后由于其中包含钙调蛋白相互作用domain，天然会结合钙信号相关蛋白，从而干扰或掩盖靶蛋白与钙信号蛋白之间的相互作用，有一定的应用局限。

当然，笔者不太清楚近年来该方法有无改进，但正是由于引入钙调domain才实现了降低成本的目的，因此猜测可能性不大。

3. Myc、HA、Flag-tagged：Myc仍然会有天然的干扰，应用略有局限；相较后两者是人工合成专门用于tagged蛋白（有相应的专利，因此目前无论抗体或交联好的beads价格都非常昂贵），因此干扰最小、最常用。

如需进一步细致区分，a-Flag效价比a-HA略高，因此更适合IP。

射频识别系统中电磁干扰排除的方法与技巧

射频识别系统中电磁干扰排除的方法与技巧随着科技的不断发展，射频识别（RFID）系统已经广泛应用于各个领域，如物流管理、供应链管理、智能交通等。

然而，由于环境中存在各种电磁干扰源，这些干扰会对RFID系统的正常运行造成影响。

因此，排除电磁干扰成为了保证RFID系统稳定运行的重要环节。

首先，了解电磁干扰的来源是解决问题的第一步。

电磁干扰可以来自于多种源头，如电磁辐射、电磁波的反射、电磁信号的传播等。

在实际应用中，常见的电磁干扰源包括电源线、电力设备、电子设备、无线电设备等。

因此，我们需要对这些干扰源进行有效的识别和分类。

其次，选择合适的天线和标签是排除电磁干扰的关键。

天线是RFID系统中最重要的组成部分之一，它负责接收和发送信号。

在选择天线时，应考虑其频率范围、增益、方向性等因素。

一般来说，天线的增益越高，其接收和发送信号的距离就越远。

此外，标签的选择也很重要。

不同类型的标签对电磁干扰的抵抗能力不同，因此，在特定的环境中，选择合适的标签可以有效降低电磁干扰的影响。

另外，合理布置RFID系统的设备和设施也是排除电磁干扰的重要手段。

首先，应将RFID设备与其他电磁干扰源相隔离，以避免互相干扰。

其次，应合理布置天线和标签的位置，以最大程度地减少电磁干扰的影响。

此外，还可以采用屏蔽材料来隔离电磁干扰源，以提高RFID系统的抗干扰能力。

除了上述方法之外，还可以通过调整RFID系统的工作频率和功率来排除电磁干扰。

在实际应用中，不同的RFID系统可能会存在频率冲突的问题，导致干扰。

因此，可以通过调整RFID系统的工作频率，使其与其他干扰源的频率相差较大，从而减少干扰。

此外，调整RFID系统的功率也可以影响其与干扰源之间的距离，进而减少干扰。

最后，定期检测和维护RFID系统也是排除电磁干扰的重要手段。

定期检测可以帮助我们及时发现和解决潜在的干扰问题。

维护RFID系统的设备和设施可以保证其正常运行，并及时修复可能存在的故障。

如何避免2.4G频段各种无线设备的干扰

随着越来越多的公司生产使用2.4GHz频段的产品，设计人员必须处理来自其他信源的更多信号。

管理免许可频段的规定表明，您的设备必须考虑干扰问题。

设计人员如何使处于这种苛刻条件下的2.4GHz解决方案获得最大性能呢？产品往往在受控的实验室环境下工作得很好，但在现场却会由于受到其它2.4GHz解决方案的影响而使性能显著下降。

目前2.4GHz频段下存在Wi-Fi、蓝牙和ZigBee等不同标准，绝大多数产品是以标准制定者所提供的方法来实现，不过，通过控制协议，设计人员能通过一定的措施将其他信号源的干扰问题降至最低。

在本文中，我们将探讨2.4GHz无线系统中的各种干扰控制技术，并介绍如何运用低级工具实现2.4 GHz设计方案中的频率稳定性。

Wi-Fi跳频扩频(FHSS)和直接序列扩频(DSSS)是两种免许可2.4GHz ISM频段中射频调制的方法。

蓝牙使用FHSS，而WirelessUSB、802.11b/g/a(也就是常说的Wi-Fi)和802.15.4(与上层网络层相结合时称作ZigBee)则使用DSSS。

