尼美舒利对人胃癌SGC7901 VCR 细胞耐药逆转作用

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不同温度热疗逆转人胃癌耐药细胞SGC7901／DDP耐药性的研究

４１，４２。４３ａｎｄ４４℃ ｔＯｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅ．Ｓｕｒｖｉｖｉｎｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎｃｅｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ．ＭｅｔｈｏｄｓＷｅｃｕｌｔｕｒｅｄｔｈｅｍｕｌｔｉ — ｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｒｅｖｅｒｓａｌｅｆｆｅｃｔａｎｄｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙｏｎｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔ —
法
采用体外细胞培养技术，培养人胃癌耐药细胞株ＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ。设计不同温度（４１、４２、４３、４４℃ ）热疗联合
化疗处理ＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ细胞，检测其凋亡率及细胞周期的改变，流式细胞仪、反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检
ｖｉｖｉｎ表达有关。
【关键词】抗药性，肿瘤；高温，诱发；细胞周期；ＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ；Ｓｕｒｖｉｖｉｎ

胃热消炎合剂对人胃癌细胞sgc-7901增殖影响的机制研究

胃热消炎合剂对人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖影响的机制研究孙瑛蔚ꎬ赵梓亦ꎬ张㊀敏ꎬ柯㊀洪ꎬ黄㊀宁ꎬ杨玉婷(成都中医药大学附属医院ꎬ四川成都６１００７１)㊀㊀[摘要]㊀目的㊀研究胃热消炎合剂对人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖的影响ꎮ方法㊀取对数生长期的人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１进行体外实验ꎬ其中空白血清组加入含１０％正常血清培养ꎬ低剂量含药血清组加入含２.５％药物血清＋７５％正常血清培养ꎬ中剂量含药血清组加入含５％药物血清＋５％正常血清培养ꎬ高剂量含药血清组加入含１０％药物血清培养ꎬ胃热消炎合剂含药血清通过给大鼠灌胃的方式获得ꎮ分别采用ＣＣＫ－８法㊁ＥｄＵ染色法和免疫荧光法检测各组细胞增殖情况ꎬ采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测各组细胞增殖信号通路ｐ５３－ｐ２１的相关基因ｐ２１㊁ｐ５３㊁ＣｙｃｌｉｎＤ１㊁ＣＤＸ２㊁ＣＤＫ７ｍＲＮＡ的表达情况ꎬ采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞中ｐ２１㊁ｐ５３㊁ＣｙｃｌｉｎＤ１㊁ＣＤＸ２蛋白表达水平ꎮ结果㊀各含药血清组ＳＧＣ－７９０１细胞增殖受到明显抑制ꎬ且呈浓度依赖性ꎮ各含药血清组ｐ２１㊁ｐ５３ｍＲＮＡ表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<００５)ꎬＣｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达水平均明显低于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬ且呈浓度依赖性ꎻ各组ＣＤＸ２㊁ＣＤＫ７ｍＲＮＡ表达水平比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎮ各含药血清组ｐ２１蛋白表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬ且呈浓度依赖性ꎻ低剂量含药血清组和中剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬ而高剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平明显低于空白血清组(Ｐ<０.０５)ꎻ各组ＣｙｃｌｉｎＤ１㊁ＣＤＸ２蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎮ结论㊀胃热消炎合剂可能通过作用于细胞周期来抑制人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖ꎬ其可能具有预防和治疗早期胃癌的作用ꎮ[关键词]㊀胃热消炎合剂ꎻ人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１ꎻ细胞增殖ꎻＰ２１ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００８－８８４９.２０２０.０９.００４[中图分类号]㊀Ｒ７３５.２㊀[文献标识码]㊀Ａ㊀[文章编号]㊀１００８－８８４９(２０２０)０９－０９２７－０６[作者简介]㊀孙瑛蔚ꎬ女ꎬ硕士ꎬ主管药师ꎬ研究方向为医院药学ꎮ[通信作者]㊀赵梓亦ꎬＥ－ｍａｉｌ:６４９４０４０４＠ｑｑ.ｃｏｍ[基金项目]㊀成都市科技局资助项目(２０１５－ＨＭ０１－００２９１－ＳＦ)ꎻ成都市卫计委资助项目(２０１５０６９)ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＷｅｉｒｅＸｉａｏｙａｎｍｉｘｔｕｒｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＳＧＣ￣７９０１ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍＳＵＮＹｉｎｇｗｅｉꎬＺＨＡＯＺｉｙｉꎬＺＨＡＮＧＭｉｎꎬＫＥＨｏｎｇꎬＨＵＡＮＧＮｉｎｇꎬＹＡＮＧＹｕｔｉｎｇ(ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＣｈｅｎｇｄｕ６１００７１ꎬＳｉｃｈｕａｎꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＩｔｉｓｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＷｅｉｒｅＸｉａｏｙａｎｍｉｘｔｕｒｅｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ￣７９０１.ＭｅｔｈｏｄｓＨｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＳＧＣ￣７９０１ｉｎｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｖｉｔｒｏ.Ｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈ１０％ｎｏｒｍａｌｓｅｒｕｍꎬｔｈｅｌｏｗ￣ｄｏｓｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓａｄｄ￣ｅｄｗｉｔｈ２.５％ｄｒｕｇｓｅｒｕｍ＋７.５％ｎｏｒｍａｌｓｅｒｕｍꎬａｎｄｔｈｅｍｅｄｉｕｍ￣ｄｏｓｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓａｄｄｅｄｗｉｔｈ５％ｄｒｕｇｓｅｒｕｍ＋５％ｎｏｒｍａｌｓｅｒｕｍꎬｔｈｅｈｉｇｈｄｏｓｅ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙａｄｄｉｎｇ１０％ｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍꎬａｎｄｔｈｅＷｅｉｒｅＸｉａｏｙａｎｍｉｘｔｕｒｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｔｏｒａｔｓ.ＣＣＫ￣８ｍｅｔｈｏｄꎬＥｄＵｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐꎬａｎｄＲＴ￣ＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｏｆｐ５３￣ｐ２１ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｐ２１ꎬｐ５３ꎬＣｙｃｌｉｎＤ１ꎬＣＤＸ２ａｎｄＣＤＫ７ｍＲＮＡꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｐ２１ꎬｐ５３ꎬＣｙｃｌｉｎＤ１ａｎｄＣＤＸ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐ.ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＳＧＣ￣７９０１ｃｅｌｌｓｉｎｅａｃｈｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ￣ｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄꎬａｎｄｉｔｗａｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ.Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐ２１ａｎｄｐ５３ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅａｃｈｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒ￣ｕｍｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐ(ａｌｌＰ<０.０５)ꎬａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＣｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐ(ａｌｌＰ<０.０５)ꎬａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ￣ｄｅ￣ｐｅｎｄｅｎｔꎻＴｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣＤＸ２ａｎｄＣＤＫ７ｍＲＮＡｂｅｔｗｅｅｎｅｖｅｒｙｇｒｏｕｐｓ(ａｌｌＰ>０.０５).Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐ２１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅａｃｈｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐ(ｂｏｔｈＰ<０.０５)ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔꎻｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｉｎｔｈｅｌｏｗ￣ｄｏｓｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｍｅｄｉｕｍ￣ｄｏｓｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈ￣ｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐ(ａｌｌＰ<０.０５)ꎬｂｕｔｔｈｅｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｉｇｈ￣ｄｏｓｅｄｒｕｇ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｅｂｌａｎｋｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐ(Ｐ<０.０５)ꎻｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣｙｃｌｉｎＤ１ａｎｄＣＤＸ２ｐｒｏｔｅｉｎｂｅｔｗｅｅｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ(Ｐ>０.０５).ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＷｅｉｒｅＸｉａｏｙａｎｍｉｘｔｕｒｅｍａｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＳＧＣ￣７９０１ｂｙａｃｔｉｎｇｏｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅꎬｗｈｉｃｈｍａｙｈａｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｏｎｅａｒｌｙｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＷｅｉｒｅＸｉａｏｙａｎｍｉｘｔｕｒｅꎻｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＳＧＣ￣７９０１ꎻｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎻＰ２１㊀㊀胃癌是全世界范围内第三大常见的恶性肿瘤ꎬ对人类的健康造成极大的威胁ꎬ其５年生存率和不带瘤生存时间均不理想[１－４]ꎮ目前我国胃癌的主要治疗方法有手术㊁化疗㊁放疗[１]ꎬ虽然对早中期胃癌疗效明显ꎬ但晚期胃癌的治疗仍然面临巨大的挑战ꎮ中医药作为一种术前及术后辅助治疗药物ꎬ近些年来受到了极大的关注ꎮ目前中医药复方已成为胃癌综合治疗的手段之一ꎬ在改善患者的生活质量㊁延长生存期方面具有显著优势[５－７]ꎮ胃热消炎合剂是成都中医药大学附属医院的院内制剂ꎬ根据本院消化内科名中医王在模老医生处方制成ꎬ有清热和胃㊁行气止痛的功效ꎬ临床用于治疗慢性浅表性胃炎㊁十二指肠溃疡等疗效确切ꎬ且可缓解胃癌患者症状及延长生存期ꎬ应用多年未发现明显毒副作用ꎮ考虑到该中药良好的消炎抗炎作用ꎬ课题组推测其对肿瘤的生理功能具有调节作用ꎮ基于此ꎬ本实验选取人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１ꎬ研究了胃热消炎合剂含药血清对细胞增殖的影响ꎬ旨在为胃热消炎合剂防治胃癌提供理论基础和科学依据ꎮ１㊀实验资料１１㊀实验药物㊁细胞和动物㊀胃热消炎合剂(由黄柏㊁粉葛㊁黄芩㊁法半夏㊁紫苏梗㊁木香㊁广藿香㊁香附㊁枳壳㊁陈皮㊁甘草㊁鸡矢藤ꎬ辅料为蜂蜜㊁苯甲酸组成)取自成都中医药大学附属医院ꎬ产品批号:２０１６０７１４ꎬ５ｇ/包ꎬ１ｍＬ胃热消炎合剂相当于１ｇ生药ꎮ人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１购自无锡菩禾生物医药技术有限公司ꎮＳＰＦ级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠ꎬ合格证号:ＳＣＸＫ(川)２０１５－０３０ꎬ购自成都达硕实验动物有限公司ꎮ１２㊀实验试剂和仪器㊀ＲＰＭＩ－１６４０培养基㊁胎牛血清㊁胰酶(不含ＥＤＴＡ)均购自美国Ｇｉｂｃｏ公司ꎻＣＣＫ－８染液购自碧云天公司ꎻＥｄＵＡｐｏｌｌｏ®５６７ＩｎＶｉｔｒｏＩｍａｇｉｎｇＫｉｔ(１００Ｔ)购自锐博生物公司ꎻＴＲＩｚｏｌ细胞裂解液购自Ａｍｂｉｏｎ公司ꎻＭ－ＭＬＶＦｒｉｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ试剂盒购自ＯＭＥＧＡ公司ꎻＳＹＢＲ®ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ购自ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓ￣ｔｅｍｓ公司ꎻＲＩＰＡ裂解液购自碧云天公司ꎻβ－ａｃｔｉｎ抗体㊁Ｋｉ－６７抗体购自成都正能生物公司ꎬ货号分别为２０００６８－８Ｆ１０和５０２０９４ꎻｐ２１抗体㊁ｐ５３抗体㊁ＣｙｃｌｉｎＤ１抗体购自武汉博士德公司ꎬ货号分别为ＢＡ０２７２㊁ＢＭ０１０１㊁ＢＭ０７７１ꎻＣＤＸ２抗体购自Ｃｅｌｌｓｉｇ￣ｎａｌｉｎｇꎬ货号为３９７７ꎮ二抗山羊抗兔Ｇｏａｔａｎｔｉ－Ｒａｂ￣ｂｉｔＩｇＧ(Ｈ＋Ｌ)ＳｅｃｏｎｄａｒｙＡｎｔｉｂｏｄｙ购自Ｌｉｆｅ公司ꎬ货号为６５－６１２０ꎻ山羊抗鼠ＧｏａｔＡｎｔｉ－ＭｏｕｓｅＩｇＧＳｅｃｏｎｄａｒｙＡｎｔｉｂｏｄｙ购自成都正能公司ꎬ货号为５１１１０３ꎻ驴抗兔ＤｏｎｋｅｙＡｎｔｉ－ＲａｂｂｉｔＩｇＧＨ＆Ｌ(绿光)购自Ａｂｃａｍ公司ꎬ货号ａｂ１５００７３ꎮ荧光倒置显微镜购自ＯＬＹＭＰＵＳ公司ꎻ酶标仪购自ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈ￣ｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司ꎻＣＯ２细胞恒温培养箱购自ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ公司ꎻ台式离心机购自成都蜀科公司ꎻ实时定量ＰＣＲ仪(７５００ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲＳｙｓｔｅｍ)购自Ａｐ￣ｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司ꎮ１３㊀实验方法１３１㊀动物血清的制备㊀将体质量２００~２４０ｇ的雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组和实验组ꎬ每组１０只ꎮ实验组给予胃热消炎合剂３.２ｍＬ/ｋｇ灌胃ꎬ对照组给予等体积的生理盐水灌胃ꎬ每只大鼠灌０.８ｍＬ(０.８ｇ/只)ꎬ早晚各１次ꎬ连续７ｄꎮ在最后一次灌胃２ｈ后(前一夜禁食不禁水)ꎬ腹腔注射１％戊巴比妥钠(５０ｍｇ/ｋｇ)ꎬ无菌条件下解剖开腹腔ꎬ于腹主动脉处取血ꎮ采集的血液低温静置过夜后ꎬ４ħ下２０００ˑｇ离心２０ｍｉｎꎬ取上清ꎬ用０.２２μｍ微孔滤膜过滤除菌ꎬ分装于１ｍＬＥＰ管中ꎬ－８０ħ保存备用ꎮ１３２㊀人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１的培养传代及细胞分组㊀人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１以含１０％胎牛血清㊁１％双抗(青霉素和链霉素)的ＲＰＭＩ－１６４０培养基ꎬ在３７ħ㊁饱和湿度㊁５％ＣＯ２和９５％空气的培养箱中培养ꎬ培养６ｈ贴壁ꎮ每隔１ｄ换液１次ꎬ５ｄ左右传代ꎮ分别在１ｄ㊁３ｄ㊁６ｄ于显微镜下观察细胞形态和生长情况ꎮ取处于对数期的ＳＧＣ－７９０１细胞进行实验:空白血清组加入含１０％正常血清培养ꎬ低剂量含药血清组加入含２.５％药物血清＋７５％正常血清培养ꎬ中剂量含药血清组加入含５％药物血清＋５％正常血清培养ꎬ高剂量含药血清组加入含１０％药物血清培养ꎮ１３３㊀ＳＧＣ－７９０１细胞增殖能力ＣＣＫ－８法检测将处于对数期的ＳＧＣ－７９０１细胞以２ˑ１０３个/孔的密度接种于９６孔板中ꎬ待细胞完全贴壁后继续培养过夜ꎬ即１６ｈ后各组加入配置好的相应培养液ꎬ每组设４个复孔ꎬ分别培养４ｈ㊁８ｈ㊁２４ｈꎮ用不含血清的培养基或ＰＢＳ稀释ＣＣＫ－８原液１０倍ꎬ每孔加入１００μＬＣＣＫ－８工作液ꎬ培养箱中孵育４ｈ后终止培养ꎬ冷却至室温后ꎬ在酶标仪４５０ｎｍ下测定吸光度ＯＤ值ꎮ可选取含细胞培养液㊁药物和ＣＣＫ－８原液但没有加入细胞的孔作为背景值ꎮ计算４个复孔的平均ＯＤ值ꎬ绘制细胞增殖曲线ꎬ并按公式计算生长抑制率ꎮ抑制率(％)＝[１－(ＯＤ药物组－ＯＤ背景值)/(ＯＤ对照组－ＯＤ背景值)]ˑ１００％ꎮ１３４㊀ＳＧＣ－７９０１细胞增殖能力ＥｄＵ染色法观察将处于对数期的ＳＧＣ－７９０１细胞以４ˑ１０４个/孔的密度接种于２４孔板中ꎬ培养过夜至细胞完全贴壁ꎬ各组加入配置好的相应培养液培养ꎮ处理２４ｈ后ꎬ参照ＥｄＵ染色说明书处理细胞ꎬ染色ꎬ拍照ꎮ所有细胞的细胞核可被Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２染成蓝色荧光ꎬ增殖的细胞可被ＥｄＵ染成红色荧光ꎮ１３５㊀ＳＧＣ－７９０１细胞增殖能力Ｋｉ－６７免疫荧光染色观察㊀细胞处理方法同１.３.４ꎬ各组培养２４ｈ后ꎬ４％的多聚甲醛溶液固定１ｈꎮ吸弃固定液ꎬ冰ＰＢＳ溶液清洗ꎬ加入含０.５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的ＰＢＳ溶液覆盖细胞ꎬ通透１０ｍｉｎꎬ冰ＰＢＳ清洗ꎻ加入含１０％驴血清的ＰＢＳ溶液３７ħ下孵育ꎬ１ｈ后倾去封闭液ꎬ勿洗ꎻ加入Ｋｉ－６７抗体工作液ꎬ４ħ孵育过夜ꎬ清洗ꎻ加入驴抗兔ＤｏｎｋｅｙＡｎｔｉ－ＲａｂｂｉｔＩｇＧＨ＆Ｌ工作液ꎬ避光ꎬ室温孵育１ｈꎬ清洗ꎻ加入ＤＡＰＩ染液ꎬ避光ꎬ室温孵育５ｍｉｎꎬ清洗ꎻ用抗荧光猝灭封片液封片ꎬ观察各组细胞染色结果并拍照ꎮ１３６㊀ＳＧＣ－７９０１细胞中增殖相关基因表达ＲＴ－ＰＣＲ法检测㊀①细胞ＲＮＡ提取:细胞处理方法同１.３.４ꎬ各组培养２４ｈ后ꎬ吸弃培养基ꎬ加入ＴＲＩｚｏｌ细胞裂解液ꎬ反复吹打后收集细胞于１ｍＬＥＰ管中ꎮ将收集的细胞１２０００ˑｇ离心５ｍｉｎꎬ小心取上清液于新的ＥＰ管中ꎬ加入三氯甲烷ꎬ剧烈震荡ꎬ１２０００ˑｇ离心５ｍｉｎꎻ然后去上清液育新的ＥＰ管中ꎬ加入等体积的异丙醇ꎬ混匀后１２０００ˑｇ离心５ｍｉｎꎬ沉淀为ＲＮＡꎻ小心弃上清液ꎬ加入７５％的乙醇ꎬ混匀后７５００ˑｇ离心５ｍｉｎꎻ小心弃上清液ꎬ自然风干残留液体ꎬ加入３０~５０μＬＮｕｃｌｅａｓｅ－ｆｒｅｅ水ꎬ即得到ＲＮＡ溶液ꎮ②总ＲＮＡ逆转录ｃＤＮＡ:按照ＯＭＥＧＡ公司生产的Ｍ－ＭＬＶＦｒｉｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ试剂盒操作说明书完成ꎮ③ＲＴ－ＰＣＲ引物设计与合成:通过检索ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库ꎬ以ＧＡＰＤＨ作为内参基因ꎬ设计引物序列ꎬ由成都擎科生物公司合成:ＧＡＰ￣ＤＨ正向引物５－ＧＴＣＡＧＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＡＣＣＴ－３ ꎬ反向引物５－ＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＡＡＡＴＴＣＧＴＴＧ－３ ꎻｐ２１正向引物５－ＡＣＡＣＣＡＣＴＧＧＡＧＧＧＴＧＡＣＴＴ－３ ꎬ反向引物５－ＧＧＣＧＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＴＡＧＡＡＡ－３ ꎻｐ５３正向引物５－ＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＣＡＣＴＧＧ－３ ꎬ反向引物５－ＣＴＣＴＣＧＧＡＡＣＡＴＣＴＣＧＡＡＧＣ－３ ꎻＣｙｃｌｉｎＤ１正向引物５－ＴＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＣＣＧＣＴ￣ＴＣ－３ ꎬ反向引物５－ＣＣＡＣＴＴＧＡＧＣＴＴＧＴＴＣＡＣ￣ＣＡ－３ ꎻＣＤＸ２正向引物５－ＣＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＣ￣ＣＡＧＧＡＣＧＡ－３ ꎬ反向引物５－ＴＣＴＣＡＧＡＧＧＡＣ￣ＣＴＧＧＣＴＧＡＧ－３ ꎻＣＤＫ７正向引物５－ＴＴＴＧＣ￣ＣＡＧＧＡＧＡＴＴＣＡＧＡＣＣ－３ ꎬ反向引物５－ＣＡＴＴＴＴＣＡＧＴＧＣＣＴＧＴＧＴＧＧ－３ ꎮ④聚合酶链式反应(ＲＴ－ＰＣＲ):按照ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司生产的ＳＹＢＲ®ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ试剂盒操作说明书完成ꎮ将ｃＤＮＡ㊁基因前引物㊁基因后引物及ＳＹＢＲ®ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ加入９６孔ＰＣＲ板ꎬ上机ꎬ设置反应条件:５０ħ加热２ｍｉｎꎻ９５ħ保持１０ｍｉｎꎻ９５ħ跑１５ｓꎬ６０ħ跑１ｍｉｎꎬ进行４０个循环ꎬ此步为引物扩增过程ꎻ９５ħ加热１５ｓꎬ６０ħ加热１ｍｉｎꎬ９５ħ加热３０ｓꎬ６０ħ加热１５ｓꎬ此步为ｑ－ＰＣＲ产物溶解过程ꎮ⑤结果处理:ＲＴ－ＰＣＲ结束后ꎬ由７５００软件分析结果ꎬ得出Ｃｔ值ꎬ采用相对定量２－әәｃｔ法计算各基因的相对表达量ꎬ其中әＣｔ＝目的基因Ｃｔ－内参基因ＣｔꎬәәＣｔ＝әＣｔ(药物组)－әＣｔ(对照组)ꎬ选取ＧＡＰＤＨ为内参基因ꎮ１３７㊀ＳＧＣ－７９０１细胞中相关蛋白表达Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测㊀细胞处理方法同１.３.４ꎬ各组培养２４ｈ后ꎬ吸弃培养基ꎬ加入ＲＩＰＡ裂解液提取蛋白ꎬ用ＢＣＡ测定蛋白浓度ꎬ并将４组蛋白浓度用裂解液调成相同的浓度ꎬ然后向蛋白中加入上样缓冲液ꎬ９５ħ加热１０ｍｉｎꎮ变性后的蛋白分装并保存于－２０ħ冰箱中ꎮ常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳ꎬ浓缩胶９０Ｖ电泳２０ｍｉｎꎬ分离胶１２０Ｖ电泳５０ｍｉｎꎻ４ħ下转ＰＶＣＦ膜１~１.