中药色谱指纹图谱相似度评价系统操作规范
中药色谱指纹图谱相似度评价系统
中药色谱指纹图谱相似度评价系统国家药典委员会翟为民背景国家食品药品监督管理局于2000年先后下达“关于加强中药注册管理有关事宜的通知”（国药管注［2000］157号）和关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要号）和“关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要求》的通知”（国药管注［2000］348号）文件。
国家药典委员会负责组织实施“已批准生产的中药注射剂质量标准的提高完善及指纹图谱工作”及牵头组织“已批准多家生产的中药注射剂，其指纹图谱联合起草工作”。
国家药典委员会从2000年12月起开始组织实施，进行了可行性调研、规范性技术文件起草与研究、同布进行了科技部立项。
从中药注射剂的指纹图谱研究质量标准提高逐步从中药注射剂的指纹图谱研究、质量标准提高，逐步成熟、扩展，到2010版药典，部分提取物和中成药标准中都收载了指纹图谱项目，为发挥着积极的作用。
1、论证1论证首先进行调研，多次召开研讨会，代表涉及科研院所、中央和省级药品检验所及企业科技人员。
形成共识：央和省级药品检验所及企业科技人员形成共识：①重点-色谱指纹图谱；②理论上可行。
②理论上可行③通过实践，检验可行性，不断完善。
2、修订《中药注射剂指纹图谱研究技术要求》（国药谱管注［2000］348号）①优化、方法验证，细化参数、明确要求。
②解决手工计算“共有峰”、“非共有峰”面积工作中大量的人为因素，改变“只见树木不见森林”的局面，力求量的人为因素改变“只见树木不见森林”的局面力求反映整体质量特性。
二规范性技术文件起草与研究工作二、规范性技术文件起草与研究工作1、修订修订稿就原料药材、半成品、成品的样品收集、制备、参照物的选择，指纹图谱试验条件，对实验室的要求，对仪器的要求，试验方法和试验条件的建立及验证，色谱条件的优选，指纹图谱的建立和验证、识别、计算和复核，标准书写格式指纹图谱的建立和验证识别计算和复核标准书写格式等进行了详尽的细化规定，起草稿经广泛征求意见，先后进行了多次修改得以完成。
中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版-系统帮助A
附录1：常用色谱工作站AIA（*.cdf）格式文件的导出
本软件系统的相似度运确实是按照峰的积分面积进行的。建议用户从色谱工作站导出AIA（*.cdf）数据文件之前，先对需要导出的数据进行积分处理，如此能够确保导出的AIA（*.cdf）数据文件包含积分数据信息。
Agilent色谱工作站
1.打开Agilent色谱工作站；
附录2：本软件涉及术语的注释，新增功能和常见咨询题及解答
简介
1．版本介绍：
本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004 A）和检验版（2004 B）。研究版要紧用于科学研究工作，具有生成对比图谱功能。检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，功能简化，不具有生成对比图谱的功能。
2．系统运行环境要求：
(1).最低配置：CPU主频533 MHz以上，内存64M，硬盘剩余最小空间100M，操作系统Windows 98以上，屏幕辨论率800×600。
为了使用户尽快找到色谱峰的峰位置，进行匹配点的设置，能够点击“谱图处理”中的“显示色谱峰”（详见“3谱图处理中（5）显示色谱峰”，图20），如此所有样本图谱的所有色谱峰全部显示出来。
样本图谱数量较多时，有些峰面积较大峰的设置较为不变；或者所有样本图谱匹配点设置完毕，但又觉得某些样本图谱匹配点的设置不够理想，这时能够采纳“单谱显示”模式（详见工具栏中“单谱显示”按钮），逐个图谱进行设置和修正。
差不多流程图如下（图29）：
图29
1样本图谱数据导入（AIA格式（*.cdf）,图30和31）
图31
图32
2设参照图谱（图33）
图34
3自动匹配
图35自动匹配结果
4多点校正
图36多点校正设定
图37多点校正后自动匹配结果(图谱)
中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版-系统帮助A
中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本 2004 A)SOP of Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM（Version 2004 A）目录一、软件系统的功能简介：二、附录1：附常用色谱工作站AIA（*.cdf）格式文件的导出三、附录2：本软件涉及术语的注释，新增功能和常见问题及解答一．简介1．版本介绍：本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004 A）和检验版（2004 B）。
研究版主要用于科学研究工作，具有生成对照图谱功能。
检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，功能简化，不具有生成对照图谱的功能。