所有这些技术都工作于全球通用的ISM频段(即2.400"2.483 GHz)(见图1)图1：工作在2.4GHz频段中无线系统的信号比较。

采用Wi-Fi的主要推动因素是数据吞吐量。

Wi-Fi通常用于计算机和本地局域网(LAN)的连接(并通过LAN间接连接到因特网上)。

目前大多数Wi-Fi设备为可每天充电的笔记本电脑或用市电供电的接入点，因此对供电问题并不敏感。

Wi-Fi使用DSSS技术，每个通道的带宽为22MHz，故允许同时采用三个均匀分布的通道而不会互相重叠。

每个Wi-Fi接入点使用的通道均需手动配置；Wi-Fi客户会搜索所有通道中的可用接入点。

802.11采用一种称为巴克(Barker)码的11位伪随机噪声(PN)码来对每一原始数据速率为1及2Mbps的信息位进行编码。

为实现更高的数据速率，802.11b 通过补码键控技术(CCK)将6个信息位编码为一个8码片符号。

ICP发射光谱中元素谱线干扰校正

ICP发射光谱中元素谱线干扰校正ICP发射光谱是一种常用的分析技术，可以用于对样品中的元素进行定量和定性分析。

然而，在实际应用过程中，由于仪器和方法参数设定不合理，样品中的物质相互作用以及仪器本身的特性等因素的影响，会引起元素谱线干扰。

因此，为了获得准确的分析结果，需要对干扰进行校正。

元素谱线干扰主要分为光谱干扰和化学干扰两种。

光谱干扰包括连锁干扰和背景干扰。

连锁干扰是指其中一种元素吸收了其他元素的辐射能量，产生新的谱线，从而干扰原有的谱线分析；背景干扰是指由于背景噪声和仪器的背景信号引起的谱线干扰。

化学干扰则是由样品本身的化学性质引起的，如共存元素的存在以及形成的化合物。

为了对元素谱线干扰进行校正，可以采取以下一些方法：1.谱线选择：针对光谱干扰，可以通过选择特定的谱线来避免或减小干扰。

通过仔细研究元素的发射光谱，可以找到不容易受到干扰的谱线进行分析。

例如，对于一些元素来说，其一些谱线在一定条件下比其他谱线更不容易受到干扰。

2.谱线消除：对于已知的光谱干扰，可以通过对干扰谱线进行适当的选择、修正或消除来校正干扰。

这可以使用多元分析技术，如多元回归分析，来建立干扰与目标元素之间的关系，从而在样品分析过程中进行校正。

3.标准加入：通过向样品中加入已知浓度的标准物质，可以用已知浓度的元素来控制样品中其他元素的干扰。

这种方法对于化学干扰的校正尤为有效。

可以通过加入纯元素标准溶液或复合标准溶液来进行干扰校正。

4.校正算法：通过建立合适的校正算法来处理干扰。

这种方法需要在样品分析之前，先进行干扰的特性研究，并对干扰进行精确的测量。

然后，根据测量结果进行峰分离、定性分析和定量分析，从而实现干扰的校正。

总之，ICP发射光谱中元素谱线干扰的校正涉及到选择合适的谱线、谱线消除、标准加入和校正算法等多个方面。

针对不同的干扰类型，可以采用不同的方法或者综合应用多种方法进行校正。

这将有助于获得准确可靠的分析结果，提高分析的精密度和稳定性。

排除干扰的方法

排除干扰的方法
排除干扰的方法可以根据具体情况采取不同的策略。

以下是一些常见的方法：
1. 分析和识别干扰源：首先需要确定可能引起干扰的源头，例如噪声、不必要的信息或恶意行为。

通过分析和识别这些干扰源，可以更好地针对性地解决问题。

2. 设定优先级：在处理多个任务或问题时，设定优先级可以帮助您集中精力解决关键问题，减少干扰因素的影响。

可以根据工作的紧急程度、重要性或其他标准来确定优先级。

3. 制定清晰的计划和目标：制定明确的计划和目标可以帮助您集中注意力，减少其他无关因素的干扰。

确保每项任务都有明确的时间表和行动步骤，以便更有效地完成工作。

4. 创造良好的工作环境：营造一个安静、整洁、有序的工作环境可以减少外部干扰的影响。

保持工作区域整洁，并尽量减少噪音和其他干扰因素的存在。

5. 使用时间管理技巧：学会合理安排时间并有效利用时间是排除干扰的重要方法。

可以采用时间分块、番茄工作法等时间管理技巧，有效地控制工作进度，避免被其他事物干扰。

6. 专注和集中注意力：保持专注和集中注意力是排除干扰的关键。

可以通过专注训练、避免多任务处理、设定时间段专注于一项任务等方法来提高专注力，减少干扰的影响。

7. 寻求支持和帮助：如果遇到无法独立解决的干扰问题，
可以寻求同事或上级的支持和帮助。