５ｈꎻ５％的ＢＳＡ溶液常温封闭ＰＶＣＦ膜１ｈꎻ将目的蛋白的一抗按说明书１ʒ５０００稀释ꎬ加入ＰＶＣＦ膜ꎬ４ħ孵育过夜ꎬ然后ＰＢＳ－Ｔ清洗３次ꎬ每次５ｍｉｎꎻ加入与一抗对应的二抗工作液ꎬ常温孵育１ｈꎬ然后ＰＢＳ－Ｔ清洗３次ꎬ每次５ｍｉｎꎮ最后将ＥＣＬ显色液滴在ＰＶＣＦ膜上ꎬ于暗室中压Ｘ胶片ꎬ显影ꎬ定影ꎬ得到含条带的Ｘ胶片ꎬ并用ＩｍａｇｅＪ软件对结果进行半定量分析ꎮ１４㊀统计学方法㊀采用ＳＰＳＳ１６.０统计软件处理数据ꎬ定量数据用ｘʃｓ表示ꎬ组间比较用单因素方差分析ꎬＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结㊀㊀果２１㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞生长ＣＣＫ－８法检测情况㊀各组细胞处理２４ｈ后ꎬ空白血清组㊁低剂量含药血清组㊁中剂量含药血清组㊁高剂量含药血清组细胞生长抑制率分别为(９８.５ʃ１.２)％ꎬ(７９.３ʃ１９)％ꎬ(６８.９ʃ２.４)％ꎬ(５４.６ʃ１.５)％ꎬ各含药血清组细胞生长抑制率均明显低于空白血清组(Ｐ均<００５)ꎬ且呈浓度依赖性ꎮ２２㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞增殖能力ＥｄＵ染色情况空白血清组中红色亮点和蓝色亮点最多ꎬ细胞增殖能力强ꎻ低剂量含药血清组㊁中剂量含药血清组㊁高剂量含药血清组依次红色亮点递减ꎬ细胞增殖能力逐渐减弱ꎮ见图１ꎮ２３㊀各组免疫荧光技术检测细胞增殖抗原Ｋｉ－６７图１㊀各组血清处理ＳＧＣ－７９０１细胞２４ｈ后ＥｄＵ染色表现(ˑ１００)表达情况㊀各组细胞处理２４ｈ后ꎬ低剂量含药血清组中Ｋｉ－６７的绿色荧光强度明显减弱ꎻ中剂量含药血清组㊁高剂量含药血清组Ｋｉ－６７的荧光强度略弱于低剂量含药血清组ꎬ中㊁高剂量组之间未观察到明显差异ꎮ见图２ꎮ２４㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞中增殖相关基因表达情况㊀各含药血清组中ｐ２１㊁ｐ５３ｍＲＮＡ相对表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬＣｙｃｌｉｎＤ１ｍＲ￣ＮＡ相对表达水平均明显低于空白血清组(Ｐ均<００５)ꎬ且呈现出浓度依赖性ꎻ各组ＣＤＸ２㊁ＣＤＫ７ｍＲＮＡ相对表达水平比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎮ见表１ꎮ图２㊀各组血清处理ＳＧＣ－７９０１细胞２４ｈ后Ｋｉ－６７蛋白荧光染色表现(ˑ１００)表１㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞中增殖相关基因表达情况( ｘʃｓ)组别ｐ２１ｐ５３ＣｙｃｌｉｎＤ１ＣＤＸ２ＣＤＫ７空白血清组１１１１１低剂量含药血清组１.３１ʃ０.０９①１.２２ʃ０.０５①０.８１ʃ０.０３①１.１４ʃ０.０５０.８２ʃ０.０３中剂量含药血清组１.３９ʃ０.１１①②１.２８ʃ０.０４①②０.７７ʃ０.０４①②１.０５ʃ０.０５①②１.１５ʃ０.０６①②高剂量含药血清组２.７６ʃ０.３７①②③１.５７ʃ０.０４①②③０.６２ʃ０.０２①②③１.０７ʃ０.０５０.８５ʃ０.０２㊀㊀注:①与空白血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎻ②与低剂量含药血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎻ③与中剂量含药血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎮ２５㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞中增殖相关蛋白表达情况㊀各含药血清组ｐ２１蛋白表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬ且呈浓度依赖性ꎻ低剂量含药血清组和中剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平均明显高于空白血清组(Ｐ均<０.０５)ꎬ而高剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平明显低于空白血清组(Ｐ<０.０５)ꎻ各组ＣｙｃｌｉｎＤ１㊁ＣＤＸ２蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎮ见表２ꎮ表２㊀各组ＳＧＣ－７９０１细胞中增殖相关蛋白表达情况( ｘʃｓ)组别ｐ２１ｐ５３ＣｙｃｌｉｎＤ１ＣＤＸ２空白血清组０.０５ʃ０.０１０.０９ʃ０.０１０.３９ʃ０.０２０.１２ʃ０.０１低剂量含药血清组０.０９ʃ０.０２①０.１６ʃ０.０２①０.３６ʃ０.０１０.１３ʃ０.０１中剂量含药血清组０.１１ʃ０.０１①②０.１９ʃ０.０１①②０.４６ʃ０.０２０.１２ʃ０.０２高剂量含药血清组０.１８ʃ０.０２①②③０.０６ʃ０.０２①②③０.４２ʃ０.０２０.１４ʃ０.０１㊀㊀注:①与空白血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎻ②与低剂量含药血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎻ③与中剂量含药血清组比较ꎬＰ<０.０５ꎮ３㊀讨㊀㊀论胃癌是一种消化系统高发的恶性肿瘤ꎬ近些年来其发病率呈上升趋势ꎮ目前ꎬ胃癌的治疗越来越重视综合治疗ꎬ以期发挥各疗法的优势ꎮ我国中医药在胃癌的综合治疗中占据一席之地ꎬ且有不错的临床效果ꎬ如中医药与手术治疗相结合有助于提高机体抗癌能力ꎬ提高手术效果ꎻ中医药可减轻放疗的不良反应ꎬ同时对放疗有一定的增效作用ꎻ中医药配合全身化疗或介入化疗ꎬ可减轻和改善化疗不良反应ꎬ同时对胃癌有提高缓解率的效果[８－１０]ꎮ虽然中药复方能抑制胃癌发生㊁发展ꎬ改善胃癌患者生活质量ꎬ提高综合治疗疗效ꎬ在防治胃癌工作中发挥重要作用[５－６]ꎬ但中药及复方组成复杂多样ꎬ仅从所含成分数和量的变化角度很难阐明复方与机体的相互关系ꎬ且中药复方的化学组成并不能代表其在体内发挥生物效应的化学形式ꎮ针对中药及其复方复杂多样的成分特点ꎬ用含药血清进行体外细胞实验ꎬ其结果的可信度明显优于中药粗制剂直接用于体外实验ꎬ且可以直接反映中药及其代谢产物的药理作用ꎬ从而相对有效地阐释中医药治病的科学机制ꎬ为中医药现代化研究提供依据[１１]ꎮ在胃癌发生㊁发展过程中ꎬ基因结构㊁编码蛋白的变化是十分复杂的ꎬ在胃癌多阶段发生㊁发展的每一步可能涉及一种或几种基因的变化[１２－１４]ꎮｐ５３是一个重要的抗癌基因ꎬ其过表达可引起胃黏膜上皮细胞增殖成胃癌细胞ꎬ导致胃癌的形成㊁发展和转化ꎮ周烨等[１５]研究发现ｐ５３蛋白与胃癌患者的预后呈负相关ꎬ可作为胃癌预后的重要因素ꎮ作为ｐ５３基因的最重要的下游基因之一ꎬｐ２１基因的表达产物ｐ２１蛋白可以通过依赖或不依赖ｐ５３的途径在细胞周期中发挥抑制细胞增殖而产生抑癌作用ꎮ刘春远等[１６]研究发现ｐ２１基因转染人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１ꎬ可使细胞周期阻滞在Ｇ１期ꎬ胃癌细胞的失控性增殖受到明显抑制ꎮ在本实验中ꎬ采用ＣＣＫ－８法㊁ＥｄＵ染色法和Ｋｉ－６７蛋白免疫荧光染色法分别从细胞活力㊁ＤＮＡ复制及肿瘤分裂特征蛋白３个方面ꎬ证明了胃热消炎合剂药物血清可以抑制人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１的增殖ꎬ并具有剂量依赖性ꎮ基因和蛋白表达检测结果显示ꎬ各含药血清组ｐ２１㊁ｐ５３ｍＲＮＡ表达水平和ｐ２１蛋白表达水平均明显高于空白血清组ꎬＣｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达水平均明显低于空白血清组ꎬ且呈浓度依赖性ꎬｐ２１基因或蛋白的异常转录或表达可使细胞周期调控失常ꎬ导致细胞无限增殖ꎬ因此推断胃热消炎合剂是通过作用于细胞周期来调控细胞增殖的ꎻ低剂量含药血清组和中剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平均明显高于空白血清组ꎬ而高剂量含药血清组ｐ５３蛋白表达水平明显低于空白血清组ꎬ可能是由于高剂量药物对细胞产生了毒副作用ꎬ从而影响了ｐ５３ｍＲＮＡ转录水平ꎻ各组ＣｙｃｌｉｎＤ１㊁ＣＤＸ２蛋白表达水平比较差异均无统计学意义ꎬ提示药物血清并没有引起ＣＤＸ２㊁ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白的明显变化ꎮ总之ꎬ本实验证实胃热消炎合剂可能通过作用于细胞周期来抑制人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖ꎬ其可能具有预防和治疗早期胃癌的作用ꎬ为进一步研究药物与癌细胞间相互作用及开发新的治疗癌症方法提供了实验依据ꎮ[参考文献] [１]㊀ＹａｎｇＬ.ＩｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｎＣｈｉ￣ｎａ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌꎬ２００６ꎬ１２(１):１７－２０[２]㊀ＲｕｇｇｅＭꎬＦａｓｓａｎＭꎬＧｒａｈａｍＤＹ.ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆＧａｓ￣ｔｒｉｃＣａｎｃｅｒ[Ｊ/ＣＤ].ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ(ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｅ￣ｄｉｔｉｏｎ)ꎬ２０１５ꎬ１２(３):３５４－３６２[３]㊀ＨｏｕｇｈｔｏｎＪＭꎬＳｔｏｉｃｏｖＣꎬＮｏｍｕｒａＳꎬｅｔａｌ.Ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇｆｒｏｍｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ￣ｄｅｒｉｖｅｄｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２００４ꎬ３０６(５７０１):１５６８－１５７１[４]㊀ＯｈＪＫꎬＷｅｉｄｅｒｐａｓｓＥ.ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＣａｎｃｅｒ:ＧｌｏｂａｌＤｉｓ￣ｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄＢｕｒｄｅｎｏｆＤｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＡｎｎＧｌｏｂＨｅａｌｔｈꎬ２０１４ꎬ８０(５):３８４－３９２[５]㊀鲍文磊.中药复方治疗胃癌的临床研究进展[Ｊ].辽宁中医药大学学报ꎬ２００８ꎬ１０(１):６８－７０[６]㊀黄铭涵ꎬ陈琴ꎬ高玲ꎬ等.中药复方联合化疗治疗胃癌术后疗效分析[Ｊ].中医药导报ꎬ２０１０ꎬ１６(８):２０－２２[７]㊀贡婷洁.中药复方在胃癌治疗中的研究进展[Ｊ].中国中西医结合消化杂志ꎬ２０１２ꎬ２０(５):２３４－２３５[８]㊀陈凛ꎬ李涛.胃癌综合治疗现状与进展[Ｊ].世界华人消化杂志ꎬ２００８ꎬ１６(６):５７１－５７４[９]㊀秦洪真ꎬ郗洪庆ꎬ陈凛.胃癌综合治疗研究进展[Ｊ].人民军医ꎬ２０１５ꎬ５８(９):１０９８－１１００[１０]林明生ꎬ王常松.中医药对胃癌术后化疗患者的辨治思路[Ｊ].长春中医药大学学报ꎬ２０１５ꎬ３１(２):２７８－２８０[１１]王筠ꎬ张军平.中药血清药理学试验方法研究概况[Ｊ].天津中医药ꎬ２００５ꎬ２２(１):８６－８８[１２]孙晓红ꎬ李洪涛ꎬ邵世和ꎬ等.中药防风对胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞生长及基因表达的研究[Ｊ].北华大学学报:自然科学版ꎬ２００９ꎬ１０(２):１２７－１３０[１３]张学庸.胃癌相关基因和基因治疗[Ｊ].医学争鸣ꎬ２００１ꎬ２２(９):７６９－７７０[１４]ＯｋｕｙａｍａＴꎬＭａｅｈａｒａＹꎬＫａｂａｓｈｉｍａＡꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｂｉｎｅｄｅ￣ｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐ５３ａｎｄｐ２１ｐｒｏｔｅｉｎｓａｓｐｒｏｇ￣ｎｏｓｔｉｃｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ[Ｊ].Ｏｎ￣ｃｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ６３(４):３５３－３６１[１５]周烨ꎬ朱慰祺ꎬ师英强ꎬ等.血管内皮生长因子和抑癌基因ｐ５３在胃癌中的表达及其临床意义[Ｊ].中国癌症杂志ꎬ２００３ꎬ１３(１):９－１２[１６]刘春远.Ｐ２１－Ｐ２７双基因转染胃癌细胞对细胞周期的影响[Ｄ].青岛:青岛大学ꎬ２００７[收稿日期]㊀２０１９－０５－０５。