2．系统运行环境要求：(1). 最低配置：CPU主频533 MHz以上，内存64M，硬盘剩余最小空间100M，操作系统Windows 98以上，屏幕分辨率800×600。
(2). 推荐配置：PVI以上CPU，内存128M，硬盘空间20G，操作系统Windows 2000以上，屏幕分辨率1024×768二．安装方法点击setup.exe后，进入安装程序，如果无其他特殊需要，可以直接点击下一步至安装结束。
图 1三．功能本软件系统包括文件导入，数据库管理，谱图处理，分析检验和帮助等功能。
安装完本系统后，运行“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”执行程序，进入登陆界面（图2），这时需要用户输入用户名和相应的密码（现暂无设置密码）。
点击确定进入启动界面（图3），三秒钟后自动进入本系统运行主界面。
若用户不想在启动界面等待三秒钟，可以直接点击启动界面（图3），这样可以快速进入系统主界面（图4）图2图3图4 系统主界面系统主界面中(图4)，文件信息区（即图谱列表）显示样本编号（如（S1））及文件的路径名称等信息，绘图区显示相应的色谱指纹图谱和样本的编号（如（S12））。
1 文件打开 绘图区文件信息区（1）打开文件（全谱导入）（图5）：图5本系统支持三种格式文件的导入：AIA(即*.cdf)文件，文本文件（*.txt）和Scp(*.Scp)格式文件的导入（图5）。
第三部分-中药指纹图谱研究关键技术及规范
3．2参照物溶液的制备
精密称取样品，用适宜的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。
4 实验
选用的原则都是良好的专属性、重现性和可行性；
专属性： 建立的指纹图谱必须能够表达该品种的惟一特点，即惟一性； 重现性：同一品种同一样品指纹图谱中构成指纹的各特征峰作为整体 (峰位、峰数、峰的丰度、各峰的大致比例)在不同实验室和不同操作 者之间得到的色谱整体特征应有较高的相似度，以表明方法的可行性。 同一品种不同样品之间的相似度不属于此范围； 可行性：色谱方法和试验条件应易于推广和便于执行，即一旦由药品 监督管理部门批准成为质量标准的内容后，生产厂家、中等水平的分 析实验室和省级以上的法 指纹图谱的参照物质一般选取容易获取的一个以上注射剂中的主 要活性成分或指标成分，主要用于考察指纹图谱的稳定程度和重 现性，并有助于色谱的辨认。在与临床药效未能取得确切关联的 情形下，参照物(复方注射剂应首选君药的活性成分或指标成分) 起着辨认和评价色谱指纹图谱特征的指引作用，它并不等同于含 量测定的对照品。指纹图谱一般色谱比较复杂，内标物不易选择， 也不易插入，指纹图谱不是含量测定，故内标物的作用也不等同 于含量测定的内标物，因此应慎重考虑选用内标物质的必要性和 可能性。参照物应说明名称、来源和纯度。如无参照物，可选择 指纹图谱中的稳定的色谱峰作为参照峰，说明其色谱行为和有关 数据，并应尽可能阐明其化学结构及化学名称。如情况需要，且 有可能，也可考虑选择适当的内标物插入色谱中。
实验中的注意事项2
如需梯度洗脱时，应尽量采用线性梯度，并应报告仪 器梯度滞后时间。测定梯度滞后时间，可用一零死体 积连接器代替色谱柱，以甲醇为溶剂A，含O．1％丙 酮的甲醇为溶剂B，检测波长为260nm，运行0～100 ％B的线性梯度，梯度时间20分钟，流速1．Oml／ mm，记录梯度图形，测定梯度曲线中间点的时间， 减去10分钟，即得。不同的仪器，由于梯度滞后时间 的不同，可能影响方法的重现性，通常可通过调整进 样和梯度起始时间减少这种影响；
中药色谱指纹图谱方法学-薄层色谱
半自动薄层点样器；计算机控制、参数可与薄层
扫描仪共享的全自动薄层点样器；自动展开箱；薄
层色谱成像及图像处理系统。
(2)操作规程的规范化 点样——展开——显色 (3)供试品溶液的预处理 “杂质” —— 对待测的活性成分或指标成分形 成干扰。不经预处理，很难得到清晰明确的结果。 例 方法：A.加热回流 B.超声提取 C.液液萃取
RH 32％
42％
47％
58％
65％
72％
展开时温度，用S-1于10℃及28℃分别展开，温度高， 斑点位置抬高，斑点扩散。溶剂系统配制时放置分层的 温度也很重要，25℃以上放置混合溶剂不分层，展开效 果很差。如在低于分层温度下展开，则溶剂系统脱混， 色谱扭曲变形。经比较5～10℃分层。10～25℃展开为宜。
二、中药色谱指纹图谱方法学
◆ 高效液相色谱(HPLC)
◆ 薄层色谱(TLC) ◆ 气相色谱(GC)
◆ 毛细管电泳(CE)
（二）薄层色谱
1.概 述
快速、简单、灵敏——鉴别、含量分析 器械、仪器、计算机化、自动化 —— 快速
发展
指纹谱特点：
①结果直观
②离线操作的灵活性
2.薄层色谱操作规程
可选择
系统适用性试验
+13号峰(Re+三七皂苷R1；未分开)
8.结语
(1) 人参、西洋参、三七的共有成分——人参皂
苷Rbl、Re、Rgl。
人参特征性成分——人参皂苷-Rf 西洋参特征性成分——拟人参皂苷-F11 三七特征性成分——三七皂苷-R1 人参和西洋参： Rb1、Rd、Re Rg1 木质部>皮部
于显色后，再喷雾或浸渍液体石蜡-己烷(1：1)混合溶 剂。 扫描：荧光方式，λ ex366nm，滤光片K400。
中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版系统帮助A