与他人交流并分享问题，可以得到更多的建议和解决方案，共同排除干扰。

通过以上方法，您可以更好地排除干扰，提高工作效率和质量。

记住，保持积极的态度和良好的自我管理能力也是排除干扰的重要因素。

称重抗干扰方案

称重抗干扰方案引言在工业生产和科学研究中，称重是一个非常重要的过程。

然而，称重过程中常常会受到外部干扰，例如震动、温度变化、电磁场等。

这些干扰会影响称重结果的准确性和稳定性。

因此，为了确保称重结果的可靠性，需要采取一些抗干扰方案来减少外部干扰对称重的影响。

本文将介绍一些常见的称重抗干扰方案，并讨论它们的优缺点和适用范围。

希望能帮助读者选择合适的抗干扰方案来提高称重的准确性和稳定性。

1. 机械抗干扰方案机械抗干扰方案主要通过改进称重装置的机械结构来减少外部干扰的影响。

常见的机械抗干扰方案包括：1.1. 选择合适的称重装置选择合适的称重装置是减少外部干扰的第一步。

例如，对于需要在震动环境下进行称重的应用，可以选择采用电子阻尼装置来减少震动的传递。

1.2. 加固称重平台加固称重平台可以减少外部震动对称重结果的影响。

可以采用加厚平台的方式来提高平台的刚度，减少变形。

1.3. 减少摩擦力摩擦力是称重过程中常见的干扰因素之一。

为了减少摩擦力对称重结果的影响，可以在摩擦表面上涂覆一层低摩擦系数的润滑剂。

1.4. 隔离热量温度变化也是称重过程中常见的干扰因素之一。

为了减少温度变化对称重结果的影响，可以在称重装置周围设置隔热材料，减少热量的传递。

2. 电气抗干扰方案电气抗干扰方案主要通过改进称重装置的电气系统来减少电磁干扰的影响。

常见的电气抗干扰方案包括：2.1. 屏蔽电磁干扰电磁干扰是称重过程中常见的干扰因素之一。

为了减少电磁干扰对称重结果的影响，可以在称重装置的电气系统中添加屏蔽材料或采用屏蔽电缆。

2.2. 优化电气布局合理的电气布局可以减少电磁干扰的传播。

例如，可以将电源线和信号线分离布置，减少电磁干扰的耦合。

2.3. 使用差分信号传输差分信号传输可以减少共模干扰对称重结果的影响。

可以采用差分信号放大器来对称重信号进行放大和处理。

3. 软件抗干扰方案软件抗干扰方案主要通过改进称重系统的软件算法来减少外部干扰的影响。

排除干扰因素的方法

排除干扰因素的方法
要排除干扰因素，可以采取以下方法：
1. 控制变量：尽量保持实验条件的稳定，只改变自己关心的因素，确保其他因素保持一致。

比如在实验中只改变一个变量，其他变量保持不变。

2. 随机分组：将实验对象随机分为实验组和对照组，以减少不同组之间潜在的差异性。

3. 设立对照组：设立一个没有接受实验处理的对照组，用于与实验组进行比较，排除其他因素对结果的影响。

4. 控制样本数：增加样本数量可以提高实验结果的可靠性，并减少随机误差对结果的影响。

5. 重复实验：进行多次独立实验，以验证实验结果的稳定性，并排除单次实验的随机误差。

6. 假设检验和统计分析：使用适当的统计方法对数据进行分析，判断结果是否具有统计学意义。

7. 独立变量检验：检测可能存在的其他独立变量，包括对实验结果有干扰可能
的未被考虑的变量。

ICP光谱分析的干扰

ICP光谱分析的干扰ICP光谱分析是一种常用的元素分析方法，具有高精度、高灵敏度以及广泛的线性范围等优点。

然而，由于其灵敏度较高，存在一些常见的干扰因素，可能会影响到分析结果的准确性和可靠性。

以下将介绍一些常见的干扰源和相应的解决方法。

1.谱线干扰谱线干扰主要是由于待分析物质的特定谱线与其他元素的谱线重叠或靠近导致的。

这种干扰会影响到待分析元素的测定结果。

解决方法：a)选择适当的工作波长。

通过检查谱线图和谱线数据库，选择一个不受干扰的工作波长，避免与其他元素的谱线重叠。

b)采用背景校正技术。

通过测量谱线两侧相同距离的背景信号，消除谱线干扰。

c)采用光谱线比法。

选择一个受干扰的谱线和一个不受干扰的谱线，通过对两个谱线进行比值计算，消除谱线干扰。

2.矩阵干扰矩阵干扰是指矩阵元素的存在对待分析元素的吸收特性产生影响，进而影响到分析结果的准确性。

解决方法：a)稀释样品。

当样品中矩阵元素含量较高时，可以通过稀释样品来降低矩阵的影响。

b)采用内标法。

选择一个与待分析元素不受矩阵干扰的内标元素，并将其添加到样品中进行测定和校正。

c)采用多元素校正法。

通过建立待分析元素与矩阵元素之间的校正曲线，对矩阵干扰进行修正。

