高速逆流色谱分离雷公藤中的雷酚内酯异构体_樊希望

图 2 雷公藤粗提物的高速逆流色谱分离纯化图 Fig. 2 Separation and purification of active components
from TWHF by HSCCC
1． 3 化合物 1 单晶的培养与测定 将第一个部位析出的晶体溶于体积比为 1∶ 1 的
氯仿和甲醇的混合溶剂，在室温下静置数天后得到 无色透明的单晶化合物 1（ 12． 1 mg） ，选取合适大小 的晶体进行单晶 X-衍射分析。在温度 93 （ 2） K 下 用经石墨单色化的 MoKɑ 射线（ λ = 0． 071073 nm） 作 为入射辐射，收集衍射数据。用 ω-2θ 扫描方式，在 3． 05° ＜ θ ＜ 27． 48°范围内-9≤h≤9，-16≤k≤15，-43 ≤l≤46，其中收集到的衍射点 26262 个，独立衍射 点 4203 个［R （ int） = 0． 0493 ］，数据的处 理 采 用 SHELXL-97 程序直接解出晶体结构，最后得到 R1 = 0． 0504，wR2 = 0. 1203，R（ int） = 0． 0493。
收稿日期： 2010-03-16
接受日期： 2010-07-05
基金项目： 广西科学与研究开发计划项目（ 桂攻科 0992003A-14） ；
广西研究生教育创新计划项目（ 2008105930703M091）
* 通讯作者 Tel： 86-771-3233718； E-mail： wxwei@ gxu． edu． cn
10-1 nm 1. 362（ 4） 1. 441（ 3） 1. 212（ 3）
Bond length C（ 6） -C（ 5） C（ 5） -C（ 4） C（ 5） -C（ 10）
10-1 nm 1. 526（ 4） 1. 494（ 4） 1. 554（ 4）
摘 要：利用高速逆流色谱法从雷公藤植物粗提物分离得到一个化合物。两相溶剂体系为正己烷 / 乙酸乙酯 /
甲醇 / 水 （ 2∶ 3∶ 3∶ 2，V / V / V / V） ，水相作流动相，有机相作固定相。经单晶 X-衍射分析确定该化合物为雷酚内酯
异构体。晶体参数为： 晶体为正交晶系，空间群为 P2 （ 1） 2 （ 1） 2 （ 1） ； 晶胞参数为： a = 0． 71913 （ 10） nm，b = 1. 25227（ 19） nm，c = 3． 5786（ 5） nm； 晶胞体积为 V = 3． 2227（ 8） nm3 ； Z = 8。
FAN Xi-wang1 ，LIU Li-heng2 ，WEI Wan-xing1* ，ZHOU Min1 ，DU Chuan-rong1
1 Department of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi University，Nanning 530004，China； 2 Department of Chemistry and Biology，Yulin Normal University，，537000，China
Abstract： One compound was isolated from Tripterygium Wilfordii Hook． F． （ TWHF） by high- speed countercurrent chromatography （ HSCCC） ． The solvents used in HSCCC were consisted of n-hexane，ethyl acetate，methanol and water by the ratio of 2∶ 3∶ 3∶ 2 （ V / V / V / V） ． The aqueous solution was the mobile phase and the organic solution was the stationary phase． The structure of this compound was identified as the stereoisomer of triptophenolide by X-ray crystallographic analysis． Crystal data of this compound was found as follows： orthorhombic，space group P2（ 1） 2（ 1） 2（ 1） ，unit cell dimensions： a = 0． 71913（ 10） nm，b = 1． 25227（ 19） nm，c = 3． 5786（ 5） nm； V = 3． 2227（ 8） nm 3； Z = 8． Key words： High-speed countercurrent chromatography （ HSCCC） ； stereoisomer of triptophenolide； Tripterygium Wilfordii Hook． F． （ TWHF）
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天然产物研究与开发
Vol. 23