2数据库功能:
数据库管理包括药材信息建档（图9）、制剂信息建档（图10)和参照图谱建档功能（图11）,便于用户信息管理。
图9
图10
图11
3谱图处理:
（1）数据剪切
数据剪切功能可使用户选择一定时间范围内的色谱数据进行匹配。
点击“谱图处理”中的“数据剪切”功能,系统会提示用户是否需要恢复原始数据，点击确定后进入“数据剪切”功能对话框，如图（12):
图2
图３
图４系统主界面
系统主界面中(图4),文件信息区（即图谱列表）显示样本编号（如(S1))及文件的路径名称等信息，绘图区显示相应的色谱指纹图谱和样本的编号(如(Ｓ1２)）。
1文件打开
（１)打开文件(全谱导入)(图５):
图5
本系统支持三种格式文件的导入:AＩA(即*．cdｆ)文件,文本文件(*.txｔ)和Scp(*.Ｓcp)格式文件的导入(图５）。建议采用通用的AIA(*.ｃｄf）格式文件导入。注意ＡＩA（＊.cdf)文件中应包含样本图谱的峰面积信息，在色谱工作站导出AＩA(*．cdf)文件前应现进行积分。否则导出的AIA(*．cｄf)文件可能因不包含峰面积信息而无法导入。为了方便用户的使用，附录中给出了主要色谱工作站的（AGIＬＥＮT,WATＥRS，和ＳHIＭAＤZU）AIA(＊.ｃdf）数据格式的文件导出介绍。
中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版-系统帮助A.．
———————————————————————————————— 作者：
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ﻩ
中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范
(版本 2004A)
ＳOPof Simｉlａriｔy evaluａtｉoｎsysｔem foｒｃhromaｔoｇraｐhic fｉnｇｅrpｒinｔof TＣＭ（Version 20０4 A）
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中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本 2004 A)SOP of Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM（Version 2004 A）目录一、软件系统的功能简介：二、附录1：附常用色谱工作站AIA（*.cdf）格式文件的导出三、附录2：本软件涉及术语的注释，新增功能和常见问题及解答一．简介1．版本介绍：本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004 A）和检验版（2004 B）。
研究版主要用于科学研究工作，具有生成对照图谱功能。
检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，功能简化，不具有生成对照图谱的功能。
2．系统运行环境要求：(1). 最低配置：CPU主频533 MHz以上，内存64M，硬盘剩余最小空间100M，操作系统Windows 98以上，屏幕分辨率800×600。
(2). 推荐配置：PVI以上CPU，内存128M，硬盘空间20G，操作系统Windows 2000以上，屏幕分辨率1024×768二．安装方法点击setup.exe后，进入安装程序，如果无其他特殊需要，可以直接点击下一步至安装结束。
图 1三．功能本软件系统包括文件导入，数据库管理，谱图处理，分析检验和帮助等功能。
安装完本系统后，运行“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”执行程序，进入登陆界面（图2），这时需要用户输入用户名和相应的密码（现暂无设置密码）。
点击确定进入启动界面（图3），三秒钟后自动进入本系统运行主界面。
若用户不想在启动界面等待三秒钟，可以直接点击启动界面（图3），这样可以快速进入系统主界面（图4）图2图3图4 系统主界面系统主界面中(图4)，文件信息区（即图谱列表）显示样本编号（如（S1））及文件的路径名绘图区文件信息区称等信息，绘图区显示相应的色谱指纹图谱和样本的编号（如（S12））。
1 文件打开（1）打开文件（全谱导入）（图5）：图5本系统支持三种格式文件的导入：AIA(即*.cdf)文件，文本文件（*.txt）和Scp(*.Scp)格式文件的导入（图5）。
色谱指纹图谱评价
规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检测 结果有相近程度（离散度）
同样的操作条件下在较短的时间间隔的精密度 线性范围内至少测定 9 次或100％的试验浓度下测 定6次
中间精密度（Intermediate Precision）
实验室内部条件改变测定的精密度
重现性（Reproducibility）
《中国药典》关于药材所收录的信息
目前中药质量控制的局限
● 缺乏化学对照品
● 化学对照品缺乏专属性
齐墩果酸、熊果酸、大黄酸、槲皮素、小檗碱
●
物质群体间的量化特征无法体现
黄柏、黄连—— 小檗碱、巴马亭的比例
人参、西洋参或三七——几种人参皂苷的比例
●
中药整体的用药的特色无法体现
中药色谱指纹图谱的提出