3.转化干扰转化干扰是指在样品预处理或测定过程中，待分析元素发生化学转化导致测定结果异常。

解决方法：a)优化预处理条件。

合理选择溶解剂、酸度和温度等预处理条件，避免待分析元素的化学转化。

b)校正转化效应。

通过添加已知浓度的标准物质进行校正，减小转化干扰对测定结果的影响。

c)采用氧化还原法。

通过氧化还原反应将待分析元素转化为更稳定的形式，避免其发生进一步的转化。

4.矩阵效应矩阵效应是指样品中共存的其他元素对待分析元素吸收特性产生的影响。

解决方法：a)采用标准添加法。

向已知浓度的标准溶液中添加待分析元素，与待分析样品以相同方式进行预处理和测定，通过比较两者的测定结果来消除矩阵效应。

b)采用矩阵匹配标准溶液。

生物实验免疫共沉淀

完成《WB实战指南》后，朋友曾央分享点免疫共沉淀方面的咚咚；当时不得不回绝。

因为，WB指南是基于这些年的回复的汇总，基本上方方面面的问题都有提及，只需要做些串联；而论及coIP，目前在国内还不太普及，尽管它已经是生化领域最基本的技术之一。

因此，再想写这么个长篇颇耗时间，于我的时间和精力太为难；不过，今天是个特殊的日子，凑凑热闹吧。

——人，如果在某些方面成功了，必然在另外一面有亏欠，也许这就是上帝的公允吧。

——在自己最擅长的地方找点成功的感觉吧，当然我的失败也只是因为没有更多的时间。

哎！扯远了玩coIP也玩了5年多了，因为上手就是最难的B蛋白结合量多少的变化（假定IP A蛋白）而非检测B蛋白的有无，说句吹牛皮的话，在我们这个小领域三家最强的lab唯有我们敢于通篇基于这种检测手段，所以，对于coIP算是非常得有心得了。

以下论述基于最难的B蛋白结合水平变化的检测，所以部分实验操作非常苛求；学会这个，其他就是小菜了；所以，这也算一个进阶篇。

一.样品的制备。

如《WB指南》，在这里我最强调从制备样品开始的一致性。

如果不触及细胞的凋亡或死亡，那么任何处理组样品和ctrl最后的终体积应该保持一致；如果细胞有大量凋亡或死亡，可以通过比对标准体积对样品的体积粗略定量后再加裂解液，一般可以把误差控制在WB的检出范围以下，基本保持样品的均一；组织样品可以通过称重添加相应体积比的裂解液。

裂解液的配方可以采用《WB指南》里给出的，原配方如下：20mM Tris/HCl, pH7.6, 100mM NaCl, 20mM KCl, 1.5mM MgCl2, 0.5% NP-40 and protease inhibitors（0.5M PMSF)此裂解缓冲液裂解条件相对温和，适合后续的coIP分析。

“不过”用它做coIP有明显的缺陷；要理解此配方的缺陷，我们先聊聊如何在coIP实验中“作伪”。

伪造结果，也分为单纯性造假和技术型伪造。

数据采集中的干扰及抗干扰措施

数据采集中的干扰及抗干扰措施作者：李喜鸽赵乾来源：《知音励志·教育版》2017年第01期在数据采集器的使用过程中，一般会存在一些干扰，如磁场耦合干扰、静电干扰、电磁辐射干扰等。

针对数据采集器的干扰，需要从数据采集器的硬件和软件设计时就采取措施实现有效的防范。

【关键词】干扰；抗干扰；硬件措施；软件措施1 数据采集器干扰的主要来源干扰的方式多种多样，主要有下面分类，分电导通路耦合干扰、为静电干扰、漏电耦合干扰、磁场耦合干扰、电磁辐射干扰等。

对数据采集器干扰的来源进行分析和明确才能够在数据采集器设计过程中做好防范措施。

2 系统抗干扰的硬件措施在数据采集器的抗干扰硬件措施方面，本研究将从电源系统抗干扰、模拟信号采集端的抗干扰设计和A/D 变换与D/A 变换干扰三个方面来进行。

2.1 电源系统的抗干扰2.1.1 采用隔离变压器数据采集系统和电网之间有不同的地线，干扰信号使两个输入端的电位相对某一公共端一起变化的。

因此，在设计和应用时，要将寄生耦合干扰消除可以通过采用隔离变压器隔离数据采集系统地线和电网的地线的方法实现，提升数据采集系统和电网的抗共模抑制比能力。

2.1.2 采用电源低通滤波器电源低通滤波器的使用是重要的硬件抗干扰措施。

一般情况下，干扰通道的频率是大于电网的工作频率50赫兹的，采用低通滤波器只让低频信号通过，使用这种方法过程中，为了防止滤波器进入磁饱和状态，应该在滤波器前面增加布设一个大约50米厂的双绞线组成的分布参数噪声衰减器，，从而保证了低通滤波器能够在干扰进入前就实现了干扰的衰减作用。