尼美舒利

这个图片可以加在起因里~
分析
• 谁的问题：学术界，政府管理部门，企业，学术界，政府管理部门，企业，学术界医疗单位，老百姓？医疗单位，老百姓？
从学术界观察：
• （1）我国学术界对尼美舒利的研究
不良反应报道篇数不良反应报道篇数（CNKI)
30 25
20
15
10
5
0 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
• • • • • • • • 起步晚增长缓慢监督不力社会主动性/ADR意识不够社会主动性意识不够覆盖面不够药企利益权衡专业能力差法律漏洞
• （2）为什么处方药可以在药典里轻易购买？
• 市民：方便市民： • 药店：利润目前医院占到药品总销售额的80%以药店：上，即只有20%的药品是在零售药店卖出。在如今医药“不分家”、“以药养医”机制下，医院的医生一般不会让患者自己拿处方到药店买药。甚至还开出只有医院工作人员才看得懂的‘天书处方’、 ‘密码处方’，而现在随着医院普遍实行电子化管理 • 药监：管不了。药店的这种折中的做法在很多地方药监：管不了。都得到了药监部门的准许，作为过渡措施允许药店销售处方药的底线是至少要登记顾客的电话、住址等相关信息，以防药品出问题后可以回访。
尼美舒利：国家药监局新批准临床研究的新药品种（中国）
• 尼美舒利，根本就没有列为美国药监局的评估范围，根本就“没有入围”。全球只有1/4的国家使用尼美舒利，中国是其中之一。我国国家药监局网站没有公示任何尼美舒利的药物不良反应。
• Word里还有一个尼美舒利的历史，是表格的，也写得蛮好，你看看是用这个还是那个。

细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展

细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展细胞焦亡是由Gasdermin（GSDM）家族蛋白诱导的程序性细胞死亡，表现为细胞质膜形成膜孔，细胞膜破裂，内容物释放。

在形态学特征上，发生焦亡的细胞和凋亡一样可出现DNA 损伤、核固缩，但细胞核较凋亡保持完整，DNA 损伤程度较凋亡低，TUNEL 染色呈阳性。

其次，细胞焦亡过程中会形成质膜孔隙，导致细胞肿胀和渗透溶解，大量炎症因子释放。

随着研究的深入，细胞焦亡在癌症中的生物学作用日益凸显。

本文基于细胞焦亡的分子机制及胃癌与细胞焦亡的相关研究探讨该生物学过程在胃癌中的作用，为胃癌的治疗提供新的思路。

一、细胞焦亡定义及机制细胞焦亡的定义从发现至今经过了多次变化。

细胞死亡命名委员会（NCCD）在2018 年将其修正为：一种依赖于Gasdermin 家族蛋白诱导细胞质膜形成膜孔的可调控的细胞死亡，通常但不总因炎症性Caspase 的活化而完成。

细胞焦亡涉及几个关键组分：炎症小体、Caspase 家族、Gasdermin 家族。

炎症小体是一种细胞内多蛋白信号复合物，通常围绕模式识别受体（pattern-recognition receptors，PRR）组装完成。

PRR 可识别胞内病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）、损伤信号（damage-associated molecular patterns，DAMPs）从而激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。

PRR 家族通常包括Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）、NOD 样受体（NOD-like receptors，NLRs）等，受体激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡，但若受体上不含Caspase 招募结构域（Caspase activation and recruitment domain，CARD），则另需通过（pyrin-like domain，PYD）结构域与含有CARD 结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）结合，最终通过CARD 结构域激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。