● 中药依赖其所含的多种化学成份发挥疗效
指纹图谱的实验研究
色谱方法选择的原则
♦ 专属性 建立的指纹图谱必须能够表达该品种的特征
♦ 重现性
同一品种同一样品指纹图谱中构成指纹特征的各 特征峰（或斑点）作为整体（峰位、峰数、峰的丰 度、各峰的大致比例）在不同实验室和不同操作者 之间得到的色谱整体特征应有较高的相似度 ♦ 普遍适用性 色谱方法和实验条件应易于推广和便于操作
●
准确度（Accuracy）
测定系统所的指纹图谱与‚对照用指纹图谱‛之 间的相近程度
系统准确度
仪器的操作指标与波动范围 样品在分析系统中的残留和对基线的响应 色谱分离情况（峰纯度、再现程度、峰型变化描述） 指标成分的定量内容
结果准确度
多批次（10 批以上）样品测定结果的相似度
●
精密度（Precision）
◆ 半成品
中药技术现代化技术-指纹图谱
02
发展新型检测技术和仪器
研发更精确、更灵敏的检测方法和仪器，满足指纹图谱需求。
03
强化传统理念与现代技术融合
在传承中药理念的基础上，运用现代技术手段，推动中药指纹图谱的发
展。
未来发展趋势预测
技术不断创新
随着科技的进步，中药指纹图谱技术将不断创新，提高准确性和 可靠性。
应用范围扩大
中药指纹图谱将逐渐应用于更多领域，如药品质量控制、新药研 发等。
指导。
中药生产过程监控
指纹图谱技术可以实时监控中 药生产过程中的关键环节，确 保生产过程的稳定性和可控性。
通过对生产过程中指纹图谱的 变化分析，可以及时发现生产 过程中的异常情况，避免生产 事故的发生。
指纹图谱技术还可以应用于中 药生产过程的优化和改进，提 高生产效率和产品质量。
中药疗效评价与机理研究
的快速筛选和鉴定。
03 中药指纹图谱建立方法与 流程
样品选择与制备
01
选择具有代表性的中药样品，确 保其能够反映该中药的整体质量 特性。
02
对样品进行适当的制备处理，如 粉碎、提取、浓缩等，以获得符 合指纹图谱分析要求的样品。
数据采集与处理
采用高效、灵敏的现代分析仪器，如 色谱仪、光谱仪等，对中药样品进行 全面的化学成分分析。
面临挑战
技术标准化难度大
中药成分复杂，不同药材、不同批次间存在差异，制定统一标准 面临挑战。
检测方法与仪器限制
现有检测方法和仪器精度、灵敏度等方面可能无法满足指纹图谱要 求。
传统理念与现代技术融合
如何将传统中药理念与现代技术相结合，是中药指纹图谱面临的重 要问题。
解决方案探讨
01
加强标准化建设
中药指纹图谱操作技巧指南
中药指纹图谱操作指南说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。
本指南未能概括的内容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。
指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。
光谱指纹图谱将另行规定。
一、供试品收集供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。
收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
(一) 原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。
由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。
药材的"批" 不是工业生产的"批"，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。
由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。
供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括：药材名称供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。
收集时间（购买时间）及收集人货源情况调查（货源是否充足和稳定）基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地收集的药材结合植物形态鉴定品种。
中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行)
(二) 半成品(提取物)：药材所含成分的个体差异是难以避免的，指纹图谱研究用的半成品应来自生产车间通过药材混批调整及规范的生产工艺生产的实际样品。关键技术及相应参数填写于表二，并附试验完毕后指纹图谱。
表二（推荐）
半成品（提取物）名称
混批前批号
日期
提取方法（关键技术）
中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行）
国家药典委员会
2002年4月27日
说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。本指南未能概括的内容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。光谱指纹图谱将另行规定。
如以中药饮片或炮制品为起始原料，应采用符合中国药典或饮片炮制规范的供试品。