2.1.3 采用交流稳压源在数据采集系统中，通过足够输出功率的稳压源防止电源的过压和欠压。

交流稳压源可以通过无源四端网络的干扰抑制器实现将尖峰干扰消除的目的。

2.1.4 供电系统要合理布线为了使电磁干扰进一步的降低，需要科学合理的布线。

2.2 模拟信号采集端的抗干扰设计由于本系统设计的数据采集器能够采集电压信号、电流信号、温度信号等不同类型的信号，需要采用线性光耦隔离放大器配置的方式实现模拟信号端采集抗干扰，从而在系统的硬件设计中就选择合适的、科学的线性光耦隔离放大器提升系统在实际运行中的抗干扰性能。

免疫沉淀(IP)常见问题解答

免疫沉淀（IP）常见问题解答刚开始做IP的时候肯定会出现各种状况，遇到很多问题，下面我们整理了IP常出现的问题，并附上了解决方案。

首先，当然是做出来的背景很高，可能存在的原因有如下：1．洗涤不够充分解决方案:在加入洗涤剂洗涤的时候，应当盖上管盖反复颠倒数次，动作应当轻柔，但次数要有保证，接着在放到离心机里离心。

2．去垢剂不溶性蛋白残留解决方案：加入上样缓存液，煮5分钟左右，而后离心，吸取上清进行WB3．非特异性蛋白和珠子产生结合解决方案：珠子应用BSA充分预封闭，确保BSA新鲜。

具体方法为，新鲜琼脂糖珠玉1%BSA （PBS溶解）孵育1h，使用前再用PBS洗涤3-4次。

4．抗体特异性不够解决方案：使用可以做IP的抗体，阅读文献购买适合做IP的抗体，根据文献报道的加入抗体的量进行IP。

5．抗体过多引起非特异性结合解决方案：一般目的蛋白直接的binding比较稳固时，减少抗体的使用量，具体可以参考直接的推文。

6．蛋白样品中蛋白浓度过高（尤其是在细胞系上转染过表达两种蛋白质）解决方案：用裂解液适当地稀释蛋白样品，或者可以选择目的蛋白有表达的细胞系，不做转染，直接收蛋白做IP。

7．IP过程中抗原降解在裂解液中一定要加入适当的蛋白酶抑制剂，尤其是对于含多个基团（如糖基化）的蛋白，更应当注意在冰上操作和4度离心。

相反，大家可能还会遇到一个问题，那就是没有检测到目的蛋白，原因如下：1．用的细胞或者组织样品中本身不表达或者低表达这个蛋白，可以换一种该蛋白高表达的细胞系或者组织，重新进行IP2．抗体量加的太少，导致不能结合到更多的抗原，应当增加抗体浓度。

3．目的蛋白没有从珠子上洗脱下来，此时，首先应确定洗脱缓冲液的质量是否良好，另外可以尝试其他的洗涤剂。

4．抗体没有结合到珠子上，此时，应当确保使用的珠子与抗体亚型是一致的。

5．细胞或组织没有裂解完全，或者完全没有裂解。

此时，应当检查裂解液是否已经失效，可以重新配置，再进行IP。

体外诊断试剂干扰因素及其消除方法

体外诊断试剂干扰因素及其消除方法1、非特异性干扰1）疏水作用原理：反应环境中存在的疏水性的物质，如样本中的脂肪/细菌/细胞碎片……与Ag/Ab或胶乳通过疏水作用结合，产生假阳。

处理方式：表面活性剂或亲水聚合物分解。

2）补体补体（complement，C）是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组活化后具有酶活性的蛋白质。

原理：Ab的Fc段与C1q补体结合位点暴露，激活血清中的补体分子与包被或标记Ab结合，产生假阳。

处理方式：通过EDTA（络合剂）处理样本。

3）类风湿因子类风湿因子（rheumatoid factor,RF）是针对IgG Fc片段上抗原表位的一类自抗体，一般为IgG和IgM。

原理：人血清中的类风湿因子（RF）与包被或标记Ab的Fc片段结合产生假阳。

处理方式：使用无Fc片段的Fab片段抗体动物IgG中和。

2、异噬性抗体异嗜性抗体是指能够结合动物抗体而干扰免疫分析的所有人源抗体。

包括：①人抗鼠抗体（Human Anti-More Antibodles HAMA）②人抗山羊抗体（HAGA）③人抗兔抗体（HARA）异嗜性抗体从何而来a动物接触（驯兽师、兽医）b动物产品接触（烹饪）c动物辅助治疗（胸腺细胞、羊细胞、胚胎细胞）d食物（奶酪）e注射疫苗f输血g自身免疫性疾病h母婴传递I心脏病变秘方药物异嗜性抗体干扰的原理3、什么是阻断剂阻断剂是一种可结合异嗜性抗体，从而有效防止异嗜性抗体介导的免疫分析干扰的生物制剂。