阿霉素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

阿霉素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响张蕾;邵淑丽;李凤英;张伟伟【摘要】观察阿霉素对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用.采用台盼蓝拒染法测定细胞生长抑制率,计算半数抑制质量浓度值；采用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡,倒置显微镜观察细胞形态结构的变化；采用流式细胞仪检测阿霉素对细胞周期的影响,探讨阿霉素对SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响.结果表明,阿霉素对SGC-7901细胞具有抑制作用,IC50为5.7 μg·mL-1；DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带,倒置显微镜观察显示,阿霉素能抑制细胞增殖,可致细胞形态学改变,出现明显的凋亡形态学特征,流式细胞仪检测出现凋亡峰.说明阿霉素能明显抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖,并能诱导其凋亡.【期刊名称】《高师理科学刊》【年(卷),期】2012(032)003【总页数】3页(P59-61)【关键词】胃癌;阿霉素;细胞凋亡【作者】张蕾;邵淑丽;李凤英;张伟伟【作者单位】齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江齐齐哈尔161006【正文语种】中文【中图分类】R735.2阿霉素（AMD）是一种经典抗生素类广谱抗肿瘤药物，具有明显的心肌毒性和神经毒性．可抑制RNA和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用[1]．阿霉素进入肿瘤细胞后，一方面作用于细胞核，使处于分裂期的核破裂，染色体崩解；另一方面，使代谢功能活跃的肿瘤细胞的核染色质凝缩，乃至核膜破裂，核质溢出，抑制胞浆中细胞器的功能，并与之结合产生毒性抑制或破坏作用，使肿瘤细胞增殖发生障碍，发生退行性改变，最终导致肿瘤细胞的死亡[2]．本实验以体外培养的人胃癌SGC-7901细胞株为研究对象，用阿霉素进行诱导，探讨阿霉素对SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响．人胃癌细胞株SGC-7901（中国科学院上海细胞生物研究所），Tris饱和酚（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司），优级胎牛血清（上海生工生物工程技术服务有限公司）．1.2.1 细胞培养、传代将SGC-7901细胞培养在含10%胎牛血清RPMI-1640的培养液中（含16.67×10-7 mol·s-1·mL-1青霉素，16.67×10-7 mol·s-1·mL-1链霉素），置于37℃，5.0% CO2培养箱内培养．1.2.2 细胞生长曲线的测定接种21瓶细胞，每瓶5 mL，细胞密度为5×104个/mL．采用台盼蓝计数法，分7 d测细胞数，每天测3瓶，取均值．得到7个数据，用Excel作图，确定对数生长期．1.2.3 台盼蓝拒染法测定细胞生长抑制率取对数生长期的细胞，分成对照组和实验组，每瓶密度为5×104 个/mL，分别加入0，1，2，3，4， 5，6，7，8μg·mL-1的阿霉素．培养48 h后，用台盼蓝拒染法计数，计算公式：细胞存活率＝用药组活细胞数/对照组细胞数×100%，采用Excel做出细胞生长抑制曲线，并确定IC50（半数抑制质量浓度）．1.2.4 倒置显微镜观察细胞形态取对数生长期的人胃癌 SGC-7901细胞，经 0，6μg·mL-1阿霉素作用48 h，光学显微镜下观察并照相．1.2.5 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡分别收集经0，4.5，5，5.5，6，6.5，7，7.5 μg·mL-1阿霉素作用48 h的SGC-7901细胞，酚氯仿法提DNA，1%的琼脂糖凝胶电泳，拍照，记录结果．1.2.6 流式细胞仪检测SGC-7901的细胞周期分别收集经0，6 μg·mL-1阿霉素作用48 h的SGC-7901细胞，加入-20℃预冷的70%的乙醇，4℃固定至少18 h．调整细胞密度为106 个/mL，取1 mL细胞悬液，用PBS洗3次，细胞重悬于1 mL PI染液中，37℃孵育30 min，即可进行流式分析．体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901生长曲线见图1．由图1可见，人胃癌细胞株SGC-7901的对数生长期在2~5 d．依据细胞生长情况，选择这段时间的胃癌细胞株SGC-7901加药为宜．SGC-7901细胞生长抑制曲线见图2．由图2可见，阿霉素作用SGC-7901细胞48 h，IC50为5.7 μg·mL-1.以药的质量浓度与抑制效果作量效关系曲线，进行曲线拟合．回归方程为回归曲线见图3．阿霉素对 SGC-7901细胞形态的影响见图4．由图4可见，未经药物处理的SGC-7901细胞大小均一，细胞核均匀．阿霉素质量浓度为6 μg·mL-1时，大部分细胞出现凋亡，胞浆浓缩，胞膜起泡、出芽，细胞体积逐渐变小，出现凋亡小体．不同质量浓度的阿霉素作用SGC-7901细胞，使其DNA断裂成180~200 bp的整数倍，所以，在电泳图中DNA条带呈梯状（见图5）．阿霉素对SGC-7901细胞周期的影响见图6．由图6可见，阿霉素可抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长周期．其阻滞胃癌SGC-7901细胞于G0/G1期．多年以来关于恶性肿瘤的研究范畴仅局限于研究细胞的分裂、增殖、分化及其调控，临床对恶性肿瘤的治疗也主要围绕这一认识展开[3-4]．近年来，随着对细胞凋亡研究的深人，人们逐渐发现它与肿瘤的关系非常密切，从而使对细胞凋亡的研究成为肿瘤研究领域中一个非常重要的课题[5-6]．本实验采用阿霉素抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡，实验结果表明，一定质量浓度的阿霉素对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞有显著的生长抑制作用，抑制率呈现时间依赖性．倒置显微镜观察证实，阿霉素处理的 SGC-7901细胞有明显的凋亡特征．细胞生化特征检测结果表明，阿霉素诱导的人胃癌SGC-7901细胞DNA片段呈间隔为180~200 bp整数倍的梯状电泳条带，正常细胞不降解，坏死细胞的DNA虽然存在降解，但由于存在各种长度的 DNA片段，表现为连续分布的弥散条带．流式细胞仪检测结果显示，细胞在药物作用下，出现特征性的亚2倍峰（凋亡峰）．阿霉素可以阻滞胃癌细胞SGC-7901于G0/G1期，使细胞不能进入下一周期，进而诱导细胞凋亡．其作用机制有待进一步研究．【相关文献】[1] 梁祁枫，蒋振营，刘纪恩，等．阿霉素与顺铂联合重组人血管内皮抑素对骨肉瘤患者血清血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶9水平的影响[J]．中医中药，2011，12（6）：1538-1539[2] 赵泉，周绪红，王蕾，等．尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及衰老的影响[J]．武汉大学学报，2011，32（6）：733-738[3] Prasad S，Kalra N，Srivastava S，et al．Regulation of oxidative stress-mediated apoptosis by diallyl sulfide in DMBA-exposed Swiss mice[J]．Hum Exp Toxicol，2008，27（1）：55-63[4] Viste A．Predicted morbidity and mortality in major gastroenterological surgery [J]．Gastric Cancer，2012，15（1）：1-2[5] 解美娜，李锋杰．无花果枝提取物体外诱导胃癌BGC2823细胞凋亡的研究[J]．天然产物研究与开发，2010（12）：219-222[6] 聂园园，仇小强．心肌细胞凋亡与心血管疾病关系的研究进展[J]．实用医学杂志，2012，28（2）：324。

双药联合化疗对耐药性胃癌细胞的协同干预研究

双药联合化疗对耐药性胃癌细胞的协同干预研究作者：李科来源：《科技风》2019年第27期摘;要：目的：探索盐酸阿霉素（DOX）和多西他赛（DOC）对于耐药性胃癌细胞的協同干预效果。

方法：通过MTT法检测DOX和DOC在人胃癌细胞SGC-7901及其多药耐药株SGC-7901 ADR的IC50值，根据IC50值设置不同的双药配比，并利用CompuSyn软件计算协同指数，以判断双药是否具有协同效果。

结果：耐药性胃癌细胞SGC-7901 ADR 对DOX和DOC均有较强的耐药性，相比之下，SGC-7901细胞对两种药物的敏感性较强。

双药联合使用可大大提高抑制效果。

半数抑制效果下，双药联合中的DOX剂量减少为单药干预的1/10以下，DOC剂量也有一定程度的减少。

而DOX和DOC比例为1∶8、1∶12和1∶16时表现出非常明显的协同效果。

结论 DOX和DOC联合干预可有效抑制耐药性胃癌细胞的增殖。

可为进一步开发耐药性胃癌治疗的新方法提供理论依据。

关键词：耐药性胃癌;联合化疗;盐酸阿霉素;多西他赛1 研究背景胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，预后较差，死亡率高居前列。

化疗是早期胃癌和手术后联合治疗的首选。

但其对正常细胞也有损伤，毒副作用大。

另外，随着化疗的进行，胃癌会产生多药耐药性。

耐药性的出现直接导致效果降低，造成治疗失败及肿瘤复发。

因此，寻求更为有效的化疗方案，提高治疗效果就具有非常重要的临床意义。

联合化疗通过发挥药物协同作用来提高疗效，减少耐药的发生;减少剂量从而降低毒副作用。

临床上对于联合化疗的使用效果在多年前已得到了研究证实，临床上联合化疗已经逐渐替代单药化疗。

本研究通过将两种经典抗肿瘤药物——盐酸阿霉素和多西他赛进行组合，用于干预多药耐药性胃癌细胞SGC-7901 ADR，探索更为有效的用药配比。

2 研究方法2.1 材料DOX、DOC、MTT均购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

DMEM高糖培养基购自hyclone公司。

中医药逆转肿瘤多药耐药机制研究进展

中医药逆转肿瘤多药耐药机制研究进展标签：肿瘤；多药耐药；逆转机制；中医药；综述据美国癌症协会统计，90%以上的肿瘤患者死于不同程度的耐药[1]。

肿瘤细胞耐药可分为原药耐药（PDR）和多药耐药（MDR）两大类。

其中，PDR指仅对诱导药物产生耐药性而对其他药物不产生交叉耐药性；而MDR是指肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药的同时，对其他结构不同、作用机制不同的药物也产生耐药现象，是肿瘤化疗最大的障碍之一。

研究MDR的产生机制、寻找有效低毒的逆转剂及其逆转措施一直是国内外学者感兴趣的研究课题。

笔者现将近年来中医药有关MDR的研究综述如下。

1 肿瘤多药耐药的产生机制1.1 转运蛋白介导药物外排药物在细胞内的减少是通过药物的细胞内流减少或外排增多所产生，细胞外排可以通过细胞膜上转运蛋白功能而发挥作用，如P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药性相关蛋白（MRP）及肺抗药性相关蛋白（LRP）等，其中P-gp外排泵的研究最为深入和广泛。

P-gp高表达导致细胞内的药物浓度维持在较低水平被认为是产生MDR最主要的原因。

研究表明，MDR-l基因与P-gp的表达水平越高，MDR 细胞内药物浓度越低，则耐药性越强[2]。

该研究结果被称作经典肿瘤MDR机制。

1.2 细胞内多药耐药相关酶表达异常在MDR细胞的胞质、胞核中存在一些与MDR产生有关的酶，主要是蛋白激酶C（PKC）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）以及谷胱甘肽S转移酶（GST）等的改变。

韩氏等[3]研究发现，PKC-2α在胃癌细胞SGC7901呈阳性表达，在其长春新碱（VCR）耐药株SGC7901/VCR呈强阳性，其表达强度随耐药剂量的增加而呈增加趋势。

在MDR细胞中因TopoⅡ数量及其活性下降所导致的耐药机制被称为非典型MDR，其特点是药物在细胞内积聚与保留没有变化，无P-gp的过度表达，膜活性药物不能逆转其耐药性。

研究发现，TopoⅡ在胃癌组织中的表达显著高于其相邻正常组织（P＜0.05），表明TopoⅡ是胃癌产生内在性耐药的影响因素之一[4]。

乙酰紫草素注射液对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用

ａｉｎｏｔｆＬＬＣｉｉｏｏｎｖｖ．
ＫｙｗｒｓＡｃｔｌｉｏｉｉｅｔｎＬｗｉｌｎａｃｏ；５Ｌ６ｍｉｅｏｄ：ｅｙｓｋｎｎｎｃｉ；ｅｓｕｇＣｒｉｍａＣ７／ｃｈｊｏｎＢｅ
胡煜，李巨等．紫草素对裸鼠皮下绒癌移植瘤的抗癌作用及机制的研究Ｅ］沈阳部队医药．０４１（）１１６．Ｊ．２０。７３：６～１３谢冰芬，冯公侃等．然紫草萘醌类化合物及其衍生物的抗肿瘤作天用研究［］中国药理学通报．２０。２４：０－５７Ｊ．０６２（）５５０．
ＫｉＳ，ｎＣ，Ｙｏ．ｔ１ｍＨＫａｇＩｏｎＴＪｅ．Ａｎｉｍｏｃｉｉｅｆｅｙａｔｕｒａｔｔｓｏｎｗｌｔｖｉａ
ห้องสมุดไป่ตู้
ｓｎｈｓｅｈｋｎｎｄｒａｉｅ２ｈｉＤｙｔｅｉｄｓｉｏｉｅｉｔ，－ｙｍ－ＭＮＱ－－３［］ＣｎｅｚｖｖＳ３Ｊ．ａｃｒ
Ｌｅｔ２０１２２：７１１５ｔ。０１，７（）１ — ７．
曾云，罗刚，文吉，乙酰紫草素注射液对人胃癌８Ｋ－９１的抑杨等．Ｃ２０７
制作用［］四川生理科学杂志，０，９４：５ —１７Ｊ．２７２（）１５５．０（收稿日期：０７０－０２０－８１）
维普资讯
四川生理科学杂志２０；９４０７２（）
从图１可以看出接种第５天以后，剂组肿瘤呈对数生溶