申报资料可将关键内容扼要填写于表一中：
表一（推荐）
药材名称
供试品编号
供试品来源
收集时间（购买时间）及收集人
货源情况调查
基原鉴定及鉴定人
学名： 鉴定人：
质量评估
供试品留样
数量： 容器： 贮藏地点及条件：
标签
原始记录保存处
附一：药材外形照片。
(二)参照物溶液的制备：精密称取，用适宜的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。
四、实验
常用的色谱技术有薄层色谱、液相色谱、气相色谱及其他色谱技术。须注意各种色谱技术的特点和不足，结合实际选用。不论何种色谱技术，选用的原则是必需具有良好的专属性、重现性和可行性。
专属性：建立的指纹图谱必须能够表达该品种的特征，即唯一性。
药材名称
供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。
中药指纹图谱操作指南
中药指纹图谱操作指南说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。
本指南未能概括的容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。
指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。
光谱指纹图谱将另行规定。
一、供试品收集供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。
收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
(一) 原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。
由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。
药材的"批" 不是工业生产的"批"，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。
由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。
供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，容包括：药材名称供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。
收集时间（购买时间）及收集人货源情况调查（货源是否充足和稳定）基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地收集的药材结合植物形态鉴定品种。
中药色谱指纹图谱方法学薄层色谱
展开剂———薄层色谱的关键
展开剂优化———依靠经验
鉴别判断信息多
展开剂要求———分离度高，斑点多。
展开剂最优化模式难以计算：
（1）样品中多类别成分共存，优化模式难以外延。
（2）溶剂蒸气在展开中起着举足轻重作用，但又 难以获得可测量的参数
(5)溶剂蒸气对色谱行为的影响
薄层色谱——“开放”环境下展开，展开剂蒸气 也参与展开全过程。
大 黄 游离蒽醌薄层色谱分析, 展开剂为石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)，用新鲜开瓶的甲酸乙酯时，5种游离蒽醌分离度很好
。
生晒人参
D S1中浓氨水改为水，一侧槽中用浓氨水平衡，分离效果同B。
高丽红参
文献多用30％～5O％硫酸喷雾显色，经改进为5％～10％硫酸乙醇液喷雾或浸渍后，立即加热显色，以免斑点在原位扩散。
半自动薄层点样器；计算机控制、参数可与薄层 扫描仪共享的全自动薄层点样器；自动展开箱；薄 层色谱成像及图像处理系统。
(2)操作规程的规范化 点样——展开——显色 (3)供试品溶液的预处理
“杂质”——对待测的活性成分或指标成分形 成干扰。不经预处理，很难得到清晰明确的结果。 例
方法：A.加热回流 B.超声提取 C.液液萃取
D.固液萃取——样品的提取液通过固相小柱处 理。吸附、键合相分配、正相、反相、离子对、离 子交换原理富集待测组分，去除部分杂质。
如雪莲花, 甲醇提 取液，不经净化处理， 色谱的可见光或荧光图 像与经预处理(Ｃ18小 柱洗脱)的图像比较， 很显然经过预处理将杂 质去除后色谱图像质量 明显提高。
(4)展开溶剂的选择
18℃
27℃
(3)显色及扫描方式的选择
文献多用30％～5O％硫酸喷雾显色，经改进为5％～
中药色谱指纹图谱相似度评价系统
中药色谱指纹图谱相似度评价系统国家药典委员会翟为民背景国家食品药品监督管理局于2000年先后下达“关于加强中药注册管理有关事宜的通知”（国药管注［2000］157号）和关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要号）和“关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要求》的通知”（国药管注［2000］348号）文件。
国家药典委员会负责组织实施“已批准生产的中药注射剂质量标准的提高完善及指纹图谱工作”及牵头组织“已批准多家生产的中药注射剂，其指纹图谱联合起草工作”。