1）阻断剂类型a被动阻断剂：非特异性物质（鼠IgG等），结合异嗜性抗体的亲和力弱。

b主动阻断剂：能特异性结合人类异嗜性抗体，结合异嗜性抗体的亲和力强。

2）常见的阻断剂厂家阻断剂系列Roche MAK33系列Scantibodies HBR系列/鼠IgGMillipore ChemiBlock系列Biodesign A66800H菲鹏HIER系列万孚鼠IgG4、怎样确认干扰1）同一样本采用不同检测方法，若结果不一致说明可能存在干扰物。

免疫共沉淀(Co-IP)

1免疫共沉淀一、实验原理免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP），是利用抗原A 与蛋白B 结合，通过A 的抗体（钥匙）沉淀A （锁），再利用精制的prorein A/G （钥匙链）预先结合到磁珠上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，磁珠上的prorein A/G 就能吸附抗原，从而获得抗原A 与蛋白B 的复合体，之后就可以对B 进行检测，从而获得蛋白质与蛋白质相互作用的信息。

二、Co-IP 标准化操作流程样品裂解（裂解液）→样品的预纯化（normal IgG/微珠）→与目标蛋白抗体共孵育（IP 抗体、Normal IgG ）→免疫共沉淀（微珠）→微珠清洗（裂解液）→洗脱→WB 分析或其他分析（WB/一抗、二抗）（一）样品裂解 1.温和裂解（1）温和的裂解液进行裂解，常用的去垢剂成分：NP-40、TritonX-100、IGEPAL CA-630、CHAPS ；（2）成品buffer ；（3）添加蛋白酶抑制剂（防止蛋白被降解）。