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及STAT3通路相关蛋白表达的影响研究

表达有关。
【关键词】信号转导和转录激活因子３胃癌；；尼美舒利【中国国书分类法分类号】Ｒ３．７５２【文献标识码】Ａ【收稿日期】０７１— ４２０ — ０２
Ｅｆｃｆｎｍｅｕｉｅｏｐｏｉｒｔｎ，ｐｐｏｉｎｒｔｉｘｒｓｉｎｆｔｏｉｓｌｎｒｌｅａｉａｏｔｓｓａｄｐｏｅｎｅｐｅｓｏｅｄｆｏ
论著文章编号：５—ห้องสมุดไป่ตู้６０８０—２ —３０３３（０）０９０２２２３４
尼美舒利对人胃癌ＳＣ９１Ｇ７０细胞增殖、亡及凋ＳＡ３ＴＴ通路相关蛋白表达的影响研究
陈
（．１重庆市肿瘤研究所内科，重庆
敏－高，
青２李林海２，
ｎｍｓｌｅｔａｍｎ：ｅｐｒｎａｅｏｐｐｏｉｗｓｉｃａｅｉｉａｔ（００）ｔｅｐｏｏｔｎｏＧ７０ｉＧ／１ｐａｅｉｅｕｉｒｔｅｔｔｅｃｔｆａｏｔｓａｎｒｓｄｓｆｎｌＰ＜．５；ｒｒｏｆＳＣ９１ｎｏｈｓｄｅｈｅｇｓｅｎｃｙｇｉｈｐｉＧｗｓｈｉｅｉｉａｔ（＜．）ＷｅｔｌｎｙｉｓｏｅｈｔｅｐｔｎｅｐｅｓｎｏｐｏｐｏｙｔＴＴ（ — ＴＴ）ａｏｔｓｆｎｌＰＯ０；ｓｒｂｏａａｓｈｗｄｔａ：ｒｅｘｒｓｉｆｈｓｈｒｌｅＳＡ３ＰＳＡ３，ｓｄｇｉｎｃｙ５ｅｎｔｌｓｈｔｏｉｏａｄＣｃｉ．ｃ一ｎＳＣ７０ｅｓｗｓｄｃａｅｉｉｃｎｌ（０５．ＣｎｌｓｏｓＴｅｐｏｆａｉｆａｔｃｃｎｅｅｌｉｙｌＤ１Ｂｌ２ｉＧ一９１ｃｌａｅｒｓｄｓｆａｔＰ＜．）ｏｃｉｎ：ｈｒｌｅｔｎｏｇｓｉａｃｒｃｌｌｅｎｌｅｎｇｉｙ０ｕｉｒｏｒｎ

GCSsiRNA载体构建及其对转染人胃癌细胞SGC7901／VCR的作用

（１郑州大学基础医学院，南郑州４０５；河５０２２河南省肿瘤病理重点实验室）
［摘要］根据ｓＮＡ设计原则，ｉＲ针对人葡萄糖神经酰胺合成酶（ＳｍＲＧＣ）ＮＡ序列设计并合成编码ｓＮＡｉＲ的寡核苷酸序列，并将其克隆入小干扰ＲＮＡ表达载体，构建重组质粒。将重组质粒转人耐长春新碱的胃癌细胞
￣
的ｐＵＰＲＥＰ载体于１ＳＥＧＦ６℃连接过夜。以连接产
２００７年１月，本研究设计了针化Ｊ０Ｍ１９感受态细胞，在卡那霉素抗性平板上
筛选重组载体。扩增抗性菌落并提取质粒，ＥｃＲ用ｏ
目前，疗在肿瘤综合治疗中的地位和作用日益２加入４ｌ火缓冲液匀，５℃水浴４ｍｉ，化ｌ６退，混９ｎ
重要，但肿瘤细胞产生多药耐药（ＭＤＲ）为肿瘤化疗７Ｃ孵育１ｎ缓慢冷却至室温，到退火双链成００ｍｉ，得失败的主要原因。研究发现，葡萄糖神经酰胺合成酶ＤＮＡ。将退火产物与经Ｂｌ和Ｈｉｄ Ⅲ 酶切处理ｇｎ双（Ｃ）ＧＳ高表达与肿瘤ＭＤＲ有密切关系。２００６年２月
胃癌细胞株（Ｇ９１ＶＣ由第四军医大学西京ＳＣ７０／Ｒ）
录为ｃＤＮＡ，ｃ以ＤＮＡ为模板进行ＰＲ扩增。ＰＲＣＣ
Ｃ２。ＰＲ０ｇＩ医院消化病研究所惠赠，本室传代培养；ＭＩ１４使用的ＧＳ引物参考文献［］Ｃ产物用１／ＲＰ－６０培养基（ｂｏ公司）ＡＭＶ第一链ｃＮＡ合成试剂琼脂糖电泳。Ｇｉｃ；Ｄ．．Ｓ表达将细胞接种盒及ＰＲ扩增试剂盒（海产）ＶＣ广州产）Ｓ１２４免疫细胞化学检测ＧＣＣ上；Ｒ（；Ｐ于放有盖玻片的６孔板内，待细胞爬片过夜后，出取免疫组化试剂盒（北京产）。１２方法．

mTOR特异性抑制剂RAD001对SGC7901／DDP细胞耐药的逆转作用

ＤＤＰ细胞顺铂耐药逆转的作用，并初步探讨其发挥作用的机制。方法Ｐ — ｇＰ、ＭＲＰ１、ｐ２７蛋白表达。结果
ＤＤＰ（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ，顺铂）或联合药物作用后，流式细胞术检测细胞周期，免疫细胞化学和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测药物作用后细胞中
单独ＤＤＰ组（顺铂组）作用于ＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ细胞后，细胞周期无明显改变，与对照组相比，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＲＡＤ００１组（ＲＡＤ分别为２．５、５、１０ｎｍｏｌ／Ｌ）、联合用药组（ＲＡＤ２．５ｎｍｏｌ／Ｌ＋ＤＤＰ２．５ｍｇ／Ｌ）
作用４８ｈ后，处于Ｇ。期细胞比例增加，与对照组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；处于ｓ期细胞比例降低，与对照组相比，
差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；联合用药组效果强于单独用药组（Ｐ＜０．０５）；免疫组化检测结果示：顺铂组对细胞中上述蛋白的表达无明显改变作用。ＲＡＤ预处理后，ＲＡＤ００１组、联合用药组作用４８ｈ后细胞中Ｐ — ｇＰ和ＭＲＰ１表达下降，ｐ２７表达升高，与对照组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。联合用药组作用效果强于单独用药组（Ｐ＜０．０５）；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测示：顺铂组对细胞中上述蛋白的表达无明显改变。ＲＡＤ预处理后，ＲＡＤ００１组、联合用药组作用４８ｈ后细胞中Ｐ．ｇＰ和ＭＲＰ１表达均下降，与对照组相比，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ｐ２７表达均升高，与对照组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。联合用药组作用强于各单独药物作用组（Ｐ＜０．０５）。结论表达引起细胞周期阻滞而发挥作用。关键词：ＲＡＤ００１；细胞周期；ＳＧＣ７９０１／ＤＤＰ细胞；耐药逆转

amiRNA-Snail逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对顺铂的耐药性及其机制研究

ＲｅｅｓｏｆＲｅｉａｃｆＨｕａｓｒｃＣａｃｒＣｅｌｎＧＣ７０１ＤＤＰｏＣｉｐａｉｙａＲＮＡ－ｎｉｎｔｖｒｉｎｏｓｓｎｅｏｍｎＧａｔｉｎｅｌＬｉｅＳｔ９／ｔｓｌｔｂｍｉｎＳａｌａｄｉｓ
ＤＰ（．１０１１、０ｇ）用后的存活率，算ＤＰ对细胞的半数抑制浓度（５。结果：ＤＤＯ、．、．１．ｍ／作０００Ｌ计ＤＩ０Ｃ）ＤＰ耐药ＳＣ９１Ｇ７０／
ＤＤＰ细胞中的Ｓａｌ蛋白相对表达量显著高于ＤＤＰ敏感亲本ＳｎｉＧＣ７０９１细胞（＜．５）Ｇ９１ＤＤＰａＲＰ００。ＳＣ７０／ —ｍｉＮＡ组细
ＰｓｂｅＭｅｈｎｓｏｓｌｃａｉｉｍＸＵＣｕｈｎ，Ｕｕｍｉ，ＧＪｎＩｉｑ２ＣＮＭｉ，ＯＵＸｉｐｎ．ｅａｔｅｔｆｈｎｏ￣ＧＯＨｉｎＷＡｕＬａｉＨＥｎＺａｉＤｐｒｎｏ２ＮＪｎ，２ｏ￣ｍ
南京医科大学附属鼓楼临床医学院消化科（１０８南京大学医学院附属鼓楼医院消化科２００）
背景：多药耐药是恶性肿瘤化疗失败的主要原因。研究显示锌指转录因子Ｓａｌ导肿瘤细胞发生上皮间质转ｎｉ介化（ＭＴ可促成肿瘤对化疗耐药。目的：讨人工合成ｍｉｏＮ．ｎｉ（ｍＲＡＳａｌ逆转人胃癌细胞株ＳＣ９１Ｅ）探ｃＲＡＳａｌａｉＮ．ｎｉ）ｒＧ７０／ＤＰ对顺铂（Ｄ）药性的作用及其可能机制。方法：建稳定转染ａｉＮＳａｌ质粒或阴性对照质粒的ＤＤＰ耐构ｍＲＡ—ｎｉ

隐丹参酮抑制人胃癌SGC—7901细胞增殖的实验研究

隐丹参酮抑制人胃癌SGC—7901细胞增殖的实验研究目的探讨隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。

方法通过体外无菌传代培养2013年5月所购的人胃癌SGC-7901细胞，设空白对照组与20 μm、40 μm、60 μm、80 μm和100 μm五个浓度的隐丹参酮组，分别于6 h、12 h、24 h和48 h后采用MTT法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率，并观察药物作用24 h和48 h后细胞的形态变化。

结果①刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均50%。

②刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的IC50为59.11 μM，③与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用（P＜0.01），且除了20 μM与40 μM 组及40 μM与60 μM组之间差异无统计学意义（P分别为0.162和0.110），其余各组间差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的增殖有明显的抑制作用，且有时间和剂量依赖关系；究其原因可能是隐丹参酮能够诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡，具体机制有待进一步研究。