SPIDEK X-单晶衍射仪（ 日本 Rigaku Inc） ； KQ5200B 型超声波清洗器（ 昆山市超声仪器有限公司） ； X-4 数字显示显微熔点测定仪 （ 北京泰克仪器有限公 司） ； P341LC 型 自 动 旋 光 仪 （ 德 国 PerkinElmer 公 司） ； Nicolet Nexus 470 FT-IR 红 外 光 谱 仪 （ 美 国 Nicolet 公司） ； QP5050A 型 GC-MS（ 日本岛津） 。硅 胶 GF254 、硅胶 200 ～ 300 目（ 青岛海洋化工厂） 。所 用试剂均为分析纯。
取正己烷、乙酸乙酯、甲醇及水按体积比为 2∶ 3 ∶ 3∶ 2 的比例配制 2000 mL 的两相溶剂体系于室温 下静置平衡过夜，上相做固定相（ 即有机相） ，下相 做流动相（ 即水相） 。取 180 mg 粗分样品，溶解在 流动相中配制成 20 mL 样品溶液。利用所选的溶剂 体系及优化后的工艺参数，确定主机中螺旋管柱旋 转速度为 800 r / min，顺时针方向旋转，流动相流速 为 2． 0 mL / min，实验温度为 25． 0 ℃ ，检测波长为 254 nm，进样 180 mg 粗分样品进行分离纯化实验。 得到三个主要成 分 部 位，其 保 留 时 间 分 别 为 185、 227 min 和 320 min。其中第一个部位析出晶体。其 高速逆流色谱分离纯化图如图 2 所示。
雷公藤（ Tripterygium Wilfordii Hook． F． （ TWHF） ） 是卫矛科（ Celastraceae） 雷公藤属木质藤本植物， 主要分布于我国长江流域以南山区和东北长白山 区［1］。雷公藤 作 为 一 种 传 统 中 药 在 我 国 已 有 几 千 年的药用历史，最早见于《神农本草经》，名莽草，在 《纲目拾遗》中有详细记载，又称山砒霜、断肠草、南 蛇藤。作为药物，雷公藤主要用于治疗类风湿性关 节炎和某些皮肤病［2，3］。自上世纪 60 年代开始雷 公藤制剂用于治疗炎症、癌症、麻风病、慢性肾炎、系 统性红斑狼疮等［4-8］疾病。雷公藤中主要含有倍半 萜、二萜、三萜化合物及少量木脂素和其他成分。本 实验利用硅胶柱色谱法对提取物进行粗分，得到的 部位经高速逆流色谱分离得到三个主要成分部位，
图 3 化合物 1 的晶体结构 Fig. 3 Crystal structure of 1
红外光谱数据（ KBr 压片） ν（ cm-1 ） ： 1754、1738、 1672、1613、1567、1489、803、3521、3482。
质谱数据 （ 直 接 进 样） GC-MS （ EI 源，70 ev ） m / z （ % ） ： 312（ M + ，64. 67） 、297（ 100） 、269（ 1. 72） 、 255（ 10. 31 ） 、227 （ 1. 10 ） 、189 （ 1. 88 ） 、187 （ 2. 72 ） 、 159（ 3. 27 ） 、123 （ 0. 32 ） 、91 （ 6. 64 ） ，65 （ 4. 08 ） 、43 （ 10. 19） 。
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2011，23： 1049-1051，1054
文章编号：1001-6880（2011）06-1049-04
高速逆流色谱分离雷公藤中的雷酚内酯异构体
樊希望1 ，刘力恒2 ，韦万兴1* ，周 敏1 ，杜传荣1
1 广西大学化学化工学院，南宁 530004； 2 玉林师范学院化学与生物系，玉林 537000
雷公藤药材采自广西中药材市场，由西北大学 生命科学学院倪士峰博士鉴定，标本（ 080601） 收藏 于本实验室。 1． 2 提取和分离纯化
雷公藤原材料 5 kg，用乙醇在常温下浸泡两周， 抽取滤液并浓缩得到总浸膏 400 g。总浸膏用热水 分散后依次用乙酸乙酯、异戊醇萃取，用旋转蒸发仪 浓缩，分别得到乙酸乙酯部位浸膏，异戊醇部位浸膏 及水部位浸膏。乙酸乙酯部位浸膏经 200 ～ 300 目 硅胶柱层析，以石油醚和乙酸乙酯体积比为 3 ∶ 2 洗 脱，得到粗分样品 6 g。
2 结果与讨论
化合物 1 与 FeCl3 溶液反应呈阳性，初步说明 分子中存在酚羟基。化合物 1 IR 显示有 α，β-不饱 和五元环内酯（ 1754、1738、1672 cm-1 ） ，1，2，3，4-四 取代苯核（ 1613、1567、1489、803 cm-1 ） 以及酚羟基 （ 3521 和 3482 cm-1 ） 。单晶 X-射线衍射法分析得到 化合物 1 的 分 子 式 为 C20 H24 O3 ，相 对 分 子 质 量 为 312. 39，晶体属正交晶系，空 间 群 为 P2 （ 1 ） 2 （ 1 ） 2 （ 1 ） 。 晶 胞 参 数： a = 0. 71913 （ 10 ） nm，b = 1. 25227（ 19） nm，c = 3. 5786（ 5） nm，α = 90 °，β = 90 °，γ = 90 °，晶胞体积 V = 3. 2227（ 8） nm3 ； 密度计 算值 Dc = 1. 288 Mg / m3 ； 晶 胞 中 分 子 数 Z = 8； F （ 000） = 1344； 吸收系数 μ = 0. 085 mm-1 ； 化合物 1 立体结构见图 3，其对应的分子结构如图 1 所示。 部分键长见表 1，部分键角见表 2。化合物 1 为二萜 化合物。