2.样本制备流程（1）去掉培养基，用冰PBS 清洗一次。

2（2）去掉PBS，每个板（10cm ）中加0.5mL 冰预冷的1×细胞裂解液，在冰上孵育5min 。

（3）将所有细胞刮下，收集到离心管，置于冰上。

（4）冰浴中对样品用超声处理3次，每次5s 。

（此步骤对膜蛋白提取有较好作用）（5）4 ℃，14000g 离心10min ，将上清转移到新的离心管中，即为细胞裂解物。

（6）BCA 测定浓度。

3.注意事项（1）整个过程冰上操作。

（2）IP 样本一般建议新鲜制备并立即使用，如有需要，可保存在-80 ℃。

（二）预纯化 1.阴性对照的选择与IP 抗体同源同型（亚型）的抗体：如 Rabbit IgG ；Mouse IgG1等。

取与IP 实验等量的裂解液，使用Isotype Control 孵育；与IP 抗体孵育同时进行。

2.Isotype Control 选择3.预纯化的目的（1）减少裂解混合物中的非特异性蛋白的含量。

信号采集抗干扰措施

信号采集抗干扰措施在信号采集过程中，由于外部干扰或者设备自身的干扰引起的噪声问题是很常见的。

为了确保采集到的信号质量，需要采取一系列的抗干扰措施。

下面将介绍一些常用的信号采集抗干扰措施。

1.电源滤波：在信号采集系统中，干净的电源供电是非常重要的。

使用带有滤波器的电源可以有效降低电源中的高频噪声和尖峰干扰。

3.屏蔽：对于容易受到外界电磁场干扰的信号采集器件，可以使用屏蔽材料对信号线进行屏蔽。

常见的屏蔽材料包括金属罩、屏蔽包等。

屏蔽材料能够有效地阻挡外界电磁波的干扰信号。

4.接地：良好的接地可以降低信号采集设备与电源设备之间的干扰。

在进行信号采集时，需要将采集设备与电源设备的地线连接在一起，共享同一个地点。

同时，接地电阻应尽量小，以确保电流的畅通。

5.提高信号采集设备的抗干扰能力：可以选择具有较高抗干扰能力的信号采集设备。

例如，模数转换器（ADC）可以选择较低噪声系数和较高的抗干扰能力的型号。

此外，还可以通过在信号采集设备中增加抗干扰电路来提高其抗干扰能力。

6.信号调理电路设计：在信号采集系统中，信号调理电路是非常重要的。

合理的信号调理电路设计能够滤除无关信号和噪声，保证采集到的信号质量。

常见的信号调理电路包括滤波、放大、去偏置等。

7.近似理想信号处理：在信号采集过程中，可以采取一些近似理想信号处理的方法，如平均滤波、中值滤波、高通滤波等。

这些方法可以有效滤除高频噪声和尖峰干扰。

8.传输线设计：在信号采集系统中，如果信号采集设备与被采集信号源之间的距离较远，信号电缆的设计就非常重要。

具体措施可以包括使用屏蔽电缆、选择较粗的电缆、减少电缆的长度等。

9.参考电平设计：参考电平的选择对于信号采集的准确性非常重要。

可以选择较低的参考电平，以减少由于参考电平波动产生的测量误差。

10.信号采集设备布线：在信号采集设备的布线中，需要尽量避免与其他电源线、高压线、高频线等电磁干扰源的交叉。

信号线应远离干扰源，并且应保持一定的距离，以减少干扰信号的传播。

这些常见的IP丨Co-IP问题,get!

这些常见的IP/Co-IP问题，get！先一起和Abbkine了解一下IP/Co-IP的结果解读：下图为验证蛋白X与蛋白Y是是否存在相互作用的结果图。

由图可以发现，该实验被分为两组：input组及IP组。

第一块胶图是IB验证蛋白X的存在，第二块是IB验证蛋白Y的存在。

由对照组的条带可以得到结论：蛋白X与蛋白Y都是存在的。

IP组的第一个条带表示利用IgG进行沉淀实验，结果蛋白X与蛋白Y没有被沉淀下来，说明蛋白X、蛋白Y不能与IgG结合（阴性对照，用于排除蛋白与抗体非特异性结合的可能性）；IP组的第二条带表示利用蛋白X进行沉淀实验，结果蛋白X被沉淀下来，蛋白Y也被沉淀下来，由此得到结论：蛋白X-蛋白Y之间存在相互作用。

在CO-IP-WB鉴定结果中，IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带，说明IP 过程成功；银染胶图中，IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异，说明CO-IP过程捕获到互作蛋白。

然后一起看看，关于IP/Co-IP常见问题和解决办法：Q：IP/Co-ip实验中IgG阴性对照的意义是什么？A：排除污染的可能性，例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质，若没有设置IgG的对照，而操作中有非特异性蛋白质，又和设计的抗体有作用，就会出现阳性的结果。

如果做了lgG阴性对照，对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白，对照出现阳性，说明抗体有非特异结合到杂蛋白的可能，需要重新开始实验。

Q：如何避免轻重链的干扰？A：1、IP一抗与WB一抗来源一致或者两种抗体来源不一致时，二抗有交叉反应，使用IPkine 二抗可以避免轻重链的干扰。

2、靶蛋白丰度较低，仪器延长曝光时间，导致IgG阴性对照出现杂带：增加Input和IP泳道上样量，减少曝光时间，防止轻重链（杂带）的干扰；3、阴性对照IgG和IP一抗加入偏多：对照IgG抗体量较多，易导致杂带形成，阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。

Q：通过WB验证发现，没有想要的目的条带A：没有目的条带可以是诸多原因导致的。

如何排除基质效应的方法

如何排除基质效应的方法
在科学实验中，基质效应是一个常见的问题，它可能对实验结果的准确性产生
负面影响。

基质效应是指样本中的其他组分对所测定的分析物产生影响的现象。

为了排除基质效应，我们可以采取以下几种方法：
1. 样品前处理：对于复杂的样品，可以通过前处理步骤来降低基质效应所引起
的干扰。

例如，可以使用固相萃取或色谱柱富集等技术来去除或减少干扰物质。

2. 样品稀释：通过将样品稀释到适当的浓度，可以降低基质效应对测定结果的
影响。

通过稀释样品，可以使干扰物质的影响相对较小，从而减少基质效应。

3. 内部标准法：内部标准法是一种常用的排除基质效应的方法。

它是在样品中
加入已知浓度的一个与分析物性质相似的物质作为参考。

通过与内部标准物质的相对浓度来计算目标分析物的浓度，可以准确排除基质效应的干扰。

4. 校正方法：针对特定的基质效应，可以采用校正方法来消除或减小其影响。

例如，可以通过测量空白试剂、对照样品或校正曲线等方法，跟踪和修正基质效应。

5. 多重批次分析：如果基质效应是样品之间变化较大导致的，则可以进行多重
批次分析。

通过在不同批次中多次测量同一样品，并计算平均值和标准差，可以准确估计基质效应的影响并进行修正。

总之，排除基质效应是确保科学实验准确性的重要步骤。

通过适当的样品处理、内部标准法、校正方法和多重批次分析等手段，可以有效地减少或消除基质效应的干扰，从而获得可靠的实验结果。

ICP光谱分析的四大干扰因素

ICP光谱分析的四大干扰因素ICP光源从本质说是由一个高温光源（包括RF发生器及炬管等）和一个高效雾化器系统所组成。

从ICP问世到如今的大量实践证明，这种光源所进行的分析其所以具有较高精度和准确度，和光源中的干扰较小是分不开的。

但是这并不是说它不存在干扰的问题。

现就ICP 光谱分析中出现的干扰问题分述如下。

1）物理因素的干扰由于ICP光谱分析的试样为溶液状态，因此溶液的粘度、比重及表面张力等均对雾化过程、雾滴粒径、气溶胶的传输以及溶剂的蒸发等都有影响，而粘度又与溶液的组成，酸的浓度和种类及温度等因素相关。