标签：隐丹参酮；人胃癌SGC-7901细胞；MTT；细胞凋亡胃癌（Gastric Cancer）是常见的消化道恶性肿瘤，严重危害威胁人类健康[1-3]，因此对胃癌的防治和治疗等研究成为肿瘤研究领域的一大热点课题。

传统中药以其价格低廉、毒副作用小的优势，辅助治疗胃癌有很好的前景。

隐丹参酮（cryptotanshinone）是从活血化瘀中药丹参中提取出的脂溶性有效成分，具有抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡或分化的作用[4]，但有关隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞作用的研究，国内却鲜有报道。

该研究采用MTT法检测隐丹参酮对SGC-7901细胞（2013年5月购自上海生命科学研究院细胞资源中心）增殖的抑制作用，以期进一步丰富隐丹参酮抗肿瘤作用的基础研究、拓宽隐丹参酮的应用范围，为胃癌患者的辅助治疗提供一种新的思路。

人胃癌紫杉醇耐药细胞株SGC7901TAX的建立的开题报告

人胃癌紫杉醇耐药细胞株SGC7901TAX的建立的开
题报告
开题报告：建立人胃癌紫杉醇耐药细胞株SGC7901TAX
一、研究背景
胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，而化疗是治疗胃癌的重要手段
之一。

紫杉醇是作为胃癌化疗的重要药物，但不少患者由于耐药而使治
疗效果不佳。

因此，建立紫杉醇耐药胃癌细胞株是为深入研究耐药机制
提供实验手段，有助于探索新型胃癌治疗策略。

二、研究目的
1.构建人胃癌紫杉醇耐药细胞株SGC7901TAX，以探索其耐药机制；
2.评估SGC7901TAX的药物敏感性，并探索其与sgc7901细胞的差异；
3.研究胃癌细胞耐药机制，为深入探索治疗策略提供理论基础。

三、技术路线
1.通过逐步增加紫杉醇的浓度，逐渐诱导SGC7901胃癌细胞系形成紫杉醇耐药细胞株；
2.对比sgc7901与SGC7901TAX的细胞周期、凋亡率及基因表达等
差异，探索耐药机制；
3.通过多药耐药机制研究来解析SGC7901TAX药物耐药的机制。

四、预期结果
1.建立人胃癌紫杉醇耐药细胞株SGC7901TAX；
2.对比SGC7901TAX与sgc7901细胞的细胞周期、凋亡率及基因表
达等差异，探索耐药机制；
3.解析SGC7901TAX药物耐药的机制。

五、研究意义
本研究的主要意义在于探索胃癌细胞耐药机制，为深入研究胃癌治
疗策略提供实验手段和理论基础。

同时，此研究结果对于在紫杉醇耐药
方面的研究和开发新型治疗手段有一定的指导作用，从而提高治疗效果，提升胃癌治疗水平。

化痰散结方含药血清体外抗胃癌作用

化痰散结方含药血清体外抗胃癌作用化痰散结方是一种中药方剂，具有清热化痰、散结消肿的功效。

近年来，越来越多的研究表明，化痰散结方对胃癌具有一定的抑制作用。

本文将对该方剂含药血清的体外抗胃癌作用进行介绍。

化痰散结方主要由白茯苓、桔梗、苦杏仁、生半夏、枳实、草果等中药组成。

其中，白茯苓能够清热解毒、利水消肿，桔梗能够宣肺化痰、利咽止咳，苦杏仁能够润肺止咳、化痰止痛，生半夏能够化痰止咳、平喘，枳实能够消食化痰，草果能够温中化湿、化痰止咳。

综合使用这些中药，化痰散结方能够清热化痰、散结消肿，对于治疗胃肿瘤等疾病具有一定的辅助作用。

近年来，一些研究发现，化痰散结方含药血清能够在体外抑制胃癌细胞的增殖及诱导其凋亡。

其中，一项研究利用MTT法检测化痰散结方含药血清对人胃癌细胞株SGC7901的抑制作用，结果显示，该含药血清能够剂量依赖性地抑制SGC7901细胞的增殖，而对于正常人类胃上皮细胞GSE-1的影响非常小。

另一项研究则采用流式细胞术检测化痰散结方含药血清对SGC7901细胞凋亡的诱导作用，结果显示该含药血清能够显著地诱导SGC7901细胞凋亡，并且呈现出剂量依赖性。

这些研究结果表明，化痰散结方含药血清具有一定的抗胃癌作用，可能与其含有的药物所具有的抗癌活性有关。

例如，白茯苓中所含的β-谷甾醇具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种活性，苦杏仁中含有的杏仁苷和杏仁酸具有抑制肿瘤生长、诱导肿瘤细胞凋亡的作用，生半夏中所含的莨菪碱能够抑制肿瘤细胞增殖，枳实中所含的皂甙则具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡的作用。

总之，化痰散结方是一种中药方剂，对于辅助治疗胃肿瘤等疾病具有一定的功效。

化痰散结方含药血清具有抗胃癌作用，可能与其含有的多种活性成分有关。

不过，目前的研究还都是体外实验，需要进一步进行体内实验和临床研究，以进一步确定化痰散结方在抗胃癌方面的作用及其安全性。

SGC7901 DDP 人胃癌顺铂耐药株说明书

上海博谷生物科技有限公司Web: Tel：************Fax：************SGC7901/DDP人胃癌顺铂耐药株使用说明书产品编号：HDRC012本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！一、组成:组份细胞一瓶25cm2细胞说明书1份细胞培养注意事项1份二、客户自备试剂:1、PBS2、培养基3、0.25%（W/V）胰蛋白酶（含0.53mM EDTA）三、培养条件1、培养基：RPMI1640+10%CS+P/S+DDP 1000ng/ml2、温度：37.0°C3、气体:空气95%，CO2 5%四、培养方法培养瓶里面的培养液是不含药物的。

待细胞长到70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含500ng/ml DDP 药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将药物浓度提高到1000ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。

五、常见问题及解决方案:1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。

次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌 SGC7901／VCR祼鼠移植瘤耐药作用的研究

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌 SGC7901／VCR祼鼠移植瘤耐药作用的研究廖文秋;张琍;李国庆;刘小叶【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】Objective To explore the effect of rosiglitazone( ROS) ,a selective peroxisome proliferator-activated receptor gamma ( PPARγ)ligand,reverses Mitomycin C resistance on nude mice xenografts of human gastric cancer SGC7901/VCR cells and its possible mechanism.Methods The model of xenografts tumor in nude mice were established by inoculating human gastric cancer SGC7901/VCR cells into the back of nude mice subcutaneously.48 male nude mice were divided into 6groups:Control group,MMC group,ROS group,MMC combined moderate dose ROS group,MMC combined high dose ROS group,MMC combined cyclosporineA( CSA) group.There were 8 mice in each group.After treated for 40 days,the volumes changes of tumor and tumor inhibition rates were observed,draw the growth curve of xenograft tumor.The expression of P-glycolprotein( P-gp) and MGr1-Ag were observed with Western-blot assay respectively.Results After medication the effect on the volume of tumor and tumor inhi-bition rates:there was no significant difference between the control group and MMC group(P>0.05),the difference of tumors volume and tumor inhibition rates were significant between other groups and thecontrol group and MMC group (P<0.05).The expression of P-gp and MGr1-Ag was highest in the control group and MMC group,the difference of expression of P-gp and MGr1-Ag were significance between other groups and control group and MMC group (P<0.05).MMC combined high dose ROS group and MMC combined cyclosporineA( CSA) group wereleast,there was no significant difference between them( P>0.05) .Conclu-sion Rosiglitazone inhibits the growth of SGC7901/VCR cell and decreases the expression of P-gp and MGr1-Ag,Rosiglitazone reverses drug resistance of nude mice xenografts of human gastric cancer SGC7901/VCR cells partly on MMC.%目的：探讨PPARγ激动剂罗格列酮（ ROS ）逆转人胃癌 SGC7901／VCR 细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素（ MMC）的耐药作用及其可能机制。

尼美舒利舒林酸对人胃癌细胞NF-κB iNOS表达的抑制作用

尼美舒利舒林酸对人胃癌细胞NF-κB iNOS表达的抑制作用朱祖安;刘莹;费素娟【期刊名称】《中国肿瘤临床》【年(卷),期】2005(032)022【摘要】目的:观察尼美舒利、舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞NF-κB、iNOS表达的影响,初步探讨其在NSAIDs抗肿瘤作用中的意义.方法:对人胃癌SGC-7901细胞进行细胞培养,采用免疫组织化学Power visionTM两步法、westem blot方法检测不同浓度尼美舒利、舒林酸作用后细胞NF-κB、iNOS表达情况;同时生化方法检测细胞内TNOS、iNOS、NO含量的改变.结果:与阴性对照组相比,药物干预48h后尼美舒利100、200μmol/L组,舒林酸0.6、1.2mmol/L组人胃癌SGC-7901细胞NF-κB、iNOS蛋白表达率及细胞内TNOS、iNOS、NO含量明显降低(P＜0.05),并且iNOS,NF-κB之间呈正相关性(P＜0.05).结论:尼美舒利、舒林酸可以通过抑制人胃癌细胞NF-κB、iNOS的蛋白表达而发挥抗肿瘤作用.抑制iNOS 的表达对NF-κB的抑制作用有关.【总页数】4页(P1267-1270)【作者】朱祖安;刘莹;费素娟【作者单位】徐州医学院附属医院消化内科,江苏省,徐州市,221002;徐州医学院病理学教研室;徐州医学院附属医院消化内科,江苏省,徐州市,221002【正文语种】中文【中图分类】R735.2【相关文献】1.双环醇对脂多糖诱导巨噬细胞iNOS蛋白的表达和NF-κB活化的抑制作用 [J], 李敏;刘耕陶2.尼美舒利、舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、iNOS表达的抑制作用 [J], 费素娟;朱祖安;刘莹3.尼美舒利和舒林酸对人胃癌SGC-7901细胞COX-2和VEGF表达的影响及意义[J], 朱祖安;刘莹;费素娟4.尼美舒利对人胃癌细胞株MKN28细胞周期和PTEN、mTOR基因表达的影响[J], 杨文燕;戴强;张燕捷;朱黎明;王碧君;江佛湖5.舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的抑制作用 [J], 朱祖安;刘莹;费素娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药

CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药吴达龙;睢凤英;张成文;吕焕章【期刊名称】《数理医药学杂志》【年(卷),期】2009(22)1【摘要】目的:探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用. 方法:将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养,采用MTT法检测其细胞毒作用;采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量.结果:SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍.1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01) 和14倍(P< 0.01).DOX蓄积实验表明,CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX 蓄积,而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响.结论:通过增加细胞内DOX蓄积量,CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性.【总页数】3页(P67-69)【作者】吴达龙;睢凤英;张成文;吕焕章【作者单位】浙江省嘉兴学院医学院药理学教研室,嘉兴,314001;浙江省嘉兴学院医学院药理学教研室,嘉兴,314001;浙江省嘉兴学院医学院药理学教研室,嘉兴,314001;北京市军事医学科学院附属医院药理科【正文语种】中文【中图分类】R962【相关文献】1.甲基莲心碱逆转人胃癌细胞株多药耐药性 [J], 石书红;张辉;庄英帜;曹建国2.氟哌啶醇对人红白血病耐多柔比星细胞株多药耐药性的逆转及其机制 [J], 周京红;吴德政3.本芴醇衍生物LY980503逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF/DOX对多柔比星的耐药性 [J], 吴达龙;吕焕章;黄丰;尹立新;万永玲;郭军华;吴德政4.氯喹衍生物CQ11逆转乳腺癌多药耐药细胞株MCF/DOX对多柔比星的耐药性[J], Dalong Wu;Shirong Ma ;Fengying Sui ;Chengwen Zhang ;LixinYin ;Huanzhang Lu5.红霉素逆转人胃癌细胞株多药耐药性的研究 [J], 葛成华;王世伟;乔世铭;顾文军;潘芳芳;林言箴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酸性应激引起胃癌SGC7901细胞自噬增强

酸性应激引起胃癌SGC7901细胞自噬增强
盛杰;郭婧;于国红;邱振康;刘宁;王莎莎;邱文生
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2017(10)11
【摘要】目的酸应激对胃癌SGC7901细胞自噬强度的影响。

方法选择人胃癌细胞系SGC7901作为研究细胞,用调节到pH 6.5或pH 7.4的完全培养基处理胃癌SGC7901细胞。

采用免疫荧光检测酸应激时胃癌细胞系SGC7901中自噬体的形成情况,采用Western-Blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况。

结果激光共聚焦电镜下观察到酸应激处理的胃癌SGC7901细胞荧光呈颗粒状数较对照组细胞内荧光颗粒数显著增多。

酸性完全培养基处理的胃癌SGC7901细胞较对照组SGC7901细胞LC3-Ⅱ生成增多,p62表达减少。

结论酸应激可以引起胃癌
SGC7901细胞自噬增强。

【总页数】2页(P9-10)
【作者】盛杰;郭婧;于国红;邱振康;刘宁;王莎莎;邱文生
【作者单位】青岛大学;青岛大学附属医院肿瘤科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.2
【相关文献】
1.TGF-β1通过诱导自噬促进胃癌SGC7901细胞侵袭
2.抑制内质网相关降解途径引起大鼠肝细胞内质网应激和自噬增强
3.白藜芦醇对胃癌 SGC7901细胞自噬的影
响及其机制探讨4.短葶山麦冬皂苷C诱导人胃癌细胞SGC7901自噬机制初探5.猫人参含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖和自噬的影响
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１Ｕ ·ｍＬ）ＲＰＭＩ１６４０液，在３７℃、５％二氧化碳培养箱
中生长传代，实验时取对数生长期细胞。１．２．２ＭＴＴ法测定生长抑制率取对数生长期
４ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞，按每孔５× １０个细胞
６１１１０ ·ｍＬ），加入１００μ ｍｏｌ ·Ｌ尼美舒利孵育７２ｈ后
·５１６ ·
１加入４μ ｇ ·ｍＬＲｈ１２３孵育９０ｍｉｎ，另取同样传代的１ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞加入４μ ｇ ·ｍＬＲｈ１２３
［摘要］目的研究尼美舒利对人胃癌敏感细胞株ＳＧＣ７９０１及多药耐药细胞株ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ的影响，初步探讨其逆转人胃癌耐药的机制。方法ＭＴＴ法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞内Ｒｈ１２３浓度和Ｐ１７０、ＧＳＴ π表ＧＣ７９０１及ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。但尼美舒利对达水平变化。结果尼美舒利对ＳＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞效应强度明显弱于ＳＧＣ７９０１细胞。尼美舒利能提高ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞内Ｒｈ１２３荧光强度，下调Ｐ１７０和ＧＳＴＰ＜０．０５）。结论尼美舒利对人胃癌ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ耐药有一定逆转作用，作用机制可能与下调Ｐ１７０ π的水平（和ＧＳＴ π的水平有关。［关键词］尼美舒利；胃癌；耐药性；Ｐ１７０；ＧＳＴ π ［中图分类号］Ｒ９８３．１；Ｒ９６５［文献标识码］Ａ［文章编号］１００４０７８１（２００８）０５０５１５０３
１
ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞及阴性对照细胞，ＰＢＳ洗２次，弃去上清液，分别加入１１００稀释的抗Ｐ１７０、抗ＧＳＴ π 单抗各１００μ Ｌ，３７℃水箱温育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤，再分别加入１２００稀释的羊抗鼠ＦＩＴＣＩｇＧ单抗１００μ Ｌ，３７℃温育３０ｍｉｎ，离心洗涤多余抗体，上机前加ＰＢＳ１．０ｍＬ，经５００目滤网过滤后上机，计算阳性百分率。１．３统计学处理采用ＳＰＳＳ１１．５软件进行统计分析。采用方差分析或ｔ检验。以Ｐ＜０．０５表示差异有显著性。２结果２．１不同浓度尼美舒利对ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞生长的抑制作用不同浓度尼美舒利（２５，１００，４００μ ｍｏｌ ·Ｌ）对ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。尼美舒利作用４８ｈ后即能明显抑制ＳＧＣ７９０１细胞生长，其中１００μ ｍｏｌ ·Ｌ
Ｐ１７０９３．２６± ３．６０５０．２０± ２．５１２８．０６± １．４２２６．７４± ２．３５
１
ＧＳＴ π ７６．６０± ２．３８
１２４．６７± １．３２
２６．５６８２．３６
ＭｕｌｔｉｄｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＲｅｖｅｒｓｉｏｎｂｙＮｉｍｅｓｕｌｉｄｅｏｎＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＬｉｎｅＳＧＣ７９０１ＶＣＲ
１１２ＣＨＥＮＪｉｎｈｕｉ，ＣＨＥＮＱｉｎｇｑｉｎｇ，ＣＨＥＮＬｉ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＬｕｑｉａｏＢｒａｎｃｈ，Ｔａｉｚｈｏｕａｉｚｈｏｕ３１８０５０，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＴＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００００，Ｃｈｉｎａ）
细胞株ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ购自上海中科院细胞库；尼美舒利：Ｓｉｇｍａ公司；罗丹明（Ｒｈ１２３）：Ｓｉｇｍａ公司；新生胎牛血清：杭州四季青公司；酶标仪：美国ＢＷＴｅｋ公司ＥＬ３０１型；流式细胞仪：ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ；抗Ｐ１７０、抗ＧＳＴＩＴＣＩｇＧ单抗：购自晶美公司。 π单抗和羊抗鼠Ｆ１．２方法１．２．１细胞培养ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞株０％胎牛血清和双抗（青霉素、链霉素各１００用含１
１
孵育９０ｍｉｎ作阴性对照，冷ＰＢＳ洗两次后用流式细胞ｈ１２３的浓度。仪测定细胞内Ｒ１．２．４细胞内Ｐ１７０、ＧＳＴ π表达水平的变化收集
１１００μ ｍｏｌ ·Ｌ尼美舒利处理７２ｈ的ＳＧＣ７９０１和
肿瘤化疗失败的重要原因是肿瘤产生多药耐药，寻找高效的耐药逆转药已成为肿瘤治疗研究的方向之一。近年来研究表明，环氧化酶２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２，Ｃｏｘ２）ｏｘ２抑在肿瘤的发生中可能起到重要的作用，选择性Ｃ制药具有抗癌作用，并有一定的耐药逆转作用。尼美舒利是一种人工合成的选择性Ｃｏｘ２抑制药，近来研究发现对多种肿瘤细胞有明显的抑制作用，但尼美舒利对胃癌的耐药逆转作用笔者未见报道。本研究以人胃癌敏感细胞株ＳＧＣ７９０１及多药耐药细胞株ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ为ｈ１２３研究对象，通过观察细胞的生长抑制率、细胞内Ｒ浓度和多药耐药相关蛋白Ｐ１７０、ＧＳＴ探讨尼 π的表达，美舒利逆转人胃癌耐药的机制，现报道如下。１材料与方法．１材料人胃癌敏感细胞株ＳＧＣ７９０１及多药耐药１
［收稿日期］２００７０５１８［作者简介］陈金晖（１９７５－），男，浙江台州人，学士，主治医师，主要研究方向：胃肠道肿瘤。电话：（０）１３９６８６５９９００，Ｅｍａｉｌ：ｄｘｌｗ１２０＠１２６．ｃｏｍ。
ＨｅｒａｌｄｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＶｏｌ２７Ｎｏ５Ｍａｙ２００８
１表１１００μ ｍｏｌ · Ｌ尼美舒利对ＳＧＣ７９０１和
ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞内Ｒｈ１２３荧光强度与ＧＳＴ π表达的影响％，ｎ＝３，ｘ ±ｓ组别与时间Ｒｈ１２３荧光强度ＳＧＣ７９０１ＶＣＰ处理前处理后ＳＧＣ７９０１处理前处理后７０．３９７２．７５
医药导报２００８年５月第２７卷第５期
· ·５１５
尼美舒利对人胃癌ＳＧＣ７９０１ＶＣＲ细胞耐药逆转作用
陈金晖１，陈青青１，陈力２
（１．温州医学院附属台州医院路桥院区普外科，３１８０５０；２．浙江大学医学院附属二院普外科，杭州３１００００）
ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅｏｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１ＶＣＲａｎｄＳＧＣ７９０１ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｗｈｉｃｈｒｅｖｅｒｓｉｎｇｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１ＶＣＲ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｅｌｌ，ＧＳＴｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ．Ｒｈ１２３ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｃｅｌｌｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＰ１７０ πｗｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＮｉｍｅｓｕｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｏｆＳＧＣ７９０１ＶＣＲａｎｄＳＧＣ７９０１ｉｎａｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｆｏｒＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓ．Ｒｈ１２３ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｉｎｔｈｅＳＧＣ７９０１ＶＣＲｃｅｌｌｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄＰ１７０、ＧＳＴｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＮｉｍｅｓｕｌｉｄｅｃａｎｐａｒｔｌｙｒｅｖｅｒｓｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇ πｅ，ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｗｈｉｃｈｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＰｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ７９０１ＶＣＲ．１７０ａｎｄＧＳＴ π ＫＥＹＷＯＲＤＳＮｉｍｅｓｕｌｉｄｅ；Ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ；ＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ；Ｐ１７０；ＧＳＴ π