国家药典委员会从2000年12月起开始组织实施，进行了可行性调研、规范性技术文件起草与研究、同布进行了科技部立项。
从中药注射剂的指纹图谱研究质量标准提高逐步从中药注射剂的指纹图谱研究、质量标准提高，逐步成熟、扩展，到2010版药典，部分提取物和中成药标准中都收载了指纹图谱项目，为发挥着积极的作用。
1、论证1论证首先进行调研，多次召开研讨会，代表涉及科研院所、中央和省级药品检验所及企业科技人员。
形成共识：央和省级药品检验所及企业科技人员形成共识：①重点-色谱指纹图谱；②理论上可行。
②理论上可行③通过实践，检验可行性，不断完善。
2、修订《中药注射剂指纹图谱研究技术要求》（国药谱管注［2000］348号）①优化、方法验证，细化参数、明确要求。
②解决手工计算“共有峰”、“非共有峰”面积工作中大量的人为因素，改变“只见树木不见森林”的局面，力求量的人为因素改变“只见树木不见森林”的局面力求反映整体质量特性。
二规范性技术文件起草与研究工作二、规范性技术文件起草与研究工作1、修订修订稿就原料药材、半成品、成品的样品收集、制备、参照物的选择，指纹图谱试验条件，对实验室的要求，对仪器的要求，试验方法和试验条件的建立及验证，色谱条件的优选，指纹图谱的建立和验证、识别、计算和复核，标准书写格式指纹图谱的建立和验证识别计算和复核标准书写格式等进行了详尽的细化规定，起草稿经广泛征求意见，先后进行了多次修改得以完成。
中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范
精心整理中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本2004 A) SOPofSimilarityevaluationsystemforchromatographicfingerprintofTCM（Version2004 A）一．简介1．版本介绍：本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004 A）和检验版（2004B）。
研究版主要用于科学研究工作，具有生成对照图谱功能。
检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，不具有生成对照图谱的功能。
2．系统运行环境要求：(1).最低配置：CPU主频533MHz以上，内存64M，硬盘剩余最小空间100M，操作系统Windows98以上，屏幕分辨率800×600。
(2).推荐配置：PVI以上CPU，内存128M，硬盘空间20G，操作系统Windows2000以上，屏幕分辨率1024×768二．安装方法点击setup.exe后，进入安装程序，如果无其他特殊需要，可以直接点击next至安装结束。
图1 三．功能本软件系统包括文件导入，数据库管理，谱图处理，分析检验和帮助等功能。
安装完本系统后，运行“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”执行程序，进入登陆界面（图2），这时需要用户输入用户名和相应的密码（现暂无设置密码）。
点击确定进入启动界面（图3），三秒钟后自动进入本系统运行主界面。
图 2图3图4绘图区文件信息区形。
1文件打开（1）打开文件（全谱导入）（图5）：图5本系统支持三种格式文件的导入：AIA(即*.cdf)文件，文本文件（*.txt）和Scp(*.Scp)格式文件的导入（图5）。
为了方便用户的使用，附录中给出了主要色谱工作站的（AGILENT，WATERS，和SHIMADZU）AIA数据格式的文件导出介绍。
（2）导出文件（保存图谱）本系统支持将导入的图谱数据文件以文本文件（*.txt）导出保存（图6）。
图6（3）导出图象（211），3（1）（2••（图14）图14•自动匹配：本系统提供自动匹配功能，可实现色谱峰的自动匹配。
相似系统理论用于中药色谱指纹图谱的相似度评价
似度时， 不能保证 % & 3 ’ )" 对所 有的样 品 或 色 谱 峰 都适用。因此 3 ’ 的有些值大于 " ， 有些值小于 "， 经 求和平均计算之后， 部分差异就会被抵消。 ! ! 为了客观地评 价 中 药 色 谱 指 纹 图 谱 的 相 似 度， 我们对程度相似度的计算公式进行了改进。在改进 的程度相似 度 的 计 算 公 式 中， 以 &’ 2 (’ 表 示 相 似 要 说明两者的相似程 素的相似程度， 比值越接近于 " ， 度越高； 以 " ’ & ’ 2 ( ’ 表示 相 似 要 素 的 差 异。 为 了 解 决差异被抵消的问 题， 我们采用差异的绝对值进行 计算。将相似要素 的 差 异 取 绝 对 值 之 后 求 和， 即用
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其中 5 &’ 为 " 色谱图中 & ’ 峰的峰面积或 峰高， 5 (’ 为 # 色谱图中对应的色谱峰 ( ’ 的峰面积或峰高。
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!" 实验研究