溶液中含有机溶剂时，粘试与表面张力均会降低，雾化效率将有所提高，同时有机试剂大部分可燃，从而提高了尾焰的温度，结果使谱线强度有所提高，当溶液中含有有机溶剂时ICP的功率需适当提高，以抑制有机试剂中碳化物的分子光谱的强度。

除有机溶剂外，酸的浓度和种类对溶液的物理性质也有明显的影响，在相同的酸度时，粘度以下列的次序递增HC l≤HNO3<HClO4<H3PO4≤H2SO4。

其中HCl和HNO3的粘度要按近些，且较小。

而H3SO4 、H3PO4的粘度大且沸点高，因此在ICP光谱分析的样品处理中，尽可能用HCL和HNO3，而尽量避免用H3PO4和H2SO4。

由上述所见，物理因素的干扰是存在而且应设法避免，其中zui主要的办法是使标准试液与待测试样无论在基体元素的组成、总盐度、有机溶剂和酸的浓度等方面都保持完全一致。

目前进样系统中采用蠕动泵进样对减轻上述物理干扰可起一定的作用，另外采用内标校正法也可适当地补偿物理干扰的影响。

基体匹配或标准加入法能有效消除物理干扰，但工作量较大。

2）光谱干扰光谱干扰是ICP光谱分析中zui令人头痛的问题，由于ICP的激发能力很强，几乎每一种存在于ICP中或引入ICP中的物质都会发射出相当丰富的谱线，从而产生大量的光谱“干扰”。

光谱干扰主要分为两类，一类是谱线重叠干扰，它是由于光谱仪色散率和分辨率的不足，使某些共存元素的谱线重叠在分析上的干扰。

一种新型的利用DSS交联剂避免重链轻链干扰的免疫沉淀技术

一种新型的利用DSS交联剂避免重链轻链干扰的免疫沉淀技术当抗原或抗原类似物侵入机体将诱导淋巴细胞尤其是浆细胞，分泌免疫球蛋白即抗体。

本实验用的是实验室自制的多克隆抗体以及纯化蛋白，并且把蛋白用针剂注射至兔子身体内部，兔子在出现免疫之后会产生抗体。

抗体的结构决定了抗体能够与抗原的特异性相结合。

通过观察可以看出，抗体的结构图形与“ Y” 字母相似，分子量大小为150KDa重链和轻链结构是由抗体在高温或还原剂作用下分解而来，在两条比较长的相对分子量中较大的是重链即H链，其分子量的具体大小是55KDa而两条相对较短的中较小是轻链即L 链，其分子量的具体大小是25KDa，“ Y'两个分支的顶端含抗原的特异性结合位点，由重链和轻链共同决定。

抗体具有较强而稳定的氨基酸结构，能够特异结合到抗原上，被应用到免疫沉淀，免疫荧光，免疫组化等免疫学实验技术中。

进行蛋白质与蛋白质亦或是蛋白质同遗传物质之间互补作用的方法之一就是免疫沉淀。

抗体具有能够同抗原进行特异性结合的特点，灵敏度高等优点，达到确定蛋白质机在体内的完整生理特性的效果。

抗体通过捕获抗原达到富集，纯化，目的蛋白或和目的蛋白相互作用的蛋白的目的。

但传统的实验中如果目的蛋白与抗体的重链轻链的大小一致或接近时，将会影响实验者对结果的判断。

因为传统的实验中，抗原-抗体-蛋白A/G磁珠复合物在高温或还原剂作用下分裂为抗原- 抗体复合物和蛋白A/G 磁珠，所以在后续的SDS-PAG检测中的上样液含有抗体，结果中会出现抗体的重链和轻链有可能遮蔽目的蛋白条带，影响实验者对结果的判断。

本实验中使用DSS交联剂使抗体和蛋白A/G磁珠紧密交联，在高温或还原剂作用下抗原- 抗体- 蛋白A/G 磁珠复合物分裂为抗原和抗体- 蛋白A/G 磁珠复合物，在后续的SDS-PAGE 检测中的上样液将不含有抗体，凝胶结果中避免了抗体的重链和轻链的干扰，有利于实验者对实验结果进行精确分析。