! ! #" 香丹注射液的实验研究 ! ! # ! #" 仪器与试剂 ! ! 高效 液 相 色 谱 （ -./0 ） 系 统： 岛 津 /01"% "234 高压泵， 岛 津 (.215"% "34 二 极 管 阵 列 检 测 器， 岛 津 0/"((134 工作 站； 柱 温 箱： 601"%% （ 天津市金洲 科学仪器有限公司） 。 ! ! 试剂： 甲醇 （ 色谱纯） ， 冰醋酸 （ 分析纯 ） ， 二次重 蒸水。 ! ! # ! !" 样品 ! ! 香丹注射液 （ 上海通用药业股份有限公司第三 %#"%""* ， %#"%""+ ， 公 司 ）"% 批，批 号 为 %#"%)! ， %#"%"!, ， %#"%+! ， %#"%*+ ， %#"%"", ， %#"%"#% ， %#"%"%+ 和 %#"%""! 。 ! ! # ! $" 色谱条件 ! ! 色谱条件参照文 献 ［#］ ， 并 进 行 了 方 法 学 考 察。 色谱 柱： "77+89% 0 ") 柱（ !( &9 : $- + 99 8- ’- ，( ， 柱温 #% ; 。 流 动 相： "， " <（ 体 积 分 数， 以下 !9） 同此） 冰 醋 酸 水 溶 液； #， " < 冰 醋 酸 甲 醇 溶 液； 采用 梯度洗脱 （ 程 序 为： "% < # , "%% < # （ % . (( 98) ） ， "%% < # , "% < # （ (( . +% 98) ） ， "% < # （ +% . *% 98) ） ） ； 流速为 "- % 9/ = 98) 。检 测波长 为 !)% )9 。 进样量为 !% ! / 。 ! ! # ! %" 供试品溶液的制备 ! ! 精 密 量 取 香 丹 注 射 液 %- (% 9/ 于 "% 9/ 量 瓶
【VIP专享】中药注射剂色谱指纹图谱试验研究操作规程指引(修订稿)
中药注射剂色谱指纹图谱试验研究操作规程指引（修改稿）供讨论用说明：本操作规程为规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而订，规定未能概括的内容，可自行补充调整，但申报资料中须有相应的说明和申述。
操作规程中的“色谱指纹图谱”包括柱色谱及平面色谱（薄层色谱），后者指色谱的彩色图像及扫描轮廓图。
光谱指纹图谱及脱氧核糖核酸指纹图谱另有规定。
一、样品收集样品收集是试验研究指纹图谱的最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，所以要收集有代表性的样品。
收集不少于10批样品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
（一）原料药材：在缺乏科学依据说明药材的化学成分与中医临床疗效的之间关联的情况下，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，所以在指纹图谱的宏观特征一致的条件下，药材样品个体的差异是正常的，因此须反映指纹图谱的真实性，以此作为选择原药材投料或混批提取的重要依据。
药材的“批”不是工业生产的“批”，是指相互独立的样品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的样品分成若干份样品，以保证试验结果的代表性。
由于收集药材样品受主观和客观的条件限制，供试验的样品严格讲均没有统计学的意义，所以样品数越多越好，10批是最低的要求。
样品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括：♦药材名称♦样品来源（真实记录样品是来自何处：传统产地采集或是资源丰富的产地采集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等）。
♦采集时间（购买时间）及采集人♦货源情况调查（货源是否充足、是否稳定、产地近三年的情况）♦基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地采集的药材品中结合植物形态鉴定品种。
如缺原植物，只能由熟练的专业人员凭性状或显微特征鉴别。
如近缘品种难以区分的野生品种（如白花蛇舌草），应在其后的指纹图谱研究中仔细比较，如获得的指纹图谱相似度很高，也可应用，但须明确记录。
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2数据库功能：
数据库管理包括药材信息建档（图9）、制剂信息建档（图10）和参照图谱建档功能（图11），便于用户信息管理。
图9
图10
图11
3谱图处理：
（1）数据剪切
采用数据剪切功能用户可以选择一定时间范围内的色谱数据进行匹配（图12）。
图12
（2）色谱峰匹配
色谱峰匹配包括指定参照峰，指定基准峰和自动匹配。下面逐一介绍：
图28多点校正设定
图29多点校正后自动匹配结果
5对照图谱生成
图30
图31
图32
图33
图34
附常用色谱工作站格式文件的导出：
色谱工作站
1.打开色谱工作站；
2.进入数据处理（>>）；
3.调入要输出的色谱文件（>> …）；
4.进入数据输出窗口（>> >> …），进入方式如下图所示：
在弹出窗口中指定导出路径及文件名，确定。可导出格式文件。
用户通过“打印报告”功能将分析结果打印出来。打印报告中包括报表信息输入（图19）和分析报告两部分（图20和21）。其中分析报告包括原始指纹图谱，匹配后图谱和相似度评价结果。
图19
图20
图21
5帮助
为方便用户使用，本系统提供简洁完整的联机帮助。
6工具栏按钮简介：
工具栏按钮如图所示(图22)。
其中大部分按钮的功能在前面已经介绍过，不再赘述。这里将重点介绍“数据恢复”，“图谱间距”，“单谱显示”和x与y轴放大功能。
四卸载
在控制面板中，采用添加/删除程序卸载本程序。
五应用实例
为方便用户快速掌握本系统，我们以一例子加以介绍。
例：对获取的色谱指纹图谱建立对照图谱，进行相似度评价，并打印报告。
基本流程图如下（图23）：
图23
1样本图谱数据导入（格式）
图24
图25
2设参照图谱
图26
3自动匹配
图27自动匹配结果
4多点校正
图14
自动匹配：
本系统提供自动匹配功能，可实现色谱峰的自动匹配。自动匹配时，需要用户设置时间漂移，系统默认值为0.1（图13）。用户可以调节此参数以调整色谱峰的匹配结果。
（4）生成对照图谱
对照图谱的生成需要先进行谱峰匹配然后才能生成对照图谱。其生成方法包括均值法和中位数法（图13）。用户可以根据需要选择合适的方法生成对照图谱（见图15中标识为R的图谱），并以特殊格式导出（图14和16，对照图谱不能在“文件”菜单中以“导出文件”导出，必须以图14所示菜单中“导出对照图谱导出”）。对于注射剂建议采用均值法产生对照指纹图谱；对于中药材，建议采用中位数法产生对照指纹图谱。
中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范
(版本2004A)
（
一．简介
1．版本介绍：
本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004 A）和检验版（2004 B）。研究版主要用于科学研究工作，具有生成对照图谱功能。检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，不具有生成对照图谱的功能。
2．系统运行环境要求：
(1).最低配置：主频533以上，内存64M，硬盘剩余最小空间100M，操作系统98以上，屏幕分辨率800×600。
（1）数据恢复
“数据恢复”功能是使当前处理结果恢复到图谱数据刚导入的状态。
（2）图谱间距
“图谱间距”可以调节绘制图谱间的距离，便于用户观察和分析。
（3）单峰显示
“单峰显示”可使选中的图谱单个显示，便于用户观察和分析单个样本图谱。
（4）x与y轴放大功能
通过此功能可以对图谱的x和y轴进行放大和缩小，系统默认值为100％。
图2
图3பைடு நூலகம்
图4
系统主界面中，文件信息区显示文件的路径名称等信息，绘图区显示相应的色谱指纹图谱的图形。
1文件打开
（1）打开文件（全谱导入）（图5）：
图5
本系统支持三种格式文件的导入：(即*)文件，文本文件（*）和(*)格式文件的导入（图5）。为了方便用户的使用，附录中给出了主要色谱工作站的（，，和）数据格式的文件导出介绍。
5.若选择输出文本格式文件（>> >> …），会弹出数据输出窗口。在数据输出窗口中，选中选项，在输入框中输入相应的文件名及文件保存路径。点击。
在窗口下，选中及Y两选项，点击后即可。
6.重复以上操作，依次输出。
M32色谱工作站
建立输出方法
登陆M32，右击小窗口，选择相应的。
在窗口中选定标签页面下要输出的某个数据（点黑）
(2).推荐配置：以上，内存128M，硬盘空间20G，操作系统2000以上，屏幕分辨率1024×768
二．安装方法
点击后，进入安装程序，如果无其他特殊需要，可以直接点击至安装结束。
图1
三．功能
本软件系统包括文件导入，数据库管理，谱图处理，分析检验和帮助等功能。安装完本系统后，运行“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”执行程序，进入登陆界面（图2），这时需要用户输入用户名和相应的密码（现暂无设置密码）。点击确定进入启动界面（图3），三秒钟后自动进入本系统运行主界面。
（2）导出文件（保存图谱）
本系统支持将导入的图谱数据文件以文本文件（*）导出保存（图6）。
图6
（3）导出图象
将导入绘制的色谱图谱也可以图象形式存放，文件格式为*（图7）。
图7
（4）图谱删除
本系统提供谱图删除功能（图8）。可以选中某一谱图删除（删除当前图谱功能），也可将导入的谱图全部删除（清除所有图谱数据）。
指定参照图谱：用户可以任意选择一条色谱图谱作为指定参照图谱。在图所示的对话框中输入参照图谱编号确定后即可将编号对应的图谱指定为参照图谱（图13）。该图谱变为红色，以区别于其他图谱。
图13
多点校正：系统支持“多点校正”功能。用户根据需要直接在图谱上设置匹配点（匹配点数不限）进行多点校正。若设置结果不满意，再点击设置的匹配点即可取消以前设置的匹配点。（图14）
图15
图16
（5）随机着色谱图：
用户可以对绘制图谱的颜色进行随机着色（图14）。
4分析检验：
（1）相似度计算：
对照图谱生成后，用户通过“相似度计算”功能进行色谱图谱样本与对照图谱的相似度评价。评价结果以表格形式显示，并可保存（图17和18）。或将结果拷贝到剪贴板上以方便用户使用。
图17
图18
（2）打印报告：
方法一：在菜单下，选下的…以建立输出方法模板
方法二：在菜单下，选…，在窗口下点击按钮。
方法一：方法二：或选中需要输出的数据文件，
在随后出现的窗口
下的框中填入输出方法名
关闭界面
方法一：
回到在窗口，选中要输出的一个或多个数据；
在菜单下选；
在随后出现的界面下确认项下的框打